实验7土壤硝态氮的紫外分光光度法.doc
土壤硝态氮测定--紫外风光光度计
土壤硝态氮的测定【方法原理】在波长220 nm 处，硝酸盐对紫外线光有强烈的吸收。
溶解的有机质在波长220 nm 及275 nm 处均有吸收，而硝酸盐在275 nm 处没有吸收，从而可以通过测定275 nm 处的吸光度对硝酸盐的吸光度进行校正，校正吸光度A= A220-2A275计算硝态氮的含量,工作范围为N 0.1～3 mg L-1。
【试剂】1）紫外分光光度计和石英比色皿2）容量瓶3）2mol/L KCl：4）【操作步骤】1、浸提：称取风干土样5.00g，放在250mL三角瓶中，加入2mol/L KCl 50mL，用振荡机振荡1h,悬液静置3～5 min放置澄清后，将悬液的上部清液用干滤纸过滤，澄清的滤液收集于干燥洁净的三角瓶中。
2、测定吸取滤液5～20mL（视NO3－—N浓度）置于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，用1cm石英比色皿分别在220nm、275nm进行比色测定吸光度。
3、标准曲线的绘制分别取20 g/LNO3－—N标准液0、0.5、1、2、3、4、5mL于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度,浓度分别为0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6g L-1用1cm石英比色皿分别在220nm、275nm进行比色测定吸光度。
硝酸盐标准曲线制定：称取0.7220g于105°C烘箱中干燥冷却后的KNO3于小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入1000ml容量瓶中，定容，摇匀，即为100u g/ml硝酸盐氮标准溶液。
移取该溶液20.00ml于100ml容量瓶，定容，摇匀，即为20ug/ml硝酸盐氮标准溶液。
分别取20ug/ml 硝酸盐氮标准溶液0、0.5、1、2、3、4、5mL于50ml容量瓶中，加入二次重蒸水，定容摇匀。
用1cm比色皿分别在220nm和275nm处测定吸光度。
用公式：A= A220 -2A275求的校正吸光度。
求此标准曲线方程。
按下式计算硝态氮：硝态氮(mg／kg)=C*V*D／m式中：C为从标准曲线查得的NO3-—N含量：V为比色测定液总体积(mL)；D为分取倍数；m为鲜土样质量(g)。
土壤硝态氮的测定
土壤硝态氮的测定A 紫外分光光度法1、方法提要土壤浸出液中的NO-，在紫外分光光度计波长210n m处有较高吸光度，而浸出液中的其它物质，除OH、CO2-、HCO、NO-和有机质等外，吸光度均很小。
将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH-、CO2-、HCO的干扰。
NO■■—般含量极少，也很容易消除。
因此，用校正因数法消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NQ「的含量。
待测液酸化后，分别在210nm和275nm处测定吸光度。
阳。
是NQ-和以有机质为主的杂质的吸光度；A275只是有机质的吸光度，因为NQ-在275nm处已无吸收。
但有机质在275nm处的吸光度比在210nm处的吸光度要小R倍，故将A275校正为有机质在210nm处应有的吸光度后，从A。
中减去，即得NQ-在210nm处的吸光度（△A）。
2、适用范围本方法适用于各类土壤硝态氮含量的测定。
3、主要仪器设备紫外—可见分光光度计；石英比色皿；往复式或旋转式振荡机，满足180r/min ±20r/min 的振荡频率或达到相同效果；塑料瓶：200mL。
4、试剂溶液(1 : 9):取10mL浓硫酸缓缓加入90mL水中。
氯化钙浸提剂[c(CaCI 2)=・L-1]:称取2.2g氯化钙(CaCI? 化学纯) 溶于水中，稀释至1L。
硝态氮标准贮备液[p (N)=100mg - L-1]:准确称取0.7217g经105〜110C烘2h的硝酸钾(KNQ，优级纯)溶于水，定容至1L，存放于冰箱中。
硝态氮标准溶液[p (N)=10mg - L-1]:测定当天吸到硝态氮标准贮备液于100mL容量瓶中用水定容。
5、操作步骤称取10.00g 土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50mL氯化钙浸提剂，盖严瓶盖，摇匀，在振荡机上于20 °C ~25 C振荡30min(180r/min ±20r/min) ，干过滤。
吸取待测液于50mL三角瓶中，加：9 H2SQ溶液酸化，摇匀。
(完整word版)土壤中氨氮、硝氮、速磷测定
硝态氮用30分钟后，提取液中硝氮测定水中硝态氮的测定（紫外分光光度法）♦主要试剂：(1)0.100mg/ml硝酸盐氮标准储备液(购置或自配)：称取0．7218g硝酸钾(经105—110℃烘4小时)溶于水中，移至1000毫升容量瓶中用水稀释至标线。
(2)盐酸溶液：C (HCl) =lmol／L(盐酸系优级纯)♦标准曲线的绘制向6支100ml0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，其相应浓度为0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mg／L)。
按水样测定相同步骤测量吸光度。
根据220nm 与二倍275nm♦用光度计上，测定水样在220nm 及275nm波长处的吸光度。
♦结果计算校正吸光度计算：Ar=A220nm -2A275nm式中：Ar——校正吸光度；A220nm——220nm波长处测得的吸光度；A275nm——275nm波长处测得的吸光度由标准曲线算出相应水样硝态氮含量。
氨态氮2 mol·L-1KCl浸提—蒸馏法方法原理用2mol·L-1KCl浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。
取一份浸出液在半微量定氮蒸馏器中加MgO（MgO是弱碱，有防止浸出液中酰铵有机氮水解的可能）蒸馏。
蒸出的氨以H3BO3吸收，用标准酸溶液滴定，计算土壤中的NH4+—N含量。
主要仪器振荡器、半微量定氮蒸馏器、半微量滴定管（5mL）。
试剂（1）20g·L -1硼酸—指示剂。
20gH3BO3（化学纯）溶于1L水中，每升H3BO3溶液中加入甲基红—溴甲酚绿混合指示剂5mL并用稀酸或稀碱调节至微紫红色，此时该溶液的pH为4.8。
指示剂用前与硼酸混合，此试剂宜现配，不宜久放。
（2）0.005 mol·L-11/2H2SO4标准液。
量取H2SO4（化学纯）2.83mL，加蒸馏水稀释至5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为0.0200 mol·L-1 (1/2H2SO4)标准溶液，再将此标准液准确地稀释4倍，即得0.005mol·L-11/2H2SO4标准液（注1）。
硝态氮测定
土壤铵、硝态氮的测定（1）待测滤液的制备（水：土=10：1）称取10g待测样品准确到0.01g，置于大白瓶中，加入100ml 0.01mol/l的CaCl2溶液，以200 r/min 25℃振荡30min，取出静置5-10min后将悬液的上部清液用干滤纸（定性滤纸）过滤，得待测滤液。
（2）硝态氮—紫外分光光度法取上述滤液5.00 ml于50 ml容量瓶，用重蒸水定容，得待测液（一般不需要稀释，浸提液过滤后直接测定即可，但是刚施完肥的土壤硝态氮含量较高，建议取2-3样品做直接上机测定一下，标线5mg/L对应读数为1.05-1.1左右，然后决定稀释倍数）。
用标线0调零，测定此待测液在220nm和275nm处吸光度A220和A275。
按照下式计算校正吸光度A：A= A220-2A275。
绘制硝态氮标准曲线：分别取100mg/L硝酸盐(NO3--N)标准溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL 于100mL容量瓶,若直接测定则用浸提剂（0.01mol/l的CaCl2）定容摇匀（用蒸馏水定容即可，蒸馏水与CaCl2吸光值无差异），即分别配成0、1、2、3、4、5 mg/L 的标准系列溶液。
用标线0调零，分别用石英比色皿在220nm和275nm处测定标曲吸光度。
用公式：A= A220 -2A275求得校正吸光度，以氮浓度为纵坐标，A （A= A220-2A275）为横坐标绘制得标准曲线。
注:标准曲线要先进行配置，并且在配置前先把紫外分光光度计打开预热30min，以节约时间。
标曲根据土壤中硝态氮含量配制，标线最大值做到5，R2可达0.999以上，一般做到6/7/8即可，R2仅0.99，线性相关不好，标线要重新配置，标线275nm读数一般为0。
（3）铵态氮—靛酚蓝比色法取步骤（1）中的滤液10.00 ml（一般吸取土壤浸出液5或10ml，具体吸取量要考虑施肥时期）于50mL容量瓶中，再加入苯酚溶液5.00 ml和次氯酸钠碱性溶液5.00mL，摇匀。
土壤硝态氮的测定
土壤硝态氮的测定A 紫外分光光度法1、方法提要土壤浸出液中的NO 3-，在紫外分光光度计波长210nm 处有较高吸光度，而浸出液中的其它物质，除OH -、CO 32-、HCO 3-、NO 2-和有机质等外，吸光度均很小。
将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH -、CO 32-、HCO 3-的干扰。
NO 2-一般含量极少，也很容易消除。
因此，用校正因数法消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NO 3-的含量。
待测液酸化后，分别在210nm 和275nm 处测定吸光度。
A 210是NO 3-和以有机质为主的杂质的吸光度；A 275只是有机质的吸光度，因为NO 3-在275nm 处已无吸收。
但有机质在275nm 处的吸光度比在210nm 处的吸光度要小R 倍，故将A 275校正为有机质在210nm 处应有的吸光度后，从A 210中减去，即得NO 3-在210nm 处的吸光度(△A)。
2、适用范围本方法适用于各类土壤硝态氮含量的测定。
3、主要仪器设备3.1紫外—可见分光光度计； 3.2石英比色皿；3.3往复式或旋转式振荡机，满足180r/min ±20r/min 的振荡频率或达到相同效果； 3.4塑料瓶：200mL 。
4、试剂4.1H 2SO 4溶液(1：9)：取10mL 浓硫酸缓缓加入90mL 水中。
4.2氯化钙浸提剂[c(CaCl 2)=0.01mol ·L -1]：称取2.2g 氯化钙(CaCl 2·6H 2O ，化学纯)溶于水中，稀释至1L 。
4.3 硝态氮标准贮备液[ρ(N)=100mg ·L -1]：准确称取0.7217g 经105~110℃烘2h 的硝酸钾(KNO 3，优级纯)溶于水，定容至1L ，存放于冰箱中。
4.4硝态氮标准溶液[ρ(N)=10mg·L-1]：测定当天吸到10.00mL硝态氮标准贮备液于100mL容量瓶中用水定容。
土壤硝态氮的测定
土壤硝态氮的测定This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020土壤硝态氮的测定A 紫外分光光度法1、方法提要土壤浸出液中的NO3-，在紫外分光光度计波长210nm处有较高吸光度，而浸出液中的其它物质，除OH-、CO32-、HCO3-、NO2-和有机质等外，吸光度均很小。
将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH-、CO32-、HCO3-的干扰。
NO2-一般含量极少，也很容易消除。
因此，用校正因数法消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NO3-的含量。
待测液酸化后，分别在210nm和275nm处测定吸光度。
A210是NO3-和以有机质为主的杂质的吸光度；A275只是有机质的吸光度，因为NO3-在275nm处已无吸收。
但有机质在275nm处的吸光度比在210nm处的吸光度要小R倍，故将A275校正为有机质在210nm处应有的吸光度后，从A210中减去，即得NO3-在210nm处的吸光度(△A)。
2、适用范围本方法适用于各类土壤硝态氮含量的测定。
3、主要仪器设备紫外—可见分光光度计；石英比色皿；往复式或旋转式振荡机，满足180r/min±20r/min的振荡频率或达到相同效果；塑料瓶：200mL。
4、试剂溶液(1：9)：取10mL浓硫酸缓缓加入90mL水中。
氯化钙浸提剂[c(CaCl2)=·L-1]：称取2.2g氯化钙(CaCl2·6H2O，化学纯)溶于水中，稀释至1L。
硝态氮标准贮备液[ρ(N)=100mg·L-1]：准确称取0.7217g 经105~110℃烘2h的硝酸钾(KNO3，优级纯)溶于水，定容至1L，存放于冰箱中。
硝态氮标准溶液[ρ(N)=10mg·L-1]：测定当天吸到硝态氮标准贮备液于100mL容量瓶中用水定容。
5、操作步骤称取10.00g土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50mL氯化钙浸提剂，盖严瓶盖，摇匀，在振荡机上于20℃~25℃振荡30min(180r/min±20r/min)，干过滤。
土壤硝态氮的测量-紫外法
土壤硝态氮的测量-紫外法2018-1-17本方法适于测定以1-2M KCl及各种浓度氯化钙、氯化钠、硫酸钠等提取的土壤硝态氮，标液用提取液配制。
要求土壤提取液没有可见的颜色，土壤有机质含量小于5%， 测定范围为1-10ppmNO3-N（溶液浓度）。
不能用乙酸铵、碳酸氢钠等在紫外区有强烈吸收的提取剂；测定硝态氮时，如果提取液氯离子、碳酸盐离子、氢氧根离子等较多，需要酸化处理：取2-3ml标液、滤液于塑料试管中，加1:5（硫酸：水）0.5ml，除去紫外去有吸收的CO2、OH-等的干扰。
如果需要在测定中不包含亚硝态氮，可在测定时加入氨基磺酸（FW.97.09）至其浓度达到0.5-0.8%，以掩蔽亚硝态氮的紫外吸收。
硝态氮的紫外吸收有较为明显的温度效应，样品冷冻后有明显的沉淀效应，需要使样品和标液在同一温度下平衡到室温，充分混匀再测定。
2 提取：称取鲜土10-12g（约10g干土，或者根据用户要求设定水土比，是否测定含水量等），加50ml 1M KCl提取液，25℃震荡30分钟，过滤，检查滤液颜色，没有明显可见颜色样品可进行紫外测定，对有颜色液体，要怀疑其测定精度，提高提取液KCl浓度有利于减少有机质干扰，对样品和标液加适量活性炭可减少颜色干扰。
3、500ppm NO3-N：将 1.8045 g 硝酸钾 (KNO3，F.W. 101.018)溶解到 400 mL水中,定容500 mL。
避光保存。
标准曲线：以500ppm NO3-N 标液按下配制于50ml 容量瓶中，以1M KCl提取液定容。
吸取标液ml 浓度mg/L0 00.1 10.3 30.5 50.75 7.54、 测定：在标液与提取液温度接近条件下，以空白调整紫外可见分光光度计基线，测定标液和样品OD220、OD275.5、计算：以各标液OD220-OD275*2.23与标液浓度做标准曲线，计算未知浓度,*50ml/5g为土壤硝态氮含量（mg/kg）。
土壤硝态氮测定方法
土壤硝态氮测定方法一、测定原理测定原理硝酸根离子在220 nm处有强吸收,在275 nm处即无吸收，而主要干扰因子。
土壤有机质均有吸收，首先测定有机质在这二个吸光度之间的转化系数(即校正因数f)，然后以浸提液在275 nm处的吸光度(A275)的f倍代替有机质在220 nm处的吸光度值，将它从浸提液在220 nm处的吸光度(A220)中扣除，即得到硝态氮在220 nm处的校正吸光度，因此，这种方法也称紫外分光光度校正因数法。
二、操作步骤：取5.00 g土样，加入50 ml 2 mol/L KCI溶液，振荡1 h，悬液静置3~5 min 后过滤。
测定浸提液在220 nm和275 nm处吸光度A220和A275。
按照下式计算校正吸光度A：A= A220 -2A275三、标准曲线：分别取10 mg/L硝态氮标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 ml 于50 ml容量瓶中，加入二次重蒸水，定容摇匀。
用1cm比色皿分别在220 nm 和275 nm处测定吸光度。
A=A220 -2A275求的校正吸光度。
求此标准曲线方程。
四、试剂配制10 mg/L NO3-N：称取0.7220 g于105 ℃烘箱中干燥冷却后的KNO3于小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入1000 ml容量瓶中，定容，摇匀，即为100 mg/L硝态氮标准溶液。
移取该溶液10.00 ml于100 ml容量瓶，定容，摇匀，即为10 mg/L硝态氮标准溶液。
2 mol/L KCI: 称取二倍分子量的KCI（105℃烘2 h），双蒸馏水溶解，定容至1000 ml。
五、结果计算：硝态氮(mg/kg) = C*V*D/m式中：C为从标准曲线查得的NO3-—N含量：V为浸提剂体积(ml)，50；D为稀释倍数,无稀释为1；m为土样质量(g)。
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实验土壤硝态氮的紫外分光光度法
根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可
为合理施肥，肥料规划和估产提供依据。
一 .目的要求
了解紫外 / 可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的
测定技术，用校正因数法测定土壤硝态氮的含量。
二 .方法原理
用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210 和 275 纳米的吸光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机
质为主的杂质的吸收。
因为 275 纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在 275 纳米处的吸收值是 210 纳
米处的 f 倍，故可将 A275 校正为有机质在 210 纳米处的干扰吸收，从 A210 中减去，即得硝酸根在 210 纳米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮
得含量。
三 .器皿与试剂
1.紫外、可见分光光度计和xx 比色皿。
2.50 毫升容量瓶 10 个， 100 和 250 毫升锥形瓶各 4 个，漏斗 4 个，普通试
管 4 支， 50 毫升胖肚吸管 1 支，
5、10 毫升和 2 毫升刻度吸管各一只，滴管 2 支。
3.氯化钠溶液 1mol/L:
称取氯化钠 58.44 克溶于 400 毫升水中，转入 1 升容量瓶中，稀释至刻度。
4.硝态氮标准溶液100μ g/ml:
称取于 105℃烘制 2 小时得硝酸钾 0.3609 克溶于水，转移至 500 毫升容量瓶中，用水定容。
临用时再稀释至 20μg/ml。
5.硫酸溶液， 10％（ V/V）
四 .测定步骤
1.待测液制备
称取 10.00 克风干土样于 250 毫升锥形瓶中，加入50 毫升 1 mol/L 的氯化钠溶液，加塞振荡30 分钟，过滤于干净干燥的100 毫升锥形瓶中，初液弃去。
同时做试剂空白。
2.标准曲线绘制与测定
吸取 20μg/ml硝态氮标准溶液0.
00、0.
50、1.
00、2.
00、3.
00、4.00 毫升分别置入 50 毫升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入 2 毫升 10％硫酸溶液，摇匀。
浓度分别为 0.
00、
0.
20、0.
40、0.
80、1.20 和 1.60 μ g/ml。
以零浓度标液作参比，于 210 米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归方程。
去土壤浸体液和试剂空白液各 10 毫升入试管中，加入 0.8 毫升 10％硫酸，摇匀。
以试剂空白作参比，分别于 210 纳米和 275 纳米处测定吸光度，不要每
测一个样品改变一次波长，以避免逐次改变波长而引入波长重现性误差。
若土
壤浸体液吸光度太大，可用氯化钠溶液稀释，但应按比例加入硫酸溶液。
测定时，向比色皿中加入待测液不要超过容积。
3.结果计算
根据测得 A210 和 A275，按下式计算硝态氮的吸光度△A
△A=A210-f × A275
由△ A 从工作曲线上查得相应浓度，乘以液土比和稀释倍数，即为土壤
硝态氮含量。
式中 f 为校正因数，本实验取值为 3.6。
五 .问题讨论
1.为什么标准曲线溶液不加入试剂空白？标准定容后，再加 2 毫升 10％硫酸溶液，对测定结果有没有影响？。