缺氧时三氧化二砷对5-氟尿嘧啶抗肝癌细胞株BEL-7402敏感性的影响
三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制研究
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三氧化二砷抑制人肝癌细胞侵袭性的体外研究
用 四 甲基偶 氮唑 盐 比色 法 （ ｒ ） ＭＴ 法 观察 Ａ 细 胞 生 长 的 影 响 ； 用 Ｔ ａ ｓ ｅｌ 室 进 行 人 工 重 组 基 底 膜 侵 袭 和 运 动 ｓ 对 Ｏ 应 ｒｎ ｗ ｌ 小
［ 键 词 】 三 氧 化 二砷 ； 癌 细胞 株 ； 袭 关 肝 侵
［ 图分 类 号］ Ｒ ３ ． 中 ７ ５７ ［ 文献 标 识 码 ］ Ａ ［ 章 编 号］ １０ — ０ ７ ２ １ ）ｌ ０ ４ — ３ 文 ０ ０ ２ ５ （０ ０ ０ 一 ０ ６ ０
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三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶对小鼠肝癌H22细胞株的抑制作用
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三氧化二砷联合 ５ 一 氟尿嘧啶对小 鼠肝癌 Ｈ ２ 细胞株的
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缺氧时三氧化二砷对肝癌细胞株生长、凋亡及化疗敏感性的影响的开题报告
缺氧时三氧化二砷对肝癌细胞株生长、凋亡及化疗敏感性的影响的开题报告一、研究背景肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，以高度恶性和强烈的浸润和转移特点而著称。
在肝癌治疗中，放疗和化疗是最主要的治疗手段之一。
然而，由于肿瘤生长和代谢特性的复杂性，药物对肝癌的抗肿瘤作用有些限制，导致化疗敏感性不佳，加重了治疗难度，从而限制了其治疗效果。
三氧化二砷是一种广泛应用于白血病治疗的有效成分，其抗肿瘤作用已被广泛研究。
最近的研究表明，三氧化二砷可以通过调节氧化应激反应和凋亡途径来诱导肝癌细胞凋亡和增强化疗的效果。
缺氧是肝癌细胞生长和代谢的一个基本特性，其缺氧微环境会对肝癌细胞的生长和凋亡状态产生重要的影响。
因此，通过研究三氧化二砷对缺氧条件下肝癌细胞生长、凋亡及化疗敏感性的影响，可以为开发新型治疗肝癌的药物提供有价值的参考。
二、研究目的本研究旨在探讨三氧化二砷在缺氧条件下对肝癌细胞株生长、凋亡及其化疗敏感性的影响，为肝癌治疗提供新的治疗策略和理论基础。
三、研究内容和方法1. 研究内容（1）体外培养肝癌细胞株，构建缺氧模型，处理三氧化二砷对肝癌细胞的影响；（2）采用MTT法检测肝癌细胞的增殖能力；（3）采用流式细胞术检测肝癌细胞的凋亡率；（4）实验验后，采用Western blot法检测肝癌细胞凋亡相关蛋白的表达。
2. 研究方法（1）细胞培养：采用SMCC-7721肝癌细胞株，在37℃和5% CO2条件下体外培养。
（2）缺氧处理：肝癌细胞分为缺氧组和正常组，分别培养在缺氧条件和正常氧气情况下。
（3）三氧化二砷处理：加入不同浓度的三氧化二砷（0、1、2、4、8和16μmol/L）到不同组的培养基中，处理72小时。
（4）MTT实验：细胞培养72小时后，加入MTT试剂，分别在490nm波长下测量细胞活力并计算细胞生长曲线。
（5）流式细胞术：采用Annexin V/PI双染法，流式细胞仪检测细胞凋亡率，并绘制细胞凋亡曲线。
（6）Western blot检测：采用Western blot法检测蛋白表达变化。
三氧化二砷对肝癌细胞表达PTTGl和VEGF的影响及其意义
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仙鹤草诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究
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明显 的 减 少 ， Ｆｕ 一 ／ Ｍ 荧光 探 针 的 作 用 下有 较 强 的绿 色 荧光 ， 时检 测 出细胞 内 Ｒ Ｓ有 较 明 显 的增 加 。 结 在 ｌｏ ３ Ａ 同 Ｏ 论 ： 鹤 草 丙酮提 取 物 正 丁醇 萃取 层 能抑 制 Ｂ Ｌ一 ４ ２细胞 的 生长 ， 导 细 胞 发 生 凋 亡 ； 仙 Ｅ ７０ 诱 细胞 内钙 离子 的释 放 和
索拉非尼联合三氧化二砷对肝癌细胞株HepG2的作用
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索 拉非 尼 联 合 三 氧化 二砷 对 肝 癌 细胞 株 Ｈ ｐ ２的作 用 木 ｅＧ
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三氧化二砷对肿瘤抑制作用其机制进展
三氧化二砷对肿瘤抑制作用及其机制研究进展【关键词】三氧化二砷；细胞凋亡；综述【中图分类号】r473.73 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）03-0117-02三氧化二砷系中药砒霜的主要成分，其药用历史悠久。
我国自古就有应用砒霜等砷类中药治疗包括肿瘤在内的多种恶性疾患的记载。
于2000年9月25日通过fda的审批，目前临床上主要用于治疗急性早幼粒白血病（apl）。
经进一步的研究证实， as2o3 不仅治疗apl 有效，而且对其他淋巴、血液系统肿瘤以及一些实体瘤均有较好的抑制作用。
其抗肿瘤的作用机制比较复杂，现综述如下。
1 抑制肿瘤细胞增殖阻滞细胞周期是三氧化二砷抑制肿瘤生长的重要机制之一。
三氧化二砷通过影响细胞周期，抑制其增殖、迁移。
三氧化二砷对u2一os细胞增殖有明显的抑制作用，能使u2-os细胞阻滞于s期，有部分阻滞在g0/g1期，且与三氧化二砷药物浓度关系密切，可能存在浓度范围依赖性[1-2]。
此外，park 等[3] 证实，三氧化二砷小结综上所述，三氧化二砷治疗肿瘤的机制可能通过上述机制的一种或多种方式共同作用，或存在其他未知途经。
砷剂对不同细胞的作用靶点、凋亡机制等问题尚未完全阐明，仍有待深入研究。
近年来国内外对三氧化二砷的抗肿瘤机制进行了大量研究，通过三氧化二砷作用于卵巢癌、肝胆癌、结肠癌、胃癌、鼻咽癌口腔癌、黑色素瘤、眼癌、膀肌癌、肺癌、等多种细胞的体内外实验进展到临床试验，发现它对多数实体瘤有效说明，有广阔的抗肿瘤范围，是一种前景乐观的广谱抗癌药。
因此，随着三氧化二砷的作用机制不断深入研究，相信三氧化二砷为治疗肿瘤提供新的思路，为寻找经济有效且毒副作用小的抗肿瘤药物提供了新的契机，更好地为患者服务。
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三氧化二砷在肝癌的应用
0 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 生存时间（月）
复旦大学中山医院数据
三氧化二砷以PML为靶点清除白血病干细 胞甚至肿瘤干细胞（TSC）
传统的化疗并不能影响休眠的白血病干细胞
As2O3通过PML下调，清除白血病干细胞
几乎所有肿瘤的发生都与PML 的异常表达相关
三氧化二砷可能以PML为靶点清除白血病干细胞甚至多
种肿瘤干细胞（TSC）
Ito K, Bernardi R, Morotti A et al. PML targeting eradicates quiescent leukaemia-initiating cells. Nature 2008;453:1072-1078.
三氧化二砷诱导多药耐药 肝癌细胞株R-HepG2凋亡
120
% cell survival
100 80 60 40 20 0 -20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 As O (μ M）
1day 3day 5day 7day
2 3 Chan JY et al.Effect of arsenic trioxide on multidrug resistant hepatocellular carcinoma cells. Cancer Lett.,2006
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AS2O3对肝癌细胞作用的研究进展
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抑制其端粒酶活性。聂林【４】应用０．２５ ｐｍｏｌ／ＬＡｓ２０３作用肝 癌Ｂｅｌ一７４０２细胞７２ ｈ，可诱导凋亡，降低端粒酶活性， 推测Ａｓ２０３可能是通过抑制端粒酶活性，使端粒缩短而凋 亡。但０．５ ｐｍｏｌ／ＬＡＳ２０３作用２４ ｈ，端粒酶活性就明显降 低，细胞凋亡也明显增多，提示Ａｓ２０３可能通过非端粒酶 的机制发生作用，因为端粒的缩短需要经过数次细胞分 裂，时间会大于２４ ｈ。究竟是端粒酶的破坏使染色体失 去端粒的保护作用引发凋亡，还是细胞凋亡影响端粒酶 的表达，或同时启动两条途径，尚待深入研究。任玮玮【１７】 等研究发现０．５ ｐｍｏｌ／Ｌ Ａｓ２０３作用于ＢＥＬ－７４０２细胞 时，可显著抑制其端粒酶的活性，而对于ＳＭＭＣ一７１２１ 肝癌细胞则需较高浓度（１．０～２．０ ｌａｍｏｌ／Ｕ才能抑制其端 粒酶活性。并指出Ａｓ２０３对这两种细胞的差异性是由于 两种细胞内谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量不同所致。 ３抑制肿瘤血管的形成 通过抑制血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）表达起作用。 崔永安等【ｌ ８ｊ研究表明ＳＭＭＣ一７７２１肝癌细胞未加 药组，ＶＥＧＦ基因表达较强（＋＋），经Ａｓ２０３作用后ＶＥＧＦ 表达受到抑制。说明Ａｓ２０３通过下调ＶＥＧＦ的表达，影 响ＶＥＧＦ的信号通路，来抑制肿瘤血管形成，控制肿瘤 细胞的生长。Ｂｉｎｇ等【１ ９Ｊ研究表明应用ＡＳ２０３治疗肝癌实 体瘤小鼠的瘤体重量明显减轻，特别是ＡＳ２０３在１ ｍｇ／ｋｇ
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缺氧条 件 下对 Ｂ Ｌ一 ４ ２的生 长 抑 制 作 用 比常 氧 Ｅ ７０ 状 态 明显 下 降 ， 统 计学 意 义 。本 实 验研 究 缺 氧 状 有 态下 ， 氧 化 二 砷 对 ５一氟 尿 嘧 啶 抗 肝 癌 细 胞 株 三 Ｂ Ｌ一 ４ ２敏感 性 的影 响 。 Ｅ ７０
（ ｅａｔ ｅ ｔｆＤｇ ｓｖ ， ｅＦ ｕｔ ｆ ｌ ｔ ｏ ｉ ｌ Ｈ ｒｉ Ｍｅｉ ｌ ｎ ｅ ｉ ， ａｂ ５ ０ １ Ｃ Ｉ Ａ） Ｄ ｐ ｒ ｎ ｉｅ ｉ ｔ ｏ ｒ Ａ ｉ ｅ Ｈ ｓ ｔ ａｂｎ ｄｃ ｉ ｒ ｔ Ｈ ｒｉ １０ ０ ， Ｈ Ｎ ｍ ｏ ｔｅ ｈ ｈ ｉ ａ ｄ ｐ ａｏ ｆ ａ Ｕ ｖ ｓｙ ｎ
１２ 细胞培养 ． 肝 癌 细 胞 Ｂ Ｌ一７ ０ Ｅ ４ ２于 含 １％ 胎 牛 血 清 及 ０ １ 双 抗 Ｒ Ｍ １４ ％ Ｐ Ｉ６ ０培 养 液 中 培 养 。化 学 缺 氧 剂 Ｃ Ｃ ， 入 培 养 液 的终 浓 度 为 １ ０ ｐ ｏ Ｌ 用 于 模 ｏ１加 ５ ￣ ｌ ， ｍ ／ 拟 肿瘤 内部 缺氧 微环境 。 １３ Ａ ， 浓度 的确 定 ． ｓ０ 将 我们 以前 研究 结果 ， 应用 剂 量 效应 曲线确 定 Ａ ， 的 非 细 胞 毒 性 剂 量 （ 长 率 ＞９ ％ ）为 ｓ０ 生 ５ ０ ５￣ ｏ／ ， ． ｚ ｌＬ 我们选 择０ ５￣ ＬＬ ｍ ． ｍｏ／ 做为 与 ５一Ｆ Ｕ的 联 合药 物剂 量 。 １４ 实验分 组 ． １４ １ 分两组 ： ｓ０ 、 ．． Ａ ５一Ｆ ｕ联 合用药 组 和 ５一Ｆ ｕ 对照组 。每组 细胞培 养液 中 ， ５一Ｆ ｕ浓 度在 ６ ２ ． ５～ ４ ０ ｍ ／ 间 分 ７个 亚 组 ， 合 用 药 组 培 养 液 中 ０ ｇＬ 联 Ａ ， 浓度 为０ ５ｉ ｏ Ｌ 实 验时 ， ｓＯ ． ｍ ］ 。 ￣ ／ 每个 亚 组设 ３个
Ｋｅ ｒ ： ｓ ｎ ｃ ｔｉｘｄｅ；５ 一ｆ ｒ ｕ ａ ｉ；Ｈｙ ｘ ａ；ＭＴＴ ｍｅｈ ｄ ｙ ｗｏ ｄｓ Ａｒｅ ｉ ｒｏ ｉ ｌ ｕｏ ｏ ｒ ｃ ｌ ｐｏ ｉ ｔｏ
越 来 越多 的证 据 表 明 ， 氧普 遍 存在 于人 类 实 缺 体 肿瘤 中 ¨ 。实验 表 明 ， 同浓 度 Ａ ， 常氧 条 』 相 ｓＯ 在 件 和缺 氧 条件对 Ｂ Ｌ一 ４ ２的生长 抑 制作 用 相 似 ， Ｅ ７０
１ 材 料 与方 法 １ １ 实验 材料 ．
肝癌 细 胞 株 Ｂ Ｌ一７ ０ 由哈尔 滨 医科 大 学 附 Ｅ ４２ 属第 一 医 院 中 心 实 验 室 惠 赠 ； Ｐ Ｉ６ ０培 养 基 购 Ｒ Ｍ １４ 自 Ｇ ｂ ｏ Ｂ Ｌ公 司 ； ｓＯ 、 ｏ １、 １ ｉｃ Ｒ Ａ Ｃ Ｃ２ Ｍ Ｔ ｒ购 自美 国 基 金项 目 ： 黑龙江省 自然科 学基金项 目（ Ｄ （７一 Ａ） ２ Ｄ ％ 黑龙江省卫生厅科研项 目２０ ２６ ０６— ３
ｃ ｒ ｉｏ ｒｗｔ ｎ ｉｉｏ ｆＢ ａｃｎ ｍａｇｏ ｈ ｉｈｂｔ ｎ ｏ ＥＬ一７ ０ ｈ ｎ ５一Ｆ ｌｎ ｈ ｒ ｓｓａｉ ｉａｌ ｉｎｆ ａ ｔｄｆ ｒｎ ｅ（ ＜ ｉ ４ ２ｔａ Ｕ ａｏ ｅ ｔｅｅｗａ ｔｔ ｔ ｌ ｓ ｉ ｃ ｎ ｉ ｅｅ ｃ Ｐ ｓｃ ｙ ｇ ｉ ｆ ０Ｏ ． ５），ｄ ｓ ｏ ｅ—ｅｆｃ ｅ ｅ ｄ ｎ ｉｓ ｆ ｔｄ ｐ ｎ ｅ ｃｅ ．Ｃｏ ｃｕ ｉｎ Ｉ ｈ ｍｉａ ｙ ｏ ｉ ｎ ｕ ｅ ｙ Ｃ Ｃ ２ｎ ｎ—ｃ ｔｔｘｃ ｄ ｓ ｆ ｅ ｎ ｌｓｏ ｎ ｃ ｅ ｃ ｌｈ ｐ ｘａｉｄ ｃ ｄ ｂ ｏ １ ｏ ｙｏｏ ｉ ｏｅ ｏ
ｔｉｘｄ ＡｓＯ ｎ ｇｏ ｈ ｉｈｂｔ ｎｏ ｉｅ ａ ｃ ｒｃ ｌ ＢＥ ｒ ｉｅ（ ， ）ｏ ｒｗｔ ｎ ｉｉ ｏ ｆｌ ｒｃ ｎ ｅ ｅｌ Ｌ一７ ０ ｕｉｇ ｈ ｐ ｘａｔｅ ｏ ｉ ｖ ４ ２ ｄ ｒ ｙ ｏ ｉ ｈ ．Ｍ ｅｈ ｄ Ｔ ｅｅ ｖ— ｎ ｔｏ ｓ ｈ ｎ ｉ ｒｎ ｎ ｆｈ ｐ ｘａｗａ ｄ ｃ ｄ ｂ ｏ １ Ｔ ｅｅｆｃ ｆ ｏ ｍｅ ｔｏ ｙ ｏ ｉ ｓｉ ｕ ｅ ｙＣ Ｃ 。 ｈ ｆ ｔｏ ｎ ｅ ５一Ｆ ｏｎ ， ５一Ｆ ｅｅｍｉｅ ｙＭＴｒ Ｕ ｉｉｔ Ａｓ ０ 、 Ｕ ｄ ｔｒ ｎ ｄ ｂ ．Ｒｅｕｔ ｓｌ ｓ
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｏｂ ｅ ｔｖ Ｔ ｔｄ ｆ ｃ ｆ５一ｆ ｏｏ ｒｃｌ（ ｓｒ ｃ ： ｊ ｃｉｅ ｏ ｓｕ ｙ Ｅ ｆ ｔｏ ｌ ｒｕ ａ ｉ ５一Ｆ ）ｉｉｔ０ ５ ｕ １Ｌ ｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ｆａｓ ｎｃ ｅ ｕ Ｕ） ｏｎ ． ｍｏ／ ｏ ｃ ｎｒｔ ｓ ｏ ｒｅ ｉ ｏ
Ｉ ｂｉｉ ｎ ｏ ｖ ｒ Ｃａ ｃ ｒ ＣｅｌＢＥＬ —７ ０ ｎｈｉ ｔｏ ｆＬｉ ｅ ｎ ｅ ｌ — ４ ２ Ｄｕｒｎ ｐｏ ｉ ｎ Ｖｉｒ ｉ ｇ Ｈｙ ｘａ ｉ ｔｏ
ＬＩ Ｔｉ —ｆ Ｕ ｅ ｕ．， Ｕ ａ —ｅ ｕ ｎ， Ｉ Ｙｏ ＬＩ Ｘｉｏ ｈ ａ Ｌ Ｕ ｎｇ，ｔａ ． ｅ １
刘铁 夫 刘 晓川 刘 勇 赵 丽莉 崔 宝红。周 婷 ， ， ， ， ，
（ ．哈尔滨医科 大学附属第 四医院 ， 龙江 哈尔滨 １０ ０ ； ． １ 黑 ５０ １ ２ 北京 市煤炭 总医院 ， 北京 １０ ２ ； ００ ８ ３ ．哈尔滨 医科大 学附属第 三医院 ， 黑龙江 哈尔滨 １０ ４ ） ５ ００
（ ） 同 浓 度 ５一Ｆ 在 缺 氧 条 件 下 对 Ｂ Ｌ一 １不 ｕ Ｅ ７０ ４ ２的生 长均 有 抑 制作 用 ， 呈剂 量 一效应 关 系 。 并 （ ） 同浓度 的 ５一Ｆ ０ ５￣ ｏ Ｌ Ａ ２ ３在缺 氧 ２不 ｕ＋ ． ｚ ｌ ｓ０ ｍ ／ 条件下对 Ｂ Ｌ一 ４ ２的生 长均有 抑 制作 用 ， Ｅ ７０ 并呈 剂 量 一效 应 关 系 。 （ ３）缺 氧 条 件 下 ， ． ￣ ｏ Ｌ ０ ５ｐ ｌ ｍ ／ Ａ， ｓ０ ＋５一Ｆ Ｕ实验 组对 Ｂ Ｌ一 ４ ２的生长 抑 制作 Ｅ ７０ 用优 于相 同浓 度 的 ５一Ｆ ｕ对 照 组 ， 统 计 学 意 义 有 （ ＜０ ０ ） （ ） 氧 条 件 下 ，． ￣ ｏ Ｌ Ａ ２ ３ Ｐ ．５ 。 ４ 缺 ０ ５ ｐ ｌ ｓＯ ｍ ／
第３ ６卷 ６ ２ ２１ ４ ０ ２年第 ９期
黑
龙
江
医
学
生长抑 制串 ＾
Ｖｏ１３ Ｎｏ ９ ． ６． ． Ｓ ｐ ２０１ ｅ． ２
ＨＥＩＬ ０ＮＧ ＪＡＮＧ ＭＥＤＩ ＡＬ Ｊ Ｉ Ｃ ＯＵＲ ＮＡＬ
孔 ， 平均 值 。 取 １４ ２ 方 法 ： 处 于 对 数 生 长 期 的 细 胞 以 ５ ０Ｘ ．． 将 ． １ ｍＬ ０／ 浓度 接种 于 ９ ６孔 板 中 ， Ｌ ｏ Ｌ 按 上 述 每￣ ２ ｏ ，
＋ ５一Ｆ Ｕ试 验组 和 ５一 Ｕ对 照组 对 Ｂ Ｌ一 ４ ２的 Ｆ Ｅ ７０
生 长 抑 制 的 Ｉ Ｃ。值 分 别 为 ３ ８ ４ ｇ Ｌ 和 ６ ．２ ｍ ／ ６ ３ ７ ｍ ／ ， 异有 显著性 （ ＜０ ０ ） ０ ． ｇ Ｌ 差 Ｐ ．１ 。
Ｉ ｈ ｍｉ ｒ ｎ ｅ ｙ ｏ ｉ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓ ｎ ｃ ｅ ｓ ｙ ｕ ｄ ｒ ｈ ｐ ｘｃ ｏ ｄｔ ｎ ．５ 一 Ｆ ｎ ｄｆ ｒ ｎ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｎ ｃ ｍｂ ｎ ｄ ｗｉ ， ｎ ｈ ｐ ｔ ｅ ｌ ｌ ｒ ｔ ｉ Ｕ ｉ ｉ ｅ ｅ ｔｃ ｎ ｅ ｔ ｉ ｏ ｉ ｅ ｔ Ａｓ Ｏ１ｏ ｅ ａｏ ｅｌ ａ ｆ ａｏ ｈ ｕ
２ 结 果
设 计 加 入 药 剂 ； 养 终 点 前 ４ｈ每 孔 加 入 ＭＴ 培 Ｔ （ ． ＃ｍ ） ０ Ｌ 继 续 培养 ４ｈ 吸 出培 养 液 ， ５０ｍ Ｌ ２ ， ； 每 孔 加入 １０ 二 甲基 亚枫 ， ５ 震荡 １ ｎ ， ０ｍｉ后 酶标 仪波 长５ ０ｎ ７ ｍ处测 吸 光度 （ Ａ值 ） 。实 验 重 复 ３次 。计 算细 胞增殖 抑 制率 ， ５一Ｆ 以 ｕ浓 度 为 横轴 ， 长 抑 生 制率 为 纵 轴 做 图 ， 用 做 图法 求 出半 数 抑 制 浓 度 并 （Ｃ。 。 Ｉ ） １５ 统 计学处 理 ． 用 统计 软件 包 Ｓ Ｓ １ ５分 析 ， 对组 间 比较 采 Ａ １． 配 用 ｔ 验， 检 多组 间 比较 采用 方差 分析及 ｑ检验 。
第 ３ ６卷 ２１ ０ ２年第 ９期
黑
龙
江
医
学
Ｖ０ ＿ ｌ３６． ． Ｎｏ ９
ＨＥ ＯＮＧ Ｊ ＡＮＧ ＭＥ Ｃ ＯＵ ＩＬ Ｉ ＤＩ ＡＬ Ｊ ＲＮＡＬ
Ｓ ｐ ２ １ ｅ ．０ ２
６ ４１
・
论
著 ・
缺 氧 时 三 氧 化 二 砷 对 ５一氟 尿 嘧 啶 抗 肝 癌 细 胞 株 Ｂ Ｌ一７ ０ Ｅ ４ ２敏 感 性 的 影 响
氧条 件 ， 四 甲基偶 氮唑蓝 （ ｅ ｙ ｉ ｏ ｌｅｒｚｌ ｍ ， Ｔ ） 及 ｍ ｔ ｌ ｈａ ｌ ｔ ｏ ｕ Ｍ Ｔ 法测 定缺氧 条件 下 不 同浓度 ５一Ｆ ｈ ｔ ｚｙ ｔ ａ ｉ Ｕ及 ５一Ｆ Ｕ