人肝癌细胞系SMMC-7721肿瘤干细胞筛选及鉴定
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黄芩苷对人肝癌细胞系SMMC7721抑瘤作用的实验研究
ｍｅ ｌｈ ｄ ｒｍａｋ ｂｅｉｈｂｔｒ ｆ ｃ ｎ ｔｅ ｇｏ ｈｏ ＭＭＣ ７ ２ ｎｖｔ ，ａ ｄ ｈ ｄ ｓａｉ ｉａｌ ｉｎｆ ａ ｔｄｆ ｒｎ ｅｉ ｏ ＿ ａ ｅ ｒａ ｌ ｎ ｉｉ ｙ ｅｆ ｔ ｈ ｒｗ ｆＳ ／ｍ ｏ ｅ ｏ ｔ ７ １ｉ ｉ ｏ ｎ ａ ｔｔ ｔ ｌ ｓｇ ｉｃ ｎ ｉｅｅ ｃ ｎｃ ｎ— ｒ ｓｃ ｙ ｉ
３ １０ ； ４ ０ ０
① ４ ～ ．０ １ ｇ ｍ 黄芩苷组对 Ｓ ０ ０ ５３ ２５ｍ ／ ｌ ＭＭＣ７ ２ ７ １肿瘤细胞 生长均具有明显抑制作用， 与细胞组对照比差异有 显著性 （ Ｐ ＜ ．５或 Ｐ＜ ． １ 。０ ５～ ．６ ｇ ｌ黄芩苷组肿 瘤生长抑 制率与其他浓度组比差异有显著性 （ ０ 叭 ）与 顺铂 ００ ０ ０ ） ． ０ ０２５ｍ／ｍ Ｐ＜ 、 ，
摘要： 目的 研究黄芩苷对人肝癌细胞 系Ｓ Ｍ ７２ 的生长抑制作用并初步探计其作用机制。方法 采用 ＭＩ 法检测 Ｍ Ｃ７ １ ｒ１ Ｔ Ｉ
黄芩 苷 对 人 肝 癌 Ｓ ＭＭＣ ７ １细胞 株 增 殖 的 抑 制 作 用 ， 采 用 流 式 细 胞 技 术 检 测 其 对 Ｓ ７２ 并 ＭＭＣ ７ １细 胞 周 期 的 影 响 。 结 果 ７２
维普资讯
பைடு நூலகம்
时珍 国医国药 ２０ ０ ８年第 １ 第 ６期 ９卷
ＬＳ Ｉ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ Ｅ Ｅ Ｒ Ｈ２０ Ｏ ．９Ｎ ． Ｉ Ｚ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ ＳＡ Ｃ ０８Ｖ Ｌ１ Ｏ ６ Ｈ Ｈ
中 图分 类号 ：２ ５ ５ 文献标 识码 ： Ｒ８． Ａ
文章 编号 ：０ ８０ ０ （ ０ ８ ０ — ２ ＿２ １０ －８ ５ ２ ０ ） ６１ ２（ ４ ）
３ １０ ； ４ ０ ０
① ４ ～ ．０ １ ｇ ｍ 黄芩苷组对 Ｓ ０ ０ ５３ ２５ｍ ／ ｌ ＭＭＣ７ ２ ７ １肿瘤细胞 生长均具有明显抑制作用， 与细胞组对照比差异有 显著性 （ Ｐ ＜ ．５或 Ｐ＜ ． １ 。０ ５～ ．６ ｇ ｌ黄芩苷组肿 瘤生长抑 制率与其他浓度组比差异有显著性 （ ０ 叭 ）与 顺铂 ００ ０ ０ ） ． ０ ０２５ｍ／ｍ Ｐ＜ 、 ，
摘要： 目的 研究黄芩苷对人肝癌细胞 系Ｓ Ｍ ７２ 的生长抑制作用并初步探计其作用机制。方法 采用 ＭＩ 法检测 Ｍ Ｃ７ １ ｒ１ Ｔ Ｉ
黄芩 苷 对 人 肝 癌 Ｓ ＭＭＣ ７ １细胞 株 增 殖 的 抑 制 作 用 ， 采 用 流 式 细 胞 技 术 检 测 其 对 Ｓ ７２ 并 ＭＭＣ ７ １细 胞 周 期 的 影 响 。 结 果 ７２
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时珍 国医国药 ２０ ０ ８年第 １ 第 ６期 ９卷
ＬＳ Ｉ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ Ｅ Ｅ Ｒ Ｈ２０ Ｏ ．９Ｎ ． Ｉ Ｚ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ ＳＡ Ｃ ０８Ｖ Ｌ１ Ｏ ６ Ｈ Ｈ
中 图分 类号 ：２ ５ ５ 文献标 识码 ： Ｒ８． Ａ
文章 编号 ：０ ８０ ０ （ ０ ８ ０ — ２ ＿２ １０ －８ ５ ２ ０ ） ６１ ２（ ４ ）
沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体内外肿瘤血管的影响
ｖｖ ｉｏ：Ｈｕ ｎｌ ｅ ａ ｃ ｒｗａ ｒｎ ｐａ ｔｄ ｓ ｂ ｕａ ｅ ｕ ｌ ｎ ｍｉｅ，ｔｅ ｉｉｅ ｎｏｔ ｒｕ ｓ：ｃ ｎｒｌｇｏ ｐａ ｄ ｔａｉｏ ｍａ ｉ ｒｃｎ ｅ ｓｔａ ｓ ｌｎｅ ｕ ｃ ｔｎ ｏ ｓｙｉ ｃ ｖ ｈ ｎｄｖｄ ｄ ｉｔ ｗｏｇｏ ｐ ｏ ｔ ｒｕ ｈ ｄ — ｏ ｎ ｌ ｍｉｅｇｏ ｐ．ＶＥＧＦ ｐｏｅｎｌｖ ｌｉ ｅｕ ｗａ ｅｅｍｉｅ ｙＥ ＳＩ ＭＶＤ Ｓ ａｃ ｌｔｄｂ ｍｍｕ ｏ ｉｔｃ ｅ ｓｒ．Ｒｅｕｔ ｄ ｒｕ ｒｔｉ ｅ ｅ ｎｓｒ ｍ ｓｄ ｔｒ ｎ ｄ ｂ Ｌ Ａ． Ｗａ ｃ ｕａｅ ｙｉ ｌ ｎ ｈｓｏ ｈ ｍｉｔｙ ｓ ｌｓ
ｉｇ ｈ ｅｓ ｏ ｈ ｉｏ ｉｅｓｌｔｎ ｉｃｅｓｄｆ ｍ ０ ｇ ｍ ｏ４ ０ ｇｍｌ ｈｌ ｔｅＶ Ｇ ｈ ｇｄｆ ｍ （ ３２ ｎ ．Ｔ ｅｄｎｉ ｆＴ ａ ｄｍ ｄ ｏｕｉ ｎｒａｅ ｒ ／ ｌｔ ０ ／ ｉ ｈ Ｅ Ｆ ｃａ ｅ ｒ ￣ ｌ ｏ ｏ ｗ ｅ ｎ ｏ ８ ． １±
ｉ ｈ ｂ ｔ ｄ ｂ ｈ ｉ ｏ ｄ ｎ ｈ ｎ ｉ ｉ ｏ ｒ ｗ ａ ｕ ｌ ｔ ｈ ｎ ｒ ａ ｅ ｏ ｅ ｄ ｎ ｉ ｆｔ ａ ｉ ｏ ｄ ｏｕ ｉ ｎ ｎ ｉ ｉ ｙ ｔ ａ ｄ ｍｉ ｅ ａ ｄ ｔ ｅ ｉ ｈ ｂ ｔ ｎ ｇ ｅ ｇ ｄ ａ ｙ ｗ ｈ ｔ ｅ ｉ ｃ ｅ ｆｔ ｅ ｓｔ ｏ ｌ ｄ ｍｉ ｅ ｓ ｌ ｔ ． ｅ ｌ ｉ ｒ ｌ ｉ ｓ ｈ ｙ ｈ ｏ
８ ３ ） ｇ ｍ ｏ（ ３ ５ ．２ ｐ／ ｌ ｔ ３ ． ９±１ ．８ ｐ／ １ ｏ ｃｕｉｎ Ｔ ｅａｔ ｎｉｇｎｃｏ ｕ ａ ｅａｏ ｅｌ ＭＭＣ一７ ２ ａ ｅ ０ ９ ） ｇ ｍ ．Ｃ ｎ ｌｓ ｈ ｉ ｇｏｅ ｉ ｆＨ ｍ Ｈ ｐ ｔ Ｃ ｌ Ｓ ｏ ｎ ａ ｎ ｍａ ７ １Ｃ ｂ ｎ
pEGFP-N2-ECM1重组质粒的构建及其在人肝癌细胞系SMMC-7721中的表达
Ｂ ｍ 、 Ｎ ｒｅ 购于 美 国 ＭＢ 公 司 ； ａ Ｈ ＩＤ Ａ Ｍａｋ ｒ Ｉ 质粒 小 量
Ｓ ＭＭＣ ７２ 一７ １肝癌细胞 系。方 法
术构建 ｐ Ｇ ＰＮ 一Ｃ 真核表 达载体 ， Ｅ Ｆ — ２Ｅ Ｍ１ 经酶切 、 测序鉴定正
确后 ， 脂质体 转染 Ｓ 用 ＭＭＣ７２ 一７ １细胞 ， ４ ８药 物 筛选 稳 定 Ｇ１ 转染 的细胞 系。荧 光显微镜检测融合 蛋 白表达 ， ＴＰ Ｒ技 Ｒ —Ｃ 术检测 Ｅ Ｍ１ 因表达 。结果 构建 的重 组质 粒经 双酶 切 Ｃ 基 及 测序分析鉴定 ， 结果证实 ｐ Ｇ ＰＮ ．Ｃ Ｅ Ｆ — ２Ｅ Ｍ１构建成功 ； 筛选
了 ｐ Ｇ ＰＮ － Ｃ Ｅ Ｆ —２Ｅ Ｍ１的真核表 达载体 ， 在肝 癌 Ｓ 并 ＭＭＣ７２ －７ １
细胞 中稳定表达 ， 为研究 Ｅ Ｍ１在肝癌进展 中的作 用奠定 了 Ｃ
实 验基础 。
公司； 胰酶购于江苏碧 云天公 司； 高糖Ｈ ｃｏｅ公 司 ； ４ ８购 于美 国 Ｒ ｓｅ ｙｌｎ Ｇ１ ｏｈ 公 司 、 培养 板 购 于 Ｃ ｒｉｇ公 司 ；Ｒ ｖｒ 反 转 ６孔 ｏｎｎ ｅｅｔ Ａ 录试 剂盒 购 于 Ｆｒ ｎａ 公 司。Ｌ ｅｍｅｔｓ Ｂ—Ｋ ｎ ａａ琼脂 培养
安徽 医科 大学学报
Ａｔ ｎｖｒｔｔ ｄ ｉ ｌ ｎ ｕ ２ １ ｅ ；７ ２ ｃ Ｕ ｉ ｓａｉＭｅｉｎ ｉＡ ｈ ｉ ０ ２Ｆｂ ４ （ ） ａ ｅｉ ｓ ｃａｓ
・１ ３・ ３
ｐ Ｇ ＰＮ －Ｃ Ｅ Ｆ —２Ｅ Ｍ１ 重组质粒 的构 建 及其在人肝癌细 胞 系 Ｓ ＭＭＣ７２ 一 １中的表达 ７
生 物学 功能 提供 依据 。
１ 材料 与方 法
Ｂ ｍ 及保护性碱基 ， ａ ＨＩ 并保持 Ｅ Ｍ１阅读框正确 ； Ｃ 所 有 引物 由上 海生工 生 物技术 有 限公 司合 成 。扩增
Ｓ ＭＭＣ ７２ 一７ １肝癌细胞 系。方 法
术构建 ｐ Ｇ ＰＮ 一Ｃ 真核表 达载体 ， Ｅ Ｆ — ２Ｅ Ｍ１ 经酶切 、 测序鉴定正
确后 ， 脂质体 转染 Ｓ 用 ＭＭＣ７２ 一７ １细胞 ， ４ ８药 物 筛选 稳 定 Ｇ１ 转染 的细胞 系。荧 光显微镜检测融合 蛋 白表达 ， ＴＰ Ｒ技 Ｒ —Ｃ 术检测 Ｅ Ｍ１ 因表达 。结果 构建 的重 组质 粒经 双酶 切 Ｃ 基 及 测序分析鉴定 ， 结果证实 ｐ Ｇ ＰＮ ．Ｃ Ｅ Ｆ — ２Ｅ Ｍ１构建成功 ； 筛选
了 ｐ Ｇ ＰＮ － Ｃ Ｅ Ｆ —２Ｅ Ｍ１的真核表 达载体 ， 在肝 癌 Ｓ 并 ＭＭＣ７２ －７ １
细胞 中稳定表达 ， 为研究 Ｅ Ｍ１在肝癌进展 中的作 用奠定 了 Ｃ
实 验基础 。
公司； 胰酶购于江苏碧 云天公 司； 高糖Ｈ ｃｏｅ公 司 ； ４ ８购 于美 国 Ｒ ｓｅ ｙｌｎ Ｇ１ ｏｈ 公 司 、 培养 板 购 于 Ｃ ｒｉｇ公 司 ；Ｒ ｖｒ 反 转 ６孔 ｏｎｎ ｅｅｔ Ａ 录试 剂盒 购 于 Ｆｒ ｎａ 公 司。Ｌ ｅｍｅｔｓ Ｂ—Ｋ ｎ ａａ琼脂 培养
安徽 医科 大学学报
Ａｔ ｎｖｒｔｔ ｄ ｉ ｌ ｎ ｕ ２ １ ｅ ；７ ２ ｃ Ｕ ｉ ｓａｉＭｅｉｎ ｉＡ ｈ ｉ ０ ２Ｆｂ ４ （ ） ａ ｅｉ ｓ ｃａｓ
・１ ３・ ３
ｐ Ｇ ＰＮ －Ｃ Ｅ Ｆ —２Ｅ Ｍ１ 重组质粒 的构 建 及其在人肝癌细 胞 系 Ｓ ＭＭＣ７２ 一 １中的表达 ７
生 物学 功能 提供 依据 。
１ 材料 与方 法
Ｂ ｍ 及保护性碱基 ， ａ ＨＩ 并保持 Ｅ Ｍ１阅读框正确 ； Ｃ 所 有 引物 由上 海生工 生 物技术 有 限公 司合 成 。扩增
扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC_7721的增殖和诱导凋亡的实验研究
Modern Practical Medicine,July2012,Vol.24,No.7・740・扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究刘帆【摘要】目的探讨扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的作用。
方法MTT法测定扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖的影响；Elisa法测定肿瘤坏死因子（TNF-g/ml、50生成均有明显的促进作用，对SMMC-7721细胞凋亡具有明显的促进作用，并随浓度和时间（24～72h）的增加凋亡率增加，活细胞减少；扶正消瘤汤高剂量组对SMMC-7721细胞bax表达有明显上调作用，浓度越大上调越明显。
扶正消瘤汤高、低剂量组对SMMC-7721细胞bcl-2表达有明显下调作用，其中高剂量组与模型组差异有统计学意义（生成有关，并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控bax、bcl-2表达有关。
【关键词】扶正消瘤汤；细胞凋亡；肿瘤坏死因子；bax；bcl-2doi:10.3969/j.issn.1671-0800.2012.07.009【中图分类号】R285.5；R735.7【文献标志码】A【文章编号】1671-0800(2012)07-0740-03Experimental research of Fuzheng xiaoliu decoction on inhibiting proliferation and inducting apoptosis of humanhepatoma SMMC-7721cells【Abstract】Objective To investigate the effect of Fuzheng xiaoliu decoction on inhibiting proliferation and inductingapoptosis of human hepatoma SMMC-7721cells.Methods The influence of Fuzheng xiaoliu decoction on the pro-liferation of human hepatoma SMMC-7721cells was determined by MTT assay.TNF-g/ml and50(TNF-现代实用医学2012年7月第24卷第7期・741・1.1细胞人肝癌细胞SMMC-7721购自北京协和医学院细胞资源中心。
三氧化二砷诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及对OPN表达的影响
ｏ ｕ ｎ ｈ ｐ ｔｃ ｌ ］ｒｃ ｒ ｉ ｏ ．Ｍ ｅ ｈ ｄ Ｔ ｅ ｈ ｍａ ｅ ａｏ ｅｌ ｌｒ ｃ ｒ ｉｏ ｅ ｌｌ ｅ Ｓ ｆｈ ｍａ ｅ ａｏ ｅｌ ａ ａ ｃｎ ｍａ ｕ ｔｏ ｓ ｈ ｕ ｎ ｈ ｐ ｔ ｃ ｌ ａ ａｃ ｎ ｍａ ｃ ｌ ｉ ＭＭＣ ７ ２ ｒ ｕ ｔｒ ｄ ｕ ｎ － ７ １ ｗｅｅ ｃ ｌ ｅ ｕ
将一 定浓度梯 度 的 Ａ 。与人 ｓ０
肝癌细胞株 Ｓ ＭＣ７２ 孵育后 ， Ｍ －７ １ 采用 Ｍｒ 法 、 ｒ ｒ 荧光显微镜及流式细胞 仪检测细胞增殖 与凋亡变 化 ， 转录 聚合 酶 逆 链反应 （ ＴＰ Ｒ） Ｒ ．Ｃ 检测肝癌 细胞株 中骨桥蛋 白基 因（ Ｐ Ｎ 表达水平。结 果 Ａ ， Ｏ Ｎ ｍＲ Ａ） ｓＯ 作用后 Ｓ ＭＭＣ７ ２ －７ １细胞 生 长明显受抑 ， 且呈时间一浓度依赖性 ； 荧光 显微镜下 细胞 呈典型 的凋亡形 态学 改变 ； 在流式 细胞仪 上可见 “ 凋亡 峰 ” 细胞周期阻滞 于 Ｇ ／ ， Ｍ期 ； 细胞 Ｏ Ｎ ｍ Ｎ Ｐ Ｒ Ａ表达 阳性 ， Ｐ Ｒ Ｏ Ｎ ｍ ＮＡ表达水 平明显下调 。结论 有效抑制肝癌 细胞株生长 ； 其机制可能为诱导细胞凋亡 、 调 Ｏ ＮｍＲ Ａ表 达。 下 Ｐ Ｎ ［ 关键词 ］ 三氧化二砷 ； 肝癌细胞 ， 凋亡 ； 骨桥 蛋白； 肿瘤转移 Ａ ，体外能 ｓＯ
ｃ ｒｉｏ ａ ＳＭ ＭＣ－７ ｅＩ ａ ｃｎ ｍ ７ ２１ ｃ ｌ
Ｚ Ｕ Ｙ ｈ ， Ｕ Ｊ — ｅ， ＨＯ ａ Ｙ ｉ ｗ ｉ ａ
Ｈ ｎ －ｉ ，， ｏ ｇｘａ ｌ
－ａ ｊｎ ｉ
（ ａ ｔ ｇ Ｕ ｉ ｒｔ ， ａ ｔｎ ２ ０ １ Ｐ Ｒ Ｃ ｉａ １Ｎ ｎ ｎ ｎｖ ｓｙ Ｎ ｎｏ ｇ２ ６ ０ ， ． ． ｈｎ ） ｏ ｅｉ
将一 定浓度梯 度 的 Ａ 。与人 ｓ０
肝癌细胞株 Ｓ ＭＣ７２ 孵育后 ， Ｍ －７ １ 采用 Ｍｒ 法 、 ｒ ｒ 荧光显微镜及流式细胞 仪检测细胞增殖 与凋亡变 化 ， 转录 聚合 酶 逆 链反应 （ ＴＰ Ｒ） Ｒ ．Ｃ 检测肝癌 细胞株 中骨桥蛋 白基 因（ Ｐ Ｎ 表达水平。结 果 Ａ ， Ｏ Ｎ ｍＲ Ａ） ｓＯ 作用后 Ｓ ＭＭＣ７ ２ －７ １细胞 生 长明显受抑 ， 且呈时间一浓度依赖性 ； 荧光 显微镜下 细胞 呈典型 的凋亡形 态学 改变 ； 在流式 细胞仪 上可见 “ 凋亡 峰 ” 细胞周期阻滞 于 Ｇ ／ ， Ｍ期 ； 细胞 Ｏ Ｎ ｍ Ｎ Ｐ Ｒ Ａ表达 阳性 ， Ｐ Ｒ Ｏ Ｎ ｍ ＮＡ表达水 平明显下调 。结论 有效抑制肝癌 细胞株生长 ； 其机制可能为诱导细胞凋亡 、 调 Ｏ ＮｍＲ Ａ表 达。 下 Ｐ Ｎ ［ 关键词 ］ 三氧化二砷 ； 肝癌细胞 ， 凋亡 ； 骨桥 蛋白； 肿瘤转移 Ａ ，体外能 ｓＯ
ｃ ｒｉｏ ａ ＳＭ ＭＣ－７ ｅＩ ａ ｃｎ ｍ ７ ２１ ｃ ｌ
Ｚ Ｕ Ｙ ｈ ， Ｕ Ｊ — ｅ， ＨＯ ａ Ｙ ｉ ｗ ｉ ａ
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－ａ ｊｎ ｉ
（ ａ ｔ ｇ Ｕ ｉ ｒｔ ， ａ ｔｎ ２ ０ １ Ｐ Ｒ Ｃ ｉａ １Ｎ ｎ ｎ ｎｖ ｓｙ Ｎ ｎｏ ｇ２ ６ ０ ， ． ． ｈｎ ） ｏ ｅｉ
苦参碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的实验研究
宁 夏 医学 院 附 属 医 院 ， 宁夏 银 川 ７ ０ ０ ） ５０ ４ 摘 要： 目的 研 究 不 同 浓 度 的 苦 参 碱 对 人 肝 癌 Ｓ ＭＭＣ ７ ２ 一７ １ 细胞 诱 导凋 亡 的 作 用 。方 法 将 不 同浓 度 的 苦 参 碱 作 用 于 培
号 ：０ ４ ３ １ 四 氮 噻唑 蓝 （ ２００ ０ ； ＭＴＴ） 美 国 Ｓｇ ： ｉｍａ公 司
物 浓度 的增 加 及 作 用 时 间 的延 长 而 加 强 （ ＜ ０ Ｏ １ 。光 学 Ｐ ．０ ）
２ １ 实验 分组 ．
实 验组 分 加 药 组 和对 照 组 两组 ， 加
药 组分 别加 入苦 参碱浓 度为 ２ ０ ，． ２ ６ ０ ． １ ４ ０ ，． ４和８ ０ ．５ ｍｍｏ ・ ， 浓度 设 ８个 复孔 ， 照组 加 等 量 的 培 ｌ Ｌ 每 对 养基， 混匀后放 人 ５ Ｃ 养箱 中培养 。 Ｏ 培 ２ ２ 四 氮噻 唑 蓝（ ． ＭＴＴ） 比色法 取 ４个 ９ ６孔 培 养 板 ， 对数生 长期 Ｓ 取 ＭＭＣ ７ ２ 细 胞 ， 一７ １ 每板 １ ５ 孔 Ａ一Ｈ 中， 每孔 加入 １ ０ Ｌ细胞 悬 液 ， ０ 培养 ２ ， ４ｈ 待细 胞 贴 壁后 ， 行 换 液 和 药 物 处 理 ， 上 清 液 ， 入 １ ０ 进 弃 加 ０ 肚 ． １４ ０ ，． ４和 ８ ０ Ｌ ２ ０ ，． ２ ６ ０ ． ５ｍｍｏ ・ 参 碱 ， 照 ｌ Ｌ苦 对 组 加入 １ ０肛 ０ Ｌ的培 养液 ， 混匀 。３ ℃ 、 Ｈ７ ２置 ５ ７ ｐ ． Ｃ 培 养箱 中培 养 。分 别 培养 ２ ， ８ ７ Ｏｚ ４ ４ ， ２和 ９ （ ６ｈ 每 个 时 间段用一 个 ９ ６孔 培 养 板 ） 培养 到 预 定 时 间时 ， ， 弃 上清 液 ， 各孔 中加入 ５ｇ・Ｌ 在 ＭＴＴ ３ Ｌ ， ０肛 继续
号 ：０ ４ ３ １ 四 氮 噻唑 蓝 （ ２００ ０ ； ＭＴＴ） 美 国 Ｓｇ ： ｉｍａ公 司
物 浓度 的增 加 及 作 用 时 间 的延 长 而 加 强 （ ＜ ０ Ｏ １ 。光 学 Ｐ ．０ ）
２ １ 实验 分组 ．
实 验组 分 加 药 组 和对 照 组 两组 ， 加
药 组分 别加 入苦 参碱浓 度为 ２ ０ ，． ２ ６ ０ ． １ ４ ０ ，． ４和８ ０ ．５ ｍｍｏ ・ ， 浓度 设 ８个 复孔 ， 照组 加 等 量 的 培 ｌ Ｌ 每 对 养基， 混匀后放 人 ５ Ｃ 养箱 中培养 。 Ｏ 培 ２ ２ 四 氮噻 唑 蓝（ ． ＭＴＴ） 比色法 取 ４个 ９ ６孔 培 养 板 ， 对数生 长期 Ｓ 取 ＭＭＣ ７ ２ 细 胞 ， 一７ １ 每板 １ ５ 孔 Ａ一Ｈ 中， 每孔 加入 １ ０ Ｌ细胞 悬 液 ， ０ 培养 ２ ， ４ｈ 待细 胞 贴 壁后 ， 行 换 液 和 药 物 处 理 ， 上 清 液 ， 入 １ ０ 进 弃 加 ０ 肚 ． １４ ０ ，． ４和 ８ ０ Ｌ ２ ０ ，． ２ ６ ０ ． ５ｍｍｏ ・ 参 碱 ， 照 ｌ Ｌ苦 对 组 加入 １ ０肛 ０ Ｌ的培 养液 ， 混匀 。３ ℃ 、 Ｈ７ ２置 ５ ７ ｐ ． Ｃ 培 养箱 中培 养 。分 别 培养 ２ ， ８ ７ Ｏｚ ４ ４ ， ２和 ９ （ ６ｈ 每 个 时 间段用一 个 ９ ６孔 培 养 板 ） 培养 到 预 定 时 间时 ， ， 弃 上清 液 ， 各孔 中加入 ５ｇ・Ｌ 在 ＭＴＴ ３ Ｌ ， ０肛 继续
原花青素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的作用
ｏ ｕ ａ ｅ ａｏ ｅｌｌｎ Ｍ Ｍ Ｃ－ ２１ Ｍ ｅ ｈｏ Ｈｕｍａ ｐａｏ ｅｌ ｌ Ｍ Ｍ Ｃ－ ７ ｆｌｇ ｒｔ ｍ ｅ ｅａ ｅ ｏ ｆｈ ｍ ｎ ｈ ｐ ｔｍａ ｃ ｌ ｉ ｅ Ｓ ７７ ． ｔ ｄｓ ｎ ｈｅ ｔ ｍａ ｃ ｌ ｉ Ｓ ｎｅ ７ ２１ ｏ ｏ ａ ｈ ｖ ｇ ｔｌｐ ｒ ｄ， ｉ ｉ
ｗ ｒ ｕｔ ｅ ｉ ｉｅｅｔ ｅｓｙｏ Ａ （０ ４ ， ０ｍ ／ ）ｆ ４ｈ ｕｓ ｈ ｕｐｅｓ ｎｒ ｅｏ ｌｐｏｉ ｒｉｎｗ ｓ ｅｅｃｌ ｒｄｗｔ ｄ ｒｎ ｄｎｉ ｆ ｕ ｈ ｆ ｔ Ｐ ２ ， ０ ６ ｇ Ｌ ｏ ２ ｏｒ，ｔ ｓｐ ｒ ｉ ａ ｆ ｅ ｒ ｆ ａ ｏ ａ ｒ ｅ ｓ ｏ ｔ ｃ ｌ ｌｅ ｔ
ｍｅ ｓ ｅ ｙ ＭＴｒ ａ ｓ ｙ ｎ ｐ ｐ ｏｉ ｓ ｄ ｔｃｅ ｙ ｆ ｗ ｃ ｔｍｅｒ ． ｅ ｓｉ ａ ｈ ｇ ｏ ｐ ｗｅｅ ｉｖ ｓｉａｅ ｉ ａ ｕ ｄｂ ｒ ｓ ａ ，ａ ｄ ａ ｏ ｔｓｓｗａ ｅ ｅ ｔｄ ｂ ｏ ｙｏ ｔ Ｃ Ｕ ｎ ｅ ｃ ｒ ｕ ｒ ｎ ｅ ｔ ｔｄ ｗ ｔ ＭＤＡ， ｌ ｙ ｇ ｈ
关键词： ， 癌 肝细胞 ； 原花青索； 增殖 ： 细胞凋亡
中 图 分类 号 ： ７５ ７ Ｒ ３ ． 文 ０ ４ － ０ －３ １０ －６ Ｘ ２ １ ）９０ ４０ ０
Ｅ ｅ ｔ ｆｐｏ ｙ ｎｄｎ ｏ ｒ ｌ ｒ ｔ ｎ ａ ｄ ａ ｏ ｔ ｓｓ ｏ ｕ ｎ ｈ ｐ ｔ ｍａ ｃ ｌ ｌ ｅ Ｓ ＭＣ－ ７ ｆ ｃｓｏ ｒ ｃ ａ ｉｉ ｎ ｐ ｏｉ ａ ｉ ｎ ｐ ｐｏ ｉ ｆｈ ｍａ ｅ ａｏ ｆ ｅ ｏ ｅｌｉ Ｍ ｎ ７ ２１
Ｂ ｔ ｔｅｓｐｒｓ ｏ ａ ｎ ｅ ｐｐｏｃｒ ｅ ｌ ａ ｄｗｔ ｔ ｃｅｓ ｇＰ ｏｃｍｔ ｔｎ Ｐ＜ ．５ ．Ｃ ｎｒ ｔｏ ｏ — ｏｈ ｈ ｕ ｐｅｓ ｎｒ ｅ ｄｔ ｏｔ ｉ ａ ｅ ｔ ｉ ｅｉ ｒａｉ Ａｅｎｅ ｒ ｉ （ ０ ０ ） ｏｔ ｓ ｔｃｎ ｉ ｔａ ｈ ａ ｔ ｔｅ ｖ ｅ ｈｈ ｎ ｎ ａｏ ａ
ｗ ｒ ｕｔ ｅ ｉ ｉｅｅｔ ｅｓｙｏ Ａ （０ ４ ， ０ｍ ／ ）ｆ ４ｈ ｕｓ ｈ ｕｐｅｓ ｎｒ ｅｏ ｌｐｏｉ ｒｉｎｗ ｓ ｅｅｃｌ ｒｄｗｔ ｄ ｒｎ ｄｎｉ ｆ ｕ ｈ ｆ ｔ Ｐ ２ ， ０ ６ ｇ Ｌ ｏ ２ ｏｒ，ｔ ｓｐ ｒ ｉ ａ ｆ ｅ ｒ ｆ ａ ｏ ａ ｒ ｅ ｓ ｏ ｔ ｃ ｌ ｌｅ ｔ
ｍｅ ｓ ｅ ｙ ＭＴｒ ａ ｓ ｙ ｎ ｐ ｐ ｏｉ ｓ ｄ ｔｃｅ ｙ ｆ ｗ ｃ ｔｍｅｒ ． ｅ ｓｉ ａ ｈ ｇ ｏ ｐ ｗｅｅ ｉｖ ｓｉａｅ ｉ ａ ｕ ｄｂ ｒ ｓ ａ ，ａ ｄ ａ ｏ ｔｓｓｗａ ｅ ｅ ｔｄ ｂ ｏ ｙｏ ｔ Ｃ Ｕ ｎ ｅ ｃ ｒ ｕ ｒ ｎ ｅ ｔ ｔｄ ｗ ｔ ＭＤＡ， ｌ ｙ ｇ ｈ
关键词： ， 癌 肝细胞 ； 原花青索； 增殖 ： 细胞凋亡
中 图 分类 号 ： ７５ ７ Ｒ ３ ． 文 ０ ４ － ０ －３ １０ －６ Ｘ ２ １ ）９０ ４０ ０
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扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究
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【 键 词 】 扶 正 消瘤 汤 ； 胞凋 亡 ； 瘤 坏死 因 子 ；ａ ；ｃ一 关 细 肿 ｂ ｘ ｂｌ ２ ｄ ｉ ０ ９９ ．ｓ．６ １０ ０ ． １．７ ０ ｏ： ． ６ ￣ｉ ｎ１７ －８０２ ２０ ． ９ １３ ｓ ０ ０
扶正消瘤汤对肿瘤 的治疗作用
的机制可 能与促进Ｔ ＦⅡ Ｎ ．生成有关 ， 并且与抑制肿瘤细胞增殖 、 诱导肿瘤细胞凋亡 、 调控 ｂｘ ｂ １ 表达有关。 ａ 、ｃ ２ ．
瘤汤 １０ ｍｌ５ ｍｌ ０ 、０ 剂量组在 １ ８ ２～ ４ｈ对人肝癌细胞 Ｓ ＭＭＣ ７ ２ ．７ １的生长有明显的抑制作用 ，４～ ２
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【 键 词 】 扶 正 消瘤 汤 ； 胞凋 亡 ； 瘤 坏死 因 子 ；ａ ；ｃ一 关 细 肿 ｂ ｘ ｂｌ ２ ｄ ｉ ０ ９９ ．ｓ．６ １０ ０ ． １．７ ０ ｏ： ． ６ ￣ｉ ｎ１７ －８０２ ２０ ． ９ １３ ｓ ０ ０
扶正消瘤汤对肿瘤 的治疗作用
的机制可 能与促进Ｔ ＦⅡ Ｎ ．生成有关 ， 并且与抑制肿瘤细胞增殖 、 诱导肿瘤细胞凋亡 、 调控 ｂｘ ｂ １ 表达有关。 ａ 、ｃ ２ ．
瘤汤 １０ ｍｌ５ ｍｌ ０ 、０ 剂量组在 １ ８ ２～ ４ｈ对人肝癌细胞 Ｓ ＭＭＣ ７ ２ ．７ １的生长有明显的抑制作用 ，４～ ２
文蛤抗癌多肽抑制肝癌细胞SMMC-7721差异蛋白质组分析
１ 材 料 与 方法
１２ ２ 第一 向等 电聚焦胶 电泳 （Ｅ ） ．． Ｉ Ｆ 自制胶 条 采用 ｐ 范 围在 ３～１ Ｈ ０和 ５～８的两 性
收 稿 日期 ：０ ８０ —５ ２０ －８１
基金项 目： 门市科技计划项 目（ ５２ ２ ０ ３ ２ ） 厦门市卫生局 厦 ３ ０ Ｚ ０ ６０ １ ， 资助项 目（ Ｋ ６ ２ 和厦 门 大学 科技 创 新工 程 基金 ＷＳ ０ ０ ） （ ＤＫ Ｃ ２ ０ ３０ ） Ｘ Ｊ Ｘ ０ ４ ０ １ 资助
贺 量 ，范成成 康 劲 翮 张 剑 ， ， ， 冷 波 石 艳 ， ，李文 岗 ， 陈清西ｈ
（ ． 门大学 生命科学学院 ， １厦 教育部细胞 生物学与肿瘤细胞工程重点实验室 ， 福建 厦 门 ３ １０ ； ６０ ５
２ 福建 医科大学附属厦门第一 医院 ， ． 福建 厦门 ３ １０ ） ６ ０ ４
料
肝癌细胞株 Ｓ ＭＭＣ ７ ２ －７ １购 自上 海 细 胞 所 细 胞
抑制 效 应 ， 肝 癌 细胞 Ｓ 如 ＭＭＣ－ ２ ， ７ １ 胃癌 细 胞 Ｂ 一 ７ ＧＣ ８ ３黑 色素瘤 细胞 等． 实验 室 已报道 过文 蛤 抗癌 多 ２， 本
肽对 胃癌细胞 Ｂ Ｃ－２ Ｇ ８ ３的抑制效应 ｕ ． 抗癌 多肽 对肝 Ｊ
引起了肝癌细胞 的凋亡 ， 一步 的抗癌多肽抑制肝癌细胞作用的研究提供了理论基础 ． 为进
关 键 词 ： ； 白质组 ； 肝癌 蛋 质谱
中图分类 号 ： １ Ｑ ５６
文献 标识 码 ： Ａ
文 章编号 ： ３ － ７（０８ ￥－ ８－ ０ ８ ４９ ２０ ）２ ０３ ４ ４ ０ ０ ０
文 蛤 肉质 鲜美 ，营养丰富 ， 且有极 高 的药 用价 值 ． 据 报道文 蛤具有 清热利湿 、 化痰 、 散结 的功 效 ， 癌 、 对肝 肺癌、 胃癌 、 甲状 腺肿 等也 有 明显 的抑 制 作用 ． 文蛤 抗
肝癌细胞系
肝癌细胞系
人肝癌细胞：HepG2细胞形态为上皮细胞样，模式染色体数为55；Hep G2细胞在免疫抑制小鼠中不致瘤。
人肝癌细胞：SMMC-7721 免疫缺陷小鼠体内可成瘤。
人肝癌细胞：Hep3b
人低转移肝癌细胞MHCC97-L (MHCC97L)，成瘤。
人肝癌细胞，SK-HEP-1，成瘤。
在裸鼠形成与肝癌一致的大细胞，SK-HEP-1系已被鉴定为来源于内皮细胞。
人肝癌细胞，GS-HepG2，该细胞是转染的HEPG2细胞，可过表达谷氨酰胺合成酶。
没有成瘤记录。
人肝癌亚力山大细胞PLC/PRF/5主要做表面分泌抗原研究，成瘤方面没有记载。
小鼠肝癌细胞Hepa1-6
人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810
小鼠肝癌瘤株H22
人肝癌细胞HHCC
人肝癌细胞PLC/PRF/5
人肝癌细胞HB611
人肝癌细胞BEL-7402
人肝癌细胞QGY-7701
人肝癌细胞QGY-7703
人肝癌细胞BEL-7404
人肝癌细胞BEL-7405
人高转移肝癌细胞HCCLM3
人肝癌细胞Hep 3B2.1-7
人肝癌细胞SMMC-7721
人肝癌细胞Homo Spaniens cell line Hep B1.2
抗人肝癌单抗HAb18杂交瘤细胞HAb18
抗人肝癌单抗F11杂交瘤细胞+F11。