四逆汤配伍环境下的附子“效―毒网络”交集调控研究

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当归四逆汤的药理作用和临床应用研究进展

当归四逆汤的药理作用和临床应用研究进展当归四逆汤传统用于营血亏虚、寒邪凝敛、阻滞脉络、血行不畅、手足厥寒、四肢麻木、冷痛、脉微细或沉细而涩。

该方虽年代久远，但现代临床仍应用不衰，且增加了许多新的应用。

笔者查阅文献，从当归四逆汤现代药理作用和临床新用方面进行综述，为临床合理用药提供理论依据。

标签：当归四逆汤；药理作用；临床应用；研究进展当归四逆汤出自张仲景《伤寒论》，方由当归12g，桂枝9g，白芍9g，细辛3g，通草6g，甘草6g，大枣12g配伍组成，具有温经散寒、养血通脉的功效。

该方虽属传统方剂，但由于其组方严谨、配伍精良和疗效明确，经后人不断探讨与实践，本方应用范围逐渐扩大，如今在内科、外科、妇科及皮肤科等疾病上都有广泛的临床应用，现将当归四逆汤的现代药理作用和临床应用作一综述。

1 药理作用1.1 抗凝及抗血栓形成、扩张末梢血管、增加血管灌流量末梢循环障碍除了与血管本质情况、心肌功能等有关外，还与血液性质状态密切相关。

血小板聚集、高凝及血栓形成等异常状态均为引起末梢循环障碍的主要因素。

当归、芍药、细辛能扩张冠状动脉，增加机体的耐缺氧能力。

因此，当归四逆汤及其组成药物的增强心肌收缩功能、抑制血凝、改善循环、扩张外周血管、促进血栓溶解及降低血液粘滞度的功效在临床治疗上有重要意义，也可能是本方“温经散寒”功效的药理基础之一。

黄芳[1]等通过实验研究发现小鼠口服当归四逆汤后，能显著延长凝血时间、凝血酶原时间、血浆复钙时间，表明该方具有抗凝作用；并通过血小板聚集试验及血栓形成试验证明当归四逆汤能抑制大鼠血小板聚集以及大鼠动-静脉旁路的血栓形成。

高雪岩等[2]报道了当归四逆汤中甘草的主要化学成分甘草酸是植物性的凝血酶抑制剂，体内可具有抗凝血活性。

游国雄[3]等证实家兔口服当归四逆汤后，两耳小血管扩张充血，且维持时间较长，表明该方的确能够扩张末梢血管，改善血液循环。

1.2 镇痛、抗炎作用阮叶萍等[4]通过对当归四逆汤镇痛作用的实验研究，发现当归四逆汤对热刺激、机械刺激、化学刺激所诱发的动物疼痛均有抑制作用，并且呈现一定时效-量效关系。

四逆汤配伍作用的化学及药效学

医药化工化工设计通讯Pharmaceutical and ChemicalChemical Engineering Design Communications·190·第44卷第10期2018年10月中药配伍中方剂组成会直接影响其治疗的效果，中药配伍理论为中医药学重点内容[1]。

不同的中药配伍方式下，其化学成本会产生一定的变化，对其整体药物应用的效果也会带来不同程度的影响[2]。

文章以分组研究的方式，将不同配伍的四逆汤3种有机成分、5种无机元素指标等进行对照分析，明确四逆汤配伍作用的化学及药效学价值。

1 资料与方法1.1 一般资料以分组研究的方式，将不同配伍的四逆汤3种有机成分、5种无机元素指标等进行对照分析。

各组方均取附子10.00g 、干姜8.35g ，甘草取5个不同剂量且获取5个不同的组方，剂量分别为11.13g 、16.78g 、22.26g 、27.82g ，33.42g 及38.97g 。

加去离子水煎煮，制备获得样品液，分离、纯化后对各个样品液。

以PE-432型原子吸收分光光度计与EXY-I 型原子吸收分光光度计对样品液中5种无机元素实施测定。

1.2 实验方法按照《伤寒论》[3]中四逆汤原方药味用量进行计算，各个组方附子均取10g ，甘草、干姜按照比例随机设计，获得5个配方。

精确称取乌头碱、中乌头碱以及次乌头碱标注品制备品液以备应用。

2 结果2.1 各类品液中三种乌头生物碱含量对比甘草剂量增加的情况，四逆汤中3种乌头生物碱含量也会发生显著变化，呈现出不断下降的趋势。

详见表1。

表1 各类品液中三种乌头生物碱含量对比样品液12345乌头碱 3.713 2.742 1.356 3.726 3.642中乌头碱 2.816 1.299 2.5820.963 1.931次乌头碱5.7312.6151.2613.9792.8072.2 不同四逆汤组方无机元素煎出率对比不同配伍方式下四逆汤中无机元素含量未见显著差异，但是煎出率会随着中药味、药量的增加而呈现出下降的趋势。

中药方剂四逆汤分析

中药方剂四逆汤分析中药方剂“四逆汤'分析王晓林长春医学高等专科学校四逆汤为张仲景所创名方，始载于《伤寒论》，是中医临床用于回阳救逆的代表方，为历版中国药典所收载，在现代临床中应用广泛。

本方仅由附子、干姜、甘草三昧中药组成，其配伍得当，疗效确切，是现代中药研究的重要方剂。

本文对作为回阳救逆的第一品药的附子，和四逆汤中可助附子回阳之功效的干姜及既能缓解附子、干姜的暴烈，又能协助附子、干姜的回阳救逆之功效的佐使药甘草三药的性能与作用、有效成分、药理学研究以及现代临床应用进行了探讨与分析。

四逆汤为张仲景所创名方，始载于《伤寒论》，为历版中国药典所收载的成方。

本方由附子、干姜、甘草组成，配伍极为精简严谨。

其功效为回阳救逆。

主治少阳病。

症见阳虚欲绝、冷汗自出、四肢厥逆，恶寒倦卧、呕吐不渴、腹痛下利、神衰欲寐、舌苔白滑、脉象微细等症。

在现代临床中应用广泛，并均收到良好的疗效。

其方剂也成为现代中药研究的首选之一。

1三种中药的性能与作用附子为毛莨科植物乌头Acomitum carmichaeli Debx．的子根的加工品。

附子在四逆汤中为君药，附子具有回阳救逆，补火助阳，散寒止痛的功效。

用于亡阳虚脱，吐泻厥逆，肢冷脉微，心腹冷痛，冷痢，脚气水肿，风寒湿痹，阳痿，宫冷，阴寒水肿，阳虚外感，阴疽疮疡以及一切沉寒痼冷之疾“为回阳救逆第一品药”：干姜为姜科植物姜Zingiber officina拓Rosc．的干燥根茎。

干姜温中散寒，回阳通脉，燥湿消痰。

用于脘腹冷痛，呕吐泄泻。

肢冷脉微，痰饮喘咳。

干姜在四逆汤中可助附子回阳之功效，为臣；甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza“．ralensisFisch．、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat．或光果甘草Glycyrrhizaglabra L．的干燥根及根茎。

甘草具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药的功效。

用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。

四逆汤研究进展

86云南中医中药杂志2019年第40卷第9期四逆汤研究进展**基金项目：云南省联合专项面上项目〔2017FF117( -044)〕；云南省联合专项青年项目〔2018FF001 ( -084)〕；姜莉云昆明市名中医专家传承工作室(201408 )；吴荣祖全国名老中医药专家传承工作室(201409)作者简介:许云姣(1987 -),女，硕士研究生，住院医师，研究方向：中医内科脾胃病。

△通信作者:姜莉云,E - mail ：jeah6895@ 163. com许云姣，吴文笛，蔡悦青，周瑞彬，杨翼豪，姜莉云"(昆明市中医医院，云南昆明650011)摘要：四逆汤是汉代张仲景《伤寒论》中少阴病的主方，用于治疗少阴虚寒证。

本方由附子、甘草、干姜组成，其药简力专,配伍精当，具有温中祛寒、回阳救逆之效&在传统中医治疗中，主要用于治疗阳虚阴盛所导致的恶寒倦卧、呕吐下利、四肢逆冷、大汗淋漓、脉微欲绝等急危重症患者，被历代医家视为“扶阳的第一要方”。

云南“火神派”代表吴荣祖教授在临证过程中辨治阳虚证时，始终贯彻“上工不治已病治未病”的宗旨。

从天人相应的角度，把阳虚证大致分为阳虚证的一般征象及隐潜性阳虚征象，率先提出四逆汤应用于隐潜性阳虚证的辨治，临床应用于许多属于阳虚但又未到真阳衰微、亡阳厥逆的慢性疾病,不但缩短疗程，还使远期预后更佳。

笔者从四逆汤的组成方解及其临床药理研究深入探析四逆汤的组方配伍特色，其附子与甘草、干姜相配即可补土伏火又可增效解毒,证实四逆汤运用于临床隐潜性阳虚证的安全性与广泛性，并就四逆汤对心肌细胞的保护作用的实验研究进行综述，以期为临床应用研究该方提供参考。

关键词：四逆汤；研究进展中图分类号：R24 文献标志码:A 文章编号：1007 -2349(2019)09 -0086 -03四逆汤是汉代张仲景《伤寒论》中用于治疗少阴虚寒证的主方，本方由附子、甘草、干姜组成，具有温中祛寒、回阳救逆之效&主要用于治疗阳虚阴盛所导致的恶寒倦卧，呕吐下利，四肢逆冷，大汗淋漓，脉微欲绝等症。

四逆汤现代研究论文：四逆汤现代研究

四逆汤现代研究论文：四逆汤现代研究【摘要】四逆汤源于张仲景《伤寒论》，为急救之方药，为回阳救逆之代表方，由附子、炙甘草、干姜组成。

自仲景创该方以来的近两千年间，历代众医家均以传统的汤剂形式应用于临床，疗效卓著。

现代药理研究表明四逆汤具有强心、抗休克、抗动脉粥样硬化作用、增加冠脉血流量等药理作用[1-3]。

而该方的君药为附子，其主要成分为乌头类生物碱(包括乌头碱、新乌头碱和次乌头碱)，此类生物碱属于双酯类生物碱，毒性极大。

酯类生物碱分子中的酯键是产生毒性的关键部位，在水中加热易水解，首先生成苯甲酰乌头原碱，进一步反应产生乌头原碱，两类水解产物毒性极小，但仍有药理活性。

【关键词】四逆汤生物碱化学成分药理作用1 四逆汤的化学成分研究现代对四逆汤在临床应用的疗效观察和大量的动物实验研究均表明,四逆汤对高脂血症、动脉粥样硬化有较好的治疗效果,对动物免疫调节、心肌缺血、低氧、降低实验性高血压、保护肠黏膜及脑缺血等都具有良好的治疗效果[4]，附子是四逆汤的君药，为毛茛科植物乌头的子根。

附子的主要化学成分除乌头生物碱外，还有醇胺、脂类及多糖等。

生物碱是其中的主要有效成分，也是毒性成分[5]。

乌头生物碱包括双酯型二萜类生物碱(dda)、脂类生物碱，双酯型二萜类生物碱包括乌头碱、新乌头碱和次乌头碱。

煎煮后c18位酯基水解生成单酯型生物碱(mda)，其毒性有明显降低。

mda进一步水解生成相应的醇胺，其毒性降低更明显，药效却没有明显减弱。

甘草酸又称甘草甜素，为甘草的代表性成分之一，具有保肝、抗炎及免疫调节等作用[6]。

主要成分有甘草酸、甘草次酸、甘草黄酮等。

方剂中，甘草所含甘草次酸能与附子中的生物碱形成不溶性的络合物?，是对抗附子引起心律失常的主要成分，而且能够改善代谢性酸中毒，增强组织用氧能力。

干姜，主要含姜萜酮、β-没药烯、α-姜黄烯等挥发油成分，还含辛辣的姜辣醇类成分，对附子有解毒作用，但低于甘草。

2 四逆汤的作用机制研究四逆汤方中附子为药中之圣药，具有回阳之效，但毒性极大。

四逆汤中附子甘草配伍规律研究

收稿日期:2000202212四逆汤中附子甘草配伍规律研究陈建萍,谭炳炎,吴伟康,张敏生,李礼娟3,韩超3(广州中山医科大学,广州　510089) 摘要:目的:观察四逆汤中药附子、甘草配伍前后主要成分的含量变化。

方法:采用串联质谱ESI2MSΠMS及HP LC测定附子中的主要成分在配伍前后含量变化,采用薄层扫描测定甘草中的主要成分甘草酸在配伍前后的含量变化。

结果:附子与甘草配伍后乌头类生物碱和甘草酸的含量均明显降低。

关键词:附子;甘草;ESI2MSΠMS,HP LC,T LC中图分类号:R28411 文献标识码:B 文章编号:100529903(2001)0320016202 四逆汤(S D)源于张仲景的《伤寒论》,是治疗少阴虚寒证的代表方剂,临床主要用于少阴病,四肢逆冷,下利清谷,脉微细无力等症。

在既往的研究发现,S D对冠心病心肌缺血具有良好的保护作用,本研究在此基础上,以S D方药为研究对象,从方药配伍的君、臣、佐、使关系出发,以君药附子为核心,对其中药味附子、甘草组成的方药进行药物成分定性定量相关性分析,对S D方药中主要药味配伍进行规律性的研究。

1　仪器和试剂API2365电喷雾离子化2质谱质谱(ESI2MSΠMS)联用仪(Perkin elmer2SCIEX公司);Waters公司高效液相色谱仪,486检测器,510泵,810色谱工作站;日本岛津CS2930型双波长薄层扫描仪。

中药来源:附子(黑顺片)(Aconitium carmichaeli Debx.)、甘草(G lycyrrhizae uralensis Fisch)、干姜(Zin2 giber o fficinale R osc.)(均购于广州药材公司,经广州中药大学药鉴教研室鉴定);甘草浸膏用上述甘草原药材自制;甘草酸单铵盐对照品(中国药品生物检定所);硅胶G F254(青岛海洋化工厂);其他化学试剂均为分析纯。

2　方法与结果211　样品溶液的制备　分别称取附子(50g),附子(50g)+甘草(20g),附子(50g),甘草(20g),于4个烧杯中,加入8倍量的水,水浴煮沸2h,过滤,滤液浓缩,醇沉,取醇层,回收乙醇将附子及甘草煎剂混合,上述方法形成附子单煎剂,附子与甘草的合煎剂以及附子甘草单煎后再混合,此三种溶液均以附子量定容至1:1,得供试液,备用。

人参四逆汤抗心力衰竭的作用及机理研究

人参四逆汤抗心力衰竭的作用及机理研究心力衰竭是多数心血管疾病的终点站,也是导致心血管病人死亡的主要原因。

其高发病、高致死率已成为威胁人类健康的重大公共卫生问题。

能量代谢紊乱和线粒体功能障碍是导致心力衰竭的主要因素。

近年来,中药复方通过整体改善患者的心功能、内环境、减少联用西药的毒副作用等优势在临床治疗心衰中发挥着重要的作用。

因此,深入探索心力衰竭的作用机制及开发抗心衰的中药新药具有重要的意义。

人参四逆汤（Ginseng Sini Decoction,GSD）源自《伤寒论》,是由人参、附子、干姜和炙甘草4味药材组成的中药经典方,在现代临床广泛应用于治疗心力衰竭。

本文拟通过对GSD药效学进行系统评价,并以线粒体能量代谢、凋亡途径为切点,探索GSD发挥抗心衰药效的机制及物质基础,为其新药开发与临床应用提供一定的依据。

本研究中通过处方分析及正交实验确定提取工艺,通过小鼠急性毒性实验评价其用药安全性。

利用尾注阿霉素建立大鼠心力衰竭（heart failure,HF）模型,通过血流动力学、心功能检测等实验评价GSD抗心衰药效;通过qPCR等实验研究GSD抗HF机制。

通过戊巴比妥钠建立体外心衰模型研究GSD抗心衰作用的机制及部分物质基础。

实验结果:⑴GSD提取工艺为水提,小鼠最大给药量44.44 g·kg-1（相当于临床拟用量的171倍）小鼠无异常反应。

⑵GSD(6.776、13.552g·kg-1)能明显升高左心室舒张、收缩末压、短轴缩短率等,降低心脏系数、CK、LDH值。

⑶GSD(6.776、13.552 g·kg-1)能显著降低MDA、ROS含量,抑制Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性,GSD(13.552 g·kg-1)显著上调PGC-1αmRNA的表达量;GSD(6.776、13.552 g·kg-1)显著下调Bax、Caspase-3 mRNA的表达量。

运用生物信息学方法研究四逆汤作用机制的研究进展

∗广西高校中医临床研究重点实验室课题(J １６０６６)㊀广西中医基础研究重点实验室开放研究课题(K J T １７０１２０７)㊀广西自然科学基金课题(２０１６G X N S F B A ３８００１８)㊀广西中医药大学岐黄工程高层次人才团队培育项目(２０１８００３)ә通讯作者运用生物信息学方法研究四逆汤作用机制的研究进展∗宋㊀曦,陈㊀晶ә,梁丽英,陈㊀炜广西中医药大学第一附属医院(南宁５３００２３)㊀㊀摘㊀要㊀四逆汤是汉代张仲景«伤寒论»中所载经方,是治疗少阴阳虚阴寒证的主方,具有温中祛寒㊁回阳救逆的功效.集中体现了中医扶阳抑阴㊁扶正祛邪的治则思想,现代药理研究显示其药效广泛,笔者就近年来关于四逆汤运用网络药理学等生物信息分析方法进行分析,主要通过血清代谢组学结合多元统计分析㊁代谢组学和网络药理学方法㊁数据挖掘和生物信息学分析等方法进行综述,体现代谢组学研究对追溯药物的作用机制有着重要作用,是目前研究中药组方作用机制的有效策略.关键词㊀四逆汤;代谢组学;网络药理学;作用机制;综述㊀㊀中图分类号:R ２８９㊀文献标识码:A㊀D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１０００Ｇ７３６９．２０１９．０７．０４８㊀㊀四逆汤是汉代张仲景«伤寒论»中所载经方,它由附子㊁干姜㊁甘草组成,是治疗少阴阳虚阴寒证的主方,具有温中祛寒㊁回阳救逆的功效.四逆汤集中体现了中医扶阳抑阴㊁扶正祛邪的治则思想,也因其用药精炼㊁效验卓著,受到历代众多医家的推崇继而成为千古名方.现代临床中,四逆汤应用广泛.其中,四逆汤运用于心血管系统疾病效果良好,如运用于心肌梗死可保护心肌细胞,治疗心力衰竭可提高心肌收缩力,因此尤为引人瞩目[１Ｇ３].除此以外,四逆汤还有广泛的临床应用,包括治疗急性肝衰竭[４Ｇ５]㊁抗肿瘤[６Ｇ７]㊁抗休克[８Ｇ９]等.经过研究者的不懈努力,四逆汤的药理作用及其作用机制的相关成果颇为丰富,但这些研究成果仍面临着较大的挑战.首先,四逆汤中的君药附子富含乌头生物碱,具有心脏毒性,其治疗量和中毒量较为接近.中药组方理论认为四逆汤中的甘草具有解毒增效的作用,但其配伍的科学性及甘草的解毒机制需要现代药理学的进一步的揭示.其次以四逆汤为代表的中药组方方剂,具有多成分㊁多作用靶点的特点,但就目前的药物作用机制研究结果而言,多数限定于一些信号通路中信号因子的改变,难于在整体上全面的反应四逆汤多成分多作用靶点的特点.在此背景下,对四逆汤这种多成分的组方药物进行以网络药理学为代表的生物信息学的研究分析,成为研究者深入研究中药组方作用机制的重要策略.以下笔者就近年来关于四逆汤运用网络药理学等生物信息分析方法进行分析研究的结果,进行一番综述.１㊀通过血清代谢组学结合多元统计分析揭示四逆汤的量效关系及其作用机制㊀四逆汤多年来用于治疗心血管疾病[１０].四逆汤组方中的附子富含乌头生物碱,是附子的主要活性成分,因其毒性作用与治疗作用接近,故而治疗区间狭窄.但就四逆汤的组方而言,富含乌头生物碱的附子实乃君药,必不可少[１１].且研究也表明,四逆汤保护心肌细胞的作用也有赖于附子的存在[１２].在此情况下,评估四逆汤治疗心血管疾病的量效关系就变得迫切而重要了.为了确定四逆汤的量效关系,Z h o u 等[１３]使用去甲肾上腺素造成S D 大鼠心肌梗死模型,后分别给予成模动物高㊁中㊁低(四逆汤浓度分别是４．０g /m l ㊁２．０g /m l ㊁１．０g /m l )三个浓度的四逆汤胃饲.动物模型药物干预完毕后分别收集动物模型的外周血清.对动物模型的外周血清进行四极杆飞行时间质谱联用超高效液相色谱(U l t r a p e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a Ｇp h y c o u p l e dt o q u a d r u p o l e Ｇt i m e Ｇo f Ｇf l i g h t m a s ss p e c t r o m e t r y ,U P L C ＧQ ＧT O F ＧM S ).并对因此获得的代谢组学数据进行包括主成分分析(P r i n c i p a l c o m p o n e n t a n a l ys i s ,P C A )㊁偏最小二乘法判别分析(P a r t i a l l e a s t s q u a r e sd i s c r i m i n a t i o na n a l ys i s ,P L S ＧD A )在内的多元统计分析.结果表明,高剂量组的代谢组学数据更接近于模型组,中剂量组和低剂量组代谢组学数据彼此接近,但低剂量组与正常对照组的代谢组学数据更相近.随后对代谢组学数据中确认的潜在生物标记的水平进行方差分析,获得１５个有统计意义的潜在生物标记物.这些潜在生物标记物分别参与氨基酸代谢㊁葡萄糖代谢㊁脂质代谢和胆汁酸代谢.其中一些代谢过程已被证实参与了四逆汤保护心肌细胞的过程[１４],但有５类胆汁酸尚属首次报道,揭示了四逆汤的量效关系,并初步揭示四逆汤治疗去甲肾上腺素诱导的心肌梗死的作用机制.２㊀基于代谢组学和网络药理学方法研究四逆汤的药物作用机制㊀迄今为止,药学的研究模式已经从以往的单一药物作用于单一蛋白因子水平,发展至药物同时作用于多个蛋白标靶[１５Ｇ１６].这种研究模式转变的背景是因为研究者越来越多的认识到,多种疾病其实是在多因素共同作用下产生的.这样的研究模式的转变,一方面促使研究者们寻找更多的切合实际的研究㊁分析方法.另一方面,也引导研究者将目光聚焦于中国传统医学(T r a d i t i o n a l C h i n e s eM e d i c i n e ,T C M ),其内在原因就在于中国传统医学的主要用药是多种药物组成的复方方剂,中国传统医学的诊疗理论着眼于整体的阴阳平衡.２８９陕西中医２０１９年７月第４０卷第７期在此背景下,以四逆汤为代表的中药组方方剂理所应当的成为人们研究的对象.C h e n等首先就四逆汤及其汤剂中的主要活性成分建立化学结构数据库,并对其进行详细的成分注释.随后使用阿霉素诱导产生心肌损伤小鼠模型,心肌损伤小鼠模型成模后进行分组,在给予不同的药物干预,药物包括四逆汤㊁四逆汤三个组成药物的活性成分别组合成的方剂㊁三种药物的活性成分的单剂.药物干预完毕,对各组小鼠的心肌组织处理后进行气相/液相色谱质谱分析,所获代谢组数据进行多元统计分析.结合该研究团队前期的研究结果,C h e n等获得了四逆汤中１８６种活性成分,及３９种四逆汤的蛋白靶标.随后,对这些药物活性成分和蛋白靶标进行分子链接和网络药理学分析,最终获得四逆汤活性成分与蛋白靶标之间的网络关系图.四逆汤的这些蛋白靶标分布于氨基酸代谢㊁脂质代谢等生物过程,且这些蛋白靶标中已有部分被其他研究者证实参与了四逆汤保护心肌的过程[１７].这个研究结果一方面验证了四逆汤可保护阿霉素诱导的心肌损伤,更重要的是通过网络药理学和代谢组学的结合运用,深入探讨了四逆汤保护阿霉素诱导心肌损伤的作用机制,证明了四逆汤组方的科学性可必要性.运用类似的思路,C h e n[１８]等对四逆汤的化学组学㊁血清药物化学和外源生物代谢组学数据进行了类似的分析研究,从不同侧面完善四逆汤药物作用机制的研究.以血清药物化学分析为例,研究者通过血清药物化学分析获得了四逆汤的４８个有效活性成分,接着使用网络药理学分析方法获得这４８个有效活性成分的６１个潜在蛋白靶标.再使用生物过程和信号通路富集分析(K y o t o e n c y c l o p e d i a o f g e n e s a n d g e n o m e s,K E G G)获得这６１个潜在蛋白靶标所在的１０个生物过程,最终得到四逆汤保护心肌细胞的作用机理[１８].以上的研究结果表明:网络药理学分析成功的关键在于药物活性成分对于特定疾病有清晰的药物作用,此外也需要对特定疾病的生物靶标有较为深入且全面的了解.在此基础上,通过网络药理学分析,就可将药物活性成分与疾病的生物靶标链接起来,进而分析药物治疗该疾病的作用机制.与四逆汤相关的药物作用机制研究已进行多年,累积了大量的研究数据,这也是进一步进行网络药理学分析的基础.３㊀通过数据挖掘和生物信息学分析研究四逆汤的效Ｇ毒网络㊀四逆汤作用机制研究的深入,为数据挖掘和生物信息学分析提供了丰富且可靠的数据来源.李志勇等[１９]首先从T C MＧG e n e D I T数据库中进行数据挖掘,获得与四逆汤中三个成分(附子㊁干姜㊁甘草)相互关联的基因信息.随后针对这些关联基因在P u b m e d中进一步进行数据挖掘,获得确定的基因相互关系,并构建附子㊁干姜㊁甘草相互关系的基因生物网络.接着,使用类似方法进行附子效Ｇ毒网络的构建.最后通过筛选共享基因和通路预测的方法,分别预测干姜㊁甘草调控附子效Ｇ毒网络的通路.最终李志勇等认为,干姜和甘草可能通过影响免疫Ｇ炎症反应信号通路㊁细胞凋亡Ｇ自噬信号通路㊁神经细胞与心肌细胞缺血缺氧保护信号通路等途径发挥拮抗附子毒性的作用.尽管这些结果仍需要进一步的实验验证,但数据挖掘和生物信息学分析无疑为今后四逆汤的作用机制和毒副作用的研究预测了方向.吴德坤等[２０]则通过文献检索的方法,收集四逆汤干预心肌梗死的代谢组学实验研究,对这些文献中提及的纳入研究的已被证实的代谢产物进行汇总,采用K E G G等生物信息学分析方法,获得四逆汤干预心肌梗死的代谢产物谱及代谢通路.这些代谢通路同样涵盖了糖㊁蛋白质的最终代谢通路,如三羧酸循环㊁氨基酸合成等.研究人员因此认为代谢组学可作为揭示代谢通路的工具,通过选择适当的生物信息学分析方法,对中医药的作用机制进行预测和发现.４㊀总㊀结㊀多年来,中国传统医学的组方方剂处境尴尬,一方面两千年的实践经验证明其有效性,另一方面研究者们缺乏有效的研究方法和技术手段对其疗效和作用机制进行全面的揭示.以四逆汤为例,其回阳救逆的疗效显著,是著名的经方,直至当下,其临床应用堪称广泛.但四逆汤的主要药物附子富含乌头生物碱,又被证明具有明确的毒副作用,因此不免为人诟病.网络药理学于２００８年提出[１５],主要用于寻找药物有效成分与靶标蛋白之间的联系.而代谢组学研究则对于追溯药物的作用机制有着重要作用,它可以全面展示药物作用后各器官整体的状态.代谢组学研究的兴起,与中国传统医学的系统性和完整性有着内在的契合.将网络药理学和代谢组学结合,是目前研究中药组方作用机制的有效策略.随着这方面研究的进一步拓展,中药组方的科学性㊁毒副作用将会得到更加清晰的阐述,也将会使得以四逆汤为代表的中药组方方剂在临床的应用更加合理.参考文献[１]㊀雷蕊娥,康㊀健．四逆汤治疗冠心病心绞痛６４例疗效分析[J]．中国实用医药,２０１２,７(１８):１９３．[２]㊀喻少峰．四逆汤治疗心力衰竭临床疗效及其对血浆B N P 水平的影响[J]．河南中医,２０１４,３４(５):８０１．[３]㊀赵小祺,王春光,焦㊀宏,等．四逆汤对急性心肌梗死溶栓后再灌注损伤的保护作用[J]．中国老年学杂志,２０１４,３４(３):５９０．[４]㊀L u o J,Z h a n g Y,H uX,e t a l．T h ee f f e c t so fm o d i f i e ds i n id e c o c t i o no nl i v e r i n j u r y a n dr e g e n e r a t i o ni na c u t el i v e rf a i l u r e i n d u c e db y DＧg a l a c t o s a m i n e i nr a t s[J]．JE th n oＧp h a r m a c o l．２０１５,２３(１６１):５３Ｇ５９．[５]㊀李㊀洁,邱建利,许㊀华．加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠S m a d７及Ⅰ㊁Ⅲ型胶原蛋白表达的影响[J]．中药材,２０１６,３９(６):１３８４Ｇ１３８８．[６]㊀陈嘉璐,李湧健,张晓迪,等．四逆汤上调p５３蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡研究[J]．中华中医药杂志,２０１３,２８(２):５４８Ｇ５５１．[７]㊀陈嘉璐,李湧健,张㊀蕾,等．四逆汤对肝癌细胞P C N A和c y c l i n D１影响的实验研究[J]．时珍国医国药,２０１３,２４(５):１１６２Ｇ１１６５．[８]㊀孙志祥,郭琳琳,田㊀野．四逆汤对脓毒性休克患者目标导向性治疗和血清炎性因子的影响[J]．世界中医药,２０１８,１３(４):８４２Ｇ８４５．[９]㊀陈兰英,吴㊀刚,陈㊀卓,等．四逆汤抗失血性休克大鼠肠３８９陕西中医２０１９年７月第４０卷第７期黏膜损伤及菌群移位药效研究[J]．中国实验方剂学杂志,２０１１,１７(２３):１２１Ｇ１２４．[１０]㊀T a nG,L i a oW,D o n g X,e t a l．M e t a b o n o m i c p r o f i l e s d eＧl i n e a t e t h e e f f e c t o f t r a d i t i o n a l C h i n e s em e d i c i n e s i n i d eＧc o c t i o no nm y o c a rd i a l i n f a r c t i o n i nr a t s[J]．P L o S O n e,２０１２,７(４):e３４１５７．[１１]㊀P e t e rK,S c h i n n e r l J,F e l s i n g e rS,e t a l．An o v e l c o n c e p tf o rd e t o x i f i c a t i o n:c o m p l e x a t i o n b e t w e e na c o n i t i n ea n dl i q u i r i t i n i naC h i n e s eh e r b a l f o r m u l a(S i n iT a n g)[J]．J o u r n a l o fE t h n o p h a r m a c o l o g y,２０１３,１４９,５６２Ｇ５６９．[１２]㊀C a iY,G a oY,T a nG,e t a l．M y o c a r d i a l l i p i d o m i c s p r o f iＧl i n g d e l i n e a t e t h e t o x i c i t y o f t r a d i t i o n a l C h i n e s em e d i c i n eA c o n i t i L a t e r a l i s r a d i x p r a e p a r a t a[J]．J o u r n a l o fE t h n oＧp h a r m a c o l o g y,２０１３,１４７,３４９Ｇ３５６．[１３]㊀Z h o u J,M aX,S h iM,e t a l．S e r u m m e t a b o l o m i c s a n a l y s i s r e v e a l s t h a t o b v i o u s c a r d i o p r o t e c t i v ee f f e c t so f l o wd o s eS i n id e c o c t i o na g a i n s t i s o p r o t e r e n o lＧi n d u c e d m y o c a r d i a li n j u r y i n r a t s[J]．P h y t o m e d i c i n e,２０１７,１５(３１):１８Ｇ３１．[１４]㊀L i uY T,J i aHM,C h a n g X,e t a l．T h em e t a b o l i cd i s t u r bＧa n c e so f i s o p r o t e r e n o l i n d u c e d m y o c a r d i a l i n f a r c t i o ni nr a t sb a s e d o n a t i s s u e t a r g e t e dm e t a b o n o m i c s[J]．M o l e cＧu l a r b i o S y s t e m s,２０１３,９:２８２３Ｇ２８３４．[１５]㊀D r e w s J．D r u g d i s c o v e r y:ah i s t o r i c a l p e r s p e c t i v e[J]．S c iＧe n c e,２０００,２８７(５４６０):１９６０Ｇ１９６４．[１６]㊀W a n g L,Z h o u G B,L i uP,e t a l．D i s s e c t i o nof m e c h aＧn i s m s o f C h i n e s em e d i c i n a l f o r m u l aR e a lg a rＧI n d i g o n a t uＧr a l i s a sa ne f f e c t i v et r e a t m e n t f o r p r o m y e l o c y t i c l e u k eＧm i a[J]．P r o cN a t lA c a dS c iU S A,２００８,１０５(１２):４８２６Ｇ４８３１．[１７]㊀C h e nS,W uS,L iW,e t a l．I n v e s t i g a t i o no f t h e t h e r a p e uＧt i ce f f e c t i v e n e s so fa c t i v ec o m p o n e n t s i nS i n id e c o c t i o nb y ac o m p r e h e n s i v eG C/L CＧM Sb a s ed me t a b o l o m i c sa n dn e t w o r k p h a r m a c o l o g y a p p r o a c h e s[J]．M o l B i o s y s t,２０１４,１０(１２):３３１０Ｇ３３２１．[１８]㊀T a nG,L i u M,D o n g X,e t a l．As t r a t e g y f o r r a p i d a n a l yＧs i s o f x e n o b i o t i cm e t a b o l o m e o f S i n i d e c o c t i o n i nv i v ouＧs i n g u l t r aＧp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yＧe l e c t r o sＧp r a y i o n i z a t i o n q u a d r u p o l eＧt i m eＧo fＧf l i g h tm a s s s p e c t r o mＧe t r y c o m b i n e d w i t h p a t t e r nr e c o g n i t i o na p p r o a c h[J]．JP h a r m B i o m e dA n a l,２０１４,９６:１８７Ｇ１９６．[１９]㊀李志勇,鲍红娟,张硕峰,等．四逆汤配伍环境下的附子效Ｇ毒网络交集调控研究[J]．中国中医药杂志,２０１５,４０(４):７３３Ｇ７３８．[２０]㊀吴德坤,郑景辉,张新春,等．基于文献的四逆汤干预心肌梗死模型代谢组的生物信息学分析[J]．中药新药与临床药理,２０１７,２８(３):４００Ｇ４０５．(收稿:２０１９Ｇ０１Ｇ２３)(上接第９７５页)[３]㊀占小兵．穴位按摩联合抚触在早产儿病理性黄疸中的应用研究[D]．广州中医药大学,２０１６．[４]㊀杨叶娇．健脾提督推拿法对早产低体重儿神经行为发育影响的研究[D]．云南中医学院,２０１７．[５]㊀田㊀丽．中医经络推拿按摩对早产儿临床干预的影响分析[J]．中国医药指南,２０１３,１１(２):５９０Ｇ５９２．[６]㊀蓝裕英．穴位按摩防治早产儿胃肠外营养相关性胆汁淤积的临床研究[D]．福建中医药大学,２０１４．[７]㊀黄晓睿,周文姬,陈秀文．点穴疗法对早产儿呼吸暂停的干预效果研究[J]．护理研究,２０１７,３１(１０):１１８１Ｇ１１８４．[８]㊀刘振寰．益肾健脾按摩法早期干预对早产儿心身发育的临床研究[A]．国际中华应用心理学研究会第十届学术年会论文集[C]．国际中华应用心理学研究会,２０１３:９．[９]㊀L i uL,O z aS,H o g a nD,e t a l．G l o b a l,r e g i o n a l,a n dn a t i o nＧa l c a u s e s o f u n d e rＧ５m o r t a l i t y i n２０００Ｇ１５:a nu p d a t e d s y sＧt e m a t i c a n a l y s i sw i t h i m p l i c a t i o n s f o r t h eS u s t a i n a b l eD eＧv e l o p m e n tG o a l s[J]．L a n c e t,２０１６,３８８(１００６３):３０２７Ｇ３０３５．[１０]㊀B l e n c o w eH,C o u s e n sS,O e s t e r g a a r d M,e t a l．N a t i o n a l, r e g i o n a l a n d w o r l d w i d ee s t i m a t e so f p r e t e r m b i r t h[J]．L a n c e t,２０１２,３７９(９８３２):２１６２Ｇ２１７２．[１１]㊀W o r l d H e a l t hO r g a n i z a t i o n．WHOr e c o mm e n d a t i o n so ni n t e r v e n t i o n s t oi m p r o v e p r e t e r m b i r t ho u t c o m e s[M]．W o r l dH e a l t hO r g a n i z a t i o n,２０１５:１Ｇ４．[１２]㊀L a p i l l o n n eA,G r i f f i nI J．F e e d i n gp r e t e r mi n f a n t st o d a yf o rl a t e r m e t a b o l i c a n d c a r d i o v a s c u l a r o u t c o m e s[J]．J o u r n a l o fP e d i a t r i c s,２０１３,１６２(３):７Ｇ１６．[１３]㊀O n g K K,K a t h y K,E u r i d i c eC,e t a l．P o s t n a t a l g r o w t h i n p r e t e r mi n f a n t sa n dl a t e rh e a l t ho u t c o m e s:as y s t e m a t i cr e v i e w[J]．A c t aP a e d i a t r i c a,２０１５,１０４(１０):９７４Ｇ９８６．[１４]㊀P a r k e r MG,K o n n i k o v aL,M a r t i nC R．T h eR o l eo fN uＧt r i t i o n i nH e a l t ha n dD i s e a s e i nP r e m a t u r e I n f a n t s:C u rＧr e n tK n o w l e d g eG a p s a n dD e f i n i n g t h eR e s e a r c hA g e n d a[M]．N u t r i t i o n i n I n f a n c y,２０１３:１１１Ｇ１３３．[１５]㊀B e r a r dA,L eTM,D eV e r a MA．S t u d y o f t h ec o s t sa n d m o r b i d i t i e s o f l a t eＧp r e t e r mb i r t h[J]．A r c hD i sC h i l dF eＧt a lN e o n a t a l E d,２０１２,９７(５):３２９Ｇ３３４．[１６]㊀V i c k e r sA,O h l s s o nA,L a c y J B,e t a l．M a s s a g e f o r p r oＧm o t i n gg r o w t ha n dd e v e l o p m e n t o f p r e t e r ma n d/o r l o wb i r t hＧw e i g h t i n f a n t s[J]．C oc h r a n e D a t a b a s eS y s tR e v,２００４,(２):３９０Ｇ３９１．(收稿:２０１８Ｇ１１Ｇ２９)４８９陕西中医２０１９年７月第４０卷第７期。

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四逆汤配伍环境下的附子“效―毒网络”交集调控研究[摘要]目的：采用网络药理学方法探索四逆汤配伍环境下，甘草、干姜对附子作用基因“效-毒网络”交集调控的机制。

方法：应用Cytoscape软件和插件Agilent Literature Search，进行文本挖掘并建立附子、甘草、干姜作用的基因相互关系网络;根据附子抗心衰、神经毒性和心脏毒性形成附子“效-毒网络”交集;应用插件Clusterviz进行靶标基因聚类，从DA VID数据库中对甘草、干姜调控附子“效-毒网络”交集的可能通路进行预测。

结果：与附子神经毒性、心脏毒性和抗心衰作用同时相关的基因有5个，AKT1，BAX，HCC，IL6，IL8，形成附子“效-毒网络”交集有47个节点基因;甘草、干姜与附子“效-毒网络”交集的重合基因分别有29个和27个，可能调控通路有23条和17条。

结论：在四逆汤配伍环境下，甘草、干姜可能通过影响免疫-炎症反应信号通路、细胞凋亡-自噬信号通路、神经细胞与心肌细胞缺血缺氧保护信号通路等途径调控附子的效/毒效应。

[关键词]四逆汤;效-毒网络;网络药理学Study on intersection and regulation mechanism of ″efficacy-toxicitynetwork″of aconite in combination environment of Sini decoctionLI Zhi-yong1，BAO Hong-juan2，ZHANGShuo-feng3，YE Tian-yuan1，YANG Ce4，LI Yan-wen4* （1. China Minority Traditional Medical Center，Minzu University of China，Beijing 100081，China; 2. Xiamen Medical College，Xiamen 361008，China; 3.School of Chinese Materia Medica of Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China;4. Institute of Information on Traditional Chinese Medicine，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China）[Abstract]Objective：To explore the intersection and regulation mechanism of ″efficacy-toxicity network″of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，Zingiberis Rhizoma and Aconiti Lateralis Radix Praeparata′s action gene in the combination environment of Sini decoction with the network pharmacological method. Method：The gene interaction network of Aconiti Lateralis Radix Praeparata，Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，Zingiberis Rhizoma were mined and established with Cytoscape software and Agilent literature search plug-in. The ″efficiency-toxicity network″intersection of Aconiti Lateralis Radix Praeparata was formedaccording to its effects in anti-heart failure，neurotoxicity and cardiotoxicity. The target genes were clustered with Clusterviz plug-in. And the possible pathways of the ″efficacy-toxicity network″intersection of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，Zingiberis Rhizoma and Aconiti Lateralis Radix Praeparata were forecasted in DA VID database. Result：There were five genes related to neurotoxicity，cardiotoxicity and anti-heart failure function of Aconiti Lateralis Radix Praeparata，namely AKT1，BAX，HCC，IL6 and IL8，which formed 47 nodes genes in the ″efficiency-toxicity network″intersection of Aconiti Lateralis Radix Praeparata. There were 29 and 27 coincident genes in the ″efficiency-toxicity network″of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，Zingiberis Rhizoma and Aconiti Lateralis Radix Praeparata. There were 23 and 17 possible regulatory pathways. Conclusion：In the combination environment of Sini decoction，Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and Zingiberis Rhizoma may regulate the efficiency-toxicity network of Aconiti Lateralis Radix Praeparata by influencingimmune-inflammatory signaling pathway，apoptosis-autophagy signaling pathway，nerve cell and myocardial ischemia and hypoxia protection signaling pathways. [Key words]Sini decoction; efficacy-toxicity network; network pharmacologydoi：10.4268/cjcmm20150429效毒二重性是药物作用的基本特性。

在中医语境下，中药“因毒为能”，“以毒显效”，中药经过必要的加工炮制、配伍优化组合，能够“化害为利，减毒增效”[1]。

网络药理学建立在疾病-表型-基因-药物的多层次网络基础之上，将药物作用网络与生物网络整合，从整体上预测药物作用靶点、提高药物的发现效率[2]。

在网络药理学范畴，中药的“多组分、多靶点、多途径”特征使其所产生的效-毒效应牵涉到生物网络上更多靶点，这些靶点群是映射到人体生物网络上的靶标子集或称为网络靶标[3]。

如将有毒中药的效/毒二重性定义为药物对生物复杂网络的不同映射效应，则配伍减毒对有毒中药的效-毒化学成分、效-毒表型变化的影响最终可表现为其对复杂生物网络的不同映射效应，而药物效毒二重性决定了其映射生物网络和作用靶点的重合性，即“效-毒”网络;中药配伍“减毒存效”即可表征为对“效-毒”网络交集区域关键生物靶标（关键节点）的调控，交集区域大小可以关键节点数量来描述，而关键节点受进入体内中药毒性成分数量或质量动态变化而激活或沉默，即中药“效-毒网络”交集调控效应[4]。

四逆汤为《伤寒论》所载经方，由附子、干姜、甘草组成，功效回阳救逆，主治少阴病，方中附子为大毒之品，服用必用生者，“不拘时候”，中病即止[5] 。

因以生附子入药，可避免炮制对附子化学成分的影响，利于配伍减毒作用研究，故本文以四逆汤为例，从“效-毒网络”交集调控角度，对甘草、干姜配伍附子减毒的机制进行预测。

1方法1.1获取四逆汤组方中药作用靶点数据从TCMGeneDIT 数据库[6]应用自动文本挖掘获得附子（毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx）、甘草（双子叶植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch. ，胀果甘草G. inflata Bat.，或光果甘草G. glabra L.）、干姜（姜科多年生草本植物姜Zingiber officinale Rosc.）的基因相互关联信息，阅读抽提语句，排除低质量文献。

1.2建立附子、甘草、干姜作用靶点网络应用Agilent Literature Search2.7.7对附子、甘草、干姜的关联基因Gene Symbol在Pubmed中进行文本挖掘，阅读检索结果，剔除假阳性信息。

将经确定的基因关系导入Cytoscape 2.8.2中，分别实现附子、甘草、干姜作用基因相互关系的复杂生物网络。

1.3形成附子作用的“效-毒网络”交集采用Cytoscape2.8.2的分析工具Network Analyzer进行附子作用基因的网络拓扑性分析，“Degree”值反映网络节点调控关联性，其值越大说明节点在网络调控中的作用越关键，综合考虑文本挖掘发现附子作用基因的数量，选择≥10的基因作为关键节点。

以文献计量学统计附子的主要临床毒副作用是心律失常及神经系统损伤[7]，故本研究以附子对心脏、神经系统的毒性作为附子毒副作用主要观察目标，将附子强心、治疗心力衰竭的作用作为药效观察目标，使用Agilent Literature Search 2.7.7，分别对获得的关键基因在神经毒性（neurotoxicity）、心脏毒性（cardiac toxicity）、抗心衰竭作用（heart failure）方面的作用进行文本挖掘，结合Gene ontology 进行关键基因功能分析。