细菌标本片的制备及染色方法

3．瑞氏染色液
取瑞氏染料 0.1g，纯中性甘油 1ml，在研钵中 混合研磨，再加入甲醇 60ml，使其溶解，装 入中性瓶中过夜，次日过滤，盛入棕色瓶中， 保存于暗处。保存越久，染色越好。
课后作业
1.写出实习报告； 2.掌握美兰染色的方法； 3.掌握革兰氏染色的方法
方法步骤
（一）细菌标本片的制作 （二）常用的细菌染色方法 （三）常用染色液的配制
（一）细菌标本片的制作
1．涂片标本的制作
（1）涂片 （2）干燥涂片 （3）固定涂片 2．血液推片和组织抹片的制作 （1）血液推片的制作 （2）组织抹片的制作
1．涂片标本的制作
（1）涂片 取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水 1 滴置于玻片中 央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑 取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片 上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。
（2）组织抹片的制作 待检尸体经无菌手术切开胸腹腔后，用经火焰灭菌的 镊子夹起组织，用灭菌剪刀剪下小块组织，将组织切 面在载玻片上等距离轻压几下，使其留有组织切面的 压迹。
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（二）常用的细菌染色方法
1．美蓝染色法 2．革兰氏染色法
3．瑞氏染色法
1．美蓝染色法
在已固定好的抹片 上，滴加适量美蓝染色 液覆盖涂面，染色 2 ～ 3 min， 水 洗 ， 吸 水 纸 轻压吸干或晾干和镜检， 结果菌体呈蓝色。
3．瑞氏染色法
细菌抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于涂片 上以固定标本， 1 ～ 3min 后，再滴加与染色液 等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上，轻 轻摇晃使与染色液混和均匀，5min左右水洗， 干后镜检，结果菌体呈蓝色，组织细胞等物呈 其他颜色。
（三）常用染色液的配制
1．碱性美蓝染色液 2．革兰氏染色液
技能训练5 细菌标本片的制备及染色方法
实训目标
能利用不同的材料进行细菌标本片的制备
掌握常规的染色方法，并认识细菌的不同染色特性
仪器材料
酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美 蓝染色液、革兰氏染色液、瑞氏染色液、染色缸、 染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜 纸、细菌培养物（大肠杆菌、葡萄球菌等）、细菌 病料、无菌镊子和剪刀、特种铅笔等
（2）卢戈氏碘液 碘1g、碘化钾2g、蒸馏水300ml。将碘化钾放入研钵 中，加入少量蒸馏水，使其溶解，再放入已磨散的碘片，徐徐加 水，同时充分磨匀，待碘片完全溶解后，把余下的蒸馏水倒入， 再装入瓶中。 （3）石炭酸复红稀释液 取碱性复红酒精饱和溶液（碱性复红10g溶于 95%酒精100ml中）1ml和5%石炭酸水溶液9ml混合，即为石炭酸 复红原液。再取原液10ml和90ml蒸馏水混合，即成石炭复红稀释 液。
（2）干燥涂片 在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上来回微 烤使其干燥。
（3）固定涂片 干燥后，将涂面向上，在火焰上快速来回通过2～3次，其 温度以手背接触玻片底面感觉微烫手为宜。
2．血液推片和组织抹片的制作
（1）血液推片的制作 取一张边缘整齐的载玻片，用其一端蘸取少许血液， 在另一张干净无油脂的载玻片上，以45°角度均匀地 推成一薄血涂片，以红细胞不重叠为宜。
3．瑞氏染色液
1．碱性美蓝染色液 甲液：美蓝0.3g、95%酒精30mL； 乙液：0.01%苛性钾溶液100mL
先配甲液，将美蓝放入研钵中，徐徐加入酒精 研磨均匀后，把甲、乙两液混合，过夜后用滤 纸过滤即成。新鲜配制的美蓝液染色不好，陈 旧的染色好。
2．革兰氏染色液
（1）草酸铵结晶紫溶液 甲液：结晶紫2g、95%酒精20ml； 乙液：草酸铵0.8g、蒸馏水80ml 将结晶紫放入研钵中，加酒精研磨均匀制成甲液，然后将完全溶 解的乙液与甲液混合即成。
2．革兰氏染色法
（ 1 ）在固定好的抹片上，滴加草酸 铵结晶紫染色液，作用1～ 3min，水洗。 （2）加革兰氏碘液，作用1～2min， 水洗。
（3）加95％酒精脱色约30s至1min， 水洗。
（4）加稀释石炭酸复红，复染30s左 右，水洗，吸干后镜检。
结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰 氏阴性菌呈红色。