植物花粉生活力检测技术进展_左丹丹
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉是植物生殖过程中非常重要的一环，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
花粉生活力测定方法是通过一系列的实验和观察，来评估花粉的生长和发育能力，从而为植物的繁殖提供科学依据。
本文将介绍几种常见的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和爱好者有所帮助。
首先，传统的花粉生活力测定方法是通过染色观察花粉管的生长情况。
首先，将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察花粉管在一定时间内的生长情况，通过显微镜观察花粉管的长度和形态，从而评估花粉的生活力。
这种方法简单直观，但需要显微镜等设备，且操作较为繁琐。
其次，现代的花粉生活力测定方法中，常用的是荧光显微镜观察法。
通过将花粉与特定的荧光染料结合，使花粉在荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号，从而可以清晰地观察花粉管的生长情况。
这种方法操作简便，观察效果明显，对于大规模的花粉生活力测定具有很大的优势。
另外，还有一种常见的花粉生活力测定方法是通过花粉萌发率来评估花粉的生活力。
这种方法是将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察一定时间内花粉的萌发情况，通过统计萌发的花粉数量来评估花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在较短的时间内获取较为准确的结果。
除了上述几种方法外，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，如分子生物学技术的应用、电子显微镜的观察等，这些方法在花粉生活力测定领域也取得了一些重要的进展。
综上所述，花粉生活力测定是植物繁殖和生长研究中的重要内容，而花粉生活力的准确测定则需要科学、准确的方法。
不同的方法各有优劣，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择适合的方法进行花粉生活力的测定，从而为植物繁殖和生长研究提供可靠的数据支持。
希望本文介绍的几种常见的花粉生活力测定方法对相关领域的研究者和爱好者有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的花粉生活力测定方法被发展和应用。
2实验二、花粉生活力测定
前 言
花粉生活力测定在育种 力 2．雄性不育系的鉴定
实验目的：
学习并初步掌握作物花粉生 活力测定的常用方法
测定方法:
（一）I-KI染色鉴定
（二）TTC染色鉴定
（三）花粉粒发芽鉴定
实验方法 I-KI染色鉴定：
正常的成熟花粉粒体积较大， 并含有大量的淀粉粒，遇I-KI 呈紫黑色，不正常的花粉粒体 系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。
实验方法 TTC染色鉴定：
具有生活力的花粉中含有 脱氢酶，它能催化引物使脱下 的氢与TTC结合，生成红色化 合物甲替。凡有生活力的花粉 呈红色，生活力弱的呈浅红色， 无生活力的不显色或成黄色。
实验方法
花粉粒发芽鉴定：
在人工培养基上进 行发芽试验，可以比较 准确地判断花粉的生活 力。
实验步骤
I-KI染色鉴定：
2 ．准备 TTC 染色和发芽试验的材料， 置培养箱保温； 3．调试显微镜，I-KI染色鉴定； 4．TTC染色鉴定、发芽率调查。
作业
实验三、作物花粉生活力测定 1．测定方法和原理： （一）I-KI染色鉴定：正常的成熟花粉粒体积较大，并含有大量的淀粉 粒，遇I-KI呈紫黑色，不正常的花粉粒体系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。 （二）TTC染色鉴定：具有生活力的花粉中含有脱氢酶，它能催化底物 使脱下的氢与TTC（氯化三苯基四氮唑）结合，生成红色化合物甲替。 凡有生活力的花粉呈红色，生活力弱的呈浅红色，无生活力的不显色或 成黄色。 （三）花粉粒发芽鉴定：在人工培养基上进行发芽试验，可以比较准确 地判断花粉的生活力。 2．实验结果： 材料 I-IK染色率% TTC染色率% 发芽率%
用镊子夹一个花药于载玻片 上滴上一滴1%I-KI溶液 用镊子将花药夹碎并把碎片 去干净盖上盖玻片置显微 镜下观察。
植物花粉生活力检测技术进展
ＴＣ即 ２３５ 代三 苯 基 四氮唑 ， 是 Ｉ ，，． 氯 它
种 氧化还原染 料 。ＴＣ染色 法 的基 本原 理是 ： ＴＣ渗 入 Ｉ 当 Ｉ
细胞 后 ， 可被 呼 吸代谢 中的还 原酶 所还 原 ， 由无色 的氧化 并 型变成 红色 的还 原型 ， 由此来判 断花粉 的生 活力 。
生长、 萌发或发育的能力。在农业和林业 的常规育种中， 为
Ｚ Ｏ Ｄ ｄ ｎｅ ｌ （ ｏｌ ｅｏ Ｈ ｒｃｌ ｒ ｎ ａｄｃｐ ｒｈｔ ｔｒ， ａｇ ｅＵ ｉ ｒｉ ，Ｊ ｇｈｕ ｕｅ ３０５ Ｕ ￣ ａ ａ Ｃ ｌｇ ｆ ｏｔｕｔ ｅａｄｌｎｓａｅＡｃ ｉｃ ｅ Ｙ ｎｔ ｎｖ ｓｙ ｉ ｚｏ ，Ｈ ｂｉ ４２ ） ｔ ｅ ｉ ｕ ｅｕ ｚ ｅ ｔ ｎ ４
（。 １长江大学园艺 园林学 院， 湖北荆州 ４４ ２ ； ． ３０５ ２ 中国农业科学 院蔬菜花卉研究所 ， 北京 １ ０ １ ０ ８） ０
摘要
总结 了植物花粉 生活 力检测 的染 色法 、 测定法 以及 田 间授粉 测定 法等的基 本原理和 应用 ， 分析 了各种 方法 的特 点 。 萌发 并且
花粉是高等植物的雄配子体。它在有性繁殖 中传递着 雄性亲本 的遗传信息。花粉既是植物遗传、 育种、 进化 、 生殖
等研究 的重要对 象 ， 是孢 粉分 析 、 群 培育 、 物 制造 、 又 蜂 药 医
疗及生 理试验等 的重要材料 。花粉 生活力 是花 粉具有存 活 、
１２ ｒ℃ 染 色法 。 Ｉ
但 该方 法耗 时长 ， 染色后 花粉 的颜 色差别 很小 ， 不易分 辨 ， 且
颜 色受染 色时间 的影 响较 大 ， 不便统 计 。 ＩＫ 染色法 的基 本原 理是 ： 淀 粉遇 ２Ｉ ． 根据
花粉生活力测定方法研究进展
花粉生活力测定方法研究进展摘要：总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词：花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体，在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象，也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中，研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难，为解决这一难题，保存花粉的活力成为重要手段，而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此，掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果，花粉生活力的检测方法可以分为四大类：①染色法；②萌发测定法；③田间授粉检测法；④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法1.1TTC染色法TTC即2,3,5-氯代三苯基四氮唑，它是一种氧化还原染料，水溶液无色。
基本原理是[1]：当TTC渗入细胞后，遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子，由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物，由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤：①配制PH为7.17的磷酸缓冲液。
称取0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于100ml的蒸馏水中，调整pH为7.17。
②TTC溶液配制。
依据不同植物称取0.02～1.0g的TTC溶于100ml的磷酸缓冲液中，于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上，加上一滴TTC溶液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，然后放置于35℃的恒温箱中染色15～20min。
④镜检。
于10×10倍镜下观察，凡具有活力的花粉被染成红色，部分丧失活力的呈现粉红色，无色的是的或不育的花粉粒。
凌春英,肖恩等的研究[2]得出常温、黑暗条件下用TTC染色12h可达到较好的观察效果，并认为TTC法是大花蕙兰和墨兰花粉活力测定便捷、有效的方法。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下能够完成受精和发育的能力。
花粉生活力的测定对于植物的研究和育种具有重要意义。
下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。
首先，最常用的方法是离体花粉萌发法。
这种方法是将收集到的花粉在一定的培养基上进行培养，观察花粉颗粒是否萌发。
通过观察花粉管的生长情况和数量，可以初步判断花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在实验室条件下进行。
其次，还有花粉染色法。
这种方法是将花粉颗粒染色后观察其形态和结构，从而判断花粉的生活力。
通过观察染色后的花粉颗粒的形态、颜色和内部结构，可以初步判断花粉的生活力。
这种方法需要借助显微镜进行观察，对实验条件要求较高。
另外，还有花粉活力染色法。
这种方法是利用活性染料对花粉颗粒进行染色，观察染色后的花粉颗粒的颜色和形态，从而判断其生活力。
这种方法对于花粉的活力有较高的敏感性，可以较准确地判断花粉的生活力。
最后，还有花粉酶活性法。
这种方法是通过检测花粉中的酶活性来判断其生活力。
通过测定花粉中的酶活性，可以间接地反映出花粉的生活力。
这种方法需要借助生化实验室进行，对实验条件和仪器设备要求较高。
综上所述，花粉生活力的测定方法有多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据具体的研究目的和实验条件选择合适的方法进行花粉生活力的测定。
通过准确测定花粉的生活力，可以为植物的研究和育种提供重要的参考依据。
不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析
3.醋酸洋红法
【原理】正常花粉呈圆球形,物质积累较多,对醋酸洋红的吸附作 用与亲和力强,通常易被染成深红色,发育不良的花粉常呈畸形, 不积累物质或积累很少,用醋酸洋红染色呈淡红色或无色。
2.氯化三苯基四氮唑（TTC）法
【原理】 具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或 NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成 红色的TTF（三苯基甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸 作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后
的颜色变化判断花粉的生活力。
花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降 低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命的长短， 因植物种类不同而异。在自然条件下，大多数植 物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或 几个星期。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异 以外，还与温度、湿度有密切的关系。通常 高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命 力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分， 也不利于保存。
用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花蕾的 花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中，写上 标签，进行必要的加温处理（培养箱温度25℃ 使其散粉。
（3）花粉的储藏
散粉然后将花粉收集于2ml的离心管（花粉瓶） 中，用封口膜密封盖子，写上标签置于冰箱 （-20℃）内储藏备用。（或者不同温度25℃， 5℃、0℃、-20℃、-40℃和-86℃下贮藏）。 注意采集花药开裂前后的新鲜花粉，对不成 熟的幼嫩花药的花粉，成熟过头的花粉被雨 露粘湿的花粉，有疑问的花粉杂质要除去。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物繁殖的重要媒介，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
近年来，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也得到了不断的改进和完善。
传统的花粉生活力测定方法主要包括离体花粉萌发试验、花粉染色观察、花粉活力染色观察等。
这些方法虽然可以初步判断花粉的生活力，但存在着操作繁琐、结果不稳定、时间周期长等问题，限制了其在实际应用中的发展。
近年来，随着生物技术和显微镜技术的不断进步，新型的花粉生活力测定方法逐渐被引入。
比如，利用荧光显微镜观察花粉萌发情况，结合数字图像处理技术进行分析，可以快速、准确地测定花粉的生活力。
另外，利用生物标记技术对花粉进行标记，然后观察其在植物受精过程中的行为，也可以对花粉的生活力进行评估。
除了显微镜技术和生物标记技术，分子生物学技术在花粉生活力测定中也发挥了重要作用。
通过分析花粉中的基因表达情况、蛋白质组成等，可以更直观地了解花粉的生活力情况，为植物繁殖提供更准确的数据支持。
综上所述，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
新型的测定方法不仅提高了测定的准确性和稳定性，同时也为植物繁殖和生长研究提供了更多的可能性。
相信随着科学技术的不断进步，花粉生活力测定方法将会更加完善，为植物繁殖和生长研究带来更多的突破和进展。
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植物花粉生活力检测技术进展左丹丹1,2,明军23,刘春2,王丽娜1 (1.长江大学园艺园林学院,湖北荆州434025;2.中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081)摘要 总结了植物花粉生活力检测的染色法、萌发测定法以及田间授粉测定法等的基本原理和应用,并且分析了各种方法的特点。
关键词 花粉;生活力;检测技术中图分类号 Q945 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)16-04742-04Advance in T echnique of P lant Pollen V iabilityZU O Dan2d an et al (C ollege of H orticulture and Landscape Architecture,Y angtze University,Jingzh ou,Hubei434025)Abstract T he principle and application of technique of plant pollen viability were summ arized,including staining m eth od,germ ination m eth od and polli2 nation in field m eth od,etc.T he characteristics of different techniques were studied.K ey w ords P ollen;Viability;T esting technique 花粉是高等植物的雄配子体。
它在有性繁殖中传递着雄性亲本的遗传信息。
花粉既是植物遗传、育种、进化、生殖等研究的重要对象,又是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理试验等的重要材料。
花粉生活力是花粉具有存活、生长、萌发或发育的能力。
在农业和林业的常规育种中,为了进行人工辅助授粉或杂交授粉,需要早期采集和贮存花粉。
尤其是在杂交育种工作中,研究花粉的生活力和育性是必不可少的基础性工作。
为了解决亲本花期不一致或远距离杂交的困难,更需要保存花粉的活力。
在使用采集和贮存花粉之前,通常要做花粉生活力的鉴定。
不同类群植物花粉在自然条件下的寿命、花粉的适宜贮存条件以及花粉生活力的适宜测定方法均有所差异。
这些差异对于研究花粉贮藏期间控制花粉生活力、花粉—柱头间的相互作用、品种改良与育种操作、基因库的保持、不亲和性与受精关系、生理调节对花粉萌发的影响以及基因流等均有重要的实践意义[1]。
因此,掌握花粉生活力检测的方法对于提高植物育种效率具有较高的实际应用价值。
1 染色法1.1 I22KI染色法 I22K I染色法的基本原理是:根据淀粉遇碘变蓝的特性,根据蓝色的深浅程度来判断花粉粒中淀粉的含量,从而确定花粉粒活性的高低。
具体操作步骤如下:①I22K I的配制。
称取2g K I溶于10 m l蒸馏水中,然后加入1g I2,待全部溶解后,加蒸馏水定容至300m l。
②染色。
取少量花粉置于载玻片上,滴上1～2滴I2K I染色液,5m in后在显微镜下观察。
③结果判断。
凡是染成蓝黑色的花粉粒具较强活力,淡蓝色次之,几乎无色则为无活力花粉。
该方法在柑橘[2]、辣椒[3-4]、梅(桃)属[5]、瓜叶菊[6]、黄瓜[7]、澳洲坚果[8]等植物上均有应用。
该方法的局限在于,它是靠花粉粒内的淀粉着色而进行判定的。
虽然花粉失去了活力,但是淀粉依然存在,所以测定值偏高,而且对于那些淀粉含量少的种类如菊属[9]不适宜。
基金项目 国家社会公益研究项目(2005DI B022);湖北省自然科学基金(2004ABA142);林木、花卉遗传育种教育部重点实验室开放基金(200605212)。
作者简介 左丹丹(1981-),女,湖北宜昌人,硕士研究生,研究方向:园林及观赏植物资源与分子育种。
3通讯作者。
收稿日期 20072022061.2 TTC染色法 TT C即2,3,52氯代三苯基四氮唑,它是一种氧化还原染料。
TT C染色法的基本原理是:当TT C渗入细胞后,可被呼吸代谢中的还原酶所还原,并由无色的氧化型变成红色的还原型,由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤如下:①磷酸盐缓冲溶液的配制。
称取1.673g十二水磷酸氢二钠和0.273g磷酸氢二钾溶解于100 m l的蒸馏水,调整pH值为7.17。
②TT C溶液的配制。
称取0.02～0.05g TT C(依植物而定)溶解在10m l磷酸盐缓冲溶液中,然后放于棕色瓶中于暗处待用。
因氯化三苯基唑有毒,操作时要注意安全。
③染色。
取少量花粉置于普通载玻片上,滴入TT C溶液2滴,用镊子搅拌均匀,盖上盖玻片,在25～28℃的温度下放置15～20m in。
④显微镜下观察。
具较强生活力的花粉粒呈红色,微弱活力的花粉粒呈淡红色,无活力或不育的花粉为无色。
该方法已应用于黄瓜[7]、枇杷[10]、猕猴桃[11]、番木瓜[12]、瓜叶菊[7]、芸薹属[13]、百合[14]等的花粉生活力检测。
但该方法耗时长,染色后花粉的颜色差别很小,不易分辨,且颜色受染色时间的影响较大,不便统计。
1.3 FCR染色法 FCR染色法即荧光染料反应法(Flu o2 rochrome Reaction),其基本原理是:荧光染料本身不产生荧光,无极性,可以自由地透过完整的原生质膜,当这种染料进入原生质后,即被酯酶作用而形成一种能产生荧光的极性物质———荧光素,并且这种物质不能自由出入原生质膜,而只在细胞内积累,所以可以根据花粉产生荧光的情况判断花粉的生活力。
而且,该方法可同时反映出酶活和质膜情况2个指标[15]。
具体操作步骤如下:①母液1(SS1)的配制。
1.75m ol/L 蔗糖、3.32mm ol/L硼酸、3.05mm ol/L硝酸钙、3.33mm ol/L硫酸镁、1.98mm ol/L硝酸钾,混合后用蒸馏水定容。
另外,可以增加蔗糖浓度以避免由渗透压引起的花粉管破裂,也可以根据荧光的强弱来调整盐的浓度。
②母液2(SS2)的配制。
7.21mm ol/L双乙酸荧光素(Flu orescein Diacetate)溶于丙酮中,放于4℃冰箱。
③染色液的配制。
取8～12滴SS2于10m l SS1中,混匀直到该混合液变为轻乳状。
④染色。
取2～3滴染色液于花粉粒上,盖上盖玻片,2m in后在荧光显微镜下观察即可。
产生绿色荧光的花粉具有生活力,无荧光产生的花粉则没有生活力。
安徽农业科学,Journal of Anhui Agri.Sci.2007,35(16):4742-4745 责任编辑 刘月娟 责任校对 胡先祥FCR 法测定芜菁芸苔属的花粉生活力结果偏低,与离体萌发试验结果不一致,颜色深浅变化很大,所以不能作为该花粉生活力测定的标准[15]。
S chueler 等应用FCR 法对橡树的花粉进行测定,发现花粉生活力随着太阳辐射时间的延长而下降,与体外萌发试验比较,FCR 法的误差偏小,测定值偏高[16]。
Aronne 在研究相对湿度和温度对迷迭香花粉活力的影响时应用了该方法[17]。
另外,尹增芳在研究鹅掌楸花粉保存条件时,采用较简便的荧光染色法———FDA (荧光素二醋酸酯),其具体方法是将5mg FDA 溶解于1m l 丙酮中,观察前用0.5m ol/L 蔗糖溶液将其稀释50倍,即得到100μg/m lFDA 测定液,检测时在撒有花粉载玻片上滴1滴FDA 测定液,盖上盖玻片,静置5m in 后荧光显微观察,以活细胞发出绿色荧光、死细胞无荧光为依据,统计花粉细胞存活率(FCR 值)[18]。
其实质也是FCR 染色法。
M araschin 对大麦花粉进行了FDA 活力测定[19]。
Reale 等应用FDA 研究了橄榄的生殖生物学[20]。
该方法与萌发测定有相关性,对亲本与F 1代的鉴别非常有效,但稳定性差,需要重复测定,估计值偏高,测定时间长,15m in 后就会退色,所以必须在落射荧光显微镜下观察。
1.4 联苯胺染色法 联苯胺染色法又称过氧化物酶染色法或B.C 夏尔达考夫染色法[21]。
基本原理是根据花粉中过氧化物酶的活性来判断花粉的生活力。
具体操作步骤如下:先将0.2g 联苯胺溶于100m l 50%酒精,0.15g α2萘酚溶于100m l 50%酒精,0.25g 碳酸钠溶于100m l 蒸馏水,等量配制成混合溶液I ;接着配制0.3%过氧化氢溶液II ;加1滴混合液I 和1滴溶液II 于带有花粉的载玻片上,静置3～4m in 后,在显微镜下检查。
显红色的为有生活力的花粉,凡为黄色或透明的均为无生活力的花粉[22]。
该方法主要是由于有活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,所用试剂能与该酶发生氧化而染色。
但是随着花粉生活力的丧失,该酶活性不消失,所以仍能染色,因此,测定值偏高[4]。
而且笔者在研究蜡梅花粉生活力时发现,在显微镜下难以区分红色和黄色,染色界线不分明,与萌发测定没有相关性。
1.5 MTT 法 MTT 染色法是根据花粉粒中脱氢酶的活性判断花粉生活力,适用试剂是四唑盐类染料。
染料的配制方法如下:1%2,52联苯四唑溴化物(MTT 或噻唑兰)溶于5%蔗糖。
若染色后,花粉呈深粉红色或表面有不规则的黑线,则证明花粉有生活力[23]。
姜雪婷等应用该方法测定了梨花粉的生活力,发现测定值明显偏高,不适宜梨花粉生活力的测定[21]。
该方法的缺点是与萌发测定不相关,染色后花粉的颜色差别很小,不易分辨,导致测定值偏高,所以应用很少。
1.6 X 2G al 染色法 X 2G al 染色法是根据花粉中β2半乳糖苷酶的存在与否来测定花粉生活力。
X 2G al 染液的配制方法如下:1mg X 2G al (52溴242氯232吲哚2β2半乳糖)溶于50μl N ,N 2二甲基甲酰胺和1m l 醋酸缓冲液(50mm ol/L ,pH 值4.8)中。
若染色后的花粉呈蓝色,则花粉具有生活力。
该方法染色后花粉颜色鲜亮,易于鉴别,并与花粉管生长有相关性。
缺点是对花粉的生活力估计偏高,也可使死亡花粉着色[24]。
1.7 B aker ’s 染色法 Baker ’s 染色法通过检测乙醇脱氢酶活性判断花粉的生活力。
Baker 试剂的配制方法如下:0.7mg/m l 磷酸缓冲液(pH 值7.3～7.5),少量硝基兰-四唑,6mg NAD +,0.5～1m l 35%酒精。
若染色后的花粉呈紫罗兰色或粉红色,则花粉有生活力。
该方法简便,但也能使死花粉着色,测定值偏高[24]。
由于药品毒性大,对某些植物存在潜在的危害,所以一般不采用。
1.8 P 2苯二胺法 P 2苯二胺测定法(p 2phenylenedia m ine 2per 2oxidase 2test ,简称ppp 2test )[24-25]。