蓝狐消化道5_羟色胺和生长抑素免疫组化定位_刘湘江

蓝狐消化道5-羟色胺和生长抑素免疫组化定位刘湘江，杨隽，张磊，张雷（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319）摘要：采用免疫组织化学SP法,研究蓝狐消化道内5-羟色胺和生长抑素2种免疫阳性细胞的形态结构与分布密度。

结果表明,消化道中这2种免疫阳性细胞形态多呈圆形、椭圆形或锥体形，主要集中分布在胃腺上皮、肠上皮及肠腺上皮细胞之间。

5-HT免疫阳性细胞数量以结肠最多，直肠和空肠次之，胃底腺区、十二指肠、回肠和幽门腺区较少，食管、贲门腺区和盲肠中未见；SS免疫阳性细胞大量出现于幽门腺区，食管、贲门腺区和盲肠中未见；根据其形态推测，蓝狐消化道这2种免疫阳性细胞有内、外2种分泌功能。

关键词：蓝狐；消化道；内分泌细胞；免疫组织化学中图分类号：Q48文献标识码：A文章顺序编号：1672-5190（2009）04-0020-01 Immuno-histochemical Localization of5-Hydroxytryptamine and Somatostatin in The Digestive Tract of Blue FoxLIU Xiang-jiang,YANG Jun,ZHANG Lei,ZHANG Lei（College of Animal Science and Technology,Heilongjiang Bayi Agricultural University,Daqing163319，China）Abstract：The morphological structures and distribution densities of2immunoreactive cells with5-hydroxytryptamine（5-HT）and somatostatin（SS）in the digestive tract of blue fox were studied by immuno-histochemical SP method.The results indicated that most of the2immunoreactive cells in digestive tract showed to be round,oval shape or cone-shape,they were mainly distributed among gastric gland epithelia,intestinal epithelia and intestinal gland epithelia fixedly.The immunoreactive cells with5-HT were most in colon, secondary in rectum and jejunum,less in fundus gland region,duodenum,ileum and pyloric gland region,not found in esophagus, cardiac gland region and cecum.The immunoreactive cells with SS appeared in pyloric gland region largely and were not found in esophagus,cardiac gland region and cecum.Based on their shapes,it was speculated that these2immunoreactive cells in the digestive tract of blue fox had2secretion functions of endocrine and exocrine.Key words：blue fox;digestive tract;endocrine cells;immunohistochemistry蓝狐又名北极狐（Alopex lagopus），属于食肉目（Carnivora）犬科（Canidae）北极狐属（Alopex Kaup）。

狐皮以毛绒细软丰厚、色泽艳丽、轻便及御寒能力强等优点而成为广大养殖户首选的经济动物之一［1］。

该研究采用组织学和免疫组织化学方法，对蓝狐消化道内5-羟色胺（5-HT）和生长抑素（SS）2种内分泌细胞的分布和形态进行研究，以期揭示蓝狐消化道内分泌细胞的分布规律及特点，为进一步研究蓝狐消化道激素的作用机理、胃肠疾病的发病机制及其养殖提供形态学资料。

1材料与方法1.1材料组织材料取自10只营养状况良好、健康的成年蓝狐。

2种胃肠激素的兔抗血清、DAB显色系统及酶系列检测试剂盒，均购于北京中杉金桥生物技术公司（美国ZYMED）。

1.2方法将试验动物处死后立即取食管末段、贲门腺区、胃底腺区、幽门腺区、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠和直肠等处组织。

组织常规脱水透明，石蜡包埋，连续切片。

切片脱蜡入水，蒸馏水冲洗干净，PBS浸泡5min，3%过氧化氢孵育10min，PBS冲洗3次，每次3min；滴加山羊血清，室温孵育15min，弃血清；滴加一抗，室温孵育2h，PBS冲洗3次，每次3min；滴加生物素标记二抗，室温孵育15min，PBS冲洗3次，每次3min；加辣根酶标记工作液（S-P/HRP），室温孵育15min，PBS冲洗3次，每次3min；DAB系统显色5～10min；自来水冲洗，脱水，透明，封片。

对照组以PBS代替一抗，其余步骤相同。

Motic105M 显微镜下观察结果并拍照。

1.3数据处理与统计分析10只蓝狐的每个取样部位分别做5-HT及SS的免疫组织化学检测，每种激素每个部位取5张切片，对每个部位的每张切片随机取10个（400×）视野统计细胞个数。

用SPSS11.0统计软件对数据进行分析。

数值用x±s表示。

2结果5-HT和SS2种激素的抗体在蓝狐消化道内的阳性细胞均呈棕黄色，细胞位于胃腺上皮、肠上皮及肠腺上皮之间。

对照组为阴性。

内分泌细胞的分布情况及出现频率见表1。

2.15-HT免疫阳性细胞5-HT免疫阳性细胞一般呈圆收稿日期：2009－04－11基金项目：黑龙江省农垦总局“十一五”重点攻关课题（HNKX-IV-08-12-06）。

作者简介：刘湘江（1984—），男，硕士，主要研究方向为动物解剖及组织胚胎学。

通讯作者：杨隽（1964—），男，教授，主要研究方向为动物组织胚胎学及水产养殖，E-mail：yangjun3658@。

表1蓝狐消化道4种内分泌细胞的分布（细胞个数/400×）部位食管贲门腺区胃底腺区幽门腺区十二指肠空肠回肠盲肠结肠直肠注：同一列数值中，肩标相同字母表示差异不显著（P>0.05），肩标不同字母表示差异显著（P<0.05）。

5-HT阳性细胞--3.91±0.520c3.12±0.400c3.85±0.620c4.41±1.290bc3.37±1.150c-6.90±2.180a5.16±1.230bSS阳性细胞--3.46±0.821b6.50±2.170a3.37±1.240b2.83±0.880b2.35±0.960c-1.21±0.470d2.03±1.050c形、椭圆形或锥体形，在结肠分布数量最多（见图1），然后依次为直肠、空肠、胃底腺区、十二指肠、回肠和幽门腺区，而食管、贲门腺区和盲肠中均未有阳性表达。

2.2SS 免疫阳性细胞SS 免疫阳性细胞呈椭圆形或锥体形，幽门腺区分布数量最多（见图2），其中胃底腺区、十二指肠、空肠、回肠和直肠分布较多，结肠较少，在贲门腺区、食管和盲肠中未发现阳性表达。

3讨论蓝狐消化道中5-HT 主要是由EC 细胞分泌，该细胞在结肠分布最多，在消化道其他部位也有一定量的分布，而食管、贲门腺区及盲肠中均未检出。

与其他哺乳动物相比较，5-HT 免疫阳性细胞的分布有一定差异［2］。

在大熊猫，5-HT 阳性细胞在空肠多于幽门部与十二指肠［3］；在猪和狗，十二指肠中的分布频率最高；家兔以盲肠的分布最多［4］；莱芜黑山羊以结肠分布数量最多［5］。

由此可见，不同动物消化道5-HT 阳性细胞的分布各不相同。

原因有可能是种间差异，也可能与其消化特点有关。

SS 是由D 细胞分泌的，该细胞在幽门腺区数量最多，胃底腺、十二指肠和空肠较多，回肠、直肠和空肠较少，贲门腺区和食管中未检出。

这与其他哺乳动物的分布特点相吻合。

蓝狐消化道内分泌细胞的分布与一般哺乳动物的分布大致相同，但存在差异，这可能与其食性及生活环境相关。

参考文献：［1］［2］［3］［4］［5］华盛，华树芳.狐品种简介及选种标准［J ］.特种经济动植物，2005，3（1）：10-12.张志强，张盛周，吴孝兵.竹叶青蛇消化道内分泌细胞的免疫组织化学定位［J ］.动物学报，2001，4（6）：666-671.杨贵波，陈茂生，邓泽沛.大熊猫胃肠道内分泌细胞分布性的研究［J ］.兽类学报，1995，15（1）：4-10.李淑兰，陈洪岩.家兔消化道5-羟色胺免疫活性细胞的免疫组织化学研究［J ］.中国比较医学杂志，2003，13（6）：347-350.侯衍猛，汤连升，王树迎.莱芜山羊消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究［J ］.解剖学报，2007，38（5）：585-588.□图1结肠5-HT 阳性细胞400×黄杨宁中主要生物碱分离纯化方法许慧子，费贤杰（合肥学院生物与环境工程系，安徽合肥230022）摘要：综述了目前黄杨宁中环维黄杨星D 的分离纯化和质量控制的几种方法，并对其进行了比较。

通过对HPLC 法和薄层色谱法在环维黄杨星D 分离纯化中的应用及影响，探索进一步的优化条件，以期为黄杨宁药品生产过程中提高有效成分和杂质控制的检测提供帮助。

关键词：黄杨宁；环维黄杨星D ；薄层色谱法；HPLC 中图分类号：R282.71文献标识码：A 文章顺序编号：1672-5190（2009）04-0021-02黄杨（Buxussinica ）为《本草纲目》上收载的草药，具祛风除湿、理气止痛、清热解毒之功，全草含黄杨生物碱，黄杨生物碱可作用于迷走神经和心脏，产生心搏缓慢、局部缺血、窦室传导阻滞和心肌损伤。

其中，环常绿黄杨碱D 、C 和环维黄杨碱C 的药理研究表明，具有增加冠状动脉血流量的作用，用于冠心病及冠心病引起的心绞痛，已制成黄杨宁药品进行生产。

黄杨宁片已具有良好的抗心律失常、心肌缺血、脑缺血和强心作用，有行气活血、通络止痛之功效，临床主要用于治疗冠心病、室性早搏、心绞痛、心律失常。