肺炎链球菌检测-菌落形态鉴定 Colony Morphology Test
肺炎链球菌检测讲解共45页
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46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
肺炎链球菌检测讲解
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7、翩翩新 来燕，双双入我庐 ，先巢故尚在，相 将还旧居。
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9、 陶渊 明（ 约 365年 —427年 ），字 元亮， （又 一说名 潜，字 渊明 ）号五 柳先生 ，私 谥“靖 节”， 东晋 末期南 朝宋初 期诗 人、文 学家、 辞赋 家、散
肺炎链球菌检测-革兰氏染色 Gram Stain
染色部位。 10.滴加 50µl 蕃红染色液，室温下静置 2 分钟后，蒸馏水冲洗载玻片，用吸水纸
吸去多余水分。不要让水流直接冲洗载玻片上染色部位。 11.镜检。100X 油镜下观察，肺炎链球菌革兰氏染色阳性，呈矛头状，常成对或
中国疾病预防控制中心
传染病预防控制所呼吸道传染病室
肺炎链球菌相关实验技术操作手册
革兰氏染色
（Gram Stain）
试验步骤： 1. 用移液器在载玻片上滴加 50µl 生理盐水或 PBS buffer。 2. 用无菌取菌环挑取可疑单个菌落溶于步骤 1 的液体中，制成均匀菌悬液。 3. 晾干载玻片。载玻片上的菌液必须完全干燥，才能进行下列操作。 4. 滴加 50µl 结晶紫溶液于载玻片上菌液干燥处，室温下静置 1min。 5. 蒸馏水冲洗载玻片。不要让水流直接冲洗载玻片上染色部位。 6. 滴加 50µl 碘液于染色处，室温下静置 1min。 7. 蒸馏水冲洗载玻片，用吸水纸吸去多余水分。不要让水流直接冲洗载玻片上
成短链排列。
图中箭头处为肺炎链球菌革兰氏染色后镜下观察结果。Leabharlann 本手册仅供实验室内部使用 版
2011 年第 1
肺炎链球菌活菌数含量的测定操作规程
肺炎链球菌活菌数含量的测定操作规程1.引言肺炎链球菌是一种常见的呼吸道病原微生物，对于疾病的防控具有重要意义。
测定肺炎链球菌的活菌数含量是判断疾病传播性和临床治疗效果的重要指标。
本文档旨在规范肺炎链球菌活菌数含量的测定操作，确保测定结果的准确性和可靠性。
2.实验所需材料肺炎链球菌培养基冰箱分装管微量移液管、移液器和吸头显微镜细菌计数板和计数室3.实验步骤1.取一小瓶肺炎链球菌培养基放置于冰箱中冷藏，保持4℃。
2.取适量肺炎链球菌培养基，分装于无菌分装管中，避免反复冻融，可存放在-20℃的冰箱内长期保存。
3.取一支肺炎链球菌分离菌株，用无菌吸头取适量细菌液，接种于肺炎链球菌培养基中。
4.将接种好的培养基放置于恒温摇床中，在37℃恒温箱中培养24小时。
5.取培养好的细菌液，用无菌吸头吸取适量的细菌悬液，放置在显微镜片上。
6.用显微镜观察细菌悬液中的活菌，计数并记录。
7.将细菌计数板放置在计数室中，将观察到的活菌在计数板上记录。
4.实验注意事项所用材料必须无菌，以防止其他微生物的污染。
活菌的计数应在24小时内完成。
活菌数的检测应重复3次并取平均值。
实验环境应保持洁净，避免灰尘和其他污染物对实验结果造成干扰。
5.结果记录与分析根据实验步骤所得的数据，计算平均活菌数含量，并记录在实验数据表中。
通过对不同样本的活菌数进行比较和分析，可以了解肺炎链球菌的传播程度和感染风险。
6.结论本操作规程提供了一种测定肺炎链球菌活菌数含量的标准化方法，经过验证具备准确性和可靠性。
科学使用本操作规程可以为疾病的早期预防和传播控制提供重要的实验数据支持。
注意：本操作规程仅供参考，具体实施过程请根据实验条件和要求进行调整。
肺炎链球菌鉴定流程
肺炎链球菌鉴定流程肺炎链球菌（肺炎链球菌属）是导致人类社区获得性肺炎（CAP）最常见的病原体之一。
准确鉴定肺炎链球菌对于指导适当的抗菌治疗和监测抗菌剂耐药性的出现至关重要。
该鉴定过程涉及多个步骤，包括：革兰氏染色：革兰氏染色是鉴定肺炎链球菌的第一步，因为它是一种革兰氏阳性球菌，通常成链状排列。
形态学检查：通过显微镜检查革兰氏阳性标本，可以观察到肺炎链球菌的典型的链球菌形态。
链条的长度和排列模式可能因菌株而异。
荚膜染色：肺炎链球菌具有多糖荚膜，可通过荚膜染色技术（例如，奎肯斯泰特染色）显现出来。
荚膜的存在是肺炎链球菌鉴定的关键特征。
血清学检测：血清学检测，如奎肯斯泰特试验，可用于确定肺炎链球菌的荚膜血清型。
肺炎链球菌的荚膜由不同的血清型组成，每种血清型与不同的抗原性决定簇（PSA）相关。
生物化学测试：多种生物化学测试可用于确认肺炎链球菌的鉴别，包括：溶血反应：肺炎链球菌通常在绵羊红细胞琼脂平板上显示β溶血反应。
胆盐耐受性：肺炎链球菌可耐受高浓度的胆汁盐，这是区分其与其他链球菌的重要特征。
尿素酶活性：肺炎链球菌通常产生尿素酶，可水解尿素。
分子诊断：分子诊断方法，如聚合酶链反应（PCR），可用于快速鉴定肺炎链球菌，尤其是在培养困难的情况下。
PCR检测靶向肺炎链球菌基因，如lytA或cpsA。
抗菌剂敏感性测试：进行抗菌剂敏感性测试对于指导针对肺炎链球菌的适当治疗至关重要。
通常使用琼脂稀释法或扩散法来确定肺炎链球菌对各种抗菌剂的敏感性。
鉴定肺炎链球菌的流程通常涉及以下步骤：1. 革兰氏染色：确定标本中是否存在革兰氏阳性球菌。
2. 形态学检查：观察革兰氏阳性球菌的链球菌形态。
3. 荚膜染色：显示肺炎链球菌荚膜的存在。
4. 血清学检测：确定肺炎链球菌的荚膜血清型。
5. 生物化学测试：进行溶血反应、胆盐耐受性和尿素酶活性测试以确认鉴别。
6. 分子诊断：如有必要，进行PCR检测以快速鉴定肺炎链球菌。
7. 抗菌剂敏感性测试：确定肺炎链球菌对各种抗菌剂的敏感性。
实验四病原性球菌的检验
1、标本采集：脓液
2、检验程序：
脓液
↓
↓
直接涂片
分离培养
革兰染色镜检 （操作）（血琼脂平板）
↓
↓ 37℃ 18～24h
初报 挑取可疑菌落（性状、色素、溶血）
↓
鉴定试验及药敏试验
↓
↓
↓
↓
革兰染色镜检 生化反应鉴定 其他鉴定 药敏试验
↓
↓
↓
↓
↓37℃ 18～24h
报告
三、葡萄球菌属生物化学反应：
（一）触酶试验（操作）
规定时间内出现清晰凝集者为阳性，不出现凝集 者为阴性。
主要用于风湿热的辅助诊断：
风湿热患者ASO大多在250单位；
活动性风湿热患者ASO一般≥400单位。
『实验报告』
绘出化脓性球菌镜下形态图。 记录脓液标本的分离培养与鉴定程序。
实验四 病原性球菌的检验
病原性球菌，又称化脓性球菌，根据革 兰染色性的不同，分为两类： G＋球菌： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链 球菌等。 G- 球菌： 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 等。
『目的要求』
掌握：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜 炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的形态及染色特点；葡 萄球菌、链球菌的菌落特点及链球菌在血琼脂 平板上的溶血性；血浆凝固酶试验、触酶试验 的试验方法、结果及意义。
四、抗链球菌溶血素“O”的测定（乳胶法，示教）
1、原理：ASO高滴度的血清被适量溶血素“O”中 和后，失去了正常水平量的抗体，多余的抗“O” 抗体与ASO乳胶试剂反应，出现肉眼可见的，清 晰均匀的凝集颗粒（ASO乳胶试剂系羧化聚苯乙 烯乳胶与溶血素“O”共价交联的产物）。
2、方法：（略）3、结Fra bibliotek及意义：1、原理：
从肺部感染患者痰液中检出溶血隐秘杆菌
从肺部感染患者痰液中检出溶血隐秘杆菌[摘要]：目的对从肺部感染患者痰液中检出溶血隐秘杆菌进行鉴定和药敏分析，为临床诊断和治疗提供参考。
方法：按《全国临床检验操作规程》第四版方法进行接种培养涂片染色镜检，以法国梅里埃API Coryne条码鉴定菌种，K-B法做药敏试验。
结果：该肺部感染患者痰培养分离出菌株，经菌落形态、染色镜检生化试验生物学性状符合隐秘杆菌属，API Coryne条码鉴定为溶血隐秘杆菌。
药敏试验对喹诺酮类、碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类抗生素均敏感，对复方新诺明天然耐药。
结论：溶血隐秘杆菌是引起肺部感染的病原菌，此菌对多种抗生素敏感，值得临床关注。
关键词：肺部感染痰液溶血隐秘杆菌Abstract:[Objective]To identify and analyze the susceptibility of Arcanobacterium haemolyticus in sputum of patients with pulmonary infection, in order to provide reference for clinical diagnosis and treatment. [Methods] According to the fourth edition of the National Clinical Test procedure, the smear staining was carried out. Thestrains were identified by API Coryne bar code in France by Merieux, and the drug sensitivity test was done by K-B method. [Results] The strains were isolated from sputum culture of the patients with pulmonary infection and identified as Arcanobacterium hemolyticus by colony morphology and biochemical test and staining microscope. The biological characters were conformed to Arcanobacterium hemolyticus by API Coryne bar code. Drug sensitivity tests for quinolones, carbapenems, Penicillins, cephalosporins, macrolides antibiotics are sensitive to compound Xinomin natural resistance.[Conclusion]Arcanobacterium haemolyticus is the pathogen causing pulmonary infection, which is sensitive to various antibiotics and deserves clinical attention.Key words: pulmonary infection, sputum, Arcanobacterium haemolyticus溶血隐秘杆菌,属于放线菌科，隐秘杆菌属，为兼性厌氧菌。
肺炎链球菌实训报告模板
一、实训目的本次实训旨在通过实际操作和理论学习，深入了解肺炎链球菌的性质、生物学特性、致病机制以及相关实验室检测方法。
通过实训，提高学生对微生物学知识的掌握，培养实际操作技能，增强对病原微生物的识别和检测能力。
二、实训时间2023年X月X日至2023年X月X日三、实训地点XX大学微生物实验室四、实训内容1. 肺炎链球菌的形态学观察2. 肺炎链球菌的生化特性鉴定3. 肺炎链球菌的分离纯化4. 肺炎链球菌的致病性检测5. 肺炎链球菌的药物敏感性试验五、实训过程1. 肺炎链球菌的形态学观察（1）实验材料：肺炎链球菌标准菌株、显微镜、玻片、染色液等。
（2）实验步骤：- 将肺炎链球菌接种于玻片上，进行涂片。
- 使用革兰氏染色法对涂片进行染色。
- 使用显微镜观察肺炎链球菌的形态和排列方式。
（3）实验结果：- 观察到肺炎链球菌为革兰氏阳性球菌，呈矛头状成双排列或呈短链状。
2. 肺炎链球菌的生化特性鉴定（1）实验材料：肺炎链球菌标准菌株、生化鉴定管、培养基等。
（2）实验步骤：- 将肺炎链球菌接种于生化鉴定管和培养基上。
- 观察并记录肺炎链球菌的生化反应结果。
（3）实验结果：- 肺炎链球菌能够分解葡萄糖，产生酸性产物，不分解乳糖。
3. 肺炎链球菌的分离纯化（1）实验材料：肺炎链球菌标准菌株、琼脂平板、无菌器械等。
（2）实验步骤：- 将肺炎链球菌接种于琼脂平板上，进行划线分离。
- 将分离后的菌落进行纯化培养。
（3）实验结果：- 成功分离出纯化的肺炎链球菌菌落。
4. 肺炎链球菌的致病性检测（1）实验材料：肺炎链球菌标准菌株、实验动物、注射器等。
（2）实验步骤：- 将肺炎链球菌接种于实验动物体内。
- 观察并记录实验动物的反应。
（3）实验结果：- 实验动物出现肺炎症状，证明肺炎链球菌具有致病性。
5. 肺炎链球菌的药物敏感性试验（1）实验材料：肺炎链球菌标准菌株、药敏纸片、琼脂平板等。
（2）实验步骤：- 将药敏纸片贴于琼脂平板上。
肺炎链球菌检验
3
生物标记物发现
质谱技术可以发现与肺炎链球菌感染相关的生物 标记物，有助于疾病的早期诊断和预后评估。
生物信息学在肺炎链球菌检验中的应用
数据整合与分析
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生物信息学可以对来自不同实验平台的数据进行整合和分析，
挖掘肺炎链球菌感染相关的生物标志物和药物靶点。
药物设计
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基于生物信息学方法，可以预测和设计针对肺炎链球菌的新型
兼性厌氧菌
肺炎链球菌为兼性厌氧菌，在 有氧或无氧环境下均能生长。
营养要求高
肺炎链球菌对营养要求较高， 需要丰富的铁、维生素B等才
能正常生长。
肺炎链球菌的致病性
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致病物质
肺炎链球菌主要通过产生 毒素和酶致病，如荚膜多 糖、溶血素等。
感染途径
感染主要通过呼吸道飞沫 传播，也可通过接触污染 物品传播。
设备和专业操作。
药敏试验
总结词
药敏试验用于检测肺炎链球菌对抗菌药物的敏感性和耐药性，指导临床合理用药。
详细描述
药敏试验通过在培养基上接种肺炎链球菌，并添加不同抗菌药物，观察细菌的生长情况，从而判断细菌对抗菌药 物的敏感性和耐药性。药敏试验对于临床医生选择合适的抗菌药物具有重要意义，能够指导临床合理用药，提高 治疗效果并减少耐药性的产生。
疾病类型
感染后可引起大叶肺炎、 脑膜炎、中耳炎等多种疾 病。
肺炎链球菌的流行病学
季节性流行
肺炎链球菌感染有明显的 季节性，冬季和春季是高 发季节。
人群易感性
儿童、老年人、身体虚弱 者及免疫功能低下者易感。
地区分布
全球范围内均有肺炎链球 菌感染的报道，但发病率 和病死率存在地区差异。
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中国疾病预防控制中心 传染病预防控制所呼吸道传染病室
肺炎链球菌相关实验技术操作手册
菌落形态鉴定
（Colony Morphology Test ）
试验开始前，请准备：
哥伦比亚血琼脂平板于室温下平衡至少20min。
试验步骤：
1.将疑似标本以三区划线方式接种于哥伦比亚血琼脂平板上。
℃2条件下培养18-20h。
2.35 5%CO
3.挑取疑似菌落，典型菌落形态：脐窝状，灰白色，半透明，草绿色溶菌环。
常见肺炎链球菌菌落形态：草绿色溶血环，灰白色、表面光滑、扁平的可疑菌落；或草绿色溶血环，中央塌陷、边缘隆起、呈脐窝状的可疑菌落；或草绿色溶血环，表面光滑、湿润有粘液的可疑菌落。
4.挑取单个疑似肺炎链球菌菌落，接种于哥伦比亚血琼脂平板上，35℃条件下
培养18-20h。
5.进行其他肺炎链球菌特异性鉴定。
将菌落形态观察结果及时添加至
Streptococcus pneumoniae isolates data bank。
本手册仅供实验室内部使用 2011年第1
版。