毛细管气相色谱法同时测定鸡蛋中的胆固醇和α-维生素E

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样品色谱图
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收稿日期： !"""#$!#"% 作者简介： 金米聪 （$&’&#） ， 男， 工程师， 工学学士， 电话： （"()*） %)!)*((&， +#,-./： 0,1012 $’3 4 15,。
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前言
后取出， 经流水冷却后， 加入质量分 ,.O 振摇一次） 数为 $"= 的氯化钠溶液 ! ,8， 摇匀， 再加入石油醚 旋涡混匀， 离心分离。吸取上清液 $ 6 " !8， $ 6 " ,8， 按选定色谱条件进样分析， 外标法定量。 #$& 标准贮备液的配制 准确称取胆固醇和 !#<+ 对照品各 $"" , V 分 用石油醚稀释至刻度， 作 别置于 $"" ,8 容量瓶中， 为胆固醇和!#<+ 的标准贮备液。
E ( ) GGG (； !678 的线性方程为 " : ’ $ 5E’ U !( # W
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色
谱
第 <C 卷
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表 ! 鸡蛋中胆固醇和 !"#$ 的测定结果 （ ! ! "） （!"#$）./ )88（ *)+),-./&+.0/ ,)12(+1 03 450()1+),0( &/6 !"+04075),0( 1 ! ! "） .,/01 56,)*78*4,) 23*4’$*
日本岛津 DE#$)C 气相色谱仪， E?#)CF 色谱数 据处理机， 超级恒温水浴槽 C:E#!". 自动 进 样 器； （上 海 市 实 验 仪 器 厂 ） ， 胆固醇标准品 （纯 度 G 广州化学试剂分公司分装） ， && 4 (= ， !#<+ 标准品 （纯度 G && 6 %= ， ・ ， 无水 @HIF/15 J-KL MF//FN5OPF， JC ） 乙醇， 石油醚 （重蒸馏， 馏分为 3" Q > ’" Q ） ， 正己 烷， 邻苯二酚， 氢氧化钾和氯化钠均为分析纯。 #$# 色谱条件 色 谱 柱： （ $( , R " 6 (3 AM#$ 大 口 径 毛 细 管 柱 。柱温： 汽化室和 TUA 检测室温度 ,, .4 S 4 ） !(" Q ； 均为 !&" Q 。载气 （氮气） 流速： 氢气流 !" ,8 7 ,.O； 速： 空气流速： *( ,8 7 ,.O； *"" ,8 7 ,.O。不分流进 样， 进样量 $ 6 " !8。 #$% 样品处理与测定 准确称取充分混匀的鸡蛋样品约 " 6 !" V 于 (" 具塞比色管中， 加入 ! 6 " ,5/ 7 8 的 9:; 乙醇溶 ,8 液 ( 6 " ,8 及 " 6 ! V 7 8 的 邻 苯 二 酚 乙 醇 溶 液 $"" 振荡混匀， 置于 ’( Q 水浴中皂化 3" ,.O （每隔 ( !8，
8I@D<?@/0+ C12JA0@ ?B12AC@AD12 * 9 G’ TA@D12AM. A@BAD * 9 G’ * 9 G’ * 9 G’ ! 6&AI<0A * 9 G’ * 9 G’
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!678
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标准工作曲线、 线性范围及检出限
胆 !( ) *!， % : ( ) GGG ,。按信噪比为 ’ 计算检出限， 固醇和!678 的最低检出限均为 ( ) # 0 +。 ! " B 准确度与精密度试验 采用标准加入法分别在 *( 份鸡蛋样品 （每份约 中， 加入 ’ 种浓度的两种被测成分的标准液， ( ) * +） 然后进行样品处理及色谱分析测定， 结果见表 *。 !"C 样品测定 用本法对从市场上得到的 E 份鸡蛋样品进行了 测定， 结果见表 ’。从表 ’ 可见， 鸡蛋中的胆固醇含 量在 * ) *( . + 3 + " # ) E, . + 3 +， !678 含量在 ( . + 3 + " ( ) (FE . + 3 +。
用微量移液器移取 !(( !4， *(( !4， ’(( !4， 5(( !4 和 #(( !4 的胆固醇和 !678 标准贮备液分 别置于 #( .4 比色管中， 在 ,# - 水浴中用氮气流 吹干， 加入 * ) ( .12 3 4 的 $%& 乙醇液 # ) ( .4 及 以 ( ) * + 3 4 的抗氧化剂邻苯二酚乙醇溶液 !(( !4， 下操作同 “样品处理” 。当胆固醇和 !678 进样量均 在 ( . + " ! 9 (( . + 范围内， 分别以各组分的色谱峰 面积 " 与其进样量 # （ . +） 进行线性回归， 得胆固 醇的线性方程为 " : 5 $ F,# U !(E # V 5! ) ’’， % :
胆固醇和 !#维生素 + （ 是两种在营养学 !#<+） 上具有重要意义的脂溶性物质， 目前对它们的测定 方 法 有 分 光 光 度 法、 气 相 色 谱 法、 液相色谱法 等
［$ > (］
， 但这些方法有些操作繁琐， 有些灵敏度低，
费时 又 费 溶 剂。 本 文 研 究 了 采 用 ! 6 " ,5/ 7 8 的 石油醚萃取， 大口径毛细 9:; 乙醇溶液直接皂化， 管气相色谱法同时测定鸡蛋中的胆固醇和 !#<+， 所有操作基本上在同一容器中进行， 大大缩短了分 析时间， 减少了溶剂使用， 方法简便、 快速、 灵敏、 准 确， 结果令人满意。
不同皂化时间、 不同 %&’ 浓度对胆固醇 和 !! () 萃取的影响 （ ! : ’） *+,-. $ /01-2.03.4 51 6.+7809 78:. +0; %&’ 3503.07<+7850 50 （!>()） （ ! : ’） 76. .=7<+378504 51 365-.47.<5- +0; !>7535?6.<5;<=10/>/?<@/10 （ ./0） @/.A # !# ’( ,( !*( ( ) # .12 3 4 $%& ?B12AC@AD12 * ) E( ’ 9 *# ’ 9 *E ’ 9 (G ’ 9 (* * ) ( .12 3 4 $%& 5 ) ( .12 3 4 $%& 表$
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结果与讨论
色谱分离 胆固醇和 !#<+ 同时存在于鸡蛋中， 两者具有
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实验部分
仪器与试剂
相似的物理和化学性质， 在多数色谱系统中产生的 色谱峰具有相近的保留时间， 往往无法将它们很好 地分离。本文选用 AM#$ 大口径毛细管色谱柱， 试 验了胆固醇和!#<+ 的分离 （见图 $） 。由图 $ 可知， 在本文选定色谱条件下， 两者能很好地分离， 试验同 时表明， 即使胆固醇含量是!#<+ 的 3"" 倍或 !#<+ 的含量是胆固醇的 3"" 倍， 相互间均不干扰测定。
［#］
取皂化液中的胆固醇和 !678 前， 加入一定量的水 和氯化钠， 有利于消除乳化， 加快两相的快速分离， 提高胆固醇和 !678 的萃取率。如果 没 有 水 的 加 入， 石油醚对皂化液中的胆固醇和 !678 的萃取率 ， 并且 明显偏低 （胆固醇 ,#H 左右， !678 E(H 左右） 常产生乳化现象。本文试验了萃取之前在皂化液中 加入不同量的 !(H 氯化钠溶液， 以提高萃取率。试 验表明， 当 !(H 氯化钠溶 液 用 量 在 ( ) # .4 " ’ ) ( 胆固醇的萃取效率稳定在 G(H " G#H ， .4 时， !6 78 的萃取率稳定在 E#H " G(H 。本 文 选 用 加 入 * ) ( .4 !(H 氯化钠溶液。 !"!"# 溶剂的选择 文献 ［ !， 报道石油醚和正己 5］ 烷均可有效地萃取鸡蛋中的胆固醇。本文比较了以 石油醚、 正己烷为萃取剂， 对胆固醇和 !678 的加标 在本文条件下石油醚 回收试验。表 * 的结果表明， 对胆固醇的萃取率明显高于正己烷； 石油醚和正己 烷对!678 的萃取率无明显差异。本文选择石油醚 为萃取剂。
第#期 !"#
金米聪等：毛细管气相色谱法同时测定鸡蛋中的胆固醇和!& 维生素$ 萃取条件的选择 氯化钠溶液用量的选择
・ 5FG ・
皂化条件的优化 文献 ［! " #］ 报道的鸡蛋样品直接皂化条件在皂
用非极性溶剂萃
化温度、 时间和 $%& 浓度等方面都有差异。为了 确定最佳的皂化条件， 我们制备了 ’( 份样品 （每份 ， 试验了在 ,# - 水浴条件 下， 不同皂化时 ( ) * +） 间 （# ./0， 、 不同 !# ./0， ’( ./0， ,( ./0 和 !*(./0） （( ) # .12 3 4， 对 $%& 浓度 * ) ( .12 3 4 和 5 ) ( .12 3 4） 胆固醇和!678 测定的影响， 结果见表 !。由表 ! 可 知， 在 ,# - 、 ( 9 # .12 3 4 或 * ) ( .12 3 4 的 $%& 乙醇 胆固醇和 !678 基本上 溶液及皂化 !# ./0 条件下， 同时 接 近 测 定 最 大 值。综 合 其 他 因 素， 本文选用 * ) ( .12 3 4 的 $%& 乙醇溶液皂化 !# ./0。