实验六叶绿素A、B 含量的测定
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
植物生理学实验讲稿
实验一
植物蒸腾强度的测定
一、植物蒸腾强度的测定 （钴纸法，p.14） 蒸腾作用是植物根系吸水的主要动力，蒸腾强度的大小 在一定程度上反映了植物生命活动（代谢）的强弱。测定 方法较多，其中钴纸法较为简单、适用。也可用光合蒸腾 仪测定，精确度更高。 1. 原 理： 单位面积的氯化钴纸吸收水量一定。 2. 氯化钴纸的制备 5 %CoCl2浸泡滤纸，60～80℃烘干，干燥皿中保存。 3. 钴纸标化：标准吸水量（X）=0.023 g/dm2 4. 材 料：红苕、天竺葵等（叶片） 5. 测 定： 用二玻片夹住叶片，橡皮筋固定。测定上、下表皮上的 钴纸由蓝色变为粉红色的时间（秒），重复3次。吸水变红 的钴纸，用电吹风吹干后再用。
4、测定准备。把连接参考气源的长塑料管子连接到面板上的“IN”接 气嘴上，并把手柄上的两根标有“IN2”、“OUT2”的管子分别与面 板上的“IN2”、“OUT2”接气嘴相连；同时，把手柄上传感器电缆 的插头插到面板上的“手柄连接”插座上，并拧紧。 5、测定。按下“参/初”键，待显示器（8）的 CO2 浓度值相对稳定 后，按下“测/终”键（CO2 初始值确定，待测CO2 最终值）；把 待测叶片夹到叶室上（叶片面积必须大于叶室面积，且使叶室密 封），当显示器（9）显示的 CO2浓度值相对稳定后，按下“完成” 键（CO2 最终值确定）。记下各显示器的数值。 6、更换叶片，重复上述第 “5” 步测定，共 3 次。 7、测定完毕，按回“开/闭路”测量键、“气泵”键、“电源”键， 结束开路测量。 8、将所得各显示器的数值，按要求输入本仪器自带软件，得到样品 的（净）光合速率（和蒸腾速率），计算3次平均值。
分子量no6作业计算材料由kno1fw193处理01moll磷酸缓冲液ph755ml蒸馏水5ml01moll磷酸缓冲液ph755ml02mollknoml4实验步骤材料0304处理液三角瓶抽气5min30酶促反应30min反应液1ml显色30min测定od5205标准曲线的制作nano取各标准液1ml于试管中加磺胺试剂2ml摇匀加萘胺试剂2ml摇匀30显色30min测定od5206作业计算材料由kno1fw20实验五叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定一层析用叶绿体色素的提取及色素分离1原理叶绿体色素各组分的脂溶性和分子量不同可用有机溶剂层析分离
不同环境条件下植物叶绿素a、b含量的比较(分光光度法测定)
一、实验课题名称不同环境条件下植物叶绿素a、b含量的比较（分光光度法测定）二、文献综述1.叶绿素a的生物合成过程起始物是谷氨酸，之后为5-氨基酮戊酸，两分子的ALA缩合形成胆色素原(PBG),4分子PBG相互连结形成原中卟啉IX.原卟啉IX与Mg结合形成Mg-原卟啉原IX，光下E环的环化形成，D环的还原作用和叶绿醇尾部的连接完成了整个合成过程，合成过程中的许多步骤在图中已省略2.影响叶绿素形成的条件（1）光光是影响叶绿素形成的主要条件。
从原叶绿素酸酯转变为叶绿酸酯需要光，而光过强，叶绿素又会受光氧化而破坏。
黑暗中生长的幼苗呈黄白色，遮光或埋在土中的茎叶也呈黄白色。
这种因缺乏某些条件而影响叶绿素形成，使叶子发黄的现象，称为黄化现象(etiolation)。
也有例外情况，例如藻类、苔藓、蕨类和松柏科植物在黑暗中可合成叶绿素，其数量当然不如在光下形成的多；柑橘种子的子叶及莲子的胚芽在无光照的条件下也能形成叶绿素，推测这些植物中存在可代替可见光促进叶绿素合成的生物物质。
(2)温度叶绿素的生物合成是一系列酶促反应，受温度影响。
叶绿素形成的最低温度约2℃，最适温度约30℃,最高温度约40℃。
秋天叶子变黄和早春寒潮过后秧苗变白，都与低温抑制叶绿素形成有关。
高温下叶绿素分解大于合成，因而夏天绿叶蔬菜存放不到一天就变黄；相反，温度较低时，叶绿素解体慢，这也是低温保鲜的原因之一。
(3)营养元素叶绿素的形成必须有一定的营养元素。
氮和镁是叶绿素的组成成分，铁、锰、铜、锌等则在叶绿素的生物合成过程中有催化功能或其它间接作用。
因此，缺少这些元素时都会引起缺绿症(chlorosis)，其中尤以氮的影响最大，因而叶色的深浅可作为衡量植株体内氮素水平高低的标志。
(4)氧缺氧能引起Mg-原卟啉IX或Mg-原卟啉甲酯的积累，影响叶绿素的合成。
(5)水缺水不但影响叶绿素生物合成，而且还促使原有叶绿素加速分解，所以干旱时叶片呈黄褐色。
通过对室外旱池处理条件下的甘薯叶片叶绿素含量变化的研究，结果表明，水分胁迫下甘薯品种叶片中叶绿素a、b及总叶绿素含量比对照均有所下降，叶绿素a/b比值比对照也有所下降，且叶绿素a/b比值占对照百分率与品种抗旱性呈极显著负相关。
实验六 叶绿素的提取、分离
叶绿素的提取、分离一、实验目的1.掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。
2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。
二、实验原理1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。
故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。
2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。
滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。
把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。
结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。
毛细管点样薄层色谱展开三、仪器和药品研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等剪纸形状滤液基线95%酒精、丙酮、石油醚碳酸钙，石英砂四、实验步骤（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。
（2）研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4-5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后，过滤入50ml锥形瓶中加塞待用。
分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。
实验六叶绿体色素的质及叶绿素ab含量的测定
叶绿素a、b含量：
C×提取液体积（20ml）×稀释倍数（10） (mg / g)
样品的重量（1g）
取分液漏斗
加20ml乙醚
加提取液10ml
？ 摇动
沿漏斗边缘加30ml蒸馏水
？ 轻摇，静置
·· 蒸馏水冲洗1～2次
分层，弃去下层 加5ml 30％KOH甲醇溶液，
用力摇动 ··
振动，静置
？ ？ 静置10min
加水10ml
分层
作业
描述各实验结果并作出解释
二、叶绿素a、b含量测定
实验原理
叶绿体色素
类胡萝卜素 （含量占1/4）
Ⅰ
Ⅱ
Mg
Ⅳ
Ⅲ
Ⅴ
头部：4个吡咯环+4个甲烯基 连接，形成卟啉环，卟 啉环+Mg，与四个吡咯 环上的N相连，再与一 个副环相连
尾部：C20H39(叶醇)
叶绿素的降解与色变
-COOCH3
-COOCH3
5. 叶绿素的荧光现象：
取提取液少许于试管中，分别观察在反射光和透射光
？ 一侧提取液的颜色
6. 黄色素与绿色素的分离
叶绿素 （含量占3/4）
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b
分光光度法
根据叶绿素对某一特定波长的可见光具有吸收能力， 用Lambert- Beer定律计算出叶绿素的含量。
吸光度
Lambert- Beer定律
A ＝ KLC
浓度
吸收系数
叶绿素b的最大吸收峰：645nm 叶绿素a的最大吸收峰：663nm
Lambert- Beer定律 A ＝ K LC
A――吸光度 K――吸收系数 C――浓度
Ka663：82.04 Kb663：9.27 Ka645：16.75 Kb645：45.60
实验5 叶绿素a与叶绿素b含量的测定
C—叶绿素的浓度（mg/L)；v—提取液体积(ml)； n—稀释倍数；m—样品鲜重（g)
作业：
比较阳生植物和阴生植物的叶绿素有何不 同？
下周实验：植株磷素的测定(钼蓝法)
三、实验器料
1、材料： 菠菜或其它绿色植物叶片
2、试剂： 80% 丙 酮 或 96% 乙 醇 ； 石 英 砂 ；
CaCO3； 3、仪器：分光光度计（分光光度计
的使用）、高速离心机
四的植物叶片，称取0.2g剪碎后置 于研钵中，加入5ml 80%丙酮，少许CaCO3和 石英 砂。充分研磨（组织变白），再加10ml80%丙 酮，静止3-5分钟，冲洗研钵后转至离心管，定 容至15ml,3000转、15分钟，取上清液用80% 丙酮 定容至25ml。
2. 测定OD值： 取上清液1ml，加80%丙酮4ml， 以80%丙 酮
作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿 素提取液在645nm、663nm、470 nm下的吸
光度。 3.计算：
把测出的吸光值带入(1)(2)(3)(4)式计算叶 绿素a、b、a+b和类胡萝卜素的浓度。 根据下式求出植物组织中叶绿素的含量：
实验六 叶绿素含量的测定
一、实验目的
1、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶 液中测定叶绿素a、b和类胡萝卜素 的方法及计算；
2、测定叶绿素含量a与叶绿素b含量 的意义。
二、实验原理
叶绿素提取液中同时含有叶绿素a、叶绿素b和 类胡萝卜素，三者的吸收光谱虽有不同，但又 存在着明显的重叠，在不分离他们的情况下同 时测定叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的浓度， 可分别测定在663nm、645nm、470 nm （分别是叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在红 光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素 a、叶绿素b、和类胡萝卜素的浓度。
植物生理学实验五叶绿素a 、b 含量的测定(分光光度法)
实验步骤
4. 称重比较：将叶片对应部位重叠在一起，用 打孔器均匀打相同数目的孔（50），分别置 于光照及黑暗的两个称量皿中，80-90℃下 烘干至恒重，在分析天平上称重比较。
实验原理
改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取 下置于暗处，另一部分则留在光下进行光合作用， 过一定时间后，在这两部分叶片的对应部位取同 等面积，分别烘干称重。因为对称叶片的两对应 部位的等面积的干重，开始时被视为相等，照光 后叶片重量超过暗中的叶重，超过部分即为光合 作用产物的量，并通过一定的计算可得到光合作 用强度。
结果分析
1. 仔细观察和记录实验结果。 2. 计算出Ca、Cb及总Ct的质量浓度。 3. 计算今天菠菜中Ca、Cb及总Ct的含量。 叶绿素a的含量（mg/g鲜重）= 叶绿素b含量（mg/g鲜重）= 叶绿素c含量（mg/g鲜重）=
韩山师范学院生物系
植物生理学实验
实验六 植物光合强度的测定 （改良半叶法）
叶绿素叶绿素aa的含量的含量mggmgg鲜重鲜重叶绿素叶绿素bb含量含量mggmgg鲜重鲜重叶绿素叶绿素cc含量含量mggmgg鲜重鲜重韩山师范学院生物系韩山师范学院生物系植物生理学实验植物生理学实验改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取下置于暗处另一部分则留在光下进行光合作用下置于暗处另一部分则留在光下进行光合作用过一定时间后在这两部分叶片的对应部位取同过一定时间后在这两部分叶片的对应部位取同等面积分别烘干称重
植物生理学实验五叶绿素a 、b 含量 的测定（分光光度法）
植物生理学实验五叶绿素a 、b 含量的测定(分光光度法)
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切取叶面总和（dm2）×照光时数（h）
实验原理
改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取 下置于暗处，另一部分则留在光下进行光合作用， 过一定时间后，在这两部分叶片的对应部位取同 等面积，分别烘干称重。因为对称叶片的两对应 部位的等面积的干重，开始时被视为相等，照光 后叶片重量超过暗中的叶重，超过部分即为光合 作用产物的量，并通过一定的计算可得到光合作 用强度。
3. 剪取样品：按编号次序分别剪下对称叶片 的一半（主脉不剪下）。按编号顺序夹于 湿润的纱布中，贮于暗处，过六个小时左 右，在依次剪下另外半叶，按同样的编号 夹于湿润的纱布中（两次剪叶的速度应尽 量保持一致。）
实验步骤
4. 称重比较：将叶片对应部位重叠在一起，用 打孔器均匀打相同数目的孔（50），分别置 于光照及黑暗的两个称量皿中，80-90℃下 烘干至恒重，在分析天平上称重比较。
实验器材和试剂
植物材料: 生长的榕树叶
实验器材：分析天平、烘箱、剪刀（自 备）、称量瓶、打孔器、纱布、棉签。
实验试剂：三氯乙酸（5 %） 。
实验步骤
1. 选择测定样品：选择生长旺盛常绿向阳的 榕树叶片20片。用小纸牌编号。
2. 叶子基部处理：采用5%三氯乙酸涂在叶 柄，以阻断光合产物的输出。
韩山师范学院生物系
植物生理学实验
实验五 叶绿素a 、b 含量的测定 （分光光度法）
实验器材和试剂
植物材料: 自选
实验器材：分光光度计、台天平、剪刀、 研钵、漏斗、移液管、量筒、10 mL容 量瓶。
实验试剂：80% 丙酮、 碳酸钙、 石英 砂、 水、 丙酮。
实验方法和步骤
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三、实验原理
• 叶绿素a、b的吸收光谱
• 叶绿素a、b的光吸收总和在645nm和663nm处各有一 峰值。
• A=nCL n=摩尔消光系数； C=溶液浓度； L=比色杯内径。
三、实验步骤
• 取培材养7：d适后量，菹从草顶，端在起含取有倒不数同第浓三度对C叶d片Cl2；的1/10Hogland营养液中 • 提取：叶片洗净、吸干、称重后于研钵中加入5mL80%丙酮、少
许石英砂和碳酸钙，研磨匀浆后过滤，再用5mL80%丙酮冲洗滤 渣，定容到10mL，混匀； • 测定：充分过滤后，以80%丙酮调零，测定叶绿素提取液在645 nm和663nm处的光吸收值。 • 计算： 叶绿素a：C=12.21A663-2.81A645
叶绿素a（mg/gFW)=? 叶绿素b：C=20.13A645-5.03A663
实验六 叶绿素a、b 含量的测定
精品实验《水生植物抗逆生理的研究》——1
一，实验目的与要求
• 掌握叶绿素a、b含量测定的方法； • 了解逆境条件（重金属Cd污染）下植物体叶绿素含
量的变化。
二、实验材料与试剂
• 材料 不同浓度Cd2+处理7d的菹草。
• 试剂 1/10Hogland营养液； CdCl2溶液：0、5、10、20mg/L（以Cd的浓度计）； 80%丙酮。
叶绿素b（mg/gFW)=?
叶绿计CdCl2处理浓度与叶绿素含量之间的关系； • 结合其他生理指标分析Cd2+对植物体生长的影响。