种子生活力的测定
种子生活力的测定资料
三、实验原理 1 .四唑染色测定原理 四唑盐类的无色溶液是一种可被种子组织吸 收的指示剂，参与活细胞的还原过程 DPNH2+TTC→DPN+TTCH+HCL
（辅酶ⅠH2) （四唑）（辅酶Ⅰ）（甲 月替）（氯化氢）
2 .红墨水染色测定原理 种子活细胞的细胞膜均能选择性地吸收外界 有用物质，而死亡的细胞则丧失了这一能力。 有生活力的种子，胚部细胞不让染料进入，因 而不容易被染色；而丧失生活力的种子，胚部 细胞丧失了选择透过性，染料可以自由的进入 到细胞内，使胚部染色。
实验六 种子生活力的测定
生活力Seed viability：种子发芽的潜在能力或种胚 具有的生活力
种子生活力测定的必要性：
1、休眠种子必须进行生活力测定： 2、快速预测种子发芽能力
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一、实验目的 1.了解四唑染色及红墨水染色测定种子生活力 的原理和方法。 2.掌握判别种子有无生活力的鉴定标准。 二、材料和用具 1. 种子材料：小麦、玉米、大豆 2. 试剂：0.1%四唑溶液、5%红墨水 3. 用具：镊子、刀片、吸水纸、烧杯、放大镜
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大豆种子红墨水染色测定结果的鉴定结果标准
五、计算种子生活力 种子生活力=有生活力种子的数量/种子总数× 100%
实验七 种子重量和重的测定方法及种子自流 角和静止角的测定 二 材料用具 小麦、玉米、大豆种子 容重器、真空数种器、电子自动数粒仪、玻璃 缸、玻璃板、量角器
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小麦种子四唑测定结果的鉴定标准
2.大豆种子红墨水染色测定
⑴ 浸种 ⑵ 染色 大豆：200n×(2-4) （20n×2） 剥种皮 浸入 5%红墨水中，0.5-1h ⑶ 漂洗 ⑷ 观察鉴定 除去种皮，掰开子叶，露出胚芽 鉴定：①整个胚不着色或着色很浅 ②胚根顶端染色，1/2 ③子叶顶端染色，1/2 ④胚芽顶部染色，1/4
测定种子生活力的方法
实验 17 种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。
测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。
但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。
而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。
Ⅰ氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）一、原理凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。
死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。
种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料玉米、小麦等种子。
（二）试剂0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。
溶液避光保存，若变红色，即不能再用。
（三）仪器设备恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。
三、实验步骤1. 浸种将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。
然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。
观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。
将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。
种子生活力与活力测定
5．观察鉴定 一般鉴定原则是，凡是胚的主要构造及有关活营养
组织染成有光泽的鲜红色，为有生活力种子。禾本 科：观察盾片、胚芽、胚轴、胚根；双子叶：观察 子叶、胚芽、胚轴、胚根。
凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色， 并且活的营养组织不染色部分超过允许范围，以及 组织软化的，为不正常种子。
2.原理
将离体胚在规定的条件下培养5～14 d。有生 活力的胚仍然保持坚硬新鲜的状态，或者吸 水膨胀、子叶展开转绿，或者胚根和侧根伸 长、长出上胚轴和第一叶；而无生活力的胚， 则呈现腐烂的症状。
（二）离体胚测定方法
1．试验样品 需用400粒种子。设定重复次数（如4×100或 8×50）。
a．胚根顶端不染色，花生为三分之一，蚕豆为三分之二， 其他种为二分之一。 b．子叶顶端不染色，花生为四分之一，蚕豆为三分之一， 其他为二分之一。 c．除蚕豆外，胚芽顶部不染色四分之一 。
瓜类： a．胚根顶端不染色二分之一。 b．子叶顶端不染色二分之一。 棉花： a．胚根顶端三分之一不染色。 b．子叶表面有小范围的坏死或子叶顶端三分之一
DPNH2 + TTC (辅酶IH2) (四唑)
DPN + TTCH + HCl (辅酶I) (甲 ) (氯化氢)
依据四唑染成的颜色和部位，即可区分种子红色的有生活力部分和无 色的死亡部分。
注意：四唑染色是一酶促反应，因此反应不仅受酶活性的影响，还受 底物浓度、反应温度、pH值等因素的影响。
平均生活力百分率（%）
最大容许范 围
1
2
3
99
2
5
98
3
6
97
4
7
96
5
种子活力测定方法
种子活力测定方法种子活力测定方法是种子品质评价的重要手段之一，其目的是评估种子的发芽力和萌发势。
种子活力与种子内蕴水分、呼吸能力、抗逆性等因素密切相关，是衡量种子质量的重要指标之一。
下面将介绍几种常用的种子活力测定方法。
1. 发芽力测定法发芽力是衡量种子活力的重要指标之一，一般指种子萌发成苗的能力。
发芽力测定是判断种子品质的主要方法之一。
其步骤如下：首先，准备一定数量的种子样品，待测种子数量应根据需要而定，但一般不少于100粒；然后，将种子样品放入适合发芽的培养介质中，如培养皿、培养箱等；接下来，将培养介质放置在适宜的温度条件下，通常在25 - 30之间；观察并记录下种子的发芽情况，一般记录发芽数、发芽率等参数；最后，根据发芽数和发芽率来判断种子的活力水平。
2. 胚乳酸测定法胚乳酸测定法是测定种子活力的一种间接方法。
其原理是在种子老化过程中，胚乳中的淀粉被分解产生酸，通过测定胚乳酸含量来评估种子的活力。
具体步骤如下：首先，准备一定数量的种子样品，通常取100粒；然后，将种子样品粉碎，并用适量的水浸泡片刻，使胚乳酸完全溶解；接下来，取一定体积的溶液，加入胚乳酸试剂；然后，用菲仪或pH计测定胚乳酸的浓度；最后，根据胚乳酸浓度来评估种子的活力水平，通常胚乳酸浓度愈高，表示种子活力愈低。
3. 电导率测定法电导率测定法是一种评估种子活力的简单、快速的方法。
其原理是测定种子浸泡液中的电导率，通过判断电导率的高低来评估种子的活力。
具体步骤如下：首先，取适量的种子样品，用一定体积的水浸泡一段时间，通常为4小时；然后，用电导计测定浸泡液中的电导率；最后，根据电导率高低来判断种子的活力水平，电导率愈高，表示种子活力愈低。
4. 呼吸强度测定法呼吸强度测定法是一种评估种子活力的方法，其原理是通过测定种子的呼吸强度来评估种子的活力。
具体步骤如下：首先，取一定数量的种子样品，并进行表面消毒处理；然后，将种子样品放入呼吸仪中，并测定呼吸强度；最后，根据呼吸强度来评估种子的活力水平，呼吸强度愈高，表示种子活力愈强。
第五章___种子生活力与活力测定
色情况。
20 ml乳酸＋20 ml苯酚＋40 ml甘油＋20 ml蒸馏水
注意
该药液有毒性，最好戴塑胶薄膜手套配 制，并在通风橱里操作。在使用时谨防 触及皮肤或衣服等。
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第一节 种子生活力测定原理及方法
（4） H202 ：加快酶活化和吸胀。一般用0.3%H202溶液 （5）杀菌剂和抗生素：延缓衰弱种子的劣变进程。
第一节 种子生活力测定原理及方法
2)种子预措
目的：采用适当的方法使胚的主要构造和(或)活的营
养组织暴露出来。
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第一节 种子生活力测定原理及方法
方法：
刺穿：对经过预湿的种子或硬实种子，可利用解剖针或解
剖刀，刺穿种子的非主要部位，适用于小粒（牧草等）种子。
加速四唑还原成甲臜的速度；
或在两端横切，打开胚腔，并 切去小部分胚乳(配子体组织) 针叶树种子沿胚旁 边纵切
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第一节 种子生活力测定原理及方法
（3）四唑染色
目的：通过染色反应，将胚和活的营养组织里的
健壮、衰弱和死亡部分的差异正确地显现出来。 染色程序： 将准备好的100×4种子放入适宜大小的培养皿或 烧杯中。 加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移置 到一定温度的（黑暗或弱光）恒温箱内进行染色反应。
ISTA Working Sheets on Tetrazolium Testing, Volume I, 1st Edition, 2003 Volume I - Agricultural, Vegetable and Horticultural Species By N. Leist and S. Krämer Illustrated by J. Pfäfflin
种子生活力测定方法
种子生活力测定方法
种子生活力是指种子在适宜条件下发芽和生长的能力，是种子质量的重要指标
之一。
种子生活力的好坏直接影响着作物的产量和品质。
因此，科学准确地测试种子的生活力是农业生产中非常重要的工作。
种子生活力的测定方法有很多种，其中常用的包括种子萌发率测定法、种子发
芽指数测定法、种子活力指数测定法等。
首先，种子萌发率测定法是通过将一定数量的种子放置在适宜的温湿度条件下
观察其发芽情况来测定种子的生活力。
这种方法简单易行，能够快速地获得种子的生活力信息，因此在实际生产中得到了广泛应用。
其次，种子发芽指数测定法是通过统计一定数量的种子在一定时间内发芽的数
量来测定种子的生活力。
这种方法能够更加客观地反映种子的生活力情况，但需要较长时间来进行实验，因此在实际生产中使用较少。
最后，种子活力指数测定法是通过将种子在一定温湿度条件下培养一段时间后，测定其发芽率和发芽势来综合评价种子的生活力。
这种方法能够较为全面地评价种子的生活力，但操作复杂，需要较长时间来完成实验。
综上所述，种子生活力的测定方法各有优缺点，农业生产中应根据实际情况选
择合适的方法进行测试。
只有通过科学准确地测定种子的生活力，才能保证种子的质量，提高作物产量，为农业生产做出更大的贡献。
种子生活力测定的原理
➢ 原理可靠 ➢ 结果准确(与标准发芽率误差一般不超过3-5%) ➢ 不受休眠限制 ➢ 简便快速 6-24h Vitascope 20-30min ➢ 成本低廉
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
4、适应范围
✓ 测定休眠种子的发芽潜力 ✓ 测定收获后马上要播种的种子的发芽潜力 ✓ 测定发芽缓慢的种子的发芽潜力 ✓ 测定发芽末期未发芽种子的生活力 ✓ 测定种子收获或加工期间损伤种子的生活力 ✓ 解决发芽期间遇到的问题 ✓ 查明种子贮藏期间劣变衰老程度 ✓ 时间紧迫，调种时快速测定种子生活力
在 20～45℃ 范围内，温度每增加 5℃，其染色时间可减少一半。
达到规定时间或染色已很明显时，倒去四唑溶液，用清水冲洗。
已达到规定时间，样品的染色仍不够充分，可适当延长染色时间，以便证 实是由于四唑溶液渗入缓慢引起，还是由于种子本身的缺陷所引起的。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
称取 0.1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成 0.1% 四唑溶液；
可用 NaOH 或 NaHCO3 溶液调节 ph 值。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
② 磷酸缓冲液
ISTA TZ手册法
➢ 母液Ⅰ：称取 9.078 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）溶解于1000 ml 蒸馏水中； ➢ 母液Ⅱ：称取 9.472 g 磷酸氢二钠（Na2HPO4）或 11.876 g Na2HPO4 ·2H 种子生活力测定的原理和方法
一般的鉴定原则：
凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色， 且组织状态正常的，为有活力种子
测种子生活力的方法
测种子生活力的方法种子生活力是指种子在适宜的环境条件下能够发芽和生长的能力。
测定种子生活力的方法有多种，下面将介绍几种常用的方法。
1. 观察种子外观种子外观可以直观地反映种子的生活力。
健康的种子应该具有充实的种皮，颜色鲜亮，表面光滑。
如果种子外观变得干燥、褐色或者有裂纹，那么可能是种子生活力下降的表现。
2. 浸泡法将一定数量的种子放入水中浸泡，观察浸泡后的变化。
健康的种子通常会吸水膨胀，并迅速沉入水底。
如果种子浸泡后浮在水面上，可能是种子生活力较低的表现。
3. 发芽率测定法这是一种常用的测定种子生活力的方法。
将一定数量的种子放入适宜的培养基中，提供适宜的温度、湿度和光照条件，观察一段时间内种子的发芽情况。
通过统计发芽的种子数量，可以计算出种子的发芽率，从而判断种子的生活力。
4. 离体培养法将种子表皮剥离，将胚乳或胚轴放入培养基中进行培养，观察胚乳或胚轴的发育情况。
这种方法可以排除种皮对发芽的影响，更准确地评估种子的生活力。
5. 高温处理法将种子置于高温环境中，观察种子的耐热性。
一些种子具有较强的耐热性，可以在高温环境下正常发芽和生长，而一些种子则对高温敏感，会导致种子生活力下降。
6. 高盐处理法将种子置于含有一定浓度盐溶液中，观察种子的耐盐性。
一些种子具有较强的耐盐性，可以在高盐环境中正常发芽和生长，而一些种子则对高盐敏感，会导致种子生活力下降。
7. 高湿处理法将种子置于高湿环境中，观察种子的抗霉性。
一些种子具有较强的抗霉性，可以在高湿环境中正常发芽和生长，而一些种子则对高湿敏感，容易受到霉菌的侵害，会导致种子生活力下降。
测种子生活力的方法有很多种，可以通过观察种子外观、浸泡法、发芽率测定法、离体培养法、高温处理法、高盐处理法和高湿处理法等方法来评估种子的生活力。
选择合适的方法进行测定，可以帮助我们了解种子的质量，为种子的储存、选育和利用提供科学依据。
种子活力测定方法
种子活力测定方法
种子活力测定方法是用于测试和评估种子的萌发力和生命力的一种方法。
常见的种子活力测定方法包括以下几种：
1. 萌发率法：将一定数量的种子在适宜的温度、湿度和光照条件下进行培养，观察和记录出苗的数量，从而计算出种子的萌发率。
2. 直播法：在适宜的生长环境中直接种植一定数量的种子，观察和记录出苗的数量，以确定种子的萌发率和活力。
3. 意识活力法：通过染料渗入法、荧光染料渗入法等，观察种子的渗透性，从而判断种子的活力。
4. 实验室测定法：包括测定种子的发芽势、发芽势指数、发芽力和细胞活力等指标，通过实验室仪器设备和技术手段进行测定和分析。
5. 遗传活力法：通过遗传学方法，通过观察和分析种子的遗传差异和表现，评估种子的活力和生命力。
这些方法可以单独使用或者组合使用，根据具体需求和种子的特性选择合适的种子活力测定方法。
种子生活力的测定
种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色）TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
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种子生活力的测定
一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法
【原理】
凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：
TTC（无色） TTF（红色）
【仪器与用具】
培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】
TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】
1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.
5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1 染色法测定种子生活力记载表
【注意事项】
1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；
子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
5.不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。
现将主要作物种子生活力测定所需条件列入表32-2。
表32-2 TTC法测定主要作物种子生活力要点
在35℃下作物种子准备TTC浓度(%)
染色时间(h)水稻去壳纵切0.12～3
高粱、玉米及麦类作物纵切0.10.5～1
棉花、荞麦、蓖麻剥去种皮 1.02～3
花生甜菜大麻向日葵剥去种皮0.13～4
大豆菜豆亚麻二叶草无须准备 1.03～4
二、红墨水（酸性大红Ｇ）染色法
【原理】
有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨水中的酸性大红Ｇ不能进入细胞内，胚部不染色。
而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。
【仪器与用具】
与TTC法相同。
【试剂】
红墨水溶液的配制：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。
【方法】
1.先将待测种子用水浸泡3～4h，待充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸3～5min，作为死种子。
2.取浸好的新种子、陈种子和死种子各50粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。
3.将备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。
4.染色10～20min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子，直到所染颜色不再洗出为止。
5.对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。
凡胚部不着色或略带浅红色者，即具有生活力的种子，若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子，把测定结果记入表32-1（同TTC法）。