恶性血液病自体造血干细胞移植后DC_CIK细胞预防复发探讨
DC-CIK
DC-CIK摘要】树突状细胞(DC)是目前已知功能最强的专职抗原呈递细胞，而细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)具有非主要组织相容性复合体限制性，是一种广谱抗瘤免疫活性细胞，近年来大量体内外研究表明，DC-CIK生物免疫治疗不仅能改善血液肿瘤患者预后，提高放化疗耐受性，延长缓解期，清除微小残留病灶，而且能一定程度上逆转耐药，因此成为肿瘤生物免疫疗法中的研究热点。
现就 DC 和 CIK 的生物学特性、抗肿瘤机制、DC-CIK细胞治疗恶性血液病的基础及临床研究予以综述。
【关键词】树突状细胞；细胞因子诱导的杀伤细胞；血液肿瘤；生物免疫疗法【中图分类号】R730.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）12-0007-02The research progress of DC-CIK treatment of blood system tumorLiu De. Yan’an University School of Medicine, Shaanx i Province,,Yan 'an 716000, China; Wang Yi, The People's Hospital of shaanxi Province, Shaanxi Province, Xi 'an 710068, China【Abstract】 Dendritic cells (DC) is the most powerful professional antigen-presenting cells are now known to function, and cytokine induced killer cells (CIK), with the major histocompatibility complex restrictive, is a kind of broad-spectrum antineoplastic immune active cells. In recent years a large number of studies have shown that DC - CIK biological immune therapy, not only can improve the prognosis of patients with tumor blood, remove tiny residual lesions, but also to a certain extent, to reverse drug resistance. This paper reviews the biological characteristics of DC and CIK, antitumor mechanism, DC - the basis of CIK cells to treat malignancies, and clinical research.【Key words】 Dendritic cells; Cytokine induced killer cells; Blood tumor; Biological immunotherapy前言：随着免疫细胞生物学及免疫分子生物学的高速发展，用免疫活性细胞输注的过继免疫治疗成为肿瘤生物治疗的研究热点之一。
DC—CIK细胞治疗恶性肿瘤的护理
暖， 持续 ２～ ， 温 恢 复 正 常 。１例 患 者 出现 寒 战 ， 温高 于 ４ｈ 体 体 ３ ℃ ， 予 口服 布洛芬 配合 物理 降 温后 体 温恢 复 正 常 ， 量减 少 ９ 给 尽 糖 皮质 激素 类 药物应 用 ， 因激 素可 使细 胞溶 解 ， 影响 其活 性 。
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ｉ ｕｅ ｅｓＣＫ 具 有很 强 的 增 殖 能 力 ， 且 可 以 从 人 外 周 ｎ ｃｄｃｉ ，Ｉ ） ｄ ｌ 而
血 中获 得 大量 前体 细胞 ， 其体 外 增 殖 能 力 可 达 到 １０ ５０倍 以 上 ， 具 有较 强 的抗 肿瘤 能 力 ＿ 。Ｄ ２ Ｊ ｃ—ＣＫ 细胞 免 疫 治 疗 联 合 放疗 、 Ｉ
输 注前 的护理 ： １ ３ １ 心 理护 理 ： ．． 治疗 前详 细 地 向患 者介 绍 生物 治 疗 的进
展 、 势和 治疗 流程 ， 消 患者 的顾 虑 ， 动关 心 患者 ， 优 打 主 向他 们 详 细介绍 细胞 治疗 的方 法 及 注 意 事 项 ， 复 向 患者 及 家 属 警 教 有 反 关 疾病 知识 ， 治疗 效果 好 的病 例 介绍 给 他们 ， 励 患者 树 立 战 将 鼓 胜 疾病 的信 心 ， 除不 良情 绪 ， 极 配 合 治疗 。但 对 可能 出 现 的 消 积 不 良反 应也 需 如 实 详尽 说 明 ， 之提 前 做 好 心 理 准备 。当 出 现 使 临床不 良反 应 时及 时 处 理 并 向 患 者做 好 解 释 ， 之 解 除 心 理 压 使 力 、 躁 和抵 触 情 绪 ， 急 以增 加 患 者 的信 任 感 和安 全 感 ， 其 能 积 使
健 康天地
２１ ００年 ｌ ０月
第 ４卷
第１ Ｏ期
干细胞移植后的复发预防与治疗策略
干细胞移植后的复发预防与治疗策略引言：干细胞移植作为一种重要的治疗手段，在许多疾病的治疗中已经取得了显著的成效。
然而，患者在移植后仍面临一定的复发风险。
因此，对干细胞移植后的复发预防与治疗策略进行深入研究具有重要意义。
本文将探讨干细胞移植后的复发预防与治疗策略，旨在提供指导和启发。
一、复发的原因移植后的复发可能与以下因素有关：1. 残留病灶：移植后的残留癌细胞或疾病相关细胞可能成为复发的潜在原因。
2. 免疫系统抑制：干细胞移植过程中，为了防止机体对移植物产生免疫反应，常会使用免疫抑制剂，而这会降低机体的免疫能力，增加复发的风险。
3. 基因突变：移植过程中所受到的损伤可能导致基因突变，使细胞具有复发的潜在能力。
二、复发预防策略为了降低复发的风险，以下是一些常用的复发预防策略：1. 干细胞来源的治疗：在干细胞移植的过程中，选择合适的干细胞来源对复发的预防具有重要意义。
干细胞可以来自于自体、同种异体或异种体，选择合适的干细胞来源可以提高移植的成功率。
2. 预处理治疗：在进行干细胞移植前，通过化疗、放疗或免疫疗法等方式，对患者进行预处理治疗。
这可以有效清除体内的残留癌细胞或疾病相关细胞，降低复发的风险。
3. 免疫调节：通过免疫调节剂的使用，提高机体的免疫能力，降低复发的风险。
例如，使用免疫增强剂、免疫调节剂等药物，可以增强机体对肿瘤或疾病的免疫反应，减少复发的可能性。
三、复发治疗策略针对已经出现复发的患者，以下是一些常用的复发治疗策略：1. 变异免疫疗法：利用改良的免疫疗法，如CAR-T细胞治疗、细胞免疫疗法等，针对复发的癌细胞或疾病相关细胞进行治疗。
这些治疗方法利用患者自身的免疫细胞靶向攻击癌细胞，提高治疗效果。
2. 靶向治疗：通过分析患者的基因型和表型，选择合适的靶向治疗药物。
靶向治疗可以针对特定的表面标志物或信号传导通路，阻断癌细胞的生长和扩散，提高治疗效果。
3. 多重疗法联合治疗：通过联合应用不同的治疗手段，如化疗、放疗、免疫疗法等，增强治疗效果，提高复发患者的生存率。
造血干细胞移植后复发防治技术的优化及规范
造血干细胞移植后复发防治技术的优化及规范复发是恶性血液病患者异基因造血干细胞移植后常见并发症和主要死亡原因之一，分别占同胞全合以及非血缘造血干细胞移植死亡原因的47%和33%。
如何预测患者复发风险，并根据病情采取最合适的复发防治策略是造血干细胞移植的主要研究趋势，以下将分别从“移植后复发分层、复发治疗技术、复发防治体系的优化和规范”三个方面详述。
（一）移植后复发分层对移植前处于完全缓解的患者，其移植后复发率并不尽相同。
白血病微小残留病灶（MRD）诊断技术的进展，使我们找到特异性、非特异性基因或其他分子标记，对这些分子标记在移植后进行动态监测，能对白血病移植后复发的风险进行预测。
如前所述，利用实时定量PCR技术监测移植后BCR-ABL水平，或对泛白血病基因WT1动态监测，能对白血病复发的概率做出评估；更为重要的是，基于这些分子标记预警的复发干预技术能明显降低移植后复发率，如标危白血病MRD+患者干预后复发率可降低50%，累积复发率与MRD-患者类似。
由于是移植后动态监测，因此此项技术不仅能筛选需要干预的目标群体，也能确定最佳干预时机，并根据患者具体病情形成个性化治疗方案。
对于难治复发白血病，常规挽救性移植虽可使部分患者达DFS，但移植后复发率仍高达60%～80%，大大超过CR 状态移植的患者。
因此，难治复发患者应采用与CR状态不同的移植方式。
通过不断发现与移植后复发相关的新分子指标，未来尚有可能将移植后复发高危人群进行更为精确的分层，进而采用不同的移植策略，降低复发率。
（二）复发治疗技术供者淋巴细胞输注、靶向药物、以及嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）等免疫细胞回输方式的复发防治手段的多元化和不断优化，为建立与诊断分层相适应的复发防治体系奠定基础。
供者淋巴细胞输注（DLI）是公认最有效的治疗方法，但DLI具有GVHD风险、骨髓抑制、对急性白血病治疗效果差等缺陷，北京大学血液病研究所采用G-CSF动员的干祖细胞代替静态供者淋巴细胞采集物，结合短程免疫抑制剂预防DLI后GVHD，形成改良的DLI（mDLI），减轻了DLI 相关GVHD，且GVL效应未减弱，使之可以安全有效用于急慢性白血病移植后复发的治疗。
DC-CIK免疫疗法介绍(原理、作用、优势、病例)
DC-CIK免疫细胞治疗介绍——原理、作用、优势、病例为什么肿瘤患者的免疫功能会不正常人类患病的最终根源都可以归结于免疫功能的异常，肿瘤患者的免疫机能是一种什么状态呢？1、患者本身在发病前免疫功能异常。
不良情绪、有害的生活方式和污染的环境等，使肿瘤患者的免疫机能处于抑制或耐受状态，也就是对肿瘤有存在漠视不管；肿瘤患者的癌变细胞表达的抗原免疫原性很弱，不能刺激机体产生强烈反应，如果人体处于以上状态，免疫系统就失去了对癌细胞的“监管”能力。
2、过度治疗重创患者免疫功能化疗对肿瘤细胞的抑制率在20%左右，而对淋巴细胞的抑制率在90%左右，且肿瘤干细胞对化疗和放疗都不敏感，这就出现了有些肿瘤经放化疗后迅速缩小，但由于肿瘤细胞并没有消灭，肿瘤又迅速长大，同时出现近处及远处广泛转移，这就是当前肿瘤治疗的普遍难题。
手术、放疗也出现同样的现象，在治疗癌症的同时加速了癌细胞的转移，也摧毁了免疫系统，使一些患者不是死于癌症，而是死于过度治疗后的并发症。
兰德称·菲茨杰拉德在其名著《百年谎言》中强调：所有药物大多数时候只能暂时缓解症状，希望在此期间我们自身的免疫系统（如果还没失效的话）能够启动，并达到治愈的目的。
因此增强患者对肿瘤的免疫功能，发挥免疫治疗在肿瘤综合治疗中的作用己成为当前和未来肿瘤治疗领域引人瞩目的前沿课题，DC-CIK细胞免疫制剂正在肿瘤免疫治疗发挥显著作用！重建患者免疫功能对战胜肿瘤非常重要！人类的免疫系统包括免疫器官（胸腺、骨髓、脾脏和淋巴结等）、免疫细胞和免疫分子，是人类在长期进化过程中不断发展起来的重要组成部分。
免疫系统的重要功能就是识别和清除“异己”成份，也就是消灭外界侵入的细菌、病毒、真菌、支原体、寄生虫和杀伤体内变异的细胞（癌细胞等），从而保持我们身体能够健康成长。
现代医学的观点认为，人类各种疾病和不适最终都能追踪到免疫系统的问题，都是因为免疫系统在体中发挥的三项功能：1、免疫防御：主要是抗感染，消灭入侵机体的病原体；2、免疫监视：主要是识别和清除肿瘤细胞和衰老凋亡的细胞；3、内环境稳定：涉及机体对自身免疫应答的耐受和调节，如自身免疫性疾病和过敏性疾病。
白血病异基因造血干细胞移植后复发的预防
中华血液学杂志2013-09-04分享异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是治疗白血病的最主要手段，甚至是治愈某些白血病的唯一方法。
多种因素可影响allo-HSCT的疗效，其中移植后复发是影响移植后生存的最主要因素。
根据国际骨髓移植协作中心统计白血病行allo-HSCT后复发率可高达60%，除慢性髓性白血病（CML）外，一旦移植后复发，不管采用什么手段治疗，其5 年生存率仅有9%~25%。
因此，近年来研究者越来越重视针对移植后复发的预防策略研究。
我们就目前临床上为降低allo-HSCT后白血病复发的风险，移植前后可采取的预防措施进行综述。
一、移植前及移植过程中的处理1.移植时机：选择合适的移植时机对预防复发十分重要，而最佳的移植时机取决于白血病的类型、危险分层、疾病缓解状态等因素。
①对于高危急性白血病（AL），多主张在诱导完全缓解（CR）并巩固治疗CR1 状态下尽快行allo-HSCT；对于低中危AL，是在CR1后持续巩固化疗还是进行allo-HSCT 仍存在争议。
最新一项来源欧美多个研究中心数据的Meta 分析显示高危急性非淋巴细胞白血病（ANLL）CR1时行清髓性allo-HSCT能使复发率降低50%，长期生存率提高12%，而对于低中危ANLL，因移植相关毒性不能使患者受益，可待CR1后复发时再考虑行allo-HSCT。
②对于标危急性淋巴细胞白血病（ALL），研究认为可在CR2时选择移植，也有研究者认为应该尽早行allo-HSCT，即使巩固化疗后监测微小残留病（MRD）仍处于高水平，此时选择HLA全相合allo-HSCT，其生存率仍明显优于CR2时移植和强化化疗包括自体造血干细胞移植者。
③对于原发性耐药患者，国内外研究表明早期移植疗效优于晚期移植。
我们曾报道对行2~3 个疗程化疗仍未获CR的患者进行allo-HSCT，其5 年生存率可达（44.6±8.1）%。
④对于CR1后复发的患者，一些回顾性研究资料表明继续化疗获CR2时移植和直接移植者长期生存差异并无统计学意义，通常在CR1复发后1 个疗程化疗仍无效予以allo-HSCT。
DC—CIK配合中药治疗化疗无效晚期恶性肿瘤患者的护理体会
DC—CIK配合中药治疗化疗无效晚期恶性肿瘤患者的护理体会标签：DC-CIK 中药恶性肿瘤护理DC和CIK是肿瘤细胞免疫治疗的两种重要细胞，前者识别抗原，激活获得性免疫应答，后者通过细胞毒作用和分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞，两种联合可提高杀伤肿瘤细胞[1]。
研究学者证实了DC-CIK细胞具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞的非组织相容性复合物限制性杀伤的特性，其增值活性和细胞毒活性均较强[2]。
目前，国内外对DC-CIK细胞因子进行了广泛的基础和临床研究证实，DC和CIK细胞因子不仅对于各种实体瘤有效，对白血病、淋巴瘤等血液系统肿瘤也显示出明显疗效，中药也是治疗恶性肿瘤的主要方法之一，由于其毒副作用低，与其他方法配合不但可增加疗效，还可有效减轻其他治疗方法的毒副作用，从而得到广泛的临床应用。
本文将笔者所在科室用DC-CIK配合中药治疗化疗无效晚期恶性肿瘤患者的护理体会汇报如下。
1 临床资料本研究选取2012年2月-2012年9月就诊于中国人民解放军266医院中西医结合科50例晚期化疗无效或不适合化疗的患者，接受DC-CIK细胞因子治疗1～4周期，平均治疗2.1周期。
男38例，女12例，平均年龄56.58～78.00岁，KPS 评分，60～80分21例，40～60分20例，20～40分9例；肿瘤类型肺癌15例，胃癌7例，结直肠癌5例，原发性肝癌5例，其他恶性肿瘤18例。
所有患者均为癌症晚期，体内有均一处或多处组织或器官转移，所有入组患者预计生存期3个月以上。
患者在治疗前均提出了治疗申请并签署免疫治疗知情同意书。
2 治疗方案适合并愿意接受DC-CIK治疗的患者检查血常规白细胞≥3.0×109/L，血红素、血小板基本正常，肝肾功能基本正常，抽取患者静脉血200 ml进行DC-CIK细胞培养，期间给予中药艾迪注射液50～100 ml或华蟾素注射液20 ml静脉点滴，并给予中药汤剂辨证治疗，1剂/d，分2次口服，14 d后分4次把上述培养好的DC-CIK细胞回输给患者，1次/4 d，第4次回输前第2次抽取患者静脉血继续进行第2周期DC-CIK培养。
DC与CIK共培养治疗恶性肿瘤的护理干预
随着技术的不断发展与完善，肿瘤生物治疗已成为继手
（泸州 #!#%%%） 泸州医学院附属医院
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（3 ） 现体温升高， 可自行缓解， 少数患者使用解热药可完全缓解。 ） （7 化疗后的患者应在化疗后两 一般 $ 5 6 个月重复 % 个疗程。 周， 且血常规稳定后进行。使用激素的患者在 ! 周前停用。由患 者最信任的医生、护士讲解，最直接方法还可以采取现身说法， 让已作过细胞疗法的患者向其它患者讲解治疗效果，激发患者 对此治疗的信心。 $, ! 采血前的准备 采血前与管床医生沟通，患者签知情同 意书。 采血前 % 日完善相关辅助检查， 如血常规、 输血前检查、 肝 功、 肾功、 电解质。 采血前 % 日晚和采血日晨患者宜清淡饮食， 禁 高脂肪。采血日晨适当进餐、 适量饮水， 以免血清中脂肪过多和 血液黏稠， 影响细胞分离效果。采血前测 )、 正常时方 8、 9、:;， 可自体采血。 $, $ 采血时护理 （% ） 由于采血针头为 %6 <， 初次采血的患 者往往有惧怕、 紧张等， 对此病人先进行安抚， 待患者心情平静 后再进行。穿刺前认真评估患者血管， 争取穿刺一次成功， 减轻 患者心理压力。操作中观察患者有无不适， 询问患者的感受。本 组患者有 $ 例采用颈外静脉穿刺， 其余选 % 例采用股静脉穿刺， 择肘正中静脉、 贵要静脉、 头静脉均顺利完成外周血的采集。采 集完后， 用 $ 5 7 根棉签沿血管方向竖压穿刺点 7 5 %"=>?， 随时 观察有无出血。 按压结束后， 再次消毒穿刺点， 外贴无菌输液贴， 以防感染。嘱患者卧床休息，尽量避免下床，防失血性休克发 （! ） 生。 采集过程中， 戴好口罩、 帽子， 戴无菌手套严格无菌操作， 防止血液污染及细菌污染，应将采血袋中的抗凝剂与血液充分 混匀， 防止血液凝固现象发生。 $, 3 细胞培养期间护理 细胞分离、 培养、 收获均在 <+8 标 准下的无菌实验室中进行。操作前紫外线消毒房间和生物安全 每一环节都要严格无菌操作， 防止细菌污染。回输前均做 柜 %@， 细菌、 霉菌、 支原体检测， 保证生物疗法质量。细胞因子放置于 加入时剂量准确， 每日观 ! 5 &A 冰箱保存， *B! 孵箱定期消毒， 察细胞生长状态，以便决定回输时间，回输前要与管床医生沟 通， 及时通知患者接受回输。 $, 7 回输时护理 回输的 C* D *EF 细胞应新鲜制备，将洗涤 后的细胞团吹打散， 均匀悬浮于 ", #G 氯化钠注射液 %""=1 中， 再加入 EH D ! %" 万 I 、白蛋白 !7=1， 在 $"=>? 内经静脉用一次 性无菌输血器输给患者。输 C* D *EF 细胞前后均用 ", #G 氯化 钠注射液冲洗。 避免细胞丢失和其它药液混合。 回输前 $"=>? 肌 肉注射非拉根 !7=J。回输过程中加强巡视，观察有无寒颤、发 热、 心慌、 呼吸困难等不适。 $, 6 注射 EH D ! ， 常见不良反应是发热、 畏寒、 （$4, 7 5 $&, 7A ） 疲乏， ， 有 % 例自 %"$ 例中有 7 例出现体温升高 水， 同时观察体温变化， 卧床休息， 并适量补充液体。 少数患者皮 下注射后可出现红肿、 硬结、 疼痛。为预防此现象的发生， 在左、 右上臂三角肌、双侧大腿外侧交替注射， 若出现红肿、硬结、 疼 痛， 用硫酸镁湿敷， 效果较好。 ! 讨 论 不良反应护理
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第46卷 第2期2010年4月青岛大学医学院学报ACTA ACADEMIA E MEDICINA E QIN GDAO UNIV ERSITA TISVol.46,No.2April 2010doi :10.3969/j.issn.167224488.2010.02.017[收稿日期]2009208213; [修订日期]2009210220[作者简介]王玲(19682),女,副主任医师,硕士生导师。
E 2mail :wldoctor @ 。
恶性血液病自体造血干细胞移植后DC 2CI K 细胞预防复发探讨王玲,史春雷,李颖,袁成录(青岛市中心医院血液科,山东青岛 266042)[摘要] 目的 探讨恶性血液病自体造血干细胞移植后应用树突状细胞2细胞因子诱导的杀伤细胞(DC 2CIK )预防复发的效果。
方法 12例恶性血液病病人自体造血干细胞移植后静脉输注及腹股沟注射DC 2CIK 细胞2～3次,观察疾病的复发情况以及DC 2CIK 细胞输注后的副作用。
结果 7例持续完全缓解(CR ),中位CR 期44(32～56)月。
4例死亡,其中3例复发。
结论 DC 2CIK 细胞治疗可能有助于清除微小残留病,预防疾病复发,延长病人生存期,且副作用小,临床可以选用DC 2CIK 细胞预防自体造血干细胞移植后恶性血液病的复发。
[关键词] DC 2CIK 细胞;造血干细胞移植;移植,自体;复发[中图分类号] R733.1 [文献标志码] A [文章编号] 167224488(2010)022*******EFFECTS OF DC 2CIK CE LLS ON PREVENTION OF RECURRENCE OF MALIGNANT HEMAT OPATH Y AFTER HEMAT OPOIET 2IC STEM CE LL TRANSPLANTATION W A N G L I N G ,S H I C HU N 2L EI ,L I Y I N G ,et al (Depart ment of Hematology ,Qing 2dao Central Hospital ,Qingdao 266042,China )[ABSTRACT ] Obj ective To observe t he clinical efficacy of dendritic cells in combination wit h cytokine 2induced killer cells (DC 2CIK )to prevent recurrence of malignant hematopat hy after auto 2hematopoietic stem cell transplantation (Auto 2HSCT ).Met hods After auto 2HSCT ,12patient s wit h malignant hematopat hy were t reated wit h DC 2CIK cells intravenously and intrader 2mally for 2-3times a week.The recurrence and side effect s DC 2CIK were followed up. Results Complete remission (CR )was found in seven patient s ,t he median CR period was 44(range 32-56)mont hs ,four died ,in which ,recurrence was note in t hree patient s. Conclusion Treat ment wit h DC 2CIK cells may be helpful in clearing minimal residual disease ,preventing relapse and prolonging t he patient s ’life wit h less side effect s ,which can be used to prevent recurrence of malignant hematopat hy after auto 2HSCT.[KE Y WOR DS] DC 2CIK cells ;hematopoietic stem cell transplantation ;transplantation ,antologous ;recurrence 自体造血干细胞移植是治疗恶性血液病的有效方法之一,自体造血干细胞移植可以将化疗剂量提高到致死量,从而达到减少残留病、降低复发率的作用。
但是因为大剂量化疗后仍然存在微小残留病,不能完全解决移植后复发的问题,使得自体造血干细胞移植的应用受到一定限制。
国内外采用体内外净化的方法去除移植物中部分残留的肿瘤细胞,但因为造价昂贵、植活时间延长等原因导致净化方法不能广泛应用。
我院自2004年8月以来,对12例恶性血液病病人在自体造血干细胞移植后应用自体树突状细胞2细胞因子诱导的杀伤细胞(DC 2CIK )治疗,观察其预防复发的效果以及副作用。
现将结果报告如下。
1 资料和方法1.1 一般资料12例病人中,男8例,女4例,中位数年龄48(13～56)岁。
其中急性白血病4例,分别为急性非淋巴细胞白血病(ALL )2例,急性淋巴细胞白血病2例;非霍奇金淋巴瘤6例;霍奇金淋巴瘤1例;多发性骨髓瘤1例。
1.2 DC 和CIK 细胞诱导方法1.2.1 细胞诱导和采集 用IL 22(山东泉港药业有限公司生产)100万单位+生理盐水静脉滴注,每天1次,连续诱导5d 。
诱导结束后4d ,使用细胞分离单采机采集病人外周血单个核细胞。
如果单个核细胞计数低于0.4×109/L ,则用GM 2CSF 150μg 皮下注射,每天1次,连续注射1～3d ,然后再进行细胞采集。
1.2.2 细胞采集 使用细胞分离单采机(SPEC 2TRA 6.0,COB E 公司,美国)采集病人外周静脉血6～8L ,每120～150mL 血浆约采集(3～6)×109单个核细胞。
1.2.3 抗原制备方法 根据肿瘤类型选择相同病2期王玲,史春雷,李颖,等.恶性血液病自体造血干细胞移植后DC2CIK细胞预防复发探讨143理类型的人肿瘤细胞株制备抗原,细胞株均购自中国科学院上海生物科学院细胞资源中心。
将肿瘤细胞株培养至(1～2)×108个,收集细胞,生理盐水洗涤。
将细胞置于RPM I1640培养液中反复冻融,离心去残渣,上清液过滤备用。
1.2.4 DC和CI K细胞制备 采集的细胞按照常规方法分离并洗涤单个核细胞,调整细胞的密度至1×1010/L,平均加到16只细胞培养瓶(美国BD公司)中,于37℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育2h,使贴壁细胞和悬浮细胞分离。
取出悬浮细胞置另外细胞培养瓶中备用。
在含有大量贴壁细胞的培养瓶中加入含有20μg/L IL24、50μg/L GM2 CSF的DC无血清培养基(德国Cell Genix公司),在37℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育,6d 后加入DC培养液和相应的肿瘤抗原继续培养2d,即为成熟DC,部分回输,其余冻存。
悬浮细胞的培养瓶中加入适量RPM I1640培养液、灭活胎牛血清和IL22、IFN2α、CD3单抗(美国R&D公司)细胞因子等,在37℃体积分数0.05的CO2条件下培养。
第8天细胞部分静脉回输,余细胞继续培养至15d。
1.2.5 细胞表型检测和细胞计数 培养结束后,采用流式细胞仪检测DC标志DR和CD83,以CD3为标志来鉴定检测CI K细胞;回输前分别计数DC和CIK细胞。
1.3 治疗方法自体造血干细胞移植造血恢复后1个月开始回输DC。
回输前将DC均分,1份与CI K混合制成250mL细胞悬液(内含1500U/mL的IL22,体积分数0.01的清蛋白),经静脉回输;1份制成1.5 mL细胞生理盐水悬液,皮下注射到肿瘤邻近的淋巴结区。
上述治疗每周进行1次,共3次。
疗程结束后1个月随访观察疗效。
观察治疗前后血清干扰素2γ(IN F2γ)、白介素210(IL210)和白介素212(IL2 12)含量变化等。
1.4 统计学方法采用SPSS10.0及PPMS1.5[1]统计软件进行统计处理。
2 结 果2.1 细胞表型检测和细胞计数DC标志DR和CD83的表达率分别为75%～84%和76%～85%,CIK CD3的表达率为88%～95%。
每个疗程细胞总量:DC为(188.3±79.8)×106个,CI K为(58.8±22.3)×108个。
2.2 病人免疫指标观察治疗前病人血清INF2γ、IL210、IL212含量分别为(42.5±31.5)、(28.5±11.5)、(85.5±60.5)μg/L,治疗结束后1个月复查,病人上述指标分别为(65.0±45.0)、(30.1±18.1)、(89.1±71.1)μg/L,即治疗后血清中INF2γ含量明显升高(t=3.679,P<0.05),但IL210和IL212含量无显著改变(P>0.05)。
2.3 疗效及生存时间观察12例恶性血液病病人中,7例持续完全缓解(CR),中位CR期44(32～56)个月。
4例死亡,其中3例复发,1例ALL,2例非霍奇金淋巴瘤,复发后因年龄较大或未找到合适的异基因移植而死亡。
1例M4病人复发,经半相合异基因造血干细胞移植(供者为其子)后病情缓解,目前持续完全缓解24个月。
2.4 DC2CI K细胞输注的副作用12例病人共输注DC2CIK细胞36次,有2例病人在输注DC2CIK细胞后24h内出现发热(最高体温38.5～39.5℃)、畏寒,应用消炎痛栓肛纳后2h内体温恢复正常,无明显感染征象,无明显骨骼、关节疼痛,无明显白细胞、红细胞及血小板波动,无注射部位红肿热痛及静脉血管损伤。
3 讨 论由于缺乏人类白细胞抗原(HL A)配型相合的供者,或者其他原因导致病人无条件进行异基因造血干细胞移植,自体造血干细胞移植支持下的大剂量化疗成为治疗恶性血液病的重要手段之一。
临床研究发现,恶性血液病病人自体移植后约30%～40%出现病情复发[223]。
因此,恶性血液病自体造血干细胞移植后如何预防肿瘤复发一直是近几年移植界所重点关注的问题之一。
10年前大部分病人自体移植后进行半年左右的小剂量及中等剂量化疗,结果非但没能减少复发,反而增加了化疗后的感染率,化疗相关死亡率增加。