脂肪酶测定标准操作程序
脂肪酶活测定
一．脂肪酶活测定原理：脂肪酶在一定条件下，将甘油三酯水解。
在不同水解阶段可分别产生脂肪酸、甘油二酯、甘油一酯及甘油。
水解所产生的脂肪酸可以用标准的氢氧化钠滴定，用滴定值表示酶活力。
酸碱滴定法 :酶活力以国际单位表示，即在一定条件下，脂肪酶水解脂肪每分钟产生1微克分子脂肪酸的酶量定为一个国际单位。
脂肪酶活力单位＝(A-B)*nf/t*v式中：A为样品耗碱液ml数，B为对照组耗碱液ml数，n为每毫升碱液微克分子数(n=cM=0.05x23x1000)，f为稀释倍数，t为作用时间(分),v:反应的酶液的体积二．挥发性脂肪酸（VFA）的测定滴定法分析1原理：将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH 溶液滴定馏出液。
废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮。
4．计算挥发性脂肪酸含量计算如下：VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L)式中：V(NaOH)-----滴定消耗的NaOH标准溶液的体积，ml;c ------ 滴定消耗的NaOH标准溶液的准确浓度，mol/L;Vs--------被测废水水样的体积，ml.酶活力定义：40℃,ph为5.6的条件下，每分钟酶解淀粉释放出lmg的还原糖(葡萄糖)所需酶量为一个酶活力单位。
1U=1mg还原糖\min.ml酶三．淀粉水解酶活性原理：淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位体积样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
四.纤维素酶酶活力测定：原理：纤维素酶水解纤维素，产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物，在550nm波长处有最大光吸收，在一定的范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法测定其还原糖的量就可测定纤维素酶的活力。
脂肪酶实验方案
脂肪酶实验方案富集培养基( %) :酵母膏0. 02 , Na2HPO4 0.35 , K2HPO4 0. 15 , MgSO4·7H2O 0. 05 , NaCl 0.05 , 橄榄油1. 0 , pH 7. 0.溴甲酚紫筛选平板分离培养基 ( %) : 牛肉膏0. 5 , 蛋白胨1. 0 , NaCl 0. 5 ,葡萄糖0. 3 ,聚乙烯醇1. 0 ,橄榄油2. 5 , 琼脂1. 5 ;灭菌后加入过滤灭菌的溴甲酚紫(50 mg/ 100 mL) 0. 4 mL , pH 6.0 ,7.0 ,8. 0.种子培养基( %) :葡萄糖 2. 0 , (NH4 ) 2SO4 0.5 , K2HPO4 0.1 ,MgSO4·7H2O 0. 05 , 蛋白胨2. 5 ,橄榄油1. 0 , pH 7. 0.发酵培养基( %) :蛋白胨2. 0 , 蔗糖0. 5 , 橄榄油1. 0 , (NH4 ) 2SO4 0. 1 , MgSO4 〃7H2O 0. 05 ,K2HPO4 0. 1 ,pH 自然产脂肪酶菌株的筛选：将细菌接种到种子培养基上，于30 ℃,200 r/ min 摇床培养24 h，划线于溴甲酚紫筛选平板分离培养基上。
观察已生长的菌落周围有无透明圈,有红色水解圈的菌落对应的菌株即为产脂肪酶菌株。
脂肪酶高产菌株的筛选：（1）产脂肪酶菌株发酵培养：将产脂肪酶菌液按 1 %的接种量接入50 mL 发酵培养基中(250 mL 三角瓶) ,30 ℃,200 r/ min 摇床培养48 h；（2）上清液的制备：经6000 rpm/min离心10 min，收集上清液，用0.20 μm滤膜对上清液过滤除菌，滤液分装后-20℃保存待用；（3）(i)度法测定各菌株产酶相对大小：在pH7.5, 30℃条件下, 每分钟释放 1 μmol 对-硝基酚( ρ- nitrophenol) 所需的酶量, 定义为一个活力单位。
酶测定方法
脂肪酶活性测定方法1、粗酶液的制备用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g，用蒸馏水溶解并定容至100 mL，配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。
2、实验设计本实验以10 mL色拉油为底物，以酶用量、水解温度、反应时间为因素，通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。
3、酸价的测定酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需NaOH的毫克数，它用于衡量油脂的水解程度。
实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价，参照文献[ 3，4 ]中所使用的方法，向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液，摇匀，终止反应，并加入2滴酚酞指示剂，迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色，在30 s内不消失为终点，记录消耗的NaOH溶液毫升数(V ) 。
用同样的方法测定空白值，每个试验重复两次，以平均值作为测定结果。
酸价按下式计算：X = C (V - V0 ) ×40 /M式中: X —油脂酸价(mgNaOH /g油)C—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)M —试样的质量( g)40—NaOH的mmol质量(mg/mmol)4 粗脂肪酶活力的测定在最佳水解条件下，分别测得粗脂肪酶和标准脂肪酶水解液的酸价X1、X2 ，根据公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力，其中U1为粗脂肪酶活力，U为标准脂肪酶活力。
5标准脂肪酶液的配制根据实验最佳条件，配制标准脂肪酶液。
一篇相关文献粗脂肪酶活力的测定方法的研究.pdf答：实验设计，本实验以10 mL色拉油为底物，以酶用量、水解温度、反应时间为因素，通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。
用色拉油作底物不太妥，一般是用橄榄油，化学纯的。
脂肪酶的测定
脂肪酶的测定脂肪酶是一种能够加速脂肪分解的酶类物质，它在人类的体内起着非常重要的作用。
脂肪酶的测定是衡量人体脂肪代谢能力的一种方法，可以用于研究肥胖、代谢疾病等疾病的发病机制。
脂肪酶的测定方法有很多种，其中最常用的是化学法和免疫法。
化学法是利用化学反应测定脂肪酶的活性，它的原理是将样品与一种特定底物反应，通过测定产生的底物或反应产物的浓度，来计算脂肪酶的活性。
常用的底物有三酰甘油、辅酶A等。
免疫法则是利用特异性抗体与脂肪酶结合反应，进行测定。
这种方法具有灵敏度高、特异性好、操作简单等优点。
在进行脂肪酶测定前，需要收集样品。
常用的样品有血浆、血清、尿液等。
对于血浆和血清样品，需要在采集后立即离心分离血清或血浆，避免冷藏时间过长而影响测定结果。
对于尿液样品，需要在采集后立即保存在冰箱中，避免样品在室温下发生酶解反应。
此外，还需要注意样品的质量和数量，以保证测定结果的准确性。
脂肪酶的测定结果可以反映人体脂肪代谢能力的强弱。
正常情况下，脂肪酶的活性处于一定的范围内。
如果脂肪酶活性过高，说明人体脂肪代谢能力较强，有利于减肥和预防肥胖等疾病；反之，如果脂肪酶活性过低，说明人体脂肪代谢能力较弱，容易出现肥胖和代谢性疾病等问题。
需要注意的是，脂肪酶的测定结果并不是唯一的评估指标，还需要结合其他指标如体重、体脂率、血糖、血脂等指标进行综合分析。
此外，脂肪酶的测定结果也受到许多因素的影响，如年龄、性别、饮食、运动等因素都会对脂肪酶活性产生影响，因此需要综合考虑。
脂肪酶的测定是衡量人体脂肪代谢能力的一种方法，它对于研究肥胖和代谢疾病等疾病的发病机制具有重要的意义。
在进行脂肪酶测定时，需要注意样品的采集、处理和测定方法的选择，以保证测定结果的准确性。
脂肪酶测定标准操作规程
血清脂肪酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清脂肪酶(缩写LPS)测定；组合项目申请：胰腺炎检测。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。
-20℃可保存数月；-70℃至少可保存半年；应避免标本反复冻溶。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
抽血前3天内避免高脂饮食，24小时内不饮酒。
2.3.2如果使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
EDTA、草酸盐、氟化钠、枸橼酸对酶有抑制作用。
2.1.5 抽血前最好停用影响血脂的药物（如调脂药、避孕药、某些降压药、激素等）数天或数周，否则应记录用药情况。
3 方法原理采用1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵）-酯作为底物，OH－脂肪酶1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵)-酯 ----------1,2-邻-二月桂宗甘油 + 戌二酸 + 甲基试卤灵在570nm波长下，根据产物红色的甲基试卤灵生成速率测定脂肪酶的活性。
脂肪酶的检测方法
脂肪酶的检测方法1. 引言脂肪酶是一类能催化脂肪酯的水解反应的酶。
脂肪酶在食品工业、医学领域等具有重要的应用价值。
为了准确、快速地检测脂肪酶的活性和浓度，科学家们开发了多种检测方法。
本文将详细介绍脂肪酶的相关概念以及常用的检测方法，并对其优缺点进行比较分析。
2. 脂肪酶的概述脂肪酶是一种水解酶，主要催化脂肪酯的水解反应，将脂肪酯分解为甘油和脂肪酸。
脂肪酶广泛存在于动植物的组织中，如胃液、胆汁、胰液等。
脂肪酶的作用对于人体的脂肪消化和吸收至关重要，但过高或过低的脂肪酶活性都可能对人体健康产生不良影响。
3. 脂肪酶的检测方法概述常见的脂肪酶检测方法包括传统的酶活性测定法、光谱法、电化学法、电镜法等。
下面将分别介绍这些方法的原理、步骤以及优缺点。
3.1 传统的酶活性测定法•原理：该方法通过测定脂肪酶对底物的水解反应，间接反映脂肪酶的活性。
•步骤：1.准备含有脂肪酶的样品和底物溶液。
2.混合样品和底物溶液，并控制反应条件（温度、pH等）。
3.反应一段时间后停止反应。
4.使用比色法、比浊法等方法来测定反应产物（如甘油）的含量。
•优点：方法简单、成本低廉。
•缺点：测定结果受其他干扰物影响较大，灵敏度相对较低。
3.2 光谱法•原理：该方法利用脂肪酶催化反应过程中底物或产物的光学性质变化来检测脂肪酶活性。
•步骤：1.准备含有脂肪酶的样品和底物溶液。
2.在一定时间内记录底物或产物的光谱变化。
3.分析光谱数据，计算脂肪酶活性。
•优点：结果准确、灵敏度较高。
•缺点：需要专用的光谱仪器，成本相对较高。
3.3 电化学法•原理：该方法利用脂肪酶催化反应过程中产生的电流或电势变化来检测脂肪酶活性。
•步骤：1.在电极表面修饰脂肪酶或底物，并固定在电极上。
2.浸入电解质溶液中，建立电化学检测系统。
3.测量电流或电位的变化，并计算脂肪酶活性。
•优点：结果准确、实时监测。
•缺点：需要专用的电化学仪器，操作复杂。
3.4 电镜法•原理：该方法通过电镜观察样品中脂肪酶的形态和数量来评估脂肪酶活性。
MMFSCNG粮食油料检验脂肪酶活动度测定法
MM_FS_CNG_0391粮食油料检验脂肪酶活动度滴定法MM_FS_CNG_0391粮食、油料检验脂肪酶活动度测定法1.适用范围本标准适用于商品粮食脂肪酶活动度的测定。
2.主要试剂和仪器.主要试剂1％百里香酚酞乙醇溶液；氢氧化钠乙醇溶液；乙醇和乙醚（4∶1）混合液；甲苯；缓冲液：量取1N乙酸溶液250ml和1N乙酸铵溶液25ml，混合后，加水至1000ml；纯油：量取向日葵油（或用纯花生油代替）约250g注入分液漏斗中加2％碱液100～150ml，摇荡后，静置分层，弃去碱液。
用水将油洗至中性，静置后，将油通过氯化钙柱干燥备用。
.仪器锥形瓶：100ml；移液管：5ml；分液漏斗：500ml；低温烘箱；研钵、细口瓶等。
3.过程简述称取试样（带壳油料称子仁）2g倒入研钵中，加入1ml纯油，混匀，加入5ml缓冲液，研磨成稀糊状，转入锥形瓶中，用5ml水洗净研钵。
锥形瓶中加3滴甲苯，用称量皿盖上瓶口，置于30℃烘箱内保温24h。
取出，加入乙醇乙醚混合液50ml，静置5min，加百里香酚酞指示剂，用碱乙醇溶液滴定至终点（浅蓝色），记下用去的碱液毫升数（V1）。
另称取2g试样做对照试验，除不用30℃保温外，其余操作同上，记下用去的碱液毫升数（V2）。
4.结果计算脂肪酶活动度按下列公式计算：脂肪酶活动度（ml碱液／1g试样）＝（V1－V2）·N×1000 W（100－M）式中：V1——试样滴定用去碱液体积，ml；V2——对照试验用去碱液体积，ml；N——实际碱液浓度，N；W——试样重量，g；M——试样水分百分率，％。
双试验结果允许差不超过平均值的10％，取平均值为测定结果。
测定结果取小数点后第一位。
5.来源：GB 5523—85。
脂肪酶、淀粉酶测定方法
脂肪酶测定——采用p-NPP法取0.5g样品，加去离子水10mL，40℃水浴浸泡2h，过滤。
取滤液1mL于试管中，加入pH8.0缓冲液3mL和1mmol/L p-NPP溶液0.1mL 于40℃下精确反应3min，迅速置于冰上终止反应。
在波长405nm处测定吸光度值。
对照管酶液用等体积去离子水代替，其余试剂相同。
Npp标准曲线Y=0.287x+0.0861（y：吸光度x：NPP浓度（umol/L））试剂配制：1mmol/L p-NPP溶液：称取0.0378g pNPP，加入1mL曲拉通-100与5mL异丙醇，用Tris-HCL（pH8.0）定容至100mL。
pH8.0 Tris-HCl：50mL 0.1M tris碱溶液与29.2mL 0.1M HCl溶液混合，加蒸馏水定容至100mL。
淀粉酶测定称取六神曲0.5g，研细，用20mL去离子水40℃浸泡1h，过滤。
取2只250mL的碘瓶，各加入5%的淀粉液25mL，10mL醋酸钠缓冲液（pH4.5），10mL蒸馏水，摇匀，40℃水浴预热5min。
A管中加入滤液5mL，准确反应1h，立即加2mol/L HCl 1mL终止反应，B管中先加入HCl，再加滤液5mL。
2只碘瓶分别加入0.05mol/L碘液10mL，0.1mol/L氢氧化钠45mL，边滴边振摇，暗处放置20min，加入1mol/L 硫酸2mL，用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定至无色。
每份样品测定3次。
记录消耗硫代硫酸钠的体积，计算得淀粉酶活力。
淀粉酶活力是指1g六神曲粉末在一定条件下(T=40℃，pH=5.0)，1h 内催化可溶性淀粉水解生成葡萄糖的毫克数。
计算公式:淀粉酶活力=［c×(vB－vA)·M·N］/2×m·t式中:c为硫代硫酸钠的浓度(mol/L)，M为葡萄糖的摩尔质量(g/mol)，N为酶液稀释倍数，V A为样品滴定值(mL)，VB为空白滴定液(mL)，m为六神曲的取样量(g)，t为反应时间(h)，淀粉酶活力单位为mg/(g·h) 。
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脂肪酶测定标准操作程序
1. 摘要
脂肪酶检测用于定量测定人血清或血浆中脂肪酶的活力，用于临床相关疾病的辅助诊断。
2. 适用范围
程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中LPS 的浓度。
3. 职责
使用日立7600自动生化分析仪进行测定LPS 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法
上海科华生物工程股份有限公司生产的二脂肪酶监测试剂盒采用的是酶法。
5. 原理
1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯−−→−脂肪酶
1，2-领-二月桂基-消旋-甘油+戊二酸+6-甲基试卤素灵 1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯在样本中的脂肪酶的作用下水解生成1，2-领-二月桂基-消旋-甘油、戊二酸以及红色的6-甲基试卤素灵。
由于甲基试卤素灵在波长570nm 附近处有吸收峰所以在一定脂肪酶活力范围内，570nm 处吸光度的变化值与样本中脂肪酶活力成正比。
6. 仪器
日立7600自动生化分析仪
7. 试剂
7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供
7.2 试剂瓶内主要成分：R1：Good ’s 缓冲液、共脂肪酶、脱氧胆酸钠、乙酸钙
R2：酒石酸缓冲液、1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯、牛脱氧胆酸钠。
7.3 试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为
12个月。
试剂不可冰冻。
试剂开瓶后冷藏于分析仪中可以保存14天。
7.4 试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制
8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》
8.5室间质评：分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
9.标本
9.1标本为新鲜血清，或采用EDTA、肝素、枸橼酸钠抗凝的血浆样本。
室温可稳定1天；
2-8℃可稳定7天；冻存可稳定1年。
9.2标本拒收：由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请
单不符状况，一律要求重新留取标本。
9.3标本处理：收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。
10.测定程序
10.1分析参数：详见参数表。
10.2操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
10.3获取结果：在日立7600仪器上或日立7600传送的中文系统电脑上查找相应结果。
10.4结果报告：对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。
可报告的
结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。
11.计算
标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。
无需手工计算，每个标本的结果自动打印
12.废液处理
参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。
13.操作性能
13.1可报告范围：本法对CO2检测范围为15-1000 U/L。
当样品测定值超过上限时，应
将样品用9 g/L氯化钠溶液作倍比稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
13.2特异性/干扰：当样品中VC≤600 mg /L，胆红素浓度≤600mg/L，血红蛋白浓度≤
5.00g/L，甘油三脂≤8mmol/L时对测定结果的影响可忽略。
13.3灵敏度：本试剂的检测限为1000 U/L。
13.4精密度:重复性CV%≤8% 批间差≤10%
14.注意事项
14.1试剂盒仅用于体外诊断。
测定结果仅作为相关疾病的临床诊断依据。
14.2使用试剂时请根据实际使用量多少，将试剂倒入干净容器再测定，其余试剂盖紧后
放回冰箱。
如试剂变混浊或空白吸光度值＞0.4A请勿使用。
14.4试剂盒中含有防腐剂叠氮钠，切勿吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。
如不慎接触，应
用大量清水冲洗。
如误服，应立即上医院诊治。
15.参考值
健康成年人：13-63 U/L 如果结果做为诊断指标应结合病史及其它临床检查结果。
16.临床意义
脂肪酶检测用于定量测定人血清或血浆中脂肪酶的活力，用于临床相关疾病的辅助诊断。
脂肪酶（LPS）是一组特异性较低的脂肪水解酶类，主要源于胰腺，其次为胃及小肠，能水解多种含长链脂肪酸的甘油酯。
胰腺是人体LPS最主要来源。
LPS增高见于急性胰腺炎及胰腺癌，偶见于慢性胰腺炎。
急性胰腺炎时，淀粉酶增加的时间较短，而LPS活力上升可持续10-15天。
胰腺炎未累及胰腺癌时、LPS通常在正常范围。
此外，总胆管结石或癌、肠梗阻、十二指肠穿孔等有时LPS 亦可增高。
脂肪酶对急性胰腺炎的有很大帮助。
临床研究证实，其灵敏度为80%~100%，特异性为84%~96%，而淀粉酶的灵敏度为73%~79%，特异性为82%~84%，脂肪酶活力测定对急性胰腺炎诊断的灵敏度及特异性均优于淀粉酶活力测定。
目前临床脂肪酶常用的测定方法有滴定法、电极法、比浊法、分光度计法及荧光度计法。
17.支持性文件
17.1日立7600自动生化分析仪使用说明书。
17.2日立7600自动生化分析仪分析参数。
17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。
用户可根据自身情况添加支持性文件。
18.参考文献
18.1《全国临床检验操作规程》第三版，叶应妩等，2006。