脂肪干细胞与小肠黏膜下层构建仿生骨膜的体内成骨
成骨细胞名词解释组织学

成骨细胞名词解释一、定义和性质成骨细胞,也称为骨细胞,是骨骼组织中的主要细胞类型之一。
它们是成熟的、功能活跃的骨形成细胞,负责骨组织的形成和重建。
成骨细胞位于骨质表面、骨膜内面及骨髓腔中,通常与基质结合形成骨组织。
在组织学上,成骨细胞具有特定的形态和结构特征,表现为长柱状或不规则形状,核大而深染,核仁明显,胞质丰富。
二、功能与特点1.骨形成:成骨细胞的主要功能是合成和分泌骨基质,包括胶原蛋白和骨钙蛋白等,这些成分是构成骨质的主要成分。
通过合成这些基质,成骨细胞有助于骨质的形成和增加。
2.骨重建:成骨细胞也参与了骨组织的重建过程。
在破骨细胞对旧骨质进行吸收后,成骨细胞会在吸收部位形成新的骨质,实现骨组织的更新和修复。
3.调节血钙平衡:成骨细胞还能调节血液中的钙浓度,通过调节骨质矿化和吸收,以维持机体血钙平衡。
4.黏附于骨表面:成骨细胞具有黏附于骨表面的能力,通过特定的受体与骨基质结合,维持骨组织的结构和完整性。
5.表达多种生长因子:成骨细胞能表达多种生长因子,如胰岛素样生长因子、转化生长因子等,这些因子能刺激成骨细胞的增殖和分化,对骨组织的形成和发育具有重要影响。
三、成骨细胞与骨组织的形成在胚胎发育过程中,间充质干细胞在一定的诱导条件下会分化为成骨细胞。
这些成骨细胞会合成和分泌骨质基质,形成原始的骨质。
随着胎儿的生长和发育,成骨细胞会不断合成新的骨质,使骨骼逐渐生长和发育成熟。
在成年后,成骨细胞仍保持着合成骨质的功能,同时参与破骨细胞的诱导和骨组织的重建过程。
四、成骨细胞的分化与调控1.信号转导途径:多种信号转导途径参与了成骨细胞的分化和调控。
例如,BMPs、TGF-βs等生长因子可通过相应的受体激活Smad或多条MAPK信号转导途径,调节成骨细胞的基因表达和功能活动。
2.转录因子:Runx2、Osterix等转录因子在成骨细胞的分化过程中发挥关键作用。
这些转录因子能调控成骨细胞的特异性基因表达,促进其向成熟成骨细胞分化。
_microRNAs在骨形成中的作用——运动调控骨代谢的新机制

中国生物化学与分子生物学报 http: / / cjbmb. bjmu. edu. cn Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology
2013 年 12 月 29 ( 12 ) : 1128 ~ 1135
CHEN XiangHe,LI ShiChang * ,SUN Peng
( Key Laboratory of Education Ministry “Evaluating and Sports Intervening to Adolescent’ s Health” , East China Normal University,Physical Education College,Shanghai 200241 , China)
发挥的分子生物学机制以及运动训练调节与骨代谢相关 miRNAs 表达的研究进展进行综述. 关键词 microRNAs; 成骨细胞; 破骨细胞; 骨形成; 运动训练; 新机制 中图分类号 Q75 ; Q441
Novel Mechanism in Regulation of Bone Metabolism by Exercise s Role in Bone Formation Focused on MicroRNAs’
[3 ]
miRNAs 在调控成骨细胞 略的调控作用. 研究发现, 增 殖、 分 化 及 骨 形 成 过 程 中 扮 演 着 重 要 角 色. Oskowitz 等[6]在检测人类多能干细胞 ( hMSCs ) 向成 骨细 胞 分 化 时 miRNA 表 达 动 力 学, 发 现 19 个 miRNAs 表达显著变化. Mizuno 等[7]研究发现, miR210 在调控成骨细胞分化及其成骨能力过程中具有 miRNAs 调控成骨细胞分化、 重要作用. 目前, 成熟
组织工程试题解答

D fd1、组织工程的三要素是什么?基本原理是什么?三要素:a)种子细胞; b)支架材料; c)生长因子基本原理:a) 由人体取出细胞;b) 在体外将细胞培养到足够的数量;c) 将这些细胞填入、养在人工支架里;d) 有时需要再加一些化学物或生长因子促进细胞的分化;e) 将此人工组织移植到患者身上。
2、组织工程的生长因子有哪些分泌方式?为什么生长因子需要控制性释放?根据生长因子产生细胞与接受生长因子作用的细胞相互之间的关系,可概括为以下三种模式:(1)内分泌(endocrine),生长因子从细胞分泌出来后,通过血液运输作用于远隔靶细胞。
如:血小板源生长因子(PDGF)源于血小板,作用于结缔组织细胞。
(2)旁分泌(paracrine),细胞分泌的生长因子作用于邻近的其他类型细胞,对合成、分泌该生长因子的自身细胞不发生作用,因为它缺乏相应受体。
(3)自分泌(autocrine),生长因子作用于合成及分泌该生长因子的细胞本身。
生长因子以后两种作用方式为主。
生长因子优点诸多,但是也存在很多问题,主要是高扩散性和半衰期短,生物学活性难以长期保存。
局部直接应用生长因子可在较短的时间内发挥作用,但在生理环境下很容易使之迅速失活,不产生预期的生理效应。
因此,采用控制性释放技术,对生长因子进行保护,使之在有水环境下即能保持活性,又能持续释放或控制释放,是使生长因子得到有效应用的关键。
3、组织工程用支架材料的基本要求是什么?为什么需要多孔结构?良好的生物相容性良好的生物降解性具有三维多孔立体结构可加工性和有一定的机械强度良好的材料-细胞界面良好的消毒性能合适的孔尺寸、高的孔隙率和相连通的孔形态,以利于大量细胞的种植、细胞和组织的生长、细胞外基质的形成、氧气和营养的传输、代谢物的排泄以及血管和神经的内长入。
A4、组织工程种子细胞的基本要求是什么?5、组织工程皮肤和骨骼等器官构建路线是什么?所构建的人工器官优缺点各是什么?采用动物实验检测所构建的器官的大概步骤是什么?6、与组织工程密切相关的两项医学生理学奖的获得者的姓名,时间,发现内容是什么呢?1986年美国生物化学家斯坦利·科恩(Stanley Co-hen) 和意大利生物学家丽塔·莱维-蒙塔尔奇尼(Rita Levi-Mont.alcini)共同获得诺贝尔生理学或医学奖。
纳米结构脂质载体载辛伐他汀体内外成骨性能及成骨机制的研究

纳米结构脂质载体载辛伐他汀体内外成骨性能及成骨机制的研究近年来,口腔种植修复技术已成为治疗牙列缺损及无牙合患者的主要修复方式。
然而,多种因素导致的牙槽骨吸收大大限制了口腔种植修复技术的应用,如:龋病、牙周炎等长期缺牙后造成的牙槽嵴较严重的垂直向或水平向骨吸收,丧失量可达到原有骨宽度的50%;外伤或颅颌面部肿瘤导致牙齿缺失的同时伴有牙槽嵴部分或大范围的缺损;患有先天性畸形或先天性基因缺陷的患者与生俱来伴有牙齿和牙槽骨的发育不全;以及近年来因人口老龄化现象而日益增多的骨质疏松症导致骨密度下降和骨吸收加快。
而种植区牙槽骨的体积和骨的质量又是影响种植修复成功的关键因素。
因此,如何解决种植术区骨量不足或大范围骨缺损,促进骨组织再生,恢复患者颌骨形态及功能,是近年来研究的一大热点。
全球每年与骨组织再生相关的手术多达130余万,治疗方案从自体骨移植、同种异体骨移植、异种骨组织移植、新型骨替代材料移植、引导骨再生到骨组织工程技术等都有大量的研究和报道。
尽管这些方法已经取得了巨大的进展,但仍存在各种各样的问题,如:技术复杂、费用高、周期长、生物安全性不足等,骨组织工程技术还存在支架材料强度差、种子细胞来源受限、外源性生长因子价格昂贵等。
因此,寻找一种简单、廉价、安全且能诱导内源性骨组织生长因子的方法来促进骨组织再生是目前口腔种植领域关注的一个热点。
有学者发现辛伐他汀小分子药物可以诱导自身骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞并促进内源性BMP-2成骨因子表达的作用,因此,把辛伐他汀应用于骨组织再生领域引起新的关注。
辛伐他汀(simvastatin, SV)是一种无活性的小分子内酯类药物,它是羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-COA)还原酶抑制剂,临床上常用的一类降高血脂、降胆固醇类药物,进入人体后经由肝脏细胞内活性酶转化成可抑制甲羟戊酸合成功能的活性体。
自1999年Mundy等首次从3000多种临床药物中筛选出他汀类药物(SV和洛伐他汀)可促进体内外成骨细胞中BMP-2基因的表达,越来越多的焦点集中在SV成骨性能的研究,并证明SV有较好的促成骨作用,包括可以促使BMSCs向骨缺损部位的迁移,促进成骨细胞的分化以及促进血管生成,同时还可以抑制破骨细胞的作用。
骨组织工程研究的新进展:修复骨缺损的完美技术

骨组织工程研究的新进展:修复骨缺损的完美技术李凯【摘要】骨组织工程自20世纪80年代诞生以来,取得了飞速的发展,为临床上骨缺损的治疗带来新的希望.纵观骨组织工程研究的二十多年里,其构成的三大要素:种子细胞方面、支架材料方面和组织构建方面都取得了一定的进展.但是距离组织工程骨在临床中正式使用尚有一定距离,有待进一步的研究.本文就目前骨组织工程研究的现状及最新进展作一综述.%Bone tissue engineering has developed rapidly since the 1980s and brought new hope for the treatment of bone defects. Throughout twenty years, the three major elements of bone tissue engineering: seed cells, scaffolds and organizations to build have made great progress. However, there is still certain distance for tissue engineered bone to be used officially in clinic. In this paper, the current status of bone tissue engineering research and the latest developments are reviewed.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2012(009)018【总页数】3页(P15-17)【关键词】骨组织工程;骨缺损;研究进展【作者】李凯【作者单位】哈尔滨医科大学附属第三医院骨科,黑龙江哈尔滨150081【正文语种】中文【中图分类】R681.2临床上由于各种原因导致的骨缺损很常见,然而修复骨缺损的惟一方法是通过骨移植来实现。
【国家自然科学基金】_骨钙蛋白_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140803

2014年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34
2014年 科研热词 推荐指数 骨髓间充质干细胞 2 骨钙蛋白 2 骨髓干细胞 1 骨桥蛋白 1 骨折愈合 1 骨形态发生蛋白9 1 骨形态发生蛋白2 1 骨形态发生蛋白-2 1 间充质干细胞 1 血管形成 1 细胞因子 1 组织工程骨膜 1 种子细胞 1 碱性磷酸酶 1 碱性成纤维细胞生长因子 1 硅酸钙生物陶瓷 1 猪小肠粘膜下层 1 牙髓细胞 1 牙槽骨 1 牙囊 1 牙体 1 成骨细胞 1 成骨分化 1 干细胞 1 增殖 1 国家自然科学基金 1 发生 1 分化 1 云南白药 1 ⅰ型胶原 1 β -catenin 1 wnt 1 vegf 1 pth 1
科研热词 推荐指数 成骨分化 5 骨髓间充质干细胞 4 细胞增殖 3 成骨细胞 3 负调控 2 碱性调宁蛋白 2 cxcr4 2 c2c12细胞 2 bmp9 2 龋病 1 鸡 1 骨钙蛋白 1 骨钙素 1 骨组织构建 1 颅骨 1 降钙素基因相关肽 1 重组逆转录病毒 1 转tgf-β 1基因小鼠 1 蛋白表达 1 荧光实时定量pcr 1 羟基磷灰石 1 细胞分化 1 组织构建 1 磷酸钙类 1 碱性磷酸酶 1 白细胞介素6 1 牵张应力 1 牙髓炎 1 核因子κ b 1 柚皮苷 1 放疗敏感性 1 放射辐照 1 放射诱导纤维萎缩机制 1 放射性骨坏死 1 成骨特异性转录因子 1 成骨活性 1 成骨前体细胞 1 国家自然科学基金 1 器官培养技术 1 前列腺肿瘤 1 信号转导 1 体外研究 1 ⅰ型胶原 1 sdf—1 1 sdf-1 1 runx-2 1 rosetta-gami(de3)plys 1 pet-32a(+) 1 ocn 1 i型胶原 1 erk1/2 1 alp 1
膝关节半月板损伤的原因术后康复及预防

南京医科大学康达学院师生再生医学学习兴趣小组软骨干细胞研究进展综述南京医科大学康达学院2013级康复1班戚新雪干细胞一直是国内外研究热点,近年来,软骨干细胞的研究愈来愈火。
本文对软骨干细胞的研究进行综述。
关键词:关节软骨干细胞骨关节炎修复1关节软骨相关知识关节软骨,关节软骨表面光滑,能减少相邻两骨的摩擦,缓冲运动时产生的震动。
关节软骨并不是均质性的,从关节表面到深层可以分为软骨表面、过渡带和深层区,每一层具有不同的生化特点和细胞表型。
表层细胞呈现扁平椭圆,具有与关节表面平行的长突起,主要分泌表面蛋白多糖;过渡移行带细胞呈圆形柱状排列,并且分泌软骨中间层蛋白(CILP);而深层细胞体积较大,硫酸软骨素排列与软骨表面垂直,主要表达X型胶原和碱性磷酸酶。
关节软骨中这种不均质性对关节软骨中软骨细胞是不是唯一细胞的观念提出了挑战。
其次,关节软骨是以外积性生长方式生长的,这为进一步提出软骨中存在干细胞的理论奠定了基础。
关节软骨是一种特殊的透明软骨,覆盖在关节末端的关节软骨厚度在低压力区为1-4mm,高压力区为5-7mm,没有血管或神经分布。
与全身大多数透明软骨不同,关节软骨没有软骨膜。
这种性质使软骨生成一个抗负荷的面。
软骨膜含有血管,可以供应原始细胞,可以对软骨进行修复,这个有点关节软骨是不具备的。
软骨也是由细胞和细胞间质组成。
根据细胞间质中纤维的不同,软骨分为透明软骨,纤维软骨,弹性软骨。
骨关节炎(osteoarthritis,简称OA )是以软骨破坏为特征的,由机械性、代谢、炎症和免疫等因素作用而造成的关节疾病。
骨关节炎的致残率高达53%,已成为老年人致残原因中仅次于心血管疾病的2号杀手。
膝关节作为负重关节,是骨关节炎最好发的关节之一。
随着年龄增大,关节软骨变性,本身就容易发生磨损,那么关节负重越大,其关节软骨磨损程度愈严重,骨关节炎发生概率就越高。
2干细胞概念干细胞,是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定条件下,它可以分化成多种功能细胞。
人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化

人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅【摘要】目的:建立体外分离培养获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)的方法,并观察其形态、免疫表型、生物学特性.初步探讨其体外成骨过程中出现成脂现象的原因及机制.方法:剖宫产手术获得腹部皮下脂肪,0.15%Ⅰ型胶原酶消化法获得人脂肪间充质干细胞并进行体外培养.行MTT细胞增殖实验绘制增殖曲线,使用流式细胞及细胞免疫荧光技术检测细胞表面抗原,行成骨成脂分化鉴定其分化潜能.通过RT-PCR技术检测成骨成脂过程中过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2 (peroxisome proliferator activated receptorγ-2,PPARγ-2)和骨桥蛋白mRNA表达情况.结果:通过分离培养,获得了大量旋涡状生长的人脂肪间充质干细胞.MTT法显示细胞增殖能力强.流式细胞鉴定结果显示,CD29、CD73、CD105、CD166高表达,CD31、CD34、CD45、HLA-DR 低表达.细胞免疫荧光结果与之相符.hADSCs在特定诱导条件下,具有成骨成脂分化潜能.在成骨分化过程中同时伴有成脂发生.RT-PCR结果显示,与对照组相比,成脂诱导组PPARγ-2 mRNA有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P<0.01).与对照组相比,成骨诱导组骨桥蛋白,PPARγ-2 mRNA均有时间依赖性递增表达,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:建立了一种分离培养hADSCs简单可靠的方法.获得的细胞具有贴壁生长、增殖活性强、干细胞表型以及多向分化等特征.hADSCs体外成骨过程中,三酰甘油的形成对成骨具有一定的促进作用.%Objective:To establish the isolation and culture method of human adipose-derived mesenchymal stem cells (hADSCs) derived from human adipose in vitro,so as to explore their morphology,identify cell surface markers,observe biological properties,and discuss the possible causes and mechanism ofthe phenomenon of hADSCs' osteogenic differentiation accompanying with synthesis of triglycerides.Methods:Human adipose tissue were obtained from abdominal operation.The hADSCs were isolated from human adipose tissue by 0.15% collagenase digesting.The cells were applied to do the experiments:MTT method,flowcytometry,immunofluorescence.Its differentiation potential was proved by osteogenic and adipogenic differentiation.The osteogenic and adipogenic related genes:PPARγ-2,osteopontin expression were detected by real-time fluorescent quantitative PCR technique.Results:After isolation and culture,we obtained a large amount of hADSCs,which grew like swirls.MTT revealed high capability for and proliferation.The flow cytometry showed CD29 +,CD31-,CD34-,CD45-,CD73 +,CD105 +,CD166 +,HLA-DR-,which fit the results of immuno fluorescence.Moreover,these cells could be functionally induced into adipocytes and osteoblasts in the presence of appropriate conditioned media.During osteogenic differentiation,we found it accompanying with the synthesis of triglycerides.RT-PCR results proved that during the differention process,osteogenic and adipogenic related genes began to be expressed gradually,which had statistically significant(P <0.01).Conclusion:Highly efficient isolation and cultivation methods for hADSCs have been developed.They are a kind of mesenchymal cells with great application prospect,which characterized with adherent growth,high proliferation,stem cell phenotype and multipotent differentiation.During vitro osteogenic differentiation,the triglyceride formation has a certain role in promoting osteogenesis.【期刊名称】《江苏大学学报(医学版)》【年(卷),期】2013(023)003【总页数】6页(P185-190)【关键词】人脂肪间充质干细胞;鉴定;成骨分化;成脂分化【作者】闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅【作者单位】江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;镇江市第二人民医院皮肤科,江苏镇江212002;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院皮肤科,江苏镇江212001【正文语种】中文【中图分类】R329.2对于间充质干细胞的研究,最初的对象是骨髓间充质干细胞,并且已经形成了成熟的分离培养方法[1]。
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中国组织工程研究 第16卷 第3期 2012–01–15出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research January 15, 2012 Vol.16, No.3P .O. Box 1200, Shenyang 110004 4261Department ofOrthopedics Surgery, Taian Center Hospital, Taian 271000, Shandong Province, China; 2Taishan Medical College, Taian 271016, Shandong Province, ChinaZhang Kai-gang ☆, Doctor, Chief physician, Department ofOrthopedics Surgery, Taian Center Hospital, Taian 271000, Shandong Province, China tachzkg@Received: 2011-05-13 Accepted: 2011-07-121泰安市中心医院骨科,山东省泰安市 271000; 2泰山医学院,山东省泰安市 271016张开刚☆,男, 1965年生,山东省泰安市人,汉族,2006年上海交通大学医学院毕业,博士,主任医师,主要从事创伤骨科、骨组织工程研究。
tachzkg@ 中图分类号:R318 文献标识码:B文章编号:1673-8225 (2012)03-00426-05收稿日期:2011-05-13修回日期:2011-07-12 (20110513004/W ·G)脂肪干细胞与小肠黏膜下层构建仿生骨膜的体内成骨☆张开刚1,张月东1,王 玫2In vivo osteogenesis of bionic periosteum constructed by adipose-derived stem cells seeded onto small intestinal submucosaZhang Kai-gang 1, Zhang Yue-dong 1, Wang Mei 2AbstractBACKGROUD: Both adipose-derived stem cells (ADSCs) and small intestinal submucosa (SIS) have good biocompatibility. But the effects of bionic periosteum composite constructed by them on bone defects repairment need further investigation. OBJECTIVE: To study the osteogenic feasibility of bionic periosteum constructed by ADSCs seeded onto SIS in vivo .METHODS: After osteogenic induction, ADSCs isolated from the rabbits inguinal fat were co-cultured with porcine SIS in vitro for 3 weeks to build bionic periosteum. Bionic periosteum was embedded in nude mice. ADSCs without osteogenesis induction seeded onto SIS were also embedded in nude mice as control.RESULTS AND CONCLUSION: After osteogenic induction, ADSCs were well adhered onto the SIS and a large amount of extracellular matrix was found in cells. At 4, 8 and 12 weeks after grafting, there was a large amount of bone formation detected by immunohistochemistry and transmission electron microscope. There was no cortical bone formation in the non-induced composite group. At 8 weeks after bionic periosteum grafting, immunohistochemistry results of osteopontin and osteocalcin were positive. It is indicated that bionic periosteum transplanted into nude mice can form new bone with good blood supply.Zhang KG, Zhang YD, Wang M. In vivo osteogenesis of bionic periosteum constructed by adipose-derived stem cells seeded onto small intestinal submucosa. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2012;16(3): 426-430. [ ]摘要背景:脂肪干细胞与小肠黏膜下层两者具有良好的组织相容性,但将二者复合构建仿生骨膜修复骨缺损的效果如何尚需进一步验证。
目的:探讨以小肠黏膜下层为支架材料复合成骨诱导的脂肪干细胞构建仿生骨膜,体内成骨的可行性。
方法:取兔腹股沟区的脂肪分离培养脂肪干细胞经成骨诱导后,与猪小肠黏膜下层复合体外培养3周,构建仿生骨膜。
将仿生骨膜埋置于裸鼠皮下,并以小肠黏膜下层复合未成骨诱导的脂肪干细胞的复合材料置于裸鼠皮下做对照。
结果与结论:兔脂肪干细胞经成骨诱导后与小肠黏膜下层体外复合培养,见两者黏附良好,细胞分泌大量的细胞外基质。
植入4,8,12周组织学和透射电镜观察见有大量骨组织形成,未成骨诱导材料复合物组内无成骨细胞。
仿生骨膜植入体内8周免疫组织化学测试骨钙蛋白、骨桥蛋白呈阳性反应。
提示仿生骨膜植入裸鼠体内后可形成具有良好血运的新生骨组织。
关键词:仿生骨膜;脂肪干细胞;小肠黏膜下层;裸鼠;组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.03.010张开刚,张月东,王玫. 脂肪干细胞与小肠黏膜下层构建仿生骨膜的体内成骨[J].中国组织工程研究,2012,16(3):426-430. [ ]0 引言理想、可靠的种子细胞是构建组织工程骨的基础和前提。
脂肪干细胞(adipose-derived stem cells ,ADSCs)是近年来发现的一种成体干细胞,可以在体外稳定增殖、具有多向分化潜能[1],因具有安全性高[2] 、获得率高等优点[3-4],迅速成为目前组织工程学的研究热点。
小肠黏膜下层(small intestinal submucosa ,SIS)是一种可降解的天然细胞外基质材料,在骨科领域有广泛的用途,可用于神经[5]、血管[6]、肌腱[7]、半月板[8]、骨软骨和骨缺损的修复[9-10]。
SIS 含有多种活性生长因子[11],如血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子2、转化生长因子β、血小板源性生长因子等,具有促进组织再生的能力。
SIS 具有自我调节能力,为宿主细胞提供良好的生长环境,促进血管生成,恢复组织功能,具有良好的组织相容性[12]。
实验应用SIS 与成骨诱导的ADSCs 共同培养后植入体内,以探讨其成骨的可行性,进而为骨缺损的治疗提供新思路。
1 材料和方法设计:随机对照动物实验。
时间及地点:实验于2007-06/2010-09在泰山医学院基础学院实验中心及泰安市中心医院中心实验室完成。
材料:取4月龄健康新西兰大白兔4只,张开刚,等. 脂肪干细胞与小肠黏膜下层构建仿生骨膜的体内成骨 ISSN 1673-8225 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH427www.CRTER .org雌雄不限,体质量2.0~2.5 kg ,由泰山医学院实验动物中心提供,实验动物生产许可证号:SCXK(鲁)2005- 0005;2周龄雄性裸鼠24只,体质量100~120 g ,由泰山医学院实验动物中心提供,实验动物生产许可证号:SCXK(鲁) 2005-0009。
主要试剂和仪器:支架材料:自备SIS ,按照Abraham 等[1]的方法制备。
实验方法:ADSCs 的分离和培养:取新西兰大白兔4只,经耳缘静脉注射空气栓塞致死,8%硫化钠脱毛,清水反复冲洗干净,固定于操作台,碘伏液消毒,取双侧腹股沟脂肪,仔细清除脂肪外组织(筋膜及血管、淋巴结)。
在超净工作台内,无菌条件下,PBS 反复冲洗,去除红细胞,剪碎,用装有Ⅰ型胶原酶50 mL 离心管吸取脂肪组织,放入恒温37 ℃摇床,振荡,180 r/min 消化60 min , 1 200 r/min 离心10 min ,弃上清,加入高糖DMEM 培养液(含1%双抗液,体积分数10%胎牛血清,292 mg/L 谷氨酞胺,50 mg/L 维生素C)重悬浮,接种于培养瓶,放入恒温37 ℃,体积分数为5%的CO 2饱和湿度培养箱内培养,3 d 后换液,洗去未贴壁的红细胞,隔日换液,融合达90%~95%后,进行传代。
ADSCs 的鉴定[13]:流式细胞术鉴定第3代细胞表面标记物,CD29,CD44表达为阳性,CD 45为阴性,第3代ADSCs 经成脂、成骨、成软骨诱导鉴定,具有多向分化潜能,鉴定为ADSCs 。
ADSCs 与SIS 体外复合培养构建仿生骨膜:取1 cm×1 cm SIS 材料1块分别放入24孔培养板,加入高糖DMEM 完全培养基(含1%双抗液,体积分数10%胎牛血清,292 mg/L 谷氨酞胺,50 mg/L 维生素C),放入细胞培养箱中复水72 h 。
将传至第3代细胞融合达90%后,以5.0×105/孔密度接种于复水的SIS ,再加入含有成骨诱导液的培养基1 mL ,于37 ℃、体积分数5%CO 2饱和湿度条件下复合培养。