小鼠的超数排卵
超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响
超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响作者：顾红霞，邹晨鹏来源：《畜牧兽医科学》 2018年第13期摘要：研究超数排卵对小鼠子宫组织结构的影响，发现超排处理后子宫壁的结构变化规律，为实际生产中超数排卵提供技术参数。
通过做石蜡切片的方法观察小鼠子宫的变化，首先对一组小鼠进行超数排卵处理后取出小鼠子宫，另一组小鼠不做处理，作为对照组，做好标记，放入福尔马林中固定保存，然后做石蜡切片，完成取材、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、染色、封片等实验步骤，最后在显微镜下观察子宫内膜、子宫腺、子宫壁等组织的变化，进行综合对照分析。
由于超数排卵激素的作用，会引起子宫内膜发生变化，分泌性内膜的结构特征表现的更为明显，与对照组相比，子宫内膜上皮增生、腺体加长、弯曲增多，子宫内膜的结缔组织和成纤维细胞发育。
关键词：小鼠；超数排卵；子宫内膜；子宫腺中图分类号：S814文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2018.13.0060引言子宫是一个中空的肌质性器官，富有伸展性，是胎儿生长发育和娩出的器官。
子宫借子宫阔韧带附着于腰下部和骨盆腔侧壁，大部分位于腹腔内，小部分位于骨盆内，在直肠和膀胱之间，前端与输卵管相接，后端与阴道相通。
子宫阔韧带为宽而厚的腹膜褶，含有丰富的结缔组织、血管、神经及淋巴管，其外侧有子宫圆韧带。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验组织超数排卵处理后的子宫10个和未经处理的子宫10个。
1.1.2试剂与药品70%、80%、90%、95%酒精及无水酒精、二甲苯、甲醛、苏木素液、1%的盐酸酒精、伊红水溶液、蒸馏水。
1.1.3主要仪器包埋机：型号KD-BM，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产生产。
切片机：型号RM2235，上海莱卡仪器有限公司生产。
推片机：型号TP-1，上海医疗仪器厂产品。
烘片机：型号KD-H，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产。
显微镜及图像采集系统：型号OLYMPUS-BH2，沈阳市互利康医疗器械公司。
利用超数排卵方法高效获取小鼠休眠胚胎
【 要 】 目的 为 提 高 小 鼠休 眠 胚 胎 的 制 备 效 率 ， 试 用超 数 排 卵 方 法 获 取 小 鼠休 眠 胚 胎 。方 法 超 ｇ ／ 鼠 摘 尝 ￣１ ，
在 注 射 孕 马 血 清 促 性 腺 激 素 （ Ｍ Ｇ） ， 照 是 否 注 射 抗 孕 马 血 清 （ｎ ．ＭＳ ｅｕ Ｐｓ 后 按 ａｔＰ Ｇ ｓｒｍ或 Ａ Ｐ Ｇ 以 及 注 射 的 不 同 时 ｉ －ＭＳ ） 间 分 为 ５ ： 母 鼠合 笼 前 注 射 Ａ Ｐ Ｓ 、 母 鼠见 栓 后 注 射 Ａ Ｐ Ｓ 在 见 栓 第 四天 卵 巢 摘 除 手 术 后 注 射 Ａ Ｐ Ｓ 组 在 ．Ｍ Ｇ 在 ．Ｍ Ｇ、 —Ｍ Ｇ、 不注射 ＡＰ Ｓ ，Ｍ Ｇ的超 排 组 和 不超 排 组 。 结 果 见 栓后 注 射 抗 Ｐ Ｓ Ｍ Ｇ组 的 平 均 出 胚 数 （ ． ， ） 高 ， 著 高 于 其 ９ ４枚 只 最 显
第 ｌ ５卷
第 ３期
研 究报 告
Ｉ ｌ 、 、 、 ！ 石、
利 用 超 数 排 卵方 法 高效 获取 小 鼠休 眠胚 胎
芦天 罡 ， 和 民 ， 倪 曲杨 燕 ， 雁 伟 ， 鸿 波 ， 丹 华 ， 云 海 赵 张 邵 刘
（ 京
ｄｆ ｒｎ ｏｅ ｆ － ＭＳ ｉ ｅｔｄｉｔ ｅｍｏ ｓ ｆ ｒｎｅｔ ｎｏ ＭＳ ｈｅｍｉｅｗ ｒ ｉｉｅ ｔ ｖ ｒｕｓ ）ｉ ｃｉｇＡ— ｉｅｅ ｔｄｓｓｏ Ｐ Ｇ ｊｃｅ ｏｔ ｕ ａｔ ｊｃｉ ｆ ｆ Ａ ｎ ｎ ｈ ｅ ｅｉ ｏ Ｐ Ｇ，ｔ ｃ ｅｅｄｖｄ ｄｉ ｏｆ ｅｇｏ ｐ ：１ ￣ｅｔ ｎ ｉ ｎ Ｐ Ｇ ｂｆｒ ｔ ｇ ）ｉｊｃｉｇＡ Ｐ Ｇ ａｔｒ ｎ ｉｇａｖｇｎｌｐｕ ，３ ｎｅｔ ｇＡ— ＭＳ ｔｒｏａｉｃｏ ｅｍｏｎｎ ｆ ＭＳ ｅ ｅ ｍａｉ ，２ ｎｅ ｔ － ＭＳ ｆ ｄｎ ａ ｉａ ｌｇ ）ｉ ｃｉ Ｐ Ｇ ａ ｅ ｖｒ ｔｍｙｉ ｔ ｒｉｇｏ ｏ ｎ ｎ ｅｆ ｉ ｊ ｎ ｆ ｅ ｎｈ ｄ ｙ４（ ａ ｌ＝ ｖｇｎ ｌｐｕ ） ａ ｄｙ ａ ｉａ ｌｇ ，４）ｓｐｒｖ ｌｔ ｇｗｉ ｏ ｔＡ－ＭＳ ｎ ｄ ５ ｈｅ ｃｎｒｌｏ ｅ ｅｕｔ Ｔ ｅ ａｅａｅ ｎ ｍｂ ｒｏ ｕ ｅ ｕａｉ ｔ ｕ Ｐ Ｇ，ａ ）ｔ ｏ ｔ ｎ ．Ｒ ｓｌ ｏ ｎ ｈ ｏ ｓ ｈ ｖｒ ｕ ｅ ｆ ｇ
1动物胚胎工程实验教程小鼠卵的体外成熟与体外受精材料与方法
《动物胚胎工程实验教程》王子玉自编南京农业大学动科院2005年8月实验一小鼠卵母细胞的体外成熟实验一、实验目的熟悉雌鼠的生殖器官的结构特点；掌握小鼠的超数排卵方案；掌握从卵巢上扎取未成熟卵母细胞的方法、卵母细胞的分类方法、体外成熟培养方法及核成熟情况和卵丘扩展程度的观察。
二、实验器材和材料1. 器材及药品体视显微镜，手术器械（眼科剪，眼科镊），1mL注射器，胶头滴管，口吸管，CO2培养箱，水浴锅，移液器，枪头，塑料培养皿，记号笔。
操作液（M2），成熟培养液（M－199），激素（PMSG和HCG），石蜡油。
2．实验动物：3-4周龄昆明系雌性小白鼠，自由采食饮水。
三、实验内容1.小鼠的超数排卵注射剂量皮下或腹腔注射PMSG 10 IU/只小鼠。
注射方法皮下注射：用手指捏住小鼠的头及尾部固定（图1-1），以酒精棉球消毒其背部，提起皮肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头微向上挑起不露出针尖时，再注入药物。
随着药物的推入，在皮下可看到鼓起一个小泡，即证实药物确已注入皮下部位。
皮下注射时防止药液从针孔处逸出。
腹腔注射：针头刚进入腹腔后向上挑，防止损伤小鼠腹腔内器官。
注射针头宜选用小号细针头。
注射药物后的小鼠自由饮水、采饲，自然光照。
2.卵巢的采集方法在注射PMSG后46h利用颈椎脱臼法处死小鼠（将供体鼠置于饲养笼上，鼠爪自然抓紧笼上铁支架，此时一只手拉紧鼠尾，另一只手食指与拇指压紧鼠颈部，或用镊子压紧颈部即可致死，此为引颈法。
用75%酒精喷湿鼠全身以消毒并防止毛发飞扬）。
将小鼠头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱臼的振动；也可用食指和拇指直接掐断颈椎致死。
然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上或鼠解剖台上。
图1－1 小鼠的固定将处死并固定好的小鼠，在下腹部中间剪开1个小口，一只手抓住鼠尾，另一只手抓住切开的皮肤向头部牵拉直至充分暴露腹部（图1-2）。
剪开腹膜，向前方揭去肠胃内脏，即暴露出生殖器官，可在肾脏后方看到两侧呈乳白色的卵巢及与输尿管相平行的两子宫角（图1-3）。
129／J小鼠超排效果的研究
２１ ０ ０年舅ｉ１ ３
１９Ｊ小鼠超排效果 的研 究 ２／
关文怡 曹授俊 齐军晶 （ 北京农业职业学院畜牧兽医系 １２４ ） ０４２
摘要 本试验 分别以近交 系Ｃ ７ Ｌ６ １９ ５Ｂ ／和 ２ Ｈ小鼠为试验 材料 ，研 究注射不 同剂量的Ｐ Ｇ和ＨＣ 对 小鼠超排效果 。 ＭＳ Ｇ
过１ 周的适应性饲 养后 ，按照注 射剂量不 同分别分为Ａ组
（ＭＳ ． Ｕ，ＨＣ ２５ｕ 、Ｂ组 （ＭＳ ．Ｉ Ｐ Ｇ２ Ｉ ５ Ｇ ． ） ｉ Ｐ ６ ５ Ｕ，ＨＣ ． ０ Ｇ５０ Ｉ 、Ｃ （ＭＳ ． Ｕ，Ｈ Ｇ ７５Ｕ ，每 组 ｌ只 。每 只 小 ｕ） 组 Ｐ Ｇ７５ １ Ｃ ． ） Ｉ ０ 鼠腹 腔 注 射 Ｐ Ｇ， 间 隔 ４ ｈ 分 别 注 射 ＨＣ ＭＳ ８后 Ｇ进 行 超 数 排
宁 波 市 激 素 制 品有 限 公 司 ； 其 余 试 剂 除 特 殊 说 明 外 均 为 Ｓｇ （ｉ ａ ｈｍｉ ｌＳ．ｏ ｉ ＭＯ， Ａ 公 司 产 品 。 ｉｍａＳｇ ｅ ｃ ， ｔ ｕｓ ｍ Ｃ ａ Ｌ ， ＵＳ ）
１ 试验方法 ． ４
选用５６ ， 周龄的１９Ｊ 鼠３ 只， 自由采食 － ２， 雌 ０
注 ：相 ｌ 母表 不差 异不 显著 （＞ ．５ ，不 Ｉ 司字 Ｐ Ｏ０ ） 司字母 表示 差异 显著 ｒ＜ ．５ Ｐ Ｏ０ ）
司） ；手 术器械：剪毛剪 、手术剪、镊子等 ；口吸式移卵
管。 Ｉ ． 试 验 试 剂 试 验 超 数 排 卵激 素（ＭＳ ３ Ｐ Ｇ，ＨＣ ） Ｇ 均购 自
剂 量 的Ｐ Ｇ和 Ｈ Ｇ对 小 鼠进 行超 数排 卵试 验 ，并 分 析 获 ＭＳ Ｃ
得卵母细胞 的数量和质量。
ｌ 材 料 和 方 法
小鼠发情周期观察与最佳超排时期的确定
２０北京农学院学报第２０卷１材料与方法１．１实验动物以ＩＣＲ系ＳＰＦ性成熟小鼠（购自北京实验动物中心）为实验动物。
雌鼠体重２９～３２ｇ，雄鼠体重３３～３５ｇ，雌雄分笼饲养在室温、自然光照、自由饮水的条件下，采用全价繁殖颗粒饲料饲养。
经７ｄ的适应性饲养后，按常规方法对雌鼠进行超数排卵处理。
１．２实验方法１．２．１阴道涂片法判断小鼠发情周期及外阴部特点的观察采用阴道涂片方法［２］对小鼠进行发情周期观察。
首先将小鼠保定，翻提起尾巴露出阴道口，观察外阴的变化并记录其特点。
然后右手持滴管吸少量生理盐水滴入阴道口，当稍放松尾部及腰部时，生理盐水即被吸入阴道，稍候三指轻压腰部，黏液随生理盐水流出，吸入滴管中，滴到载玻片上。
待稍干后用酒精（９５％）固定５ｍｉｎ，然后用伊红染液染色１５ｍｉｎ，随后冲片，干燥，镜检。
１．２．２外部观察法确定小鼠发情时期根据阴道涂片结果及小鼠在不同发情周期所表现出的外阴部特点，依次将其分为发情前期（实验１组）、发情期（实验２组）、发情后期（实验３组）、问情期（实验４组）４个实验组别。
发情周期未观察小鼠作为对照组。
１．２．３小鼠超数排卵［３３雌性小鼠于１９：００腹腔注射ＰＭＳＧ（天津实验动物中心，批号：０４３２９）１０ＩＵ／只，间隔４８ｈ腹腔注射ｈＣＧ（国营南京动物激素厂，批号：９８０１０９）１０ＩＵ／只，注射ｈＣＧ后即与公鼠按１：１合笼。
次日８：ｏＯ检查阴栓，凡阴门处有阴道栓，合笼后４７ｈ脱臼处死小鼠，获取２一细胞胚胎。
１．３数据统计采用卡方检验。
２实验结果２．１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点观察‘２３见表１和图１、图２。
表１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点图１不同发情时期阴道上皮细胞变化２．２不同发情周期小鼠超排效果由表２可知，（１）不同发情周期超排成功率，实验１组、２组和４组极显著高于３组和对照组（Ｐ＜ｏ．０１）。
（２）平均图２不同发情时期外阴部特征每组可用胚胎率，实验ｌ组、２组、４组与对照组无显著差异（Ｐ＞ｏ．０５），但与实验３组差异极显著（Ｐ＜ｏ．０１）。
SPF级小鼠超数排卵效果
以 供 应 ３５ｄ胚 胎 为 需 要 所 用 ， Ｓ Ｆ级 Ｋ 小 鼠使 用 ４～ｌ 周 龄 的 都 可 以 ； 外 ，Ｐ ． 而 Ｐ Ｍ ０ 另 ＳＦ级 小 鼠超 数 排 卵 处 理 仍 宜 在
维普资讯
２０ ０ ８年 ３月 第 ｌ卷 ８ 第 ３ 期
中 国 比较 医学 杂 志
Ｃ ＮＥ Ｅ Ｊ ＨＩ Ｓ ＯＵＲ ＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰ ＡＲＡＴ Ｖ Ｉ０ ８ Ｖ １ １ ＮＯ ３ Ｏ ．８ ．
ｓ ａｏ ｅ ｓ ｎ．Ｍ ｅ ｏ ￣ ｄ Ｗ ｅ ｇ ｖ ｕ ｒ ｖ ｌｔｏ ｒ ａｍｅ ｔｔ ａ ｅ ｓ ｐ ｏ ｕａ ｉｎ ｔｅ ｔ ｎ ｏ ＢＡＬＢ ／ ｎ ｅ ｃ ａ ｄ Ｋｍ ｃ ｅ ｒ ｍ ｏ １ ｅ ｓ ｉ ｐ ｎ ｓ ｍｍｅ ｄ ｍｉｅ ａ ｄ ｆｏ ４ ｔ ０ ｗｅ ｋ ｎ ｓ ｒ ｇ， ｕ ｇ ｉ ｒａ ｎ ｗｉｔｒｒｓ ｃｉｅｙ．Ｓｔｔｓｉｓ ｎ ｅ ｅｐ ｔ ｌ ｅ ｖ ａ ｉｔｃ ｗｅ ｄ ｎ ｂ ｓ ｄ ｏ ｈ ｒｔ ｆｖ ｇｉｌ ｐｕ ｄ ｏ ｕａ ｏ ｔ ｅ ｕ ｅ ａ ｄ ｈｅ ｙ ｏ ｍｂ ｏ ｅ ｒ ｏ ｅ ａｅ ｎ ｔ ｅ ａｅ ｏ ａ ｎａ ｌｇ ａ ｖ ｌｔ ｎ， ｈ ｎ ｍｂ ｒ ｎ ｔ ｔｐ ｎ ｉ ｅ ｆｅ ｒ ｙ ａ ｑ ｉ ｄ ｉ ａ ５．Ｒｅ ｕｌ Ｎｏ ｅ ｏ ｈｅ３ ｆｃｏｓｗｅ ｉｖ ｓｉａｅ ａ ｅａ ｆ ｃ ｎ ｔ ｅｒｔ ｆｖ ｉａ ｌｇ ｉ ｐ ｃｆ ａｈ ｇ ｎ ｃ ｕ ｒ ｎ ｄ ｙ３． ｅ ｓ ｔ ｎ ｆｔ ａ ｔｒ ｎ ｅ ｔ ｔ ｄ ｈ ｖ ｎ ｅ ｅ ｔｏ ｅｏ ａ ｎ ｐ ｕ ｎ ｓ ｅ ｉｃ ｐ ｔｏ ｅ — ｇ ｈ ａ ｇ ｌ ｉ ｆｅ ＡＬ ｃ ａ ｄ Ｋｍ ｃ ｒｅ Ｂ Ｂ／ ｎ ｍｉｅ．Ｏｔ ｅｗｉｅ ｔ ｓ ａ ｔｒ ｖ ｅｔｉ ｆｅ ｔｏ ｅｒｔ ｆｅ ｒ ｏｐ ｏ ｕ ｅ ｔｅ ｎ ｍｂ ｒａ ｅ ｔｐ ｈ ｒ ｓ ｈｅｅ ｆｃｏｓｈａ ｅａ ｃ ｒ ｎ ｅ ｃ ｎ ｔ ｅ ｏ ｍｂ ｒ ｄ ｃ ｄ， ｕ ｅ ｎｄ ｔ ｙ ａ ｈ ａ ｙ ｈ ｈ ｅ ｏ ｍｂ ｏ ｉ ｐ ｃ ｃｐ ｔｏ ｅ ｆｅ ｆｅ ｒ ｎ ｓ ｙ ｅ ￣ ａ ｇ ｎ—ｒ ｅＢＡＬ ／ ｎ ｈ Ｂ ｃａ ｄ ＫＭ ｃ ｍｉｅ．Ｃｏ ｃｕ ｉｎ Ｕｓｎｇｓ ｃ ｔｏ ｅ —ｒｅ ＢＡＬ ／ ｃ ｅ ｒ ｍ ｎ ｌｓｏ ｉ ｐ ￣ｃ ｐ ｈ ｇ ｎ ｆｅ ｅ ａ Ｂ ｃ ｍｉｅ ａ ｄ ｆｏ ９ ｇ ｔ ０ ｗｅ ｋ ｎ ｔｅ ｓ ｐ ｒｖ ｌｔ ｎ ｅ ｐ ｒｍｅ ｓ ｍａ ｉｅ ａ ｓｔｓ ｅ ｕ ｅ ｒｅ ｒｏ ｉ ａ ５， ｉｅ ｔｅ ｐ ｐ ｒａ ｅ ｏ ｏ １ ｅ ｓｉ ｕ ｈ ｅ ｏ ｕａｉ ｘ ｉ ｎｔ ｙ ｇｖ ａｉｆ ｄ ｎ ｍｂ ｍｂ ｎ ｄ ｙ ３． ｗｈｌ ｈ ｒ ｅ ｏ ｅ ｉ ｙ ｅ ｇ ｆＫｍ ｃ ｍｉｅ ｒ ｎ ｅ ｒ ｍ ｏ １ ｅ ｓ ａ ｇ ｓｆｏ ４ ｔ ０ ｗｅ ｋ ．Ａｌｏ， ｕ ｒ ｖ ｌｔ ｎ ｔｅ ｔ ｎ ｎ ｓ ｃ ｃｐａｈ ｇ ｎ ｆｅ ｃ ｈ ｕｄ ｂ ｏ ｅ ｉ ｐ ｎ ｒｓ ｓ ｓ ｐ ｏ ｕａｉ ｒ ａｍｅ ｔｉ ｐ ￣ ｔｏ ｅ —ｒ ｅｍｉｅ ｓ ｏ ｌ ｄ ｎ ｎ ｓ ｒ ｇ ｏ ｕｍｍｅ ， ｓｉ ｅ ｏ ｅ ｅ ｉ ｒ ａ ｔ ｃ ｕｄ ｇｖ ｏ ｎ ｅｕ ｔ ｏ ｌ ｉｅ ｙ ｕ ａ ｆ ｅ ｒｓ ｌ ． ｉ
小鼠超数排卵相关问题的探讨
小鼠超数排卵相关问题的探讨刘维俊;高珊;唐菲;张一云;刘牧;薛孝先【期刊名称】《黑龙江动物繁殖》【年(卷),期】2011(019)001【摘要】应用回顾性研究方法,对国内近年小鼠超排中遇到的若干相关问题进行研究和总结.研究探讨了小鼠超排的各个影响方面,包括:环境因素、供体雌鼠个体和遗传差异以及试剂等因素.比较了国内外不同试验室使用不同产品孕马血清(PMSG)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)对小鼠超排效果的影响.利用纯度不同的PMSG、hCG 进行小鼠超排试验,结果差异较大.延长超排后采集卵母细胞时间,可用成熟卵母细胞数量相对减少,且不利于体外受精.【总页数】9页(P1-9)【作者】刘维俊;高珊;唐菲;张一云;刘牧;薛孝先【作者单位】海南省药物研究所/海南省实验动物中心,海口市,570216;中国医学科学院,医学实验动物研究所,北京,100021;海南省药物研究所/海南省实验动物中心,海口市,570216;海南省药物研究所/海南省实验动物中心,海口市,570216;中国医学科学院,医学实验动物研究所,北京,100021;中国疾病预防控制中心,北京,100050;内蒙古大学,生命科学院,呼和浩特,010021【正文语种】中文【中图分类】S814.3【相关文献】1.周龄·初始注射时间对小鼠超数排卵的影响 [J], 巩雪洁;臧敦安;许文豪2.中国兔子超数排卵相关问题的研究(一) [J], 刘牧;高珊;孙井江;张建军;刘云波3.中国兔子超数排卵相关问题的研究(二) [J], 刘牧;高珊;孙井江;张建军;刘云波4.小鼠超数排卵和小鼠胚胎体外培养的研究 [J], 张春兰;侯健5.动物科学专业《小鼠超数排卵实验》开放式实验教学课程设计与实践 [J], 倪萌萌;赵佳福;陈祥;龚婷;李辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究
江丙农业学报2010，22(12)：144～146A c t a A g r i c uhu r ae J i an gxi小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究林峰，陈玉霞+，孙克宁，杨婷，田晓军(河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002)摘要：为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响，分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。
结果表明：子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0．01)，而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P< O．05)，两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P>0．05)，说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著，且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。
小鼠早期胚胎发育观察结果表明：超排处理后，在公母鼠合笼后76～79．5h采胚，胚胎大多处于桑椹胚期，而在公母鼠合笼后88～91．5h采胚，胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期；采用TC M l99+15％胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。
关键词：小鼠；超数排卵；早期胚胎；体外培养；冲胚方法中图分类号：Q132．8文献标识码：A文章编号：1001—8581(2010)12—0144—03St udy on E f f ect of Super ovul a t i on and i n vi t r o C ul t ur e of Ear l y Em br yo i n M ous eLI N Fe n g，C H E N Y u—xi a‘，SU N K e—ni ng，Y A N G Ti ng．T I A N X i ao—j u“(C ol l ege of A n i m a l H us ba ndr y a nd V et er i nar y M e di ci ne，H enan A矛c ul t ur al U ni ver si t y．Z he ngzhou450002，C hi na)A bs t r act：I n t hi s paper．t he e ffe c t of dif f erent m e t h ods of c o l l ec t i n g e m br yos on t he s uper ovul at i on of m i c e w a s s t udi ed，and t he e m br yos i n t he suoer ovul at ed m i Ce w er e coll ected by usi ng t he ut erus—m i nc i ng m e t ho d a nd ut er us—col l ect i ng m e t hod re s pec t i ve l y．ne r es ult s show e d t ha t t he aver age num ber of eggs and em bryos obt ai ned by t he ut er us—co l l ect i ng m e t ho d w er e,ext r em el y s ignif i ca ntl y hi gher(P<0．01)t han t hos e obt ai ned by t he ut e r us—m i nci ng m e t hod，an d t he aver age nu m ber of us abl e em bryos obt ai ned by t he u t e r r us—coll ect i ng m e t he d w强si gni f i cant l y hi gher(P<0．05)t han t ha t di d by t he ut erus—m i nc i ng m et hod．ne aver age num be r of an-fe r t i l i zed eggs obt ai ned by t hes e t w o m e t h ods w a s no t s ignif i cant ly di f f er e nt(P>O．05)．So t he s uper ovu l at i on e ffe c t of m i c e W a S s i g-nif i e ant lv i nnue nee d by t he m e t ho d of coll ect ing em bryos．T he obs er vat i on r es ult s of ear l y e m br yos de vel opm ent i ndi cat ed t hat m ost of t he em bryos coll ected76—79．5hour s aft er com bi ni ng cages w e r e at m or ul a s t age．w hi l e m os t of t}l e em bryos coll ected88～91．5 hour s a ft e r com bi ni ng cages w e r e a t com pa ct e d m or u l a s t a ge and bla s t o e yst s t ag e．I t W a S f eas i ble t ha t t he em bryos of m i c e w er e cul t i—vat ed i n vi t ro by usi n g t he m i xed s o l ut i o n of T C M l99and15％F C S．K e y w or ds：M ouse；Sup er ov ul at i on；E ar l y em br yo；I n vi t ro cul t ur e；M e t hod of coll ect ing em bryos雌性哺乳动物一生所产的卵子总数早在其胚胎发育形成卵巢的过程中已被确定，成熟卵子在成年后的发情周期中分别排出，但是单纯依靠动物的自然排卵，一方面所得到的卵母细胞数或胚胎数较少，另一方面又消耗大量的时间和浪费较多的动物．因此为了获取大最的胚胎，多采用超数排卵的方法，即利用外源性促性腺激素诱发多个卵泡同时发育并排出具有正常受精能力的卵子¨。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
几种对母鼠繁殖有作用的激素A
类别 下
名称
简称
激 激 GnRH
来源
化学特征 生理功能
丘 脑 部 激 素
素 素
素 素 素 OXT ,
作用
几种对母鼠繁殖有作用的激素B
促 性 腺 激 素
促卵泡素 促黄体素 GnRH LH 腺垂体 腺垂体 糖蛋白 糖蛋白
促使卵泡发育和成熟，促 进精子发生 刺激排卵，促进黄体生成， 促进雄激素和孕激素的分 泌 促进泌乳，对某些动物刺 激黄体功能和孕酮的分泌， 增强母性行为 与促卵泡素类似，促进马 属动物辅助黄体的形成
小鼠的超数排卵
不同激素对不同小鼠超排的影响研究
指导老师:刘云海
Hale Waihona Puke 10131乙于昊研究的理论依据
造成超排效果（获卵率和可用的胚胎数）不 稳定的因素主要有两大类：一类是动物因素， 包括个体和遗传的差异、生理和营养状态、 开始超排的日期、季节及其它影响动物的环 境因素；另一类是药物因素，包括激素的半 衰期、激素制剂中的FSH／LH比例、给药途 径、剂量和频率等。
目前的研究进展
参考文献
①杨文胜 倪和民等 母兔超数排卵方法的研究 实验动物 科学与管理 1996. 4 ②徐平 不同日龄与品系小鼠超排卵、体外受精及受孕率的 比较研究 中国实验动物学杂志 2001. 6 ③李秦等 不同激素对哺乳动物超数排卵作用的研究 实验动 物科学与管理 1997.3
实验方法
主要实验内容： 主要实验内容：
实验方法
主要研究方法 c.实验器械
一次性塑料培养皿、显微镜、灭菌手术器械（眼科剪、眼科镊）、？ml 无菌注射器、吸管等。 d.实验步骤 将小鼠分为A、B及对照组三组，A、B每组6只，对照组8只，A组腹腔注 射PMSG + hCG ,B组腹腔注射PSMG + PG F2α ，对照组不作任何处理。 这样的注射一般在每天下午四点左右进行。先注射PMSG（A、C组）、 FSH（B组），在44小时候后注射hCG (B组)和PG F2α（C组）,在注射 组 （ 组 后第二天上午约八点左右将前一天处理过得小鼠处死，打开小鼠腹腔， 取出输卵管及卵巢，撕裂输卵管壶腹部，将胚胎冲出，在显微镜下检查 胚胎、卵巢，计数、记录 。
研究的理论依据
动物的整个生殖活动都是受神经、激素控制的。生殖系统与 神经系统、内分泌系统之间形成一条中枢神经、下丘脑、垂 体、性腺轴。由于这条轴的作用，使动物的生命活动按照严 格的规律有条不紊的进行。中枢神经系统把外界环境刺激传 到下丘脑，使之分泌促性腺释放激素，促性腺释放激素作用 于垂体，促使垂体分泌促性腺激素，促性腺激素即作用于性 腺，使性腺分泌性腺激素。垂体激素可以通过反馈作用调节 下丘脑释放激素的分泌。同样，性腺激素也可以通过反馈作 用调节下丘脑和垂体释放相应的激素。 生殖激素是指与动物性器官、性细胞、性行为等的发生和发 育以及发情、排卵、妊娠、分娩和泌乳等生殖活动有直接关 系的激素。
以小鼠为研究对象，其腹腔注射 以小鼠为研究对象，其腹腔注射PMSG＋hC ＋ G、PMSG＋hCG或PG F2α比较几组注射后排 、 ＋ 或 卵的效果。 卵的效果。
主要研究方法： 主要研究方法：
实验所需要的材料：
a、实验动物：清洁级小白鼠30只 b、实验药品：一定量的孕马血清促性腺激素（PMSG）人类绒毛膜 促性腺激素 (hCG) 前列腺素F2a(PG F2α)需要产地明确。生理盐/水， 75%乙醇、PBS(自配）。
实验方法
实验结果
观察解剖小鼠的卵巢（包括大小、黄体数量） 和胚胎的质量及数量 对观察结果统计分析 比较各组观察结果，找出超排效果较好的一 组
实验讨论
感谢
刘云海老师的指导和大力帮助 袁海滨同学及其他实验室同学 的合作和帮助
促乳素
PRL
腺垂体
糖蛋白
孕马血清 促性腺激 素 人类绒毛 膜促性腺 激素
PMSG
马属动物尿囊绒 毛膜 灵长类胎盘绒毛 膜 子宫及其他
糖蛋白
hCG
糖蛋白
与促黄体素类似
其它
前列腺素
PG
脂肪酸
溶解黄体，促进子宫收缩
目前的研究进展
在目前，关于超数排卵已有一些研究。如杨文胜、倪和民① 等发现采用相同品种、月龄和体重的处女母兔进行超数排卵 试验, 过低或过高剂量的PMSG，显着降低母兔的超排效果， hCG剂量的提高，有助于提高排卵率，获得较多的胚胎。而 徐平②对不同品系及日龄小鼠的超排研究发现，用PMSG和 hCG分别对不同日龄（28日龄、56日龄及112日龄）的ICR、 B6C3F1及C57BL/6J三个品系超排处理后，28日龄小鼠的排 卵数高于56日龄及112日龄的排卵数（P＜0.01）。而这与 Yokoyama与朱士恩研究结果完全相同。在李秦等③研究中， 用PMSG、APMSG、hCG、LHRH等对大鼠、小鼠、豚鼠、 家兔、绵羊、猪、牛等的超排作用系统探索后发现，PMSG 和hCG各5～10IU可使小鼠产生稳定的超排，取卵数达 50±10个。