大肠杆菌菌株区别

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实用文档之大肠杆菌BL21和DH5α的区别

实用文档之大肠杆菌BL21和DH5α的区别

实用文档之"DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

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基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)
BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr
最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别
大肠杆菌DH5α做克隆或保存质粒用,BL21用来做原核表达用。

当然也有人用DH5α做表达也能表达出来。

也有人用BL21保存质粒的,但时间久了,质粒容易丢失。

你要是做原核表达的话,应该会现用前者克隆得到重组质粒,转化入后者进行表达。

大肠杆菌简介

大肠杆菌简介

大肠杆菌1、大肠杆菌是细菌,属于原核生物;具有由肽聚糖组成的细胞壁,只含有核糖体简单的细胞器,没有细胞核有拟核;细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。

4致病性质1、定居因子(Colonizationfactor,CF):也称粘附素(Adhesin),即大肠杆菌的菌毛。

致病大肠杆菌须先粘附于宿主肠壁,以免被肠蠕动和肠分泌液清除。

使人类致泻的定居因子为CFAⅠ、CTAⅡ(ColonizationfactorantigenⅠ、Ⅱ),定居因子具有较强的免疫原性,能刺2、黏附素能使细菌紧密黏着在泌尿道和肠道的细胞上,避免因排尿时尿液的冲刷和肠道的蠕动作用而被排除。

大肠杆菌黏附素的特点是具有高特异性。

包括:定植因子抗原〡,大肠杆菌〢,〣;集聚黏附菌毛〡和〣;束形成菌毛;紧密黏附素;P菌毛;侵袭质粒抗原蛋白和Dr菌毛等。

肠产毒性大肠杆菌的有些菌株只产生一种肠毒素,即LT或ST;有些则两种均可可产生。

有些致病大肠杆菌还可产生vero毒素。

5、其他:胞壁脂多糖的类脂A具有毒性,O特异多糖有抵抗宿主防御屏障的作用。

大肠杆菌的K抗原有吞噬作用。

病原体大肠杆菌O157:H7是大肠杆菌的其中一个类型,该种病菌常见于牛只等温血动物的肠内。

这一型的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素,并可能导致肠管出现严重症状,如带血腹泻。

大肠杆菌血清学分型基础(即其抗原)大肠埃希菌主要有三种抗原:O抗原,为细胞壁脂多糖最外层的特异性多糖,由重复的多糖单位所组成。

该抗原刺激机体主要产生IgM 类抗体(出现早,消失快)。

K抗原,位于O抗原外层,为多糖,与细菌的侵袭力有关。

K 抗原分为A,B,L三型。

H抗原,位于鞭毛上,加热和用酒精处理,可使H抗原变性或丧失。

H抗原主要刺激机体产生IgG类抗体,与其他肠道菌基本无交叉反应。

表示大肠杆菌血清型的方式是按O:K:H排列,例如:O111:K58(B4):H25危害程度认知:大肠杆菌是原核生物,构造相对简单,遗传背景清晰,培养操作容易,因此也常常被作为基因工程的对象加以利用:研究者常常将外源基因导入质粒,将质粒整合入大肠杆菌基因,这样,大肠杆菌就能够表达基因重组后的蛋白(例如胰岛素,某些疫苗等)了。

比对序列的菌株信息

比对序列的菌株信息

比对序列的菌株信息序言:在生物学领域中,比对序列是一项重要的技术。

通过比对不同菌株的基因序列,我们可以了解它们之间的相似性和差异性。

本文将介绍比对序列的菌株信息。

一、什么是比对序列?比对序列是指将两个或多个生物体(如不同菌株)的DNA或RNA序列进行比较和分析的过程。

通过比较这些序列,我们可以了解它们之间的相似性和差异性,并推断它们之间可能存在的进化关系。

二、为什么需要进行比对序列?1.了解基因组结构和功能通过比对不同菌株的基因组,我们可以了解它们之间基因数量、排列顺序、功能等方面的差异。

这有助于我们深入理解生物体内部结构和功能。

2.推断进化关系通过比较不同菌株基因组中同源基因(homologous genes)的变化情况,我们可以推断它们之间可能存在的进化关系。

这有助于我们了解生物体演化历程。

3.研究疾病发生机制通过比对正常人和患者基因组中某些特定区域(如SNP)的差异,我们可以了解这些区域与疾病发生的关系。

这有助于我们深入理解疾病发生机制,为疾病治疗提供依据。

三、如何进行比对序列?1.选择合适的比对工具当前比对序列的常用工具包括BLAST、ClustalW、MAFFT等。

在选择比对工具时需要考虑数据量、精度等因素。

2.获取序列数据获取不同菌株的基因组序列数据,可以通过NCBI等公共数据库或自行测序获得。

3.进行比对将不同菌株基因组序列输入到比对工具中,进行比对分析,并生成结果报告。

四、比对序列的菌株信息下面以大肠杆菌为例,介绍其不同菌株基因组的比对情况。

1.大肠杆菌O157:H7和K12基因组的比对大肠杆菌O157:H7是一种致病性菌株,而K12则是一种非致病性菌株。

它们之间基因组存在较大差异。

通过比对它们的基因组序列可以了解它们之间的差异和相似性。

2.大肠杆菌O157:H7和CFT073基因组的比对大肠杆菌O157:H7和CFT073都是致病性菌株,它们之间基因组存在一定相似性。

通过比对它们的基因组序列可以了解它们之间的相似性和差异性。

大肠杆菌的名词解释

大肠杆菌的名词解释

大肠杆菌的名词解释大肠杆菌(Escherichia coli)是一种常见的细菌,是一种革兰氏阴性杆菌,属于肠道菌群中的重要成员。

大肠杆菌在人和动物的肠道内普遍存在,并且一般情况下对人体是无害的。

然而,某些菌株的感染会导致一系列疾病,从轻微的腹泻到严重的泌尿系统感染和败血症。

大肠杆菌具有多种不同的菌株,其中一些菌株与人体健康密切相关,如肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,简称ETEC),会引起旅游者腹泻;而其他菌株则与食物中的致病性大肠杆菌(Enteropathogenic E. coli,简称EPEC)或与泌尿系统感染相关的大肠杆菌(Uropathogenic E. coli,简称UPEC)有关。

大肠杆菌的名称源自于奥地利医生Theodor Escherich,在1885年首次发现这种菌株,并以自己的名字命名。

这种菌株最初是通过研究婴儿粪便发现的。

大肠杆菌的特点是它能够在温和而富含养分的环境中生长,并且以产生酪氨酸酶为特征,这种酶能够分解乳糖,使得大肠杆菌能够利用乳糖作为碳源。

大肠杆菌在人和动物的肠道中起着非常重要的生态角色。

它帮助消化食物,促进维生素和蛋白质的合成,还可以保护宿主免受一些致病菌的侵害。

此外,大肠杆菌还可以产生维生素K,这是一种重要的血凝促进剂。

大肠杆菌对肠道内细菌群的平衡具有重要影响,一旦肠道菌群失衡,可能会导致各种健康问题。

然而,一些大肠杆菌的菌株会导致感染。

这通常发生在摄入了被污染的食物或水后。

一旦这些致病性大肠杆菌进入人体,它们可以通过附着于肠道上皮细胞而引发感染。

常见的症状包括腹泻、恶心、呕吐、腹痛和发热。

一般情况下,这些症状是轻微的,可以在几天内自愈。

然而,对于免疫系统较弱或消化系统异常的人群,感染可能导致严重并发症,如血尿和溶血性尿毒症综合征。

因为大肠杆菌感染的常见途径是通过食物和饮用水,所以正确的食品和卫生处理对于预防感染非常重要。

肠杆菌科细菌归纳总结

肠杆菌科细菌归纳总结

肠杆菌科细菌归纳总结肠杆菌科(Enterobacteriaceae)是一类常见的革兰氏阴性菌,它包括了许多与人类和动物相关的致病菌,同时也包括了许多与环境和食品卫生相关的菌株。

肠杆菌科细菌的特点是在普通培养基上能够产生气体,并且在革兰染色中呈现棒状。

1. 肠杆菌属(Enterobacter)肠杆菌属是肠杆菌科中的一个重要属,常见的菌株包括粪肠杆菌(Enterobacter cloacae)和黄色肠杆菌(Enterobacter aerogenes)等。

这些菌株广泛存在于土壤、水体以及人及动物的肠道中,有些种类具备耐药性,并且可能引发医院感染。

2. 大肠杆菌属(Escherichia)大肠杆菌属是肠杆菌科中的另一个重要属,其中最著名的是大肠杆菌(Escherichia coli),它一般存在于人和动物的肠道中。

大肠杆菌是一种常见的致病菌,可以引起腹泻、尿路感染等疾病。

此外,某些大肠杆菌菌株还产生毒素,如致命的肠毒性大肠杆菌产生的毒素可以引起严重的食物中毒。

3. 鲍曼不动杆菌属(Klebsiella)鲍曼不动杆菌属是肠杆菌科中的另一个重要属,常见的菌株包括肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)等。

这类菌株是常见的医院感染病原菌,可以引起肺炎、尿路感染以及败血症等严重疾病。

而产超强粘多糖的黏质性肺炎克雷伯菌更是具有高度的传染性和致病性,是医疗环境中的重要威胁之一。

4. 沙门氏菌属(Salmonella)沙门氏菌属是肠杆菌科中的一类重要致病菌,它包括众多血清型,其中一些血清型可以引起食物中毒和沙门氏菌感染。

这些菌株主要存在于动物及其产品中,比如家禽、牛奶和蛋等。

如果不注意食品的卫生状况,摄入被污染的食物可能导致人体感染引起胃肠炎等症状。

5. 艰难梭菌属(Clostridium)虽然肠杆菌科主要是指肠道相关的菌属,但在其中也包括一些与人体肠道无关或者少数与肠道关联不紧密的菌株。

艰难梭菌属是其中之一,该属的细菌广泛存在于土壤和水体中。

大肠杆菌

大肠杆菌
该方法主要过程:加入10mL左右的无菌水于滤器中,然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁,再进行过滤, 将滤膜放在M-FC培养基中,两者之间不能够有气泡,然后进行密封,存放温度为44.5℃,存放时间约24h,直到 大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。然后记录数据,估算每一单位的水溶液菌群数量,然后进行大肠杆菌量值的 换算 。
检测方法
食品中的大肠杆菌进行快速准确的检测已成为了人们经常**的问题。下面阐述食品中的大肠杆菌检测的方法 及分析 。
这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养,该培养基含有荧光底物,需要培养24h。然后 对荧光底物进行释放,需要采用葡萄糖醛酸进行,让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。采用这样的方式方 法,还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等 。
目前国际公认的分类,主要有六个种类的大肠杆菌,即能够致使胃肠道感染的肠道致病性的大肠杆菌 (EPEC)、肠道产毒素性的大肠杆菌(ETEC)、肠道侵袭性的大肠杆菌(EIEC)、肠道出血性的大肠杆菌 (EHEC)、肠集聚性的大肠杆菌(EAEC)以及近年来发现的肠产志贺样毒素同时具有一定侵袭力的大肠杆菌 (ESIES),另外,还有能够致使尿道感染的尿道致病性的大肠杆菌(UPEC),以及最新命名的肠道集聚性的黏 附大肠杆菌(EAggEC) 。
用无菌吸管吸取稀释度样品1mL,该样品与乳糖胆盐发酵类似,然后将其放入无菌培养皿中,再加入温度于 45℃下的CDLJJD显色培养基中10mL的量,并进行培养皿中溶液均匀混合,可以通过快速转动培养皿的方式,等溶 液凝固以后,加入5mL左右 ,然后快速摇晃培养基,使其可以均匀覆盖平板表面,等其凝固以后,翻转培养基, 在温度37℃中培养24h左右,然后观察其形态,颜色等变化。

大肠杆菌dh5a菌株特征

大肠杆菌dh5a菌株特征
大肠杆菌DH5α(Escherichia coli DH5α)是一种广泛应用的
实验室菌株,具有许多特殊的特征和优势。

这种菌株最初是由Messing 在1975年从K12菌株中构建而成,并被广泛应用于分子生物学、生物
工程和基因工程领域中。

下面将介绍DH5α菌株的主要特征。

1. 基因型
DH5α菌株基因型为F-Φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169, recA1, endA1, hsdR17(r_K-, m_K+), supE44, thi-1, gyrA96, relA1。

其中,F-表示此菌株没有细菌质粒F,邻苯二酚酶基因lacZ为突变型,可以
实现蓝白斑点筛选,endA1表示此菌株缺失限制酶endonuclease I的
基因,可以有效防止质粒DNA的降解等等。

2. 生长特性
DH5α菌株可以在常规的LB(Luria-Bertani)平板和液体培养基上正
常生长,并且生长速度较快。

此外,DH5α菌株的细胞形态规则、菌落外观整齐,易于操作,比其他大肠杆菌菌株更加稳定。

3. 转化效率
DH5α菌株的常规转化效率较高,通常可达到10的6到10的8次方CFU/μgDNA,因此非常适合质粒转化、基因克隆以及DNA测序等实验
操作。

4. 可重复性
DH5α菌株经过多次冻存和复苏,仍然能够保持其稳定性和表型特征,并且不会出现不同批次之间表型差异较大的情况。

综上所述,大肠杆菌DH5α菌株具有较好的稳定性和易于操作的
特点,被广泛应用于各种实验室研究中。

然而,在使用DH5α菌株时,也需要严格遵守实验室安全操作规程,确保实验室安全和健康。

常用大肠杆菌感受态JM109-DH5a-BL21等的区别(1)

【引用】常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别生命科学2011-03-31 14:48:42 阅读80 评论0 字号:大中小订阅本文引用自xxrrzq《常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别》1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

大肠杆菌BL21和DH5α的区别

⼤肠杆菌BL21和DH5α的区别DH5a是⼀种常⽤于质粒克隆的菌株。

E.coli DH5a在使⽤pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。

可⽤于蓝⽩斑筛选鉴别重组菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1BL21(DE3) 菌株该菌株⽤于⾼效表达克隆于含有噬菌体T7启动⼦的表达载体(如pET系列)的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染⾊体上。

该菌适合表达⾮毒性蛋⽩。

基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低⽬的基因的背景表达⽔平,但不⼲扰⽬的蛋⽩的表达。

该菌适合表达毒性蛋⽩和⾮毒性蛋⽩。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别⼤肠杆菌DH5α做克隆或保存质粒⽤,BL21⽤来做原核表达⽤。

当然也有⼈⽤DH5α做表达也能表达出来。

也有⼈⽤BL21保存质粒的,但时间久了,质粒容易丢失。

你要是做原核表达的话,应该会现⽤前者克隆得到重组质粒,转化⼊后者进⾏表达(此⽂档部分内容来源于⽹络,如有侵权请告知删除,⽂档可⾃⾏编辑修改内容,供参考,感谢您的配合和⽀持)编辑版word。

什么是大肠杆菌

大肠杆菌(学名:Escherichia coli,通常简写:E. coli)是人和动物肠道中最著名的一种细菌,主要寄生于大肠内,约占肠道菌中的1%。

是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。

除某些菌型能引起腹泻外,一般不致病,能合成维生素B和K,对人体有益。

其属名埃希氏菌(Escherichia)来源于其发现者Theodor Escherich。

1885年当Escherish尝试找出霍乱之病原时,该学者分离出大肠杆菌,最初命名为Bacterium coli commune。

大肠杆菌是肠杆菌科的一员,经常作为细菌的模式生物广泛用于科学研究。

每个人每天平均从粪便中排出1011到1013个大肠杆菌。

各种粪便细菌和类似的生活在土壤或植物降解物中的细菌(最常见的是产气肠杆菌,学名Enterobacter aerogenes)一起被归为“大肠杆菌群”(coliform)。

大肠菌群为好氧细菌或兼性厌氧菌[来源请求],不形成内孢子,大肠杆菌群可在胆盐存在下生长,革兰氏阳性菌则否,该菌群可以利用乳糖并产气,这个特性可以用来当概略性菌群的判定基础,因为大肠杆菌群容易培养,而且容易跟其他菌分辨,所以是理想的指标菌,除非有特别的异形菌存在增加鉴定的困难度外,异常的乳糖发酵代表卫生可能有问题[1]。

在水净化和污水处理领域,因大肠杆菌在粪便中数量极多,故常用为检查水源是否被粪便污染的标志,其测量标准为大肠菌群指数。

此外大肠杆菌多数情况下无害,不会从实验室“逃脱”而伤害人类。

利用大肠杆菌作为粪便污染的指示物也可能产生误导性的结论,因为其它环境如造纸厂中,大肠杆菌也可大量存在。

然而一般无害的大肠杆菌在以下三种情况下也会导致疾病:1.当细菌离开肠道进入泌尿道可以导致感染,由于性交会导致细菌进入膀胱,有时被称作“蜜月膀胱炎”。

尿路感染尽管对女性更为普遍,但两性都可能发生。

老年中发病男女比例大体相同。

因为细菌总是通过尿道进入泌尿系统,厕所的不卫生会升高感染概率,但其它因素也很重要(如女性怀孕,男性前列腺肥大),还有一些原因不明。

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JM109,DH5a,BL21这些感受态有何区别
1:DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与
载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,
mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
2:BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7
噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非
毒性蛋白。
基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3)
3:BL21(DE3) pLysS菌株

该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降
低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋
白。
基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr
4:JM109菌株

该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载
体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷
酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’
5:TOP10菌株

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC), φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74, recA1 ,
araΔ139Δ(ara-leu)7697, galU ,galK ,rps, (Strr) endA1, nupG
6:HB101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,
xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1
M110或 SCS110
大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌
呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用
的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.
部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内
切酶说明中均有说明。
大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI, BclI等。而且甲基化只发生
在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化。
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:
(1)选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影
响;
(2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coli JM110和链霉菌等,前者
Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的 DNA

就能被上述酶切割。
E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110
如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化.
各种感受态细胞的区别 用途 特征
Xl1-Blue菌株

基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘ hsdR17(rK- mK+)。
特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。
用途:分子克隆和质粒提取。
BL21(DE3)菌株

基因型:F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 )。
特点:该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌
体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染
色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达。
BL21(DE3)ply菌株

基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。
特点:该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶
能够降低目的基
因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达
DH5α菌株

基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15
Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ–
特点:一种常用于质粒克隆的菌株。 其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的
β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和 endA1的突变有利于克隆
DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
JM109菌株

基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14-
hsdR17(rK-mK+)。

特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

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