刚地弓形虫_遗传筛选与DHFR_TS相连的融合蛋白
刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因编码蛋白主要特性与抗原表位的生物信息学分析
Ｃ ． Ｈ Ｎ ２ （ ） Ｓ 。 ， 分 子 质 量 单位 为 ３ ３ ７ ７ ７ ． ５ ， 等 电 点为 ６ ． ０ １ ， 波长 ２ ８ ０ ｎ ｍ 时的吸光度（ Ａ） 值为 ０ ． ３ ６ ４ ， 半衰期为 ３ ０ ｈ ， 有 ９ 个 表 面 可及 性参 数≥ １ ． ９的 区域 、 ４个 亲 水 性 参 数 得 分≥ １ ． ９的 区域 、 ７个 柔 韧 性 参 数 得 分 ≥ ２的 区域 、 １ ４个 翻 译 后 修 饰 位 点 和 １ ４个 潜 在 抗 原 表位 ， 为 可 溶 性 表 达 蛋 白。 结论 为 弓形 虫 病 疫 苗 候 选 抗 原 。 Ｔ ｇ ＭＤ Ｈ 基 因编 码 蛋 白为 可溶 性 蛋 白 ， 有 多个 抗 原 表 位 ， 具有免疫原 性， 可 作
刚地 弓形 虫 苹 果酸 脱 氢酶 基 因编 码 蛋 白主 要 特 性 与抗原表位 的生物信 息学分析
刘转 转 ， 杨 燕萍 ， 郑葵 阳 ， 刘 宜 升
摘 要 ： 目的 用 生 物 信 息 学 方 法 分 析 刚地 弓形 虫苹 果 酸 脱 氢 酶 （ Ｔ ｇ ＭＤＨ） 基 因 编 码 蛋 白的 结 构 与抗 原 表 位 ， 预 测 该 蛋
ＡＢＳ ＴＲＡＣＴ ： Ｔｈ ｅ ｉ ｍｍ ｕ ｎｏ ｇｅ ｎｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｏｆ ｔ ｈｅ ｍａ ｌ ａ ｔ ｅ ｄｅ ｈｙｄ ｒ 。 ｇｅ ｎａ ｓ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏｍ Ｔｏ ａ ＇ ｏ ｐｌ ａｓ ｍａ ｇｏ ｎ ｄｉ ｉ（ ＴｇＭ Ｄ Ｈ ）ｗ ａ ｓ ｐｒ ｅ ｄｉ ｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｎｄ ｉ ｔ ｓ ｓ ｔ ｒ ｕｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ａ ｎｄ ｅ ｐｉ ｔ ｏ ｐｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｚ ｅ ｄ ｂｙ ｂｉ ｏｉ ｎ ｆ ｏｒ ｍａ ｔ ｉ ｃ ｓ ａ ｐｐ ｒ ｏａ ｃ ｈ ｅ ｓ ． Ｔｈｅ ｏ ｐｅ ｎ ｒ ｅ ａ ｄｉ ｎｇ ｆ ｒ ａ ｍ ｅ， ｐｈ ｙｓ ｉ ｃ ｏ
刚地弓形虫肌动蛋白profilin的原核表达和纯化
刚地弓形虫肌动蛋白profilin的原核表达和纯化李会敏;伊焕发【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(043)006【摘要】目的:探讨刚地弓形虫肌动蛋白profilin(TgPRF)的原核表达体系和纯化条件,为后续的抗肿瘤免疫佐剂研究提供依据.方法:以弓形虫RH株速殖子的cDNA为模板,采用一对特定的引物扩增TgPRF基因的编码区.PCR产物双酶切后克隆入pET28a(+)载体中.重组的pET28a(+)-TgPRF质粒转化E.coli DH5α感受态细胞.双酶切鉴定阳性克隆,并选取测序正确的质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌,经IPTG 诱导表达4 h,SDS-PAGE法检测TgPRF蛋白的表达,Western blotting法检测重组蛋白His-prolilin的表达.结果:PCR扩增产物长度为492 bp.经双酶切和测序,重组质粒pET28a-TgPRF连接产物构建成功.SDS-PAGE检测,目的蛋白在超声菌液的上清中表达.经Ni-NTA琼脂糖凝胶柱纯化,获得纯化的TgPRF蛋白(纯度>90%).Western blotting检测,重组TgPRF蛋白能被Anti-His抗体识别.结论:成功构建重组质粒pET28a-TgPRF,并实现可溶性原核表达.%Objective:To discuss the prokaryotic expression system and purification conditions of Toxoplasma gondii profilin-like protein (TgPRF), and to provide basis for the study on anti-tumor immuno-adjuvant. Methods:The coding region of TgPRF gene was amplified with a pair of specific primers which were designed according to the cDNA of tachyzoites of Toxoplasma gondii RH strain.The PCR products were cloned into the pET-28a (+ ) vector after double enzyme digestion. The recombinant pET28a (+ )-TgPRF plasmidwas transformed into E.coli DH5αcells.The positive clones were selected by the double restrictive enzyme digestion and sequencing.The correctpET28a (+)-TgPRF plasmid was transformed into E.coli BL21 (DE3)and induced for 4 h by IPTG.The expression of recombinant TgPRF protein was analyzed by SDS-PAGE method;the expression of recombinant protein His-profilin was detected by Western blotting method.Results:The length of product of PCR was 492 bp.The recombinant plasmid pET28a-TgPRF was confirmed by double restriction enzyme digestion and sequencing.The SDS-PAGE results showed that the target protein was expressed in E.coli BL21 (DE3)in bacteria supernatant.The purified TgPRF protein was obtained by Ni-NTA agarose gel column chromatography with the purity>90%.The Western blotting results revealed that the recombinant TgPRF protein could be recognized by Anti-His antibody.Conclusion: The recombinant plasmid pET28a-TgPRF is successfully constructed,and the TgPRF protein is obtained with the soluble prokaryotic expression.【总页数】6页(P1109-1114)【作者】李会敏;伊焕发【作者单位】吉林大学第一医院转化医学研究院移植免疫实验室,吉林长春130021;吉林大学第二医院检验科,吉林长春 130041;吉林大学第一医院转化医学研究院移植免疫实验室,吉林长春 130021【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.刚地弓形虫肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白家族的研究进展 [J], 李润花;李雅清;殷国荣2.牛骨骼肌G-肌动蛋白的分离纯化及超高压处理对G-肌动蛋白的影响 [J], 王志峰;王媛;李金柱;包·格日勒图3.人β肌动蛋白基因原核表达载体的构建及其表达和纯化 [J], 宋烨琼;郭靖;徐小洁;李玲;梁迎春;洪甜;纪贝贝;叶棋浓;吕朝晖4.橡胶树肌动蛋白解聚因子原核表达及纯化 [J], 邓治;杜磊;李德军5.刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆与表达 [J], 李润花;郝海霞;王海龙;孟晓丽;申金雁;殷国荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究》
《刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究》一、引言刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种重要的胞内寄生虫，其感染范围广泛，对人类和动物健康构成严重威胁。
随着生物技术的进步，核酸疫苗作为一种新型的疫苗形式，因其高效、安全、易于制备等优点，逐渐成为抗寄生虫病研究的热点。
本研究旨在构建刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗，并对其与SAG1蛋白的联合免疫保护性进行比较分析，为进一步研发更有效的刚地弓形虫病防治方法提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料刚地弓形虫SRS29C基因序列、SAG1基因序列、相关酶、载体等。
2. 方法（1）SRS29C核酸疫苗的构建：根据SRS29C基因序列设计引物，通过PCR扩增目的基因，将目的基因克隆至真核表达载体，构建SRS29C核酸疫苗。
（2）SAG1蛋白的制备：通过基因工程方法表达SAG1蛋白，并进行纯化。
（3）免疫保护性比较研究：将动物分为不同组别，分别接种SRS29C核酸疫苗、SAG1蛋白疫苗以及联合接种，观察各组动物的免疫反应及对刚地弓形虫感染的抵抗力，比较SRS29C与SAG1的联合免疫保护性。
三、实验结果1. SRS29C核酸疫苗的构建成功通过PCR扩增、克隆至真核表达载体等步骤，成功构建了SRS29C核酸疫苗。
2. SRS29C与SAG1的免疫保护性比较（1）单独接种SRS29C核酸疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力有所提高，但效果有限。
（2）单独接种SAG1蛋白疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力明显提高，但免疫反应较强，可能出现一定程度的副作用。
（3）联合接种SRS29C核酸疫苗与SAG1蛋白疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力显著提高，且免疫反应较为温和。
四、讨论本研究成功构建了刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗，并通过比较其与SAG1蛋白的免疫保护性发现，联合接种SRS29C核酸疫苗与SAG1蛋白疫苗可显著提高动物对刚地弓形虫感染的抵抗力，且免疫反应较为温和。
刚地弓形虫蛋白质分拣定位与功能研究概述
白还 可 以 和 棒 状 体 蛋 白 Ｒ ２和 Ｒ ４相 互 结 ０Ｐ ０Ｐ 合［ 。所 以， 某种意 义上讲 ． ４ 弓形 虫在入 侵宿 ４ 一 从 冈地 主细胞 时 只是 暂 时将 自身蛋 白释 放 到宿 主细胞 浆 ，
地 弓 形 虫 具 备 精 密 而 复 杂 的 细 胞 入 侵 、 胞 内 分 裂 细
和逸 出机制 。在这 ３个 过程 中 ， 地 弓形 虫 的 各种 刚 蛋 白质起着 举足 轻 重 的作 用 。因 此 ， 刚地 弓形 虫 的 蛋 白质合成 、 分拣 和 分泌 机 制逐 渐 成 为 寄生 虫 学研
文献 标 识 码 ： Ａ
文 章 编 号 ： ５ ９６ ０ （ ０ ０ ｌ 一 ０ ８０ ０ ２～０ ５ ２ １ ） ｌ ４ ２ ０
刚 地 弓形 虫 （ ： ｐｌ ｓ ｏ ｄ ｉ 是 一 种 专 性 Ｔｏｃ ａ ｍａ ｇ ｎ ｉ ） ｏ
的研 究 就 证 明 ， ＯＰ Ｒ １的 蛋 白 前 体 片 段 对 它 向 棒 状
状 体 和 致 密 颗 粒 ３种 细 胞 器 中 的 蛋 白 质 经 核 糖 体 合
成 后都要 通过信 号肽 识 别 进入 内质 网 ， 在 高 尔 基 并 体 完成加 工修饰 ， 终 定位 到虫 体 的不 同部 位 。研 最
究 发 现 ， Ｉ 定 的 蛋 白 （ Ｓ Ｇｓ 通 过 组 成 型 分 ＧＰ 一 锚 如 Ａ ）
主 细 胞 浆 中 ， 时 形 成 一 个 不 含 虫 体 的 空 泡 结 构 同 （ｖ ｃ ｏｅ ） ｅａ ｕ ｌｓ 。与 带 虫 空 泡 相 似 ， 种 泡 状 结 构 同 样 这
对 弓形 虫体 内蛋 白早期分 泌路径 进行分 析后发 现， 弓形虫对 组成 型及 调 节 蛋 白分 泌 的分 拣 机 制 与 高 等真核 细胞 具 有 多重 类 似点［ 。定 位 到微 线 、 １ 棒
刚地弓形虫：遗传筛选与DHFR—TS相连的融合蛋白
２０ ０ ２年 ５月
第 ２ ９卷
第 ３期
正 在 发 生 的 混 合 型 Ｔｈ ／ ２反 应 可 能被 “ ｌＴｈ 重 设 定 ” 完 全 的 细 胞 介 导 的 １ｈ 反 应 。 为 、ｌ
（ 杨 彬摘 官 亚 宜校 ）
台 受 体 是 树 脂 中 的 肝 素成 份 。
于 Ｄ Ｒ 内 包 含 ２ 个 氨 基 酸 突 变 的 ＨＦ ＤＨＦ Ｒｍ２ 一 Ｓ， 有 高 水 平 的 乙 胺 嘧 啶 抗 ｍ３ ＂ 具 Ｉ 性 ， 此 已作 为 多种 转 染 载 体 的 阳性 选 择 标 因 记 。ＤＨＦ ＴＳ的 活 性 功 能 区 在 不 同 虫 种 之 Ｒ． 间 具 有 高 度 保 守 性 ， 是 ， 同虫 种 的 ｛ Ｒ 但 不 Ｆ 和 ＴＳ的 衔 接 区 域 之 间 的 同 源 性 很 低 ， 测 推 此 衔 接 区 主 要 起 连 接 ＤＨ ＦＲ 和 ＴＳ的 作 用 。 据 此 ， 者 通 过 将 编 码 Ｆ ＡＧ 多 肽 的 ＤＮＡ 作 Ｌ 片 段 定 向 克 隆 到 Ｄ Ｒ 和 ＂Ｓ的 衔 接 区 域 ， ＨＦ Ｉ 构 建 了 一 个 新 的 转 染 载 体 Ｄ Ｒｒ２ ａ． ＨＦ ｎ ｎ３
基 酸 的 ＤＮＡ 片 段 （ ＲＡＩ ． １ ） （ ＲＡ ２ ． Ｓ ７ １ ０ 和 Ｓ ２ ７
不 同的各种 未 标 记 聚糖 进行 竞 争性 实验 ， 表
明该 结合也 具有特 异性 。 当速 殖 子 与肝 素 于 ３ ℃ 共 同 孵 育 后 ， ７ 荧
光 很 快 集 中为 较 大 的 光 点 ， 随着 时 间 延 长 ， 并
该 结 合 具 有 可 饱 和 性 。用 结 构 和硫 酸 化 程 度
为 验 证 此 载 体 能 否 快 速 、 定 表 达 对 寄 稳 生 虫 本 身 有 毒 性 的 外 源 基 因 的 预 测 ， 者 选 作 择 恶 性疟原虫 丝 氨 酸重 复 抗原 （Ｅ Ｓ ＲＡ） 为 作 外 源 基 因 。 Ｓ ＲＡ 氨 基 末 端 的 Ｓ ４ Ｅ Ｅ ７区 域 能 诱 导产 生 抗 体 从 而 抑 制 寄 生 虫 的 发 育 ， 有 现 刚 地 弓形 虫 表 达 系 统 均 未 能成 功 短 暂或 稳 定 表 达 Ｓ ＲＡ 功 能 区 。 作 者 首 先 将 编 码 Ｓ ＲＡ Ｅ Ｅ 氨基 末端 １ ７—１０和 羧 基 末 端 ２ ７—３ ２氨 ｌ ２ ５
刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用
刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用谭峰;华倩倩;李星潘;李相志;梁韶晖【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2014(32)2【摘要】目的制备、评价特异性抗刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白8(autophagy protein 8,TgAtg8)多克隆抗体。
方法生物信息学方法分析弓形虫基因组中自噬相关蛋白的基因序列和氨基酸序列。
以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgAtg8编码基因,克隆入pGEX-6p-1载体,构建pGEX-6p-1-TgAtg8重组质粒,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21。
异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签亲和层析法纯化表达产物。
以纯化的TgAtg8蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,获得特异性抗TgAtg8多克隆抗体。
以制备的多克隆抗体作为一抗,进行Western blotting分析和间接免疫荧光(IFA)检测。
结果双酶切和测序结果证实,原核表达质粒pGEX-6p-1-TgAtg8构建成功。
SDS-PAGE和Western blotting结果表明,TgAtg8蛋白在E.coli BL21中获得高效表达,其融合蛋白相对分子质量(Mr)约40 000,与理论值相近。
Western blotting结果证实,所制备的多克隆抗体能特异性识别融合蛋白TgAtg8和虫株体内天然的TgAtg8蛋白。
IFA实验表明,TgAtg8均匀分布于虫体胞浆中,但在自噬诱导培养后,TgAtg8逐渐聚集成颗粒状。
结论制备的特异性抗TgAtg8多克隆抗体可用于检测虫体内TgAtg8蛋白在弓形虫自噬形成过程中的变化情况。
刚地弓形虫ppt课件
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17
（一） 致病阶段：
速殖子（急性期），包囊（慢性期）
（二） 致病机制：
1、虫体毒力： 1）弓形虫毒素：是一种免疫原形不强的抗原，接种 到健康小鼠可引起惊厥和后肢麻痹，几分钟后死亡。 2）弓形虫素：由弓形虫体提取。对鸡胚有明显致畸 作用，可能与胚胎发育异常有关。 3）弓形虫因子：由弓形虫培养液中提取，将其注入 健康小鼠体内，小鼠出现懒动内、耸毛，体重减轻， 肝脾肿大，胸腺委缩。注入小鼠，可阻止母鼠受孕， 或引起流产，中枢神经系统受损等。
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32
五、流行与防治
（Epidemic & prevention)
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33
1、 分布：
本病呈世界性分布，血清学调查人群抗体阳性率为 25%～50%，全球约有10亿人受感染，多属隐性感染。且 为为人兽共患寄生虫病，家畜感染率亦高。
我国血清调查人群感染率为5±％，家畜10－50％， 我省11％±（均为人群抗体阳性率）。
刚地弓形虫
（Toxoplasma gondii)
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1
引言（introduction)
1908 年 法 国 学 者 Nicolle 在 突 尼 斯 的 一 种啮齿动物刚地梳趾鼠的肝脾单核细胞内发现， 其滋养体呈弓形，故名弓形虫。
弓形虫寄生在人及其他多种哺乳动物除红细胞 外的几乎所有有核细胞内，引起人兽共患的弓形虫 病（toxoplasmosis）。孕妇在孕期感染可致流产、 早产、死胎 、畸胎；后天感染常损害脑、眼等多 种脏器，引起脑炎、癫痫、精神异常等。我国首例 弓形虫感染是钟惠澜1957年从猫和兔中发现，续后
14
在中间宿主体内
卵囊
吞食
一种快速检测弓形虫的重组蛋白及其制备方法和应用[发明专利]
![一种快速检测弓形虫的重组蛋白及其制备方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/680f0a8e48d7c1c709a14556.png)
专利名称：一种快速检测弓形虫的重组蛋白及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：华海涌,余铭恩,吴琼杉,胡祥叶,陈伟,卢萍
申请号：CN201711414639.4
申请日：20171225
公开号：CN108165569A
公开日：
20180615
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物工程技术领域，涉及弓形虫重组抗原的制备和诊断应用。
本发明分析选择弓形虫P24、P30、GRA2、GRA6抗原优势表位，通过基因工程技术构建原核表达载体并实现融合表达；将该原核表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)并筛选得到重组表达菌株；利用该表达菌株表达并纯化融合蛋白G267；利用该融合蛋白建立弓形虫胶体金诊断方法。
申请人：江苏省血吸虫病防治研究所
地址：214064 江苏省无锡市滨湖区梅园杨巷117号
国籍：CN
代理机构：无锡华源专利商标事务所(普通合伙)
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检 纤 维 支气管镜检 和支 气管肺泡 灌洗
(B A L )
BA L
, 。
,
分子 量 可 筛 选 出 相 应 的 阳 性 克 隆
S E 凡犯 2 7
一
。
用 间 接 荧 光 染 色 和 PC R 方 法 检 查
PC
3 5 2 区域 的 免疫 原 性 很 差
,
不能通
t
中 包囊 或
。
特异性
D NA
。
对
PC P
P C
患 者更 多 见 呼 吸 困 难 之
PC P
症状
P
但 仅依 据 临 床标 准 区 别
。
与非
,
r r a e 氏肺 抱 子 虫 肺 炎 [ 英 ] 旧a g e v
J N
… /
,
是困 难的
该研 究 尽 管使用 了高 剂 量
,
r n T a
s
R
S犯
o T I- P M e d
H
路
(4 )一4 0 2 一 4 0 7
,
P
P C
与 其 它原 因 所 致 的 慢
。
。
PC R 和
乳 h m 杂交 分析转染 e
u
t
PC P
的 治疗预 后
TB
寄生虫 的整 合 基 因 时 发 现 在 没 有 乙 胺 嚓 陡
的 环境 下 连 续 传 代 培 养 的 转 染 寄生 虫 的整
,
根 据 马 拉维 国家 略 确定 涂片 阴性
, ,
控 制 中 心 制定 的 策
-
,
具 有 高 水 平 的 乙 胺 吻 吮抗
弓形 虫 结合 和 人侵几 乎 所有 的 哺 乳 类 细
,
性 因 此 已作 为 多种 转染 载 体 的 阳 性 选 择标 记
。
胞 人 侵时 虫 体 必 须 首先 与 宿 主 细 胞 表 面 分
子 识别 而 在 宿 主 细 胞 表 面 和 细 胞 介 质 普 遍
BK …
r 连 的 融 合 蛋 白 〔 ] 班又 lp e 英
P
a r
S i v ia l
/
E
即
,
P
(3 )
一 13 4 一 14 4
s r a
t iol
一2 0 0 1
,
98
s t a i l o
一2 0 0 1
n o r 从
…
/
,
9 8 (3 )
短 暂 和稳 定转染 载 体是 研究胞 内寄生 虫 刚地 弓形 虫 速殖子 的重要 分子 工 具 之 一
,
SE RA
氨 基 末端 的
SE 4 7 区 域 能
当速 殖子 与 肝素 于 3 ℃ 共 同 孵 育后 荧 7
,
诱 导产 生 抗 体 从 而 抑 制 寄生 虫 的发 育 现 有
刚地 弓形 虫表达 系 统均未 能成功短 暂或稳 定 表达
光很 快集 中为 较 大 的光 点 并 随 着 时 间延 长 其光 强 度 直径 和 数 目 不 断 增 加
于 D HFR
D H FR
,
一 16 7 一 17 0
已 有研 究 表 明 弓形 虫 和 疟 原 虫均 可 通
,
。
由
过 特定 的细 胞 器摄 取 营 养 物 质 是 否 存 在 特 异 的 受体介 导 的 (R M )细 胞 内 吞 作 用 尚不 清 楚
。
内包 含
一
2
个氨基 酸突变 的
n
它
3 S m T
,
在非洲
传变 异 〔 〕 e 英 朋b
P a a ito r s l
JP .
二
/ A n
n
T r p Me o d
医 院 内死亡 的 H IV 阳性 尸 检 中 仅 发现 2 %
9 %
一2 0 0 1
州m
o
,
95 ( 5
)
患有
,
P
,
P C
。
作者 采用 随机扩增 多 态 性 D
PC P 的 研究 集 中在 急
,
NA
片段 (S R A 1 7
1 10 )
xl l
一
和 (S 凡犯 2 7
2
-
镜观察 双 标 速殖 子 发 现 肝 素 定 位 于 虫 体 细
胞膜 并 迅 速 转 移 至 膜 下 包 被 于 泡状 结 构 内 穿 过 若 干光 学 截 面
, 。
,
分别 克隆到载体
一
D H 下R
3 m
一
FL G T S -
,
此 衔接 区 主 要 起 连 接 D
H FR 和 FL A G
S T
的作 用
。
将胞 外 活 性 速殖 子与 异 硫氰 酸 荧光 素标
记的肝 素 (H F )于 0 ℃ 共 同孵 育 后 在虫 体 近
顶 点 的 区 域 发 现 较 小 的点 状 荧 光 表 明 肝 素 可 以 结 合 于 虫 体 而 且 可 能 的 结 合 受 体 主要
例 接受 了 支 气管 镜 检 和
P CR
, 。
经 间接
,
免 疫荧 光染色 和
(徐 文 岳 摘
检测 诊 断 1 例 (9 % ) 7
黄复生 校 )
PC P P
患者
。
临床症 状分 析结 果发 现 与 非
,
10 2
马拉 维 地 区 涂 片 阴 性 肺 结 核 患 者 的 卡
s
P C P C
患者 相 比
P
PT B
。
在
1995
一
19 6
年 间 的不 同季节 从 津 巴
1 4
.
,
B
感 染 者被 误 认 为 是
布韦 东北 地 区 的 一 个曼 氏血 吸 虫 病 流 行 区吉
i 尔歇 (C h
26 1
.
本文 作 者 选 择 马 拉 维 首 都 利 隆 圭 这 一
H IV 严 重 流 行 区 为 研 究 地 区
,
S T S T
,
;
然后 分 别转 染
~
1〕 FR H
一
一
S T
、
D H FR FL G
一
-
H 和 1〕 F R S E R A T S 到 刚 地 弓 形 虫 R H
随着 孵 育 时 间 的 延 长 特异 性 结 合 和 内 化 聚
株 在 乙 胺嗜 陡 存 在 下 检 测 已 转 染 寄 生 虫 裂 解
上 构 建 了 载 体 D H F R r 己m 3
1 10 T S
F L G S R A 17
一
此 时 链 霉 蛋 白酶 部
, , 。
和
D HFR
n
论 m 3 FL G S R 八2 2 7 3 2 5
一 -
-
分消 化速 殖 子 表面 蛋 白 对 荧 光 无影 响 可 能
是 肝素及 其 受体 被 细胞 内环 境保 护 的 缘故
论m 3 F L G S 凡犯 2 7
和 D HF
Rr己
3 n r
F - LG S R A 1 7
-
一
11 0
一
力 明 显 低 于 前 两 组 转 染 寄生 虫 数 目增 倍 的 时 间延 长
,
,
S T
的裂 解 细 胞 能
PC P
所 占比例 2 是否 可 以 根据 临 床 或 放射 )
,
线 图 像检 查 鉴 别 性 咳嗽疾 病 3 )
,
。
结果 共 检 查 3 5 例 患 者 H IV 阳 性 率 2
%
因此 本实 验 为 分 析 弓 形 虫 等胞 内 寄 生 虫 外 源基 因 功 能 提 供 了 一 种 新 的 快 速 稳 定
的 转染 载 体
。
3 3 (2 7 8 / 1 )
该组 患 者 因 各 种 原 因 只
BA L
,
8 1 6
荧光 多糖 已 被虫 体 内 化
,
、Байду номын сангаас
,
,
。
这些 荧 光
,
E S
RA
功 能区
一
点在不 同 的 显 微 镜 位 面 经 常可 以 见 到 提 示
。
7 氨基 末 端 1
作者 首先将 编码 S R A E 11 和梭基末 端 22 一 35 氨 0 7 2
。
一
激光 共 聚焦 扫 描 电
,
基 酸的 D
352 )
一
D H F R FL G T S 一
组和
D H FR -
组两 项 指 标 均 无 区 别 提 示 F LG A 的插
,
两 条 多 肤 在 凝 胶 上可 增 加
,
3
一
4
倍 但不
,
I〕 F R H
-
和
S T
一
的酶活 性; 但 是 5 3
2 TS
一
能结 合 于 未 交联 的 凝 胶树 脂 表 明 它 们 的 结
。
千米 的 8 个 不 同地 点 采集 螺 标 本
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)高 原 草 地 彼 此 相 距
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从
调 查研究 了
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螺 头足 部顶 端 提取 基因组
用 2 对随 9
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) l 该 地 区 被 登 记 为 涂 片 阴性
患者中
机 寡 核 昔 酸 引 物 进 行 凡锣 D
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