肿瘤药理学研究方法概述
临床药学中的抗肿瘤药物的药理研究
临床药学中的抗肿瘤药物的药理研究抗肿瘤药物是指在癌症治疗中用于抑制或杀死肿瘤细胞的药物。
药理研究是对药物在机体内的吸收、分布、代谢和排泄等药理学特性进行系统研究的过程。
本文将探讨临床药学中的抗肿瘤药物的药理研究，以帮助读者更好地理解这些药物的作用机制，从而为临床治疗提供基础。
一、抗肿瘤药物的药理学特性抗肿瘤药物的药理学特性是指药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄等过程。
首先，药物的吸收是指药物从给药途径进入体内的过程。
常见的抗肿瘤药物给药途径主要包括口服、静脉注射和肌肉注射等，不同给药途径的药物吸收特性也有所不同。
其次，药物在体内的分布是指药物在体内各组织和器官中的分布情况。
由于肿瘤细胞的特殊性，抗肿瘤药物通常能够更好地富集于肿瘤组织中。
然后，药物的代谢是指药物在体内经过化学变化转化为代谢产物的过程。
最后，药物的排泄是指药物及其代谢产物从体内排出的过程。
大部分抗肿瘤药物主要通过肾脏排泄，少数药物通过肝脏或其他途径排出。
二、抗肿瘤药物的作用机制抗肿瘤药物的作用机制主要包括干扰肿瘤细胞DNA合成、细胞周期阻滞、抑制肿瘤细胞的增殖和诱导肿瘤细胞凋亡等。
首先，一些抗肿瘤药物能够通过与DNA结合，阻止DNA的复制和转录，从而干扰肿瘤细胞的DNA合成。
此外，一些药物能够干扰肿瘤细胞的细胞周期，使其停滞在某个特定的阶段。
例如，某些细胞周期阻滞剂能够阻止肿瘤细胞进入分裂期，从而抑制肿瘤细胞的增殖。
另外，抗肿瘤药物还可以通过不同的机制诱导肿瘤细胞发生凋亡，即程序性细胞死亡。
这种细胞死亡方式与正常细胞周期密切相关，通过激活细胞凋亡信号通路，促使肿瘤细胞自身死亡。
三、抗肿瘤药物的临床应用抗肿瘤药物作为癌症治疗的重要手段，在临床中得到了广泛应用。
根据不同的目标和作用机制，抗肿瘤药物可分为多个类别，如细胞周期特异性药物、细胞周期非特异性药物和靶向治疗药物等。
其中，细胞周期特异性药物主要作用于细胞分裂期，例如阿霉素和长春碱等；细胞周期非特异性药物则可以作用于细胞周期的各个阶段，如环磷酰胺和丝裂霉素等；而靶向治疗药物则通过作用于肿瘤细胞的特异靶点，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤。
抗肿瘤药物药效学实验方法及指导原则
抗肿瘤药物药效学实验方法及指导原则一、基本原则1. 抗肿瘤药物分类(1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等；(2) 生物反应调节剂(biological response modifier)；(3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)；(4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)；(5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)；（6）分化诱导剂(differentiation inducing agent)；(7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)；（8）反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。
2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。
2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。
2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。
二、体外抗肿瘤活性试验1. 试验目的1.1 对候选化合物进行初步筛选；1.2 了解候选化合物的抗瘤谱；1.3 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等。
2. 试验方法选用10-15株人癌细胞株，根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养；推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT 还原法、磺酰罗丹明B(SR染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。
药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。
试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。
3. 评价标准以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线，然后采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值或EC50值)。
肿瘤药理试验方法与技术
第七节 肿瘤药理实验方法与技术肿瘤药理实验方法无外乎体内和体外实验两种。
从实验目的上看，又可以分成抗癌作用和抗癌作用机制研究两种。
一、抗癌作用研究（一）体外实验法：用培养的肿瘤细胞系进行。
1、噻唑蓝（MTT ）法 在培养的活细胞线粒体中与NADP 相关的脱氢酶可将黄色的四氮唑（MTT ）催化成不溶性的蓝紫色的甲替，将甲替用二甲基亚砜（DMSO ）溶解后，利用酶标仪（试验波长570nm ，参比波长450nm ）测定光密度值，按照公式实验组光密度值肿瘤细胞生长抑制率（%）=（1 - ）×100%对照组光密度值计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率。
用系列浓度的药物可制作肿瘤细胞生长抑制率的量效曲线。
2、染料排斥法 本方法是根据活细胞具有排斥某些染料的功能，而死细胞因胞膜破坏而易于被染料着色的原理，在培养的对数生长期的细胞悬液中加入伊红、台盼蓝、或苯胺黑等染料，在室温下放置5分钟后，在15分钟用血球计数板计数200个细胞。
根据公式未染细胞数活细胞率（%）= ×100%细胞总数3、生长曲线法 本方法是根据肿瘤的Gompertzian 生长曲线而设计。
培养的肿瘤细胞在初期为指数增殖期，随着细胞密度的增加，因代谢产物的积聚和营养物质的消耗，增殖趋于减缓乃至停止，进入所谓的平台期。
在培养后的的即刻、1、2、3、4、5、7天的细胞，用台盼蓝染色，细胞计数，然后取细胞对数对培养时间作图可获细胞生长曲线。
1）将生长曲线外延至Y 轴可获得截距No`，用公式%100No No`-No ⨯=对增殖细胞的杀伤力计算药物对增殖细胞的杀伤力（No`是对照组的的截距）2）用Nt 代表接种后t 小时的细胞数， 用公式TD = 0.301t / logNt - LogNo计算药物对细胞增增时间（TD ）的影响。
3）取平台期每毫升的细胞均数，比较细胞生长的饱合密度（Ns ）。
4、集落形成法 本方法利用分裂≥6代以上的克隆原单细胞子细胞可形成集落成簇（每簇细胞数＞50）的能力，比较药物对单个肿瘤细胞增殖能力的影响。
肿瘤药理学实验方法
形态观察
主要观察细胞的一般形态， 如大体形态、核浆比例、染色 质和核仁大小、多少等以及细 胞骨架微丝微管的排列状态等.细胞多形性 2.细胞核多形性 3.细胞胞浆的改变
4.细胞超微结构的改变
肿瘤细胞的形态学特征
恶性肿瘤细胞的核体积增大，使 细胞核与细胞浆的比例（核浆比， nuelei-cytoplasm ratio）较正 常增大，正常细胞为1：4～6， 恶性肿瘤细胞可接近1：1。核的 大小、形状和染色不一，并可呈 现巨核、双核、多核或奇异形核。 由于核内DNA增多，核染色质 （hyperchromatic）深，染色质 呈粗颗粒状，分布不均匀，常堆 积在核膜下，使核膜显得增厚。 核仁肥大，数目也常增多（3～5 个）。核分裂像常增多。恶性肿 瘤细胞的核异常改变与染色体呈 多倍体（polyploidy）或非整倍 体（aneuploidy）有关。
肿瘤细胞培养与传代
注意事项
1.培养液中可加入适量青霉素、链霉素； 2.用于调pH值的7%NaHCO3用0.1-0.22μm 滤膜过滤灭菌，勿高压灭菌。 3.洗去胰蛋白酶时应该用D-Hanks液，而 不是Hanks液。 4.传代时细胞分散密度要适当，不能太 低，因肿瘤细胞的自泌促生长因子会 因分散培养而被稀释，达不到肿瘤生 长的需求，降低肿瘤细胞的生长增殖力。
游离期：细胞接种后从悬浮状态到细胞贴瓶； 指数增生期：细胞接种2～3天分裂增殖比较旺 盛，是活力最好时期，称指数增生期(对数生 长期)，适宜进行各种试验； 坪台期（停止期）：细胞密度已饱和，细胞停 止增殖，但代谢活动仍在进行 。
肿瘤细胞培养
悬浮培养与贴壁培养
肿瘤细胞培养可分为单层贴壁培养和悬浮培养。 ▲悬浮培养是指细胞悬浮于培养基中进行生长或维持。 ▲单层贴壁培养是指细胞贴附在培养器皿表面生长的 方法。将细胞消化后分散成单个细胞后种入器 皿，细 胞臵含37℃、5%CO2的孵箱中培养，一般经过3-6 h， 细胞沉于器皿底部，附着于玻璃或塑料层的培养面，分 裂，向四周生长，逐渐融合形成细胞单层。 正常二倍体细胞在两个细胞集落生长到相互接触时， 由于细胞信息的传递，生长即停止，即生长接触抑制。 恶性转化细胞或恶性肿瘤细胞由于具有失去接触抑 制的特性，在生长到细胞相互接触时，还能继续生长， 形成重叠层。细胞生长到旺盛期，即可进行传代。
肿瘤药理学
根据实验目的和要求，选择合适的动 物模型，如免疫缺陷小鼠、转基因小 鼠、移植性肿瘤等。
肿瘤药理学实验方法与技术
细胞培养
体内药效学实验
通过体外培养肿瘤细胞，研究药物对肿瘤 细胞的生长抑制、细胞毒性和凋亡等作用 。
通过给动物模型用药，观察药物对肿瘤生 长、转移和耐药性的影响，评估药物的疗 效和安全性。
肿瘤药物的安全性监测与评价
肝功能监测
对于接受化疗等药物治疗的 患者，定期监测肝功能，以 便及时发现和处理药物性肝 损伤。
血常规监测
定期监测血常规指标，如白 细胞、血小板和血红蛋白等 ，以便及时发现和处理药物 引起的骨髓抑制。
心脏安全性监测
对于某些可能对心脏产生不 良影响的药物，如蒽环类药 物，需要进行心脏安全性监 测。
信号转导抑制剂
干扰肿瘤细胞信号转导，抑制肿瘤细胞增殖，如EGFR抑制剂。
血管生成抑制剂
抑制肿瘤血管生成，切断肿瘤营养供给，导致肿瘤细胞死亡。
免疫调节剂
激活或增强机体免疫系统对肿瘤的识别和杀伤能力。
肿瘤药物的靶点与作用机制
直接作用机制
直接杀伤或抑制肿瘤细胞增 殖。
间接作用机制
通过调节机体免疫系统、抑 制肿瘤血管生成等方式发挥 作用。
肝肾损伤
某些抗肿瘤药物可能对肝脏和肾脏造成损害 。
05
肿瘤药物的研发与临床应用
肿瘤药物的研发流程与关键环节
01
靶点发现
通过基因组学、蛋白质组学等方法 ，发现肿瘤细胞特异的靶点。
体外筛选
在细胞水平上对药物进行初步筛选 ，评估其抗肿瘤活性。
Hale Waihona Puke 0302药物设计与合成
基于靶点结构，设计和合成具有抑 制作用的肿瘤药物。
实验肿瘤药理学—抗肿瘤药物的药效学评价
01
抗肿瘤药物通常通过口服、注射等途径进入体内，药物的吸收受到药物剂型、生物利用度、胃肠黏膜通透性等多种因素的影响。
抗肿瘤药物的吸收与分布
02
药物吸收后，会随着血液和淋巴液分布到全身各个组织器官中，药物的分布受到药物与组织的亲和力、血流量和组织屏障等因素的影响。
xx年xx月xx日
实验肿瘤药理学—抗肿瘤药物的药效学评价
CATALOGUE
目录
实验肿瘤药理学概述抗肿瘤药物的药效学评价抗肿瘤药物的抗肿瘤作用机制抗肿瘤药物的药代动力学研究抗肿瘤药物的药效学评价的临床应用实验肿瘤药理学的未来发展趋势
01
实验肿瘤药理学概述
实验肿瘤药理学是一门在实验条件下研究抗肿瘤药物作用机制、药效和药代动力学的学科。它利用动物肿瘤模型和体外实验系统来评估药物的疗效和安全性。
实验肿瘤药理学与其他学科的交叉融合
应用生物信息学方法分析肿瘤药效学和耐药性的相关数据，挖掘药物作用机制和预测药效。
与生物信息学交叉
结合医学影像学技术，实时监测药物在肿瘤组织中的分布、活化及疗效评估等。
与医学影像学交叉
THANKS
感谢观看
破坏肿瘤细胞膜结构
抗肿瘤药物可以破坏肿瘤细胞的膜结构，导致肿瘤细胞裂解、死亡，从而抑制肿瘤的生长和转移。
抑制肿瘤血管生成
01
抗肿瘤药物可以抑制肿瘤血管的生成，切断肿瘤细胞的营养供应，导致肿瘤细胞死亡。
间接抗肿瘤作用机制
调节宿主免疫系统
02
抗肿瘤药物可以通过调节宿主免疫系统，增强机体的免疫功能，杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤的生长和转移。
药效学评价是药物研发和临床试验中不可或缺的环节，对于抗肿瘤药物的研发和应用具有重要意义。
抗肿瘤药物的药效学研究
抗肿瘤药物的药效学研究随着医学技术和科技的不断发展，抗肿瘤药物的药效学研究也得到了很大的发展。
药物的药效学研究是药物研究的重要方面，也是药物研究的核心内容之一。
一、药物的药效学研究药物的药效学研究是对药物在体内的药理学与药动学以及药物在治疗中对体内疾病的治疗效果的研究。
药物在体内的药理学与药动学是药物药效学研究的重要方面之一。
药理学研究药物与生物体之间的相互作用，包括药物的结构、生理作用、药效、剂量效应关系以及药物的不良反应等。
药动学则是研究药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄的过程，以及药物在体内的血药浓度与药效的关系等。
药物的药效学研究不仅要求对药物机理与代谢有全面深入的认识，还要求对药物在治疗过程中所发挥的作用进行全面的评估与研究。
二、抗肿瘤药物是治疗肿瘤疾病的重要药物之一，抗肿瘤药物的药效学研究对治疗肿瘤疾病具有重要作用。
1. 细胞系模型的建立建立肿瘤细胞系模型，能够对抗肿瘤药物的效果进行预测。
在细胞系模型中，通过对不同类型的肿瘤细胞的试验、筛选和实验，可以进一步提高抗肿瘤药物的疗效。
不同的肿瘤细胞系模型具有不同的优势。
2. 动物模型实验动物模型实验是对促进抗肿瘤药物的药效学研究的重要方法。
动物模型实验中，可以进行抗肿瘤药物药效评价、探究药物在体内的分布、代谢和排泄的过程，以及药效的剂量--效应关系等。
在动物实验中，可以通过体内、体外等多种方法对抗肿瘤药物进行研究，这对促进抗肿瘤药物的研究具有重要作用。
3. 抗肿瘤药物的药效评估抗肿瘤药物的药效评估是抗肿瘤药物的药效学研究的重要方面。
药效评估通过对抗肿瘤药物药效作用、生理指标变化、肿瘤生长变化等指标的评估，来确定抗肿瘤药物的药效，并从而指导临床应用。
药效评估的结果直接影响到抗肿瘤疗效的判断和指导。
4. 抗肿瘤药物的剂量--效应关系研究抗肿瘤药物的剂量--效应关系研究是抗肿瘤药物药效学研究的重要方面之一。
这一研究重点在于确定抗肿瘤药物的最佳剂量，一个合理而有效的剂量是确保抗肿瘤药物有效性和安全性的基础。
《肿瘤药理学研究生》课件
研究目的：寻 找新的肿瘤治 疗药物和治疗
策略
研究进展：新 型靶向药物、 免疫治疗、基
因治疗等
肿瘤药理学的发展历程和趋势
19世纪末， 肿瘤药理 学开始萌 芽
20世纪初， 化疗药物 开始应用 于临床
20世纪50 年代，靶 向治疗药 物开始出 现
20世纪80 年代，免 疫治疗药 物开始出 现
21世纪初， 精准医疗 理念开始 兴起
肿瘤药理学实验数据分析和处理
数据收集：收集实验数据，包括药物浓度、 细胞增殖、细胞凋亡等
数据处理：对数据进行预处理，包括数据 清洗、数据转换等
数据分析：对数据进行统计分析，包括t 检验、方差分析等
数据可视化：将分析结果以图表形式展 示，包括柱状图、折线图、散点图等
结果解释：对分析结果进行解释，包括药 物作用机制、药物疗效等
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
重要性：肿瘤药理学是肿瘤治疗学 的重要组成部分，为肿瘤治疗提供 科学依据。
应用：肿瘤药理学的研究成果可以 指导临床用药，提高肿瘤治疗的效 果和安全性。
肿瘤药理学的研究内容和方法
研究内容：肿 瘤细胞生物学、 肿瘤细胞信号 传导、肿瘤细 胞代谢、肿瘤
细胞免疫等
研究方法：细 胞培养、动物 模型、基因编 辑、药物筛选
肿瘤药理学临床应用
肿瘤药理学临床试验的设计和实施
临床试验的目的：验证新药的安全性和有效性 临床试验的设计：包括研究对象、研究方法、研究指标等 临床试验的实施：包括招募受试者、进行试验、收集数据等 临床试验的伦理问题：保护受试者的权益和隐私，确保试验的公正性和科学性
肿瘤药理学临床试验的评估和总结
研究挑战：耐药性、毒性、 疗效评估等
药理学视角下的抗肿瘤药物研究
药理学视角下的抗肿瘤药物研究近年来，肿瘤成为全球主要的疾病之一，并且其发病率与年龄有关。
随着医学科技的不断发展，药理学视角下的抗肿瘤药物研究取得了长足的进展。
药理学是研究药物在机体内的作用、转化、分布和排泄等过程的学科，而抗肿瘤药物则是指能干扰或抑制肿瘤细胞生长和扩散的药物。
本文将从药理学角度出发，探讨抗肿瘤药物研究的进展和挑战。
一、抗肿瘤药物的分类抗肿瘤药物可以分为多个类别，包括化学疗法药物、靶向治疗药物和免疫治疗药物。
其中，化学疗法药物是最为常见的一种抗肿瘤药物，通过抑制肿瘤细胞的DNA合成、代谢或干扰细胞分裂等方式达到治疗的效果。
靶向治疗药物则是通过选择性地作用于肿瘤相关的分子靶点，从而阻断肿瘤细胞的增殖和生长。
免疫治疗药物则是通过调节机体的免疫系统，增强机体对肿瘤的免疫应答，达到治疗肿瘤的目的。
二、抗肿瘤药物研究方法抗肿瘤药物的研究需要经历多个阶段，包括药物筛选、药效评价和毒理学研究等。
其中，药物筛选是研发药物的起点，通过体外细胞系或动物模型，对候选药物进行筛选，评估其对肿瘤细胞的杀伤作用和抗肿瘤活性。
药效评价则是对已经筛选出来的药物进行进一步验证，进行体内实验，评估其对动物模型中的肿瘤的疗效。
毒理学研究则是对药物的毒副作用进行评估，确保药物的安全性和可靠性。
三、药物联合治疗的重要性近年来，越来越多的研究表明，单一药物治疗肿瘤的效果有限，而药物联合治疗则能够增加治疗的效果。
药物联合治疗可以通过不同的作用机制，同时抑制肿瘤细胞的多个通路，增加治疗的成功率。
此外，药物联合治疗还可以减少肿瘤细胞对药物的耐药性，提高治疗的持续时间和生存率。
四、抗肿瘤药物研究的挑战尽管抗肿瘤药物研究取得了一定的进展，但仍然存在一些挑战。
首先，肿瘤的异质性使得治疗难度增加，不同类型的肿瘤对药物的反应不同，需要个体化治疗。
其次，药物的耐药性也是一个重要的问题，肿瘤细胞往往会发展出对药物的耐受性，从而限制了药物的疗效。
肿瘤学药理学的研究进展
肿瘤学药理学的研究进展近年来，肿瘤学药理学领域取得了许多重要的研究进展。
药理学是研究药物如何在生物体内起作用的科学，而肿瘤学药理学则关注于药物在肿瘤细胞中的作用机制以及抗癌药物的研发。
本文将介绍一些肿瘤学药理学的最新研究进展。
1. 肿瘤微环境的研究肿瘤微环境是指肿瘤细胞周围的组织和细胞环境，包括肿瘤细胞、免疫细胞、血管、纤维细胞等。
近年来，研究人员通过对肿瘤微环境的深入研究，发现该环境对肿瘤的形成和发展起着重要作用。
针对肿瘤微环境的研究为开发新的针对性药物提供了理论依据。
2. 免疫检查点抑制剂的研究免疫检查点抑制剂是一类新型的抗癌药物，通过恢复免疫系统对肿瘤的识别和攻击能力，来治疗肿瘤疾病。
近年来，免疫检查点抑制剂在肿瘤学药理学领域取得了突破性的进展。
这类药物已经成功用于治疗多种肿瘤类型，包括黑色素瘤、肺癌等。
其研究成果为肿瘤免疫治疗开辟了新的途径。
3. 基因编辑技术在肿瘤治疗中的应用基因编辑技术是一种用于修改生物体遗传信息的先进技术，近年来在肿瘤学药理学中得到广泛应用。
通过基因编辑技术，研究人员能够精确改变肿瘤细胞的基因组，进而调控肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移能力。
这一领域的研究成果为个体化治疗和精准医学提供了新的思路。
4. 组织芯片技术的发展组织芯片技术是一种将多个不同组织或细胞培养在芯片上的技术，通过这种技术，研究人员可以模拟出肿瘤细胞在体内的生长环境，进一步研究肿瘤的发生机制和治疗方法。
组织芯片技术的发展为肿瘤学药理学的研究提供了新的工具和平台。
5. 人工智能在药物筛选中的应用人工智能技术在肿瘤学药理学中的应用越来越广泛。
通过建立大规模的数据库和使用机器学习算法，研究人员可以高效地筛选出具有抗肿瘤活性的化合物，并预测药物的药效和毒副作用。
这一领域的研究进展为药物研发提供了新的方法和理论支持。
总结起来，随着科学技术的不断进步，肿瘤学药理学领域取得了许多重要的研究进展。
肿瘤微环境的研究、免疫检查点抑制剂、基因编辑技术、组织芯片技术和人工智能在药物筛选中的应用等方面的研究成果为肿瘤学的发展和抗癌药物的研发提供了理论基础和实验支持。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 足印法结果显示， Hoechst 33342能结合 于拓扑异构酶II的启动子DNA区域，而可 能抑制有关转录因子与其相应DNA结合 位点的结合。
• Hoechst 33342 的竞争性结合序列主要是 ICB2，这是一个已知的拓扑异构酶IIa启 动子抑制区。
凝胶延迟实验
• 凝胶延迟实验也称Gel Shift或Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) 。
酶学）、凋亡（形态、流式细胞计数）； • 分子水平：蛋白表达（Western, 流式细胞计
数），蛋白活性（ 酶学、转运），DNA扩增、 变异（Southern、PCR），mRNA表达 （Northern, RT-PCR）。
转录调控研究方法在药理学中 的应用
• 肿瘤的发生和发展，与肿瘤细胞的基因 变异和表达异常有密切关系。针对肿瘤 细胞特异性的基因表达异常，可能发现 有特异性作用的抗肿瘤药物。
肿瘤药理学研究方法概述
药理学研究方法的演进
• 药理学研究方法，通常是以各种生理生 化方法为基础的。
• 随着生命科学的发展，药理学研究从整 体，发展到组织、细胞和分子水平。
• 现代分子生物学的发展，为药理学研究 提供了更丰富的手段。
肿瘤药理ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ研究常规方法
• 整体水平：荷瘤小鼠（瘤体生长、转移）； • 细胞水平：细胞增殖（MTT）、分化（形态、
DNase I 足印：Distamycin A（a）和Hoechst 33342 (b)可单独产生DNA足印， Distamycin A 的DNA结合作用比Hoechst 33342 更广泛。Hoechst 33342 主要 结合于ICB2的位置。(c)核蛋白可与Hoechst 33342 竞争结合ICB2的位置。 ICB1和2显示拓扑异构酶IIa基因启动子上CCAAT序列位置。
• 多数转录因子是DNA结合蛋白，结合于 靶基因的调节DNA元件，或称为顺式作 用元件（cis-acting element）。
• 转录因子也称为反式作用因子（transacting factor）。
• 哺乳类细胞大约含有2－3千种转录因子， 有限数量的转录因子，是通过组合效应 来实现对其自身和其它基因表达调控的。
• 典型的核心启动子单元是由TATA盒（位于转 录起始点上游25bp左右）和嘧啶富含区单元 （转录起始点）组成，它们是PolII的主要DNA 靶点。
• 启动子近端单元通常位于转录起始点上 游50－200bp 。
• 启动子远端单元则可位于转录起始点上 游或下游的不同距离的区域。
• 转录因子与它们结合，调节PolII的活性， 影响转录起始过程。
• 转录调控是通过影响在起始、延长、终 止过程中PIC的组装和催化效率来达到的。 在起始阶段PIC的组装，是整个转录过程 的限速环节。
转录因子
• 不同基因的表达是通过一个复杂的调控 网络调节的，在这一网络中，特定的转 录因子将信号传递给特定的靶基因。
• 外界刺激信号通过信号转导通路，经过 一系列酶促反应，影响相应的转录因子， 最终引起相关基因的改变，产生一定的 生物学效应。
转录调控研究的常用方法
• 转录调控研究可分为两类，既蛋白质与 DNA的相互作用，和蛋白质与蛋白质的 相互作用。
蛋白质与DNA的相互作用
DNA足印法
• 这是一种直接观察DNA结合蛋白与特定 的DNA序列相结合的方法。
• 基本原理：转录因子与DNA靶序列结合 后，可保护所结合的DNA区域不受 DNase I 或其它分子的消化。通过比较转 录因子存在与否时，消化的DNA条带分 布，可以了解转录因子所结合的具体 DNA序列。
NIH3T3细胞提取核蛋白，与放射性标记的ICB2 DNA双链探针结合后电泳。 1：仅含有探针与核蛋白； 2，3：分别加入非标记的竞争性原始或变异探针 （含有NF-YA的结合位点）；4，5，6：分别加入NF-YA，NF-YB和Sp1抗体。 F，游离探针；S，迁移的DNA－蛋白质复合物；Su，迁移的DNA－蛋白质 －抗体复合物。
• 基因表达调控，是现代生物医学研究的 前沿领域。
• DNA转录形成RNA，RNA翻译形成蛋白 质，这一过程称为基因表达。
• 基因表达的调控，可以发生在各个水平 上。
RNA转录的有关理论
• 基因5‘非编码区含有转录起始区和相应基因 序列，称为启动子。
• 启动子由三类DNA序列组成，一类是基础（或 核心）启动子单元，一类是启动子近端单元， 一类是启动子远端单元。
核蛋白凝胶迁移实验中，Hoechst 33342可与ICB2探针发生特异性竞争结合。 (a)ICB2探针；(b)GC富含区探针。
• 结果表明，ICB2的结合蛋白复合物含有 NF-YA和NF-YB。而Hoechst 33342可与 结合蛋白复合物发生特异性竞争，结合 ICB2。
应用示例
• 拓扑异构酶IIα是肿瘤治疗的一个重要靶 点。肿瘤细胞的拓扑异构酶II表达下降， 可能是其对该类细胞毒性药物产生抗性 的机理。
• Hoechst 33342是合成的化合物，可促进 拓扑异构酶II的表达，可能作为克服肿瘤 抗药性的辅助化疗药物。
Western Blot：与对数生长期（1）相比，生长停滞期的细胞（2）的拓扑异 构酶IIa表达明显下降。Hoechst 33342处理（3）可恢复生长停滞期的细胞（2） 拓扑异构酶IIa表达。
• 是另一种直接观察DNA结合蛋白与特定的DNA 序列相结合的方法。
• 基本原理：转录因子与DNA靶序列结合后，形 成的复合物在非变性凝胶电泳时的迁移速度， 明显慢于单独的DNA片段。根据标记的DNA片 段的迁移情况，可以很敏感地反映出蛋白质与 其DNA靶序列的结合。
应用示例
• 为进一步验证ICB2序列的结合蛋白，用 ICB2探针作了凝胶迁移实验，并对结合 蛋白的可能身份，进行确定。
组合效应：三种转录因子及其DNA结合序列，通过不同的排列组合， 可产生九种调节方式。
• 转录因子一般有两个特征性的功能簇， 一个是DNA结合功能簇，可与基因的特 定调节位点，即顺式调节单元直接结合；
• 另一个功能簇则显示转录激活或抑制活 性。
• 有时，这两个功能簇也可位于不同的蛋 白分子上，共同形成分子伴侣。