威灵仙总皂苷诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化作用的研究
柠檬醛诱导白血病细胞株NB4凋亡的分子机制
Ｌｄｅ 凋亡 条 带 ， ａｄｒ 流式 细 胞术 检 测 证 实 了药 物诱 导 后凋 亡 的存 在 。通过 流式 细胞 术检 测不 同药 物浓 度 和作 用时 问的 细胞凋 亡率表 明凋亡 呈剂 量和 时 间的
依赖性。Ｄ ｄｉ ｕａ 等 研究发现 ｃｒ 在其他肿瘤细 ｉａ ｔｌ 胞 中可 以激 活 ｃｓａｅ３ 但 机 制 尚不 明确 ， 实 验 ａｐｓ一， 本 证实 在 Ｎ ４细胞 中 ＣⅡ 活 化 了细胞 凋亡 的效 应 分 Ｂ ｉ 子 ｃｓａｅ３ ９ 说 明 Ｃ州 激 活 了细 胞 凋 亡 通路 ， ａｐｓ－、 ， ｉ 且
１ ５ Ｒ ａ—ｍ Ｃ ． ｅ ｌｉ ｅＰ Ｒ检 测 Ｍｃ ｌｍ Ｎ ｔ ｌ Ｒ Ａ表 达 — Ｃｔ ｌ ｉａ ｒ
下 避光 染 色 ３ ｎ ０ｍｉ。用 流 式 细 胞 仪 检 测 不 同 时点 （ 、、２２ ）Ｃｔ ｌ 理后 的 Ｎ ４细胞 凋亡率 。 ０ ６ １ 、４ｈ ｉａ处 ｒ Ｂ １３ 细胞 Ｄ Ａ提 取 和 片段 化 检 测 接 种 Ｎ ４细 ． Ｎ Ｂ 胞 于 ６孔板 中。细胞 浓 度 ｌ×１ ｍ 。不 同浓 度 的 ０／ ｌ
医药 ２ １ ０ ０年第 ５ ０卷第 １ ３期
・
临床 研 究 ・
柠 檬 醛诱 导 白血 病 细胞 株 Ｎ ４ Ｂ 凋 亡 的分 子 机制
陈晓 文 。 夏海 龙 ’
（ 安徽 医科 大学 第一 附属 医院 ， 合肥 ２ ０ ２ ） ３０ ２
摘要 ： 目的
探讨柠檬醛 （ ｉａ） Ｃｔ １诱导急性早幼粒细胞 白血病细胞株 Ｎ ４凋亡的分子机制 。方 法 ｒ Ｂ
一
５ ％脱脂奶粉／ Ｂ Ｔ封 闭 １ｈ 根据 实验 目的将 目的条 Ｔｓ ，
ｏ １ ０ ｍｎ Ｃ、 ００ｒ ｉ 离心 ５ｒｎ 弃上清。预冷的 Ｐ Ｓ ／ ｉ， ａ Ｂ 洗
皂角刺抗肿瘤作用有效成分研究进展
皂角刺抗肿瘤作用有效成分研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】中药皂角刺中含有多种生物活性成分且作用广泛，药理研究已表明具有抗肿瘤活性。
本文综述了皂角刺中主要抗肿瘤成分的研究。
【关键词】皂角刺;抗肿瘤;有效成分近年来，中草药及其活性成分抗肿瘤作用的研究已成为国内热点，天然物有效成分在新药及新药先导化合物中占有不可替代的作用，越来越受到人们的关注。
皂角刺(Spina Gleditsiae)，又称皂刺、天丁、皂针等，是我国民间常用的中草药，始载于《本草纲目》，具有消肿脱毒、排脓及杀虫之功，常用于消炎、镇痛及癌症等治疗，已被列为抗癌中草药之一。
皂角刺分布于东北、华北、华东、华南、以及四川、贵州等地，为双子叶植物药豆科植物，药用部位主要是皂荚(Gleditsia sinensis Lam.)的棘刺。
中药化学成分含黄酮、皂苷、三萜、氨基酸、酚类等，具有抗癌作用的部分主要是黄酮类化合物。
黄酮类化合物为黄颜木素、非瑟素及少许无色花青素等。
目前国内外尚无对皂角刺抗肿瘤有效成分的系统研究，化学成分研究局限在醇提取部分的分离。
本文参考近年来的文献，就皂角刺的抗肿瘤有效成分做了初步总结，综述如下。
1 鉴别研究《中国药典》规定，皂角刺为主刺及1-2次分枝的棘刺，分枝基部常有小阜状隆起，刺端锐尖，表面紫棕色或紫褐色，有的带浅色斑块。
体轻、质硬不易折断，断面皮部极薄，木部黄白色，髓部疏松，红棕色。
无臭，味淡。
但是，由于皂角刺与其同属植物如山皂角刺等在性状及形态上均相似，且因其原生药较坚硬，包装不便，常切成饮片收购，造成长期以来有不少伪品与其鱼目混珠，难以鉴别。
1991年，刘静[1]等就从性状、组织及粉末显微特征方面对皂角刺及其五种混伪品(酸枣刺、野蔷薇等)进行了比较研究，为皂角刺的真伪鉴别提供依据。
周日宝[2]主要从两方面对皂角刺及其同属植物山皂荚、华南皂荚、绒毛皂荚和滇皂荚的棘刺进行了鉴别研究，其中薄层层析显示皂角刺与其同属植物在斑点数量、分布上均有区别，而紫外吸收光谱上最大吸收峰也有明显差异。
威灵仙化学成分概述汇总
威灵仙化学成分概述威灵仙（Clematidis radix et Rhizoma）为毛茛科植物威灵仙(Cle matis chincrisis Osbeck)、棉团铁线莲(Clemats hexapetala)或东北铁线莲(Clematis manshurica Rupr)的干燥根及根茎[1]。
为常用中药，在古代及现代医方和临床上应用广泛。
威灵仙中主要含有挥发性成分、三萜及皂苷、生物碱、黄酮、香豆素、木脂素、甾体及烷烃等成分[2]。
1.挥发性成分威灵仙挥发性成分较多，研究报道明，威灵仙3种植物中挥发性成分主要是正十六烷酸 (即棕榈酸)和(Z，Z)-9，12-十八碳二烯酸(即亚油酸)（二者结构见图1），二者占总挥发性成分的5O％左右[3-5]。
正十六烷酸 (Z，Z)-9，12-十八碳二烯酸图1 正十六烷酸和(Z，Z)-9，12-十八碳二烯酸结构郗瑞云[6]等人采用水蒸气蒸馏后用醋酸乙酯萃取的方法对威灵仙3种植物挥发性成分进行了比较。
对比了从威灵仙挥发性成分中鉴定出的11个化合物、棉团铁线莲挥发性成分中鉴定出的16个化合物以及从东北铁线莲挥发性成分中鉴定出的9个化合物。
结果表明其主要成分中有3个种的共有成分，分别是正十六烷酸(即棕榈酸)、松油醇和( z ，z)-9， 12-十八碳二烯酸(即亚油酸) ，这3种成分的总和占挥发性成分总量的百分比分别为棉团铁线莲64.71％、威灵仙58.59 ％和东北铁线莲46.54 ％。
此外，威灵仙中鉴定出的挥发性化学成份还有2-甲氧基苯酚、辛酸、4-(1-甲基乙基)-苯甲醇、2-甲氧基-4乙烯基苯酚、1-(2-羟基-5-甲苯基)乙烯酮、2-(1-苯乙基) -苯酚、邻苯二甲酸二丁酯和 2-丁基-5-己基-8氢-1H-茚；棉团铁线莲中鉴定出的挥发性化学成份有2-乙酰吡咯、苯乙醛、苯乙醇、2-甲基-3苯基-丙醛、a-侧柏烯醛、4-(1-甲基乙基 )-苯甲醇、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、6，8-十二碳二烯甲基醚、十六烷酸甲酯、z-11-十六碳烯酸、邻苯二甲酸二丁酯、1-十八烷醇和 (z， z )-9、1 2-十八碳二烯酸甲酯；东北铁线莲中鉴定出的挥发性化学成份有苯乙醛、苯乙醇、2-甲基-3-苯基-丙醛、2，4-二甲基苯乙醇、2-羟基-5-甲基苯乙酮和环十二炔。
威灵仙中的三萜皂苷类成分及其抗关节炎作用机制的研究进展
威灵仙中的三萜皂苷类成分及其抗关节炎作用机制的研究进展郑佳逸;辛贵忠;刘丽芳
【期刊名称】《中国野生植物资源》
【年(卷),期】2018(037)005
【摘要】威灵仙为毛茛科铁线莲属植物威灵仙(Clematis chinensis Osbeck.)、棉团铁线莲(Clematis hexapetala Pall.)或东北铁线莲(Clematis manshurica Rupr.)的干燥根和根茎.近年来,随着对威灵仙化学成分和药理活性研究的深入,其三萜皂苷类成分在治疗类风湿关节炎(RA)和骨关节(OA)方面的作用已得到充分证实.为了科学合理的利用该药材,本文对药典收载的三种威灵仙药材中三萜皂苷类成分的分布及其抗关节炎的药理机制进行了概述.
【总页数】10页(P39-48)
【作者】郑佳逸;辛贵忠;刘丽芳
【作者单位】中国药科大学,天然药物活性组分与药效国家重点实验室,江苏南京210009;中国药科大学,天然药物活性组分与药效国家重点实验室,江苏南京210009;中国药科大学,天然药物活性组分与药效国家重点实验室,江苏南京210009
【正文语种】中文
【中图分类】R284
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3.威灵仙总皂苷抗类风湿性关节炎的作用机制 [J], 李特;李运曼;刘丽芳;王宇新;李丰文;朱兴祥
4.毛冬青中三萜皂苷类成分的研究进展 [J], 赵文珠;居文政;谈恒山
5.商陆中三萜皂苷类成分抗烟草花叶病毒活性研究 [J], 葛永辉;罗焕平;郑钰;陈兴江;耿召良
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威灵仙总皂苷对小鼠免疫功能的影响
威灵仙总皂苷对小鼠免疫功能的影响
夏伦祝;徐先祥;张睿
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2009(013)005
【摘要】目的观察威灵仙总皂苷对小鼠免疫功能的抑制作用.方法用DNFC对小鼠进行致敏,用鸡红细胞致小鼠溶血素生成,测定威灵仙总皂苷37.5、75、150 mg·kg-1三种剂量对耳片肿胀值、免疫器官胸腺与脾脏的指数及溶血素的影响.结果威灵仙总皂苷37.5、75、150 mg·kg-1三种剂量能减轻DNFC致敏小鼠耳片肿胀程度、降低免疫器官指数,抑制鸡红细胞致小鼠溶血素的生成.结论威灵仙总皂苷具有显著的免疫抑制作用.
【总页数】2页(P496-497)
【作者】夏伦祝;徐先祥;张睿
【作者单位】安徽中医学院第一附属医院·安徽省中药研究和开发重点实验室,安徽,合肥,230031;安徽中医学院第一附属医院·安徽省中药研究和开发重点实验室,安徽,合肥,230031;安徽中医学院第一附属医院·安徽省中药研究和开发重点实验室,安徽,合肥,230031
【正文语种】中文
【中图分类】R2
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1.人参总皂苷对免疫低下小鼠免疫功能的影响 [J], 周娅红
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3.人参茎叶总皂苷对D-半乳糖致衰老小鼠免疫功能的影响 [J], 刘佳;张敬敬;李明阳;石高星;曾志能;魏珊珊
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黄芪总苷诱导人白血病NB4细胞凋亡的研究
实验 ， 于细 胞计 数板 上计 算 细胞 数 ， Ｎ ４细胞 以 ５ 将 Ｂ ｘ１ ｍｌ ／ 密度 接 种 于 ２ Ｌ 内 ， 验 组 分 别 加 入 ０ ４孑 板 实
终 浓 度 为 ２ ０ ４ ０、０ 、０ ｇ ｍｌ ０ 、０ ６ ０ ８ ０ ／ 的黄 芪 总 苷 ， 以
相 同培 养条 件下 不 加药 的细 胞 为 阴性 对 照组 。每孔 培 养总 体 系为 １ｍ 。继 续 培 养 ４ ｌ ８ｈ后 收集 各 组 细 胞， 加入 流 式专 用上 样 管 ，Ｂ Ｐ Ｓ洗 涤 细胞 两 次 （ ０ １００
国 Ｂ ｃ ｍａ ．ｏｌ ｒ 司产 品。 ｅｋ ｎｃｕｔ 公 ｅ
胞 白血 病 细 胞 株 Ｎ ４ 凋 亡 的 影 响 。 方 法 将 不 同 浓 度 的 Ｂ
Ｔ ２０、０ 、０ 、０ ｇ ｍ ） Ａ（０ ４ ０ ６ ０ ８０ ／ １作用 于 Ｎ ４细胞 ， 续培养 ４ Ｂ 继 ８
ｈ 采 用 磷 脂 结 合 蛋 白 Ｖ（ ｎ ｅｉ Ｖ 碘 化丙 啶 （ Ｉ 双 染 色 ， Ａ ｎ ｘ ）＋ ｎ Ｐ） ｈ ｉ ００Ｏ ｔ４ （ ） ｃ Ｕ ｉ ｓ ａｓＭｅｉｎ ｌ ｎ ｕ ａ ｅｉ ｉ ｉ ｓ ２ １ ｃ；５ ５
・６ ３・ ４
黄 芪 总 苷诱 导 人 白血 病 Ｎ ４细 胞 凋 亡 的 研 究 Ｂ
胡 雪 莹 ， 瑞祥 夏
摘要 目的 研究 黄芪 总苷 （ Ａ） Ｔ 对体外培养 的人早 幼粒细
威灵仙皂苷对HL_60细胞生长抑制作用的研究_陈玉茹
威灵仙皂苷对HL-60细胞生长抑制作用的研究陈玉茹，黄纯兰，李晓明(泸州医学院附属医院血液内科，四川泸州646000)摘要目的：观察中药威灵仙皂苷对人髓系白血病细胞株HL-60生长抑制的作用，并探讨其可能的作用机制，为开发新的抗肿瘤药物提供理论依据，为白血病患者能进一步提高临床疗效，改善生活质量，延长生存时间做探讨。
方法：威灵仙皂苷为本实验室根据文献自行提取，运用细胞培养；Wright's-Giemsa 染色各组HL-60细胞，在光学显微镜下观察细胞形态变化并照相；CCK-8的方法观察不同浓度不同时间威灵仙皂苷对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制，对比HL-60细胞在加入不同浓度威灵仙皂苷和作用不同时间后的生长情况和细胞活性并与三氧化二砷作用进行比较，探讨威灵仙皂苷对急性白血病细胞生长抑制的作用。
结果：加入不同浓度的威灵仙皂苷作用后，急性白血病细胞受到不同程度的抑制，且呈浓度和时间的依赖性，经形态学检查发现细胞体积变小，细胞核高度浓缩聚集，甚至断裂形成凋亡小体。
结论：实验证明威灵仙皂苷有抑制急性白血病细胞生长的作用，且呈浓度和时间的依赖性；高浓度的威灵仙皂苷与三氧化二砷的作用无统计学意义。
关键词威灵仙皂苷；急性白血病；HL-60细胞；抑制中图分类号R733.7；R91文献标识码A文章编号1000-2669（2011）3-0231-04STUDY ON CLEMATIS SAPONIN IN HIBITING HL-60CELL GROWTHChen Yuru ，et alDepartment of Hematology,the Affiliated Hospital of Luzhou Medical CollegeAbstract Objective:To observe the inhibition induced by Chinese medicine clematis saponin against human myeloid leukemia cell line HL-60and investigate the potential mechanism,Methods:Acute leukemic cells were treated by different concentration of clematis saponin for clifferent period of time.The morphology and growth activity were observed.Results:HL-60cells were inhibited by clematis saponin in a time and concentration de -pendent manner .By means of morphology examination ,cell volume shrinked and nucleus was highly crimpled and aggregated,and even broke to form apoptotic body.Conclusion ：This experiment proves that clematis saponin can inhibit the growth of acute leukemic cell ,inhibition effect of high concentration clematis sapanin has no significant difference with that of arsenic trioxide.Key words Clematis saponin;Acute leukemia;HL-60cell;Inhibition作者简介：陈玉茹（1985-），女，住院医师，硕士生近年来，恶性肿瘤已成为我国主要的死亡原因之一，严重威胁着人类的健康和生命。
三叶青黄酮诱导髓系白血病NB-4细胞凋亡及信号通路的研究
三叶青黄酮诱导髓系白血病NB-4细胞凋亡及信号通路的研究吴海英;吴元庭;陈优优;骆惠丽;蒋慧芳【摘要】目的:研究三叶青黄酮(RTHF)对人急性早幼粒细胞白血病NB-4细胞活力、凋亡及MAPK信号通路的影响.方法:采用CCK-8法及BrdU实验分别检测RTHF对NB-4细胞活力及增殖的影响;流式细胞术检测RTHF诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期的作用.Western blot分析RTHF对细胞凋亡及MAPK信号通路相关蛋白表达的影响.结果:RTHF有效地抑制NB-4细胞的活力及增殖,呈时间和剂量依赖性,作用48 h的IC50为2.26 g/L.RTHF阻滞NB-4细胞进入增殖周期,停滞在G2期,并诱导其凋亡(P<0.01),呈剂量依赖性.RTHF下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax、caspase-3和Cyt-C的表达,呈剂量依赖性(P<0.05).RTHF对ERK1/2及JNK的表达无明显影响,但可降低ERK5蛋白表达,提高p38的表达水平(P<0.05).结论:RTHF在体外有效地抑制白血病NB-4细胞活力及增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过p38 MAPK信号通路及凋亡蛋白途径.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2019(035)008【总页数】6页(P1451-1456)【关键词】三叶青黄酮;白血病;NB-4细胞;细胞凋亡;MAPK信号通路【作者】吴海英;吴元庭;陈优优;骆惠丽;蒋慧芳【作者单位】浙江省立同德医院血液科,浙江杭州 310012;浙江省立同德医院血液科,浙江杭州 310012;浙江省立同德医院血液科,浙江杭州 310012;浙江省立同德医院血液科,浙江杭州 310012;浙江省立同德医院血液科,浙江杭州 310012【正文语种】中文【中图分类】R733.7;R363.2急性白血病(acute leukemia，AL)是早期造血前体细胞突变导致的造血系统恶性肿瘤。
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·实验研究·近年来研究发现威灵仙中的有效成分三萜皂苷［1］可以通过诱导恶性肿瘤细胞的分化和凋亡达到抗肿瘤作用［2-3］，笔者在前期研究中已经发现威灵仙总皂苷对NB4细胞具有诱导凋亡作用［4］，但是对NB4细胞是否具有诱导分化作用尚无研究。
因此，本研究拟从细胞的增殖抑制、形态变化和功能抗原表达等方面研究威灵仙总皂苷对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞是否具有诱导分化作用，以期为进一步研究威灵仙在血液系统恶性肿瘤临床治疗上的应用提供实验依据。
1材料与方法1.1材料威灵仙总皂苷由泸州医学院药学院参照文献［5-7］提取，系棕色粉末状结晶，储存液（16mg/mL）用无血清RP-MI1640（Gibeo公司产品）溶解，应用液用含10％小牛血清的RPMI配制；佛波醇酯（TPA）、硝基蓝四氮唑（NBT）、全反式维甲酸（ATRA）干粉为美国Sigma产品；CD11b和CD33购自BD公司。
1.2细胞培养NB4细胞株由四川大学华西医院干细胞生物研究室馈赠。
将NB4细胞接种于含体积分数为10%小牛血清、青霉素100IU/mL及链霉素100μg/mL的RPMI1640培养液中，置于37℃、5%CO2的孵箱中悬浮培养。
取对数生长期，台盼蓝染色拒染率在95%以上的细胞进行实验。
1.3细胞增殖率和形态观察取对数生长期的NB4细胞，以1×105/mL细胞密度分别接种于含5种不同质量浓度威灵仙总皂苷（分别为25、50、100、200、400μg/mL）的培养液中，并设不加药空白对照组和1μmol/L ATRA阳性对照组，培养体系8 mL，连续培养5d。
每日取各组细胞，记数活细胞，绘制生长曲线，并计算第5日的生长抑制率。
隔日取各浓度组细胞，离心涂片瑞氏染色后油镜下观察200个细胞形态变化并计算细胞诱导分化率，诱导分化率（%）=（200-早幼粒细胞）/200×100%。
威灵仙总皂苷诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化作用的研究*黄莉黄纯兰△（泸州医学院附属医院，四川泸州646000）中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1004-745X（2012）08-1248-03【摘要】目的研究威灵仙总皂苷对NB4细胞分化的影响。
方法取对数生长期的NB4细胞，设置多个浓度梯度的威灵仙总皂苷药物组，观察用药后不同时间点NB4活细胞数，计算生长抑制率；Wright's-Giemsa染色计数法和NBT还原试验测定细胞分化率，透射电镜观察细胞形态学变化；流式细胞术检测CD11b/CD33表达情况。
结果与空白对照组比较，威灵仙总皂苷对NB4细胞有明显的生长抑制作用，且具有剂量-效应依赖关系；但具有统计学意义的诱导分化现象不明显。
结论威灵仙总皂苷可有效抑制NB4细胞增殖，但对NB4细胞无明显的诱导分化作用。
【关键词】威灵仙总皂苷急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株细胞分化Effect of Total Saponin from Clematis Chinensis Osbeck on the Differentiation Effect of Acute Promyelo-cytic Leukemia NB4Cell Line in Vitro HUANG Li，HUANG Chun-lan.The Affiliated Hospital of Luzhou Medical College，Sichuan，Luzhou，646000【Abstract】Objective：To study the effect of total saponin from clematis chinensis osbeck on differentiation of a-cute promyelocytic leukemia NB4cell line cultured in vitro.Methods：The NB4cells were independently treated with ATRA and total saponin combined with differernt concentrations in5days.The proliferative inhibition rates of NB4cell induced by total saponin and ATRA were calculated in every day.Cell differentiations were demonstrat-ed by Giemsa stain，transmission electron microscope（TEM）and NBT reduction assay at different time.The ex-pressions of CD11b and CD33induced by these drugs were measured by flow cytometry（FCM）at different times. Results：As compared with blank control group，that the NB4cells were inhibited significantly by the clematis to-tal saponins showed a dose-effect dependence.There were no statistical significances in the differentiation phe-nomenons.Conclusion：The total saponin can obviously inhibit the proliferation of NB4cells.However，there were no obvious differentiation effect in the NB4cells treated by total saponin from clematis chinensis osbeck.【Key words】Total saponin from clematis chinensis osbeck；Acute promyelocytic leukemia；NB4cell line；Cell differentiation*基金项目：四川省卫生厅基金资助项目（070266）；泸州市科技局基金资助项目（2007279）△通信作者1.4硝基蓝四氮唑（NBT ）还原实验取各实验组细胞悬液500μL ，与1g/L 的NBT 溶液混合，加入200μg/mL TPA 溶液100μL ，37℃孵育30min 后离心涂片，光镜下见胞浆内含蓝黑色颗粒的为阳性细胞。
计数200个细胞，得出NBT 阳性细胞的百分率。
实验重复3次。
1.5透射电镜观察收集第4日各实验组的细胞，离心，PBS洗涤，戊二醛固定，按常规制备超薄切片，在透射电镜下观察细胞核、染色质等的变化并照相。
1.6细胞分化表面抗原CD11b 和CD33的检测取经威灵仙总皂苷作用后的细胞，用CD11b 和CD33单抗对各组细胞进行免疫标记，用流式细胞仪检测细胞表面抗原表达（平均荧光强度）。
1.7统计学处理应用SPSS13.0统计软件。
计量资料以（x ±s ）表示，各组应用方差分析。
率的比较采用χ2检验。
以a =0.05为检验水准。
P <0.05为差异有统计学意义。
2结果2.1威灵仙总皂苷对NB4细胞生长的影响不同质量浓度威灵仙总皂苷作用NB4细胞后，随着剂量增加和作用时间延长，细胞增殖明显受抑，呈现剂量和时间的量效关系。
在96h 时出现抑制率的最高值。
但在120h ，威灵仙总皂苷各组受抑率整体出现轻度下降。
400μg/mL 组的抑制率变化幅度在各组中最大，96h 生长抑制率达到（37.41±2.16）%，与阳性对照组比较没有明显差异（P >0.05）。
见表1。
2.2威灵仙总皂苷对NB4细胞细胞形态及细胞分化率的影响与空白对照组相比，威灵仙总皂苷组在整个实验中未见典型分化作用，仅个别细胞核出现肾形或杆核。
却出现了明显的核固缩、核边聚、核碎裂、胞膜出泡现象，并可见典型的凋亡小体。
随浓度增高，时间延长，该现象越明显。
而阳性对照组，细胞体积变小，胞浆增多，核缩小，核浆比例减少，细胞核由圆、椭圆转变为肾形、杆状，甚至出现分叶。
见图1，表2。
2.3NBT 还原实验结果威灵仙总皂苷各浓度组作用于NB4细胞5d 后，NBT 还原法检测结果显示，各实验浓度组细胞内无或者仅有少量的蓝色颗粒，随浓度和时间的变化，NBT 阳性率无明显增加，与空白对照组比较无显著差异（P >0.05），明显低于阳性对照组（P <0.01）。
见表3。
2.4透射电镜与Wright's-Giemsa 染色的细胞形态学改变类似，实验组经威灵仙总皂苷作用96h 后，在透射电镜下并未发现有较明显的胞浆、胞核成熟现象，仅个别细胞出现杆核或者肾形核改变。
但是观察到NB4细胞明显呈现凋亡形态学变化：胞膜皱缩、染色质凝聚并边集呈月牙状改变，核仁消失。
见图2。
2.5细胞表面分化抗原CD11b 、CD33的检测1μmol /L ATRA作用NB4细胞后，可明显使CD11b 表达增加（P ＜0.01），CD33表达下降。
而威灵仙总皂苷各剂量组CD11b 表达的阳性率低，CD33表达无明显下降，与空白对照组比较无显著差异（P ＞0.05）。
见图3，表4。
组别24h 48h 72h96h120h阳性对照组29.96±2.1131.12±1.9833.49±1.4535.12±1.3037.49±1.4425μg/mL 组8.71±1.3410.32±0.7713.01±0.2515.16±0.5216.10±0.8850μg/mL 组9.34±0.6211.66±0.7216.45±0.5319.90±0.7718.18±0.45100μg/mL 组9.24±0.2515.32±0.2921.03±0.7925.03±1.3528.65±1.60200μg/mL 组11.01±0.2520.34±0.4529.45±0.8734.23±2.0131.32±0.54400μg/mL 组11.99±0.2622.26±1.1230.48±0.4137.41±2.1635.71±2.79表1不同质量浓度威灵仙总皂苷在各时间点对NB4细胞生长的抑制率（%，x ±s）图1威灵仙总皂苷400μg/mL 组72h 后NB4细胞形态（Wright's-Giemsa 染色，×1000）组别25μg/mL 组95.32±2.05 1.89±0.21 1.33±0.80 1.46±0.6050μg/mL 组94.39±1.311.04±0.722.95±0.26 1.61±0.80100μg/mL 组92.88±3.09 2.15±1.72 3.24±0.25 1.73±0.77200μg/mL 组91.55±4.50 4.82±2.73 1.48±0.57 2.15±0.10400μg/mL 组91.40±5.664.83±1.621.25±0.612.51±0.10空白对照组94.32±2.05 3.39±0.60 1.21±0.78 1.06±0.48阳性对照组44.00±1.78*12.33±2.19*20.01±0.93*23.65±1.64*诱导分化率（%）4.68±2.055.61±1.317.12±3.098.45±4.508.60±5.665.68±2.0556.00±1.78*细胞分类（%）早幼中幼晚幼杆状及分叶表2不同质量浓度威灵仙总皂苷作用96h 后对NB4细胞分化和形态的影响（x ±s ）与空白对照组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01。