实验1.2 培养基的配制(2016)
培养基配置
1000ml
自然 pH
实验器材
牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/LNaOH, 1mol/LHCl，KNO3，K2HPO4·3H2O， MgSO4·7H2O，FeS04·7H2O，马铃薯，蔗糖等。
试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙， pH 试纸(pH 5.5~9.0)，
pH 值调到一定的范围。 牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏 蛋白胨
3.0 g 10.0g
NaCl
5.0g
水
1000mL
pH
7.4~7.6
高氏 I 号培养基配方
可溶性淀粉 20g
NaCl 0.5g
KNO3 1g K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O 琼脂 15—25g
0.5g 0.5g 0.01g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
马铃薯培养基配方
马铃薯（去皮）
200g
葡萄糖（或蔗糖）
20g
琼脂 水
15~25g 1000ml
自然 pH 察氏培养基配方
蔗糖
30g
NaNO3
2g
K2HPO4
1g
KCl
0.5g
MgSO4· 7H2O
0.5g
FeSO4· 7H2O 琼脂
0.01g 15~25g
蒸馏水
以上熔化成液体，而在 45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特 点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。
培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵
母菌的 pH 偏酸；细菌、放线菌的 pH 为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
植物组织培养实验报告
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师）年级13级学号17130208 组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6指导老师实验名称植物组织培养综合实验一、实验目的1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法；3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法；4.了解组织培养的基本程序；5.掌握接种的方法和材料的培养过程；6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术；7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体；8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别二、实验原理1.植物细胞的全能性一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。
植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。
2.植物细胞表现出全能性的条件1.离体状态；2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）；3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型3.无菌条件把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。
用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。
在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。
组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。
4.脱分化与愈伤组织已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。
脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。
所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。
5.培养基植物组织培养常用的培养基为MS培养基。
常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的配制
• 干热灭菌 • 湿热灭菌
• 过滤除菌 • 辐射灭菌
• 放射线辐照灭菌 • 紫外线灭菌
• 化学药品灭菌
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一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温 度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量 等具体情况而有所改变。
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过滤除菌
定无菌生长，方可使用。
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几种常用培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：
牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g
NaCl 水 pH
5.0g 1000ml 7.4～7.6。
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高氏Ⅰ号培养基配方如下：
可溶性淀粉
20g
NaCl
0.5g
KNO3 K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O
• 碳源：提供微生物繁殖所需碳元素的营养物质。用途：糖、 蛋白质、核酸合成。
• 氮源：提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。用途：蛋 白质、核酸合成。
• 能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射 能。
• 生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。 • 无机盐：提供微生物繁殖所需各种重要元素。 • 水分：水是保证生命活动重要的介质。
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 • 调pH值：用1MNaOH或1MHCl调pH，用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 • 分装：注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 • 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确
琼脂
菌株培养操作规程
菌株培养操作规程1.菌株培养1.1仪器的灭菌将养菌所需的所有仪器放在高压锅内灭菌，然后放入烘箱烘干，在实验操作前30min放入无菌操作台，打开紫外灯，待用。
1.2培养基的配制按照配方配置肉汤固体培养基250ml，肉汤液体培养基250ml，120度高压灭菌，放置于冰箱4℃备用。
（培养基的配制参照《微生物学实验》，徐威主编，中国医药科技出版社，第172页，微生物实验常用培养基配方）1.3菌株传代将高压灭菌完的固体培养基在酒精灯上融化，待温度降到45℃左右，取无菌培养皿，打开，沿着培养皿一侧倒入固体培养基，倒入的量是培养皿体积的1/3时停止，将培养皿盖好盖子，放在无菌操作台上，待培养基凝固。
取出从医院拿回的菌株（标记为F0代，一直储存在4℃，在操作前半个小时放在室温下适应），用接种环取一环接种于凝固好的固体培养基上，放入37℃细菌培养箱中培养18h。
培养18h后，得到F1代菌，将其保存于冰箱4℃（从医院取回的菌株数量有限，并且不能长期保存，为了后面的实验有足量的菌株完成实验，所以大量传代得到F1代菌，保存于冰箱，以后的实验都是从F1代菌开始进行）。
2.菌株保存2.1菌株短期保存从医院取回的菌株（F0代）,通过传代得到F1代菌，用胶带将培养皿封存好，放置于冰箱4℃保存，称为短期保存。
短期保存的时间一般为20天到一个月。
2.2菌株的长期保存取无菌培养皿，倒入融化的固体培养基，待培养基凝固后，用接种环取一环F1代菌接种于培养皿上，放入37℃细菌培养箱培养18h得到F2代菌。
用移液枪取2ml无菌液体培养基于试管中，用接种环取一环F2代菌接种于试管中，放入细菌培养箱培养8h。
取100ml无菌锥形瓶，倒入50ml液体培养基，用移液枪从试管中取0.5ml菌液于100ml锥形瓶中，37℃摇床培养16h得到F3代菌。
将买回的甘油配成80%浓度，然后将甘油和F3代菌液按体积比1:1混合，再用移液枪将混合液吸入冻存管中，1ml/管，在冻存管上用记号笔标记冻存菌液的名称，代数，日期，放入冰箱-20℃保存，保存年限为1-2年，此保存法称为“甘油管冻存法”。
培养基配方及配置
培养基配方及配置
一般来说，培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分，包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分，如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分，如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置：
1.基础培养基成分：
- 水：900ml
-蛋白胨：10g
-酵母提取物：5g
-NaCl：5g
2.添加剂：（可根据实验需求进行必要的添加）
- 抗生素（如氨苄青霉素）：100μg/ml
- 抗菌剂（如氯霉素）：25μg/ml
3.配制方法：
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中，并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中，加水至1000ml，并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2（一般使用缓冲液进行调节）。
-用自制滤纸过滤器滤过，将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂，将相应的药物加入培养基中，并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌，或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程，不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时，需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度，并注意配制和保管过程中的无菌操作，以确保培养基的质量和有效性。
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二.大肠杆菌的培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
㈡培养大肠杆菌：
1.接种：
划线法 2.培养：
将接种后的平板倒置放入37℃恒温箱中培养2～3d
Q：为什么划线法接种能观察到单个菌落？
划线法接种时，使接种物逐渐稀释，最后 出现单个细菌，培养后出现单个菌落。
划线
划线法优点：
可对微生物进行分离、纯化，获 得单一菌落
4、调节pH
5、分装
6、灭菌
灭菌——高压灭菌
1.05kg/cm2、121℃，15—30min
灭菌锅
高压灭菌作用：杀死所有活的微生物及芽孢
（补充：倒“平板”）
超 净 工 作 台
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止培养皿盖上的水珠滴落污染培养基
7、恒温培养（恒温培养箱）
培养基的配制
计算
加热熔化琼 脂（搅拌）
定容 调节PH至 7.2-7.4
称量
熔化
调节pH
分装
恒温培养
灭菌
倒入三角烧瓶，与 其他器具一起放入 灭菌锅 高压灭菌
（一般需要作无菌检查）
核心：保证无菌操作
超净工作台、酒精灯火焰旁操作
超净工作台
1、如何检验培养基是无菌的？
将未接种的培养基放在恒温培养箱中适宜条 件下培养2-3d，如果无菌落产生，则培养基 是无菌的。 2、常用灭菌方法有哪些？
微生物重点实验2 ——微生物的培养
•掌握划线法接种方法与作用
菌落是由单个细胞分裂形成的种群
补充：菌落 1.定义： 单个 菌体 固体培养基上
大量繁殖
子细胞群体
2.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、硬度、透明度等。 3.功能： 鉴定菌种的重要依据
常用工具图示
接种环
玻璃刮铲
微生物（如大肠杆菌）的培养：
用于培养基、培养皿、锥形瓶等 高压（蒸气）灭菌 灼烧灭菌 用于接种环等金属器具
3、消毒与灭菌的区别
（1）消毒（如巴氏消毒法62℃，30min、酒精 擦拭等）仅杀死活的微生物，不能杀死芽孢。
（2）灭菌（高压灭菌1.05kg/cm2、121℃、1530min；灼烧灭菌、干热灭菌等）能杀死所有微 生物及其芽孢。
大肠杆菌菌落 菌落灰白色，圆形，透明或半透 明
枯草杆菌菌落 菌落灰白色，较 大，边缘比较粗 糙
滕黄八叠球菌菌落 菌落黄色，圆形、边缘 光滑
为什么在操作的第一步以及每次划线之前都 要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要 灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上 的微生物污染培养物 杀死残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种 直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次 数的增加，使每次划线时接种物逐渐稀释，培 养后得到单个菌落。 避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者。
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算 2.称量 3.熔化 4.调节pH 5.分装 6.灭菌 7.恒温培养
二.大肠杆菌的培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡培养大肠杆菌： 1.接种： （超净工作台上、酒精灯火焰旁进行） 划线法 冷却后刮取菌苔 接种环
菌种
划线法接种： 使接种物逐渐 稀释，培养后 出现单个菌落 划线法接种
微生物重点实验1
——实验1.2 培养基的配制
• 学习目标：
– 掌握培养基的配制的过程 – 理解无菌操作
组内合作：
1、说出培养基配制流程；
2、讨论消毒与灭菌的区别，小结常用
NaCl H2O 琼脂 5.0g 10.0g 5.0g 1000mL 2.0g
2、称量
3、熔化
3、下列对于灭菌和消毒的理解，不正确的是（ B ） A.灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B.消毒和灭菌实质上是相同的 C.接种环用灼烧法灭菌 D.常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭 菌等
4、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、
空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是（
①化学消毒 ④紫外线消毒 A.⑤⑤②①④⑥ ②灼烧灭菌 ⑤高压灭菌 ③干热灭菌 ⑥巴氏消毒法
A
）
B.①②③④⑤⑥
C.⑥②③④①⑤
D.③④②①⑥⑤
1、鉴别培养基是否被杂菌污染的方法是（ A.将未接种的培养基放在实验桌上培养 B.将未接种的培养基放在窗台上培养 C.将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养 D.将已接种的培养基放在恒温培养箱中培养
C
）
2、要将配制好的培养基进行灭菌，通常采用的方 法是（ B ） A.灼烧灭菌 B.高压蒸气灭菌 C.干热灭菌 D.煮沸灭菌