注射用克林霉素磷酸酯无菌检查方法验证
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号：2010•MEF•041•05•004起草单位(Composed by)：质检部(QC Department)起草人(Composer)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QC)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QA)：日期(Date)：批准人(Approved by)：日期(Date)：目录1. 验证目的2. 验证人员3. 验证依据及参考文件4. 仪器与设备5. 验证过程5.1 培养基及稀释液5.2 菌液的培养与制备5.3 方法验证试验6. 验证总结1. 验证目的：本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。
即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。
2. 验证人员：验证小组组长：刘长宏验证小组副组长：宋芳良验证小组成员：曲晓燕、常西胜3. 验证依据及参考文件：验证依据：中华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版中国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）4. 仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台5. 验证过程：5.1 培养基及稀释液5.1.1 培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录Ⅺ H无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1 培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
结果记录：结论：5.1.2.2 培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。
克林霉素磷酸酯标准
克林霉素磷酸酯标准克林霉素磷酸酯是一种广谱抗生素，常用于治疗呼吸道、皮肤软组织感染以及泌尿生殖系统感染等疾病。
由于其广泛的临床应用，对其质量标准的要求也越来越高。
本文将对克林霉素磷酸酯的标准进行介绍。
首先，克林霉素磷酸酯的外观要求。
根据标准规定，克林霉素磷酸酯应为白色或类白色结晶性粉末，无异物和机械杂质。
这一要求确保了药品的外观质量，保证了其在使用过程中不会受到外部杂质的影响。
其次，克林霉素磷酸酯的纯度要求。
标准规定了克林霉素磷酸酯的纯度应不低于99.0%，这一严格的要求保证了药品的有效成分含量高，能够更好地发挥药效，提高治疗效果。
另外，克林霉素磷酸酯的水分含量也是一个重要的指标。
标准规定了其水分含量应不超过5.0%，这一要求确保了药品的稳定性和保存期限，避免了因水分含量过高而导致药品失效的情况发生。
此外，克林霉素磷酸酯的重金属含量也受到严格的限制。
标准规定了其含铅量不得超过2ppm，含汞量不得超过1ppm，这一要求保证了药品的安全性，避免了因重金属超标而对人体健康造成危害。
最后，克林霉素磷酸酯的微生物限度也是一个重要的指标。
标准规定了其细菌总数应不超过1000cfu/g，霉菌和酵母菌数应不超过100cfu/g，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌应不得检出。
这一要求保证了药品的微生物质量，避免了因微生物污染而对人体健康造成危害。
综上所述，克林霉素磷酸酯的标准涉及到外观、纯度、水分含量、重金属含量以及微生物限度等多个方面，这些严格的要求保证了药品的质量和安全性，为其在临床上的应用提供了可靠的保障。
在生产和使用过程中，我们应严格按照标准的要求进行操作，确保药品符合标准，提高治疗效果，保障患者的健康安全。
注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查方法学研究(1)
注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查方法学研究简述：本试验对注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查的可行性进行了验证，结果表明：注射用克林霉素磷酸酯可以用细菌内毒素检查法进行细菌内毒素限量的控制，其细菌内毒素限值可定为：每1mg克林霉素磷酸酯中含内毒素的量应小于0.10EU。
一、试验目的对注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查的可行性进行了验证，为该品种质量标准中制定细菌内毒素检查项提供依据。
二、试验方法与结果1、限值的确定注射用克林霉素磷酸酯临床用于治疗革兰氏阳性菌、厌氧菌引起的各种感染性疾病，重度感染推荐剂量为按静脉滴注：成人一日1.2~2.7g。
参照60kg体重的剂量，按静脉注射剂的内毒素阈值计算供试品细菌内毒素限值，公式如下：5EU/（kg·hˉ1）L=K/M=————————————— =0.1EU/mg2700 mg /(60kg·hˉ1)式中L为供试品的细菌内毒素限值；K为按规定给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，静脉注射剂的K值为5EU/(kg.h)；M为人用每公斤体重每小时最大剂量。
根据以上公式计算出细菌内毒素限值为：每1mg克林霉素磷酸酯中含内毒素的量应小于0.10EU。
现将该品种的细菌内毒素限值按L<0.10EU/mg进行细菌内毒素方法学验证。
2、试剂2.1 注射用克林霉素磷酸酯生产厂家：批号：2.2 鲎试剂湛江博康海洋生物有限公司规格：0.1ml 批号：1106210 灵敏度：0.25EU/ml湛江安度斯生物有限公司规格：0.1ml 批号：1011091 灵敏度：0.25EU/ml2.3 细菌内毒素工作标准品中国药品生物制品检定所规格：140EU/支批号：150601-2010702.4 细菌内毒素检查用水湛江安度斯生物有限公司规格：5ml/支批号：10052403、鲎试剂灵敏度复核试验按照《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂灵敏度复核，结果见表1所示。
克林霉素磷酸酯阴道凝胶 微生物限度检查方法的建立
克林霉素磷酸酯阴道凝胶微生物限度检查方法的建立目的建立克林霉素磷酸酯阴道凝胶的微生物限度检查方法。
方法利用氯化钙能与凝胶中的卡波姆结合形成钙盐沉淀达到破胶的目的原理，按照《中国药典》2010年版附录的要求进行方法学验证，细菌计数采用薄膜过滤法、霉菌及酵母菌计数采用平皿法，控制菌检查采用薄膜过滤法。
结果细菌、霉菌及酵母菌的菌回收率均大于70%，控制菌检查中各阳性试验菌均检出，阴性对照无菌生长。
结论本法可消除克林霉素磷酸酯阴道凝胶的抑菌作用，适用于该制剂的微生物限度检查。
关键词克林霉素磷酸酯阴道凝胶；微生物限度；方法学验证；氯化钙；破胶克林霉素磷酸酯主要对革兰阳性球菌及厌氧菌有很强的抗菌活性，为了有效控制药品的质量，保证微生物限度检查方法的科学性和检验结果的准确性，根据《中国药典》2010年版[1]附录微生物限度检查的新要求，对克林霉素磷酸酯阴道凝胶栓进行了微生物限度检查的方法学验证。
1 材料1.1 培养基与试剂pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、溴化十六烷三甲基三甲铵琼脂培养基。
1.2 菌种金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]、大肠埃希氏菌[CMCC(B)44 102]、铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑曲霉[CMCC(F)98 003]。
1.3 样品克林霉素磷酸酯阴道凝胶（黑龙江多多药业有限责任公司，规格：5g:0.1g）2 方法与结果2.1 菌液制备取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的新鲜斜面培养物接种于适宜液体培养基中，按规定条件和时间培养，再分别取上述培养液按要求用适宜溶液按10倍依次稀释法稀释至浓度约为50～100cfu·mL-1备用。
直接接种无菌检查法验证方案及报告
贵州金玖生物有限责任公司验证方案及报告验证方案名称：直接接种无菌检查方法验证验证方案编号：验证完成日期：有效期：验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日1 概述无菌检查法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。
它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。
基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。
检验方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。
2 验证目的对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本公司产品的无菌检查。
3 实验原理直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。
本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得出直接接种法无菌检验的有效性。
4 验证范围实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。
56 职责7 验证内容建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养24~72小时，比较观察菌落的生长状况，得出结论。
8 验证指示物本实验所用菌种为购于贵州食品药品监督管理局标准菌株:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌及生孢梭菌。
9 实验过程（1）培养基的配制用于大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的营养琼脂培养基用于白色念球菌的改良马丁培养基用于生孢梭菌的流体硫乙醇酸盐培养基（2）供试品的制备术泰舒TM生物多糖冲洗胶液供试品：直接取成品10ml，加pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试品。
注射用克林霉素磷酸酯细菌内毒素检查方法的试验
定为 ０ ５１ Ｐ Ｕ ｍ 。扣 出 中西 方 人 体 ８１ Ｅ ／ ｇ Ｓ
重 差异 ， 定为 ０ ２Ｅ ｈ 高 于 ｕ 中的 ．５ Ｕ ￣（ 规 定） 。
分别 作细菌 内毒素检查 ． 并按 不同 灵敏 度对供试品 作相 的稀 释 ， 同时增 加 ｉ 支 阳性对 照 管。按 中 国药 典 ２０ ００年版 二 部附 录细 菌内毒素检查 法 ， 共检 查 ２ 批 。 注射用克林 霉素 磷酸酯 冻 于粉针 ， 果 结 全部与热鼠 检查结果相 符。
论限值（ ） ／ ０ ￣Ｅ ／ 。 Ｌ ＝ＫＭ＝ ． Ｕｍｇ 参考 ｕ Ｐ４中克林霉翥瞬酸酯的规 ｓ２
２３ 供试 品细 菌内毒素 检查法 与 ． 热原 检查 法的 比较试验
甩 ＝ ．５０ １５的 Ｔ Ｌ对供试 品 ０ ２ ，．２ Ａ
批号为 ００ １ 灵敏度标示值 ＝ １ ３８
０．７ Ｅ —ｎ ＩＳ Ｕ ． ｉ Ｌ
２１ 鲎试剂灵敏度 复核 ： 中国药 ． 按
典 ２１ Ｏ０年版附录细菌 内毒素 检查法 ， ３ 结
・
７ ・ ８
ｉ
羹 ０
瓤０
＝ ０ ２ ＥＵ 一 ＇Ｌ ．５ Ｉ Ｌ ＝Ｏ． ２ Ｉ５ 一ｒ ＿ ｉ ｄ
９） 【 ， ２ 福卅 产 电热 恒 温水 溶锅 上海 产 ，
精密移液器 和无热原 枪 头 ， 接 中国药 算 与确 定 ： 均 的 Ｔ Ｌ 接 中国药典 ∞０年 版 二部附 录 ＆， 典 ２０ ００年版规 定处理 。 Ｆ 本 品人用每公斤体重每小 时最大 注 细菌内毒素检查法供试品干扰试验项 ．
批号 为 ０００ ３ 灵 敏度标示 值 １５ １
＝
０ １５ Ｕ —ｍＬ一 ．２ Ｅ
１２ １２ 福 州 新 北生 化工 业 有 限 ．．．
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查的方法学验证方案注射液的无菌性是医疗领域中最为重要的质量指标之一。
为了确保注射液的无菌性，需要进行方法学验证方案。
本文将介绍一种常见的注射液无菌检查方法学验证方案，确保验证结果准确可靠。
一、验证目的本验证方案旨在验证注射液无菌性检查的方法学准确性和可靠性。
通过验证，可以确保注射液无菌性检查的结果符合预期，并为其他类似检查提供参考。
二、验证对象本验证方案适用于各类注射液无菌性检查方法，包括但不限于常规培养法、膜过滤法、试管法等。
三、验证步骤1. 制定验证计划：明确验证的目标、方法和时间安排等。
2. 准备样品和试剂：收集需要验证的样品和所需试剂，并确认其质量符合要求。
3. 合理布局实验室：确保实验室环境符合无菌实验要求，避免干扰因素的存在。
4. 实验操作：a) 样品准备：按照标准操作程序，制备样品，确保操作无菌。
b) 检测方法操作：按照所选的检测方法，依次进行实验，确保操作无误。
c) 平行实验：为了验证结果的可重复性，进行平行实验，确保结果一致。
5. 结果分析：根据实验结果进行数据统计和分析，得出结论。
6. 结果确认：将验证结果与预期目标进行比较，确认验证是否合格。
7. 编写验证报告：将整个验证过程、操作方法和结果总结编写成验证报告。
四、验证要求1. 严格遵守无菌技术操作规范。
2. 注射液样品的选择应具有代表性和典型性。
3. 实验室环境应符合无菌要求，避免外界干扰。
4. 检测方法的选择应根据实际情况和需求进行。
5. 实验操作过程要规范、准确，确保每个步骤符合方法要求。
6. 结果分析要科学、客观，数据统计要准确无误。
7. 结果确认应根据验证目标和标准进行判断。
8. 验证报告要详细、完整，包括验证目的、方法、结果和结论等。
五、验证结果分析根据实验结果的分析，可以判断注射液无菌性检查方法是否准确可靠。
如果验证结果符合要求并且与预期目标一致，则说明所选的检查方法具有可靠性和精准性。
如果验证结果与预期目标不一致，则需要进一步分析原因，寻找解决方案。
注射用克林霉素磷酸酯无菌检查的方法验证(1)0.3g
注射用克林霉素磷酸酯无菌检查方法及其验证报告为保证新生产的注射用克林霉素磷酸酯无菌检查的结果的准确可靠，现特对注射用克林霉素磷酸酯进行了无菌检查方法的修订及验证工作。
新拟定的检查方法及验证结果如下：1、实验用品：供试品：注射用克林霉素磷酸酯（批号：规格：0. 3g／支）样品来源：仪器、滤器和设备：HTY-III型智能集菌仪、全封闭集菌培养器KDGB220 KDGB330，均由杭州高得泰林医疗器械有限公司制造。
HNZ-1-1垂直流形超净工作台（南通沪南科学仪器有限公司）；YXQ-SG41.280电热手提式压力蒸汽消毒器（上海医用核子仪器厂）；HH·B11·500电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；HP250MJ-B霉菌培养箱（武汉瑞华仪器设备有限责任公司）；DGH140-B型电热鼓风干燥箱（武汉瑞华仪器设备有限责任公司）等。
培养基：硫乙醇酸盐培养基，批号：091020；改良马丁培养基，批号：090911；营养肉汤培养基，批号：090922；营养琼脂培养基，批号：091102；玫瑰红钠琼脂培养基，批号：090601；蛋白胨，批号：080121；上述培养基均来源于北京三药科技开发公司。
均按照《中国药典》2010年版二部附录XI H 无菌检查法项下要求配制。
冲洗液：0.1%蛋白胨水溶液，按照《中国药典》2010年版二部附录XI H无菌检查法项下要求配制。
验证试验用菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]金黄色葡萄球菌[CMC（B）26 003]大肠埃希菌[CMCC（B）44 102]生孢梭菌[CMCC（B）64 941]黑曲霉菌[CMCC（F）98 003 ]白色念珠菌[CMCC（F）98 001]上述菌种均来自湖北省药检所。
均符合中国药典》2010年版二部附录XI H无菌检查法项下要求。
2、预试验小结：检查方法选择：根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪH无菌检查法方法要求首选薄膜过滤法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
注射用克林霉素磷酸酯无菌检查方法验证
【摘要】目的:确定注射用克林霉素磷酸酯的无菌检查方法。
方法:采用薄膜过滤法，通过确定冲洗量、选择阳性对照菌及加入顺序。
结果:经试验各实验菌能够正常生长。
结论:方法学验证采用薄膜过滤法进行的无菌检查方法可行、有效。
【关键词】注射用克林霉素磷酸酯；薄膜过滤法；验证试验；冲洗量
克林霉素磷酸酯为化学半合成的克林霉素衍生物，它的脂溶性及渗透性比克林霉素好，该药对革兰氏阴性球菌和厌氧菌有很强的抗菌活性，且对厌氧菌感染有良好的疗效。
根据2005年版药典的规定，当建立药品无菌检查时，应进行方法验证，以证明其方法的适用性。
因此，针对注射用克林霉素磷酸酯［1］的抑菌特性采用适宜方法消除其抑菌活性，拟建立克林霉素磷酸酯的无菌检查方法［2］。
1 材料与方法
1.1 仪器:HTY-2000A型集菌仪，全封闭无菌试验过滤培养器（批号：20060623），杭州泰林生物技术设备有限公司。
1.2 检品:注射用克林霉素磷酸酯；规格：600mg/瓶；批号：070117；苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司。
1.3 培养基和稀释液硫乙醇酸盐流体培养基（060524）、改良马丁培养基（060523）、营养肉汤培养基（060216）、改良马丁琼脂培养基（060523）、营养琼脂培养基（060811）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨（0606005）缓冲液,上海中科昆虫生物技术开发有限公司。
1.4 菌种:金黄色葡萄球菌-第2代、枯草芽孢杆菌-第3代、铜绿假单胞菌-第3代、生孢梭菌-第3代、白色念珠菌-第3代、黑曲霉-第2代。
江苏省药品检验所。
1.5 菌液制备: ①取经（3
2.5±2.5）℃培养18～２４h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的营养肉汤培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5～10-7，备用。
②取经（32.5±2.5）℃培养18～２４h的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5～10-7，备用。
③取经（25.5±2.5）℃培养24～48h的白色念珠菌改良马丁培养基液体培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5～10-6，备用。
④取经（25.5±2.5）℃培养5～7d的黑曲霉斜面培养物，加5ml 0.9%无菌氯化钠溶液，洗下黑曲霉孢子，取孢子悬液1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4，备用。
1.6 试验用菌液检验：①金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌取上述10-5～10-7备用稀释液各1ml，置45℃营养琼脂培养基皿，（3
2.5±2.5）℃培养48h，活菌计数。
②生孢梭菌：取上述生孢梭菌10-6备用稀释液1ml置12ml硫乙醇酸盐液体培养基中，（32.5±2.5）℃培养48h，菌团应清晰可数。
③白色念珠菌和黑曲霉：取上述白色念珠菌10-6稀释液及上述黑曲霉10-4孢子悬液各1ml，置45℃改良马丁琼脂培养基皿,（25.5±2.5）℃培养，活菌计数。
1.7 薄膜过滤法验证试验［3］，选择冲洗液用量，进行过滤与冲洗：取六套一次性的全封闭三联桶滤器。
每株菌株准备供试品20支。
6株菌准备检品总量至少120支。
①先用0.1%蛋白胨水溶液少量润湿滤膜，直至液体顺利流出。
②取检品40支,按每支半量转移至500ml的0.9%无菌氯化钠溶液中,分别均匀滤入两个滤器中，完毕后，用0.1%蛋白胨水溶液冲洗，每次每桶冲洗液100ml，滤干后再循环操作，冲洗总量每桶分别为300ml, 500ml，抽干。
③另一滤桶内不过滤检品，其它操作相同，加入同体积的培养基和等量的同种菌种，作阳性对照。
④其余5组按上述方法依次操作。
2 结果
2.1 试验用菌液的活菌计数，其含菌量应为50～100cfu•ml－1, 计数结果详见表1。
2.2 验证试验的培养与观察：分别将硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁液体培养基各100ml滤入相应冲洗抽干滤桶器中，将计数的6株试验菌分别加入相应滤桶。
硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，改良马丁液体培养基置23～28℃,培养3～5天，逐日观察、记录不同冲洗量对6株阳性代表菌的影响。
检品冲洗量实验结果，即检品验证结果，详见表2。
3 讨论
从表2的实验结果得出，注射用克林霉素磷酸酯，按规定取量，用0.1%蛋白胨水溶液以500ml/桶的量冲洗时，对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌及黑曲霉无明显抑菌活性，均可使其正常生长。
由此得出注射用克林霉素磷酸酯采用薄膜过滤法进行无菌检查时，取样量,60支，用0.1%蛋白胨水溶液的冲洗量应为细菌500ml/桶，每次冲洗量为100ml，能达到冲洗效果。
本品按薄膜过滤法进行无菌检查可行，有效。
参考文献
［1］国家食品药品监督管理局.国家药品标准，WS 1-(X-020)-2003Z ［2］中华人民共和国药典,二部［S］,北京化学工业出版社,2005: 附录89-93 ［3］中国药品检验标准操作规范［S］,北京：中国医药科技出版社,2005:313。