bac载体的重要工作元件
基因工程原理练习题和答案
基因工程复习题题型：名词解释（10 个）30 分；填空（每空 1 分）20 分；选择题（每题 1 分）10 分；简答题（4 个）20 分；论述题（2 个）20 分。
第一章绪论1. 名词解释：基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗传物质DNA 直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。
遗传工程广义：指以改变生物有机体性状为目标，采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作，以改良品质或创造新品种。
包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。
狭义：基因工程。
克隆：无性（繁殖）系或纯系。
指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA 分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。
2 ．什么是基因克隆及基本要点?3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。
A）限制性切酶和DNA 连接酶的发现（标志着DNA 重组时代的开始）；B）载体的使用；C） 1970 年，逆转录酶及抗性标记的发现。
4. 基因工程研究的主要容是什么？基础研究：基因工程克隆载体的研究基因工程受体系统的研究目的基因的研究基因工程工具酶的研究基因工程新技术的研究应用研究：基因工程药物研究转基因动植物的研究在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究第二章基因克隆的工具酶1. 名词解释：限制性核酸切酶：一类能识别双链DNA 中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸酶。
回文结构：双链DNA 中的一段倒置重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构。
同尾酶：来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。
同裂酶：不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列黏性末端：DNA 末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA 末端通过互补配对粘合，这样的DNA 末端，称为粘性末端。
《基因工程的》教学大纲设计
红河学院《基因工程》理论课程教学大纲一、课程基本情况与说明（一）课程代码：（二）课程英文名称: Genetic Engineering（三）课程中文名称: 基因工程（四）授课对象：生物技术专业生物科学专业（五）开课单位：生命科学与技术学院（六）教材：《基因工程》，孙明主编，高等教育出版社，2006（七）参考书目[1] 《基因工程》，楼士林，北京科学出版社；[2] 《基因工程原理与应用》，陈宏，中国农业出版社；[3] 《基因工程》，刘祥林、聂刘旺，科学出版社。
（八）课程性质《基因工程》是生物技术专业的专业必修课程，同时也是生物科学专业的专业选修课。
其以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段而建立起来的一门技术学科。
基因工程兴起于20世纪70年代初，它的问世带动了生物技术的兴起和发展，是现代生物技术的核心内容。
基因工程课程的主要内容包括基因的分离、基因的克隆、基因的表达、植物基因工程、动物基因工程、药物基因工程和基因治疗等。
它是生命科学学院生物技术专业本科生的主干专业课程之一，它是生物工程(包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程)中最重要的课程，其它三大工程是建立在基因工程基础之上的，同时也为生物技术制药等后继学科奠定了重要的理论基础。
（九）教学目的1.使学生对基因工程基本原理及其主要操作技术有比较全面、系统的认识；2.使学生通过学习能够清楚基因工程的实质及发展现状；3.调动学生对基因工程技术的兴趣，使学生能运用所学的基本理论、知识和技能，分析和解决生产实践中相关的一般问题。
（十）教学基本要求要求学生通过本课程的学习了解并掌握基因操作基本原理和操作技术，清楚基因工程的实质和发展现状，并能够在实际的生产实践中较灵活的运用。
（十一）学时数、学分数及学时数具体分配学时数：54学时分数：3学分（十二）教学方式本课程是一门实践性很强的课程，理论课程与实验课程同步进行，在教学过程中，教师应充分利用现代教育技术，结合多媒体资料，使学生直观了解课程内容。
bac
发现小组发现话题小组、话题BAC及其转基因研究进展来自: 小蜉2007-09-29 19:09:17BAC及其转基因研究进展胡炜朱作言(中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉10087)摘要：奉文综述了细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromsomes，BAC)的构建、物理图谱制作方法及其靶位精细操作策略的研究进展同时，简要介绍了BAC转基因在基因功能以及基因表达与调控研究中的应用。
关键词：细菌人工染色体转基因利用转基因动物可有效地研究基因的表达调控及其功能。
增强子，座位控制区(MR)及insulators等调控元件对于转基因的高水平组织特异表达和整合十分重要，但这些调控元件常距基因约50kb之遥。
传统上，由于受DNA克隆载体容量的限制，制作转基因动物的外源基因片段通常小于20kb，因此某些调控基因活性的重要元素不可避免地被丢失，从而导致转基因的低水平表达及位置效应的产生。
人工染色体技术的建立和不断发展，为大基因和太基因簇的转基因研究提供了技术准备。
1987年，克隆容量可达几百至几千kb的酵母人工染色体(Yeast Artificial Chromosomes，YAC)问世，并可以通过同源重组的方式在酵母菌中对携带有基因组插人大片段的YAC进行操作，这些操作包括高效地引入报告基因、特定的缺失突变等，鉴于YAC转基因技术不仅保证巨大基因的完整性，保证所有顺式因子的完整并与结构基因的位置关系不变，而且目的基因上下游的侧翼序列可以作为缓冲区域，消除或减弱基因整台后的“位置效应”，使外源基因的表达更接近于真实情况，并为研究基因的功能提供便利。
为此，几个研究小组在YAC诞生之始即致力于建立YAC转基因技术。
1993年，Schedl等首次报道用显微注射法制备得到含35kb酪氨酸酶基因以及侧翼序列的转基因鼠，并在后代中检测到酪氨酸酶的表达。
同年，Yale大学医学院Forget教授随即在美国科学院院刊上以“YAC transgenes：bigger is probably better”为题发表述评，对这类大片段的转基因研究给予了高度评价。
酵母人工染色体载体
工作原理：
用BamH Ι酶切去除载体上的HIS3顺序，再用EcoR Ι切 开克隆位点，形成YAC的左右两臂，与外源大片段DNA在 该切点相连就形成一个大型人工酵母染色体，转化到酵母 细胞后可像染色体一样复制，并随细胞分裂到子细胞中去， 达到克隆大片段DNA的目的。外源DNA的转载导致抑制 基因SUP4插入失活，从而使重组菌形成红色菌落，而载体 自身连接转入到酵母细胞后所形成的菌落为白色。
酵母人工染色体pYAC4上的基本功能单位有：
1.CEN4顺序，来源于酵母第4号染色 体的着丝粒顺序，它提供酵母着丝粒 正常功能的所有顺式调控信息，可保 证YAC在酵母细胞分裂时向两极运动；
2.TEL顺序，来源于四膜虫大核中的 rDNA分子的末端，提供端粒形成顺 序，可保证YAC末端不被降解和重组， 且能够稳定地复制；
7.HIS3顺序。
酵母人工染色体载体的构建：
将酵母染色体DNA的端粒(TEL)、DNA的复制起点 (ARS)和着丝粒(CEN)，以及必要的选择标记(TRP1等)基因 序列克隆到大肠杆菌质粒pBR322中，获得的重组质粒就是 YAC载体。
常用的YAC载体有3种，即pYAC3、pYAC4和pYAC5， 其差别主要是sup4基因上的克隆位点不同，分别为SnaBI、 EcoRI和NotI位点。
优缺点
概念
酵母人工染色体载体（yeast artificial chromosome,YAC) 是利用酿酒酵母染色体的复制元件构建的载体，是最早 构建成功的人工染色体载体，其工作环境也是在酿酒酵 母中。
酿酒酵母的形态为扁圆形和卵形，生长代时为90min， 含16条染色体，其大小为225~1900kb，总计有14×106bp。
1.YAC载体在酵母中复制的必需元件包括：
bac制备方法
bac制备方法（原创实用版4篇）《bac制备方法》篇1BAC（细菌人工染色体）是一种基因载体，可以用于基因克隆和转化。
BAC 制备方法主要包括以下步骤：1. 构建BAC 载体：首先需要构建一个BAC 载体，通常包括一个选择标记、一个表达载体和一个人工染色体。
选择标记用于筛选转化的细胞，表达载体用于表达目标基因，人工染色体则是BAC 载体的主要组成部分。
2. 提取基因组DNA：从目标物种中提取基因组DNA，可以使用血液、组织或细胞等样本。
提取DNA 后，需要进行质量检测，确保DNA 的质量和纯度。
3. 构建BAC 文库：将提取的基因组DNA 片段化，并将其与BAC 载体连接起来，构建BAC 文库。
这一步通常需要使用限制性内切酶和DNA 连接酶等工具。
4. 转化细胞：将BAC 文库转化到受体细胞中，通常使用显微注射技术将BAC 载体注射到细胞中。
转化后，需要筛选出成功转化的细胞，并进行扩增和保存。
5. 筛选和鉴定：通过筛选和鉴定，确认BAC 载体是否成功导入目标基因。
筛选方法包括PCR、Southern blot 等。
《bac制备方法》篇2BAC（细菌人工染色体）是一种基因载体，用于携带外源基因并将其导入细胞中。
BAC 制备方法通常包括以下步骤：1. 构建BAC 载体：首先需要构建一个BAC 载体，通常包括一个选择标记、一个表达盒和一个复制起点等组件。
选择标记用于筛选携带外源基因的细胞，表达盒包含外源基因和其所需的启动子和转录因子，复制起点用于在细胞中复制BAC 载体。
2. 获取细菌宿主：通常使用大肠杆菌（Escherichia coli）作为细菌宿主。
需要选择一种能够承受BAC 载体并包含适当选择标记的菌株。
3. 转化BAC 载体：将BAC 载体通过转化方法引入细菌宿主中。
转化方法包括化学法（如钙离子处理）和电击法等。
4. 筛选转化细胞：通过选择标记筛选成功转化BAC 载体的细胞，并进行扩增。
5. 提取BAC 载体：从细菌宿主中提取BAC 载体，通常使用碱裂解法或超声波法等方法。
基因工程简答题总结
基因工程原理复习题思考题5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。
）6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？类型：DNA连接酶和RNA连接酶异同点：相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。
7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。
（传说中的网上答案）1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。
这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感5、尽可能缩小连接反应的体积6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？1）大肠杆菌DNA聚合酶2）Klenow fragment3）T7 DNA聚合酶4）T4 DNA聚合酶5）修饰过的T7 DNA聚合酶6）逆转录酶7）Taq DNA聚合酶第四章基因克隆的载体系统1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；具有合适的筛选标记；具有较高的外源DNA的载装能力；具有多克隆位点（MCS）；具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。
这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。
厦门大学基因工程课后思考题
第一章核酸的制备1.名词解释：脱氧核糖核酸：核糖核酸：ccc-DNA：当两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构时，称为共价闭合环形DNA（cccDNA）oc-DNA：如果两条核苷酸链中只有一条保持着完整的环形结构，另一条链出现一至数个缺口时，称为开环DNA（ocDNA）l-DNA,：发生双链断裂而形成线性分子（L—DNA），L构型DNA变性：双联变成单链DNA复性：单链又变成双链PCR, 模板，引物2.分别阐述用CTAB裂解法，SDS裂解法，碘化钠裂解法以及蛋白酶K裂解法和溶菌酶裂解法裂解细胞的依据。
溶菌酶：破坏细胞的细胞壁肽聚糖骨架，在内部渗透压的作用下使得细胞胀破。
CTAB裂解法：CTAB作为离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚SDS裂解法：利用中性去污剂NP-40破坏全血的红细胞膜，离心弃去溶血液，收集白细胞沉淀，加入去污剂SDS以破坏白细胞核膜，并使核蛋白解离，再加入高浓度的NaCl使DNA溶解，同时使蛋白盐析。
通过离心收集水相，加2——2.5倍体积的无水乙醇，沉淀DNA碘化钠裂解法：低渗破坏细胞，碘化钠破坏核膜蛋白酶K裂解法：蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解3.用于检测样品纯度和浓度的方法有哪些？简述个各方法的基本原理。
电泳、OD值、荧光定量法第二章基因工程工具酶1.名词解释：限制性内切核酸酶：在DNA上核苷酸的特定连接处以特定的方式把DNA双链切开DNA连接酶：催化DNA上裂口两侧(相邻)核苷酸裸露的3＇羟基和5＇磷酸之间形成共价结合的磷酸二酯键，使断开的DNA•裂口连接起来逆转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶DNA聚合酶：是一类催化DNA合成的酶类，酶的作用需要DNA或RNA作为模板，合成DNA链的序列与模板的序列互补Klenow片段（Klenow酶）：大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理,获得N端三分之二的大肽段,即Klenow 酶限制性图谱（物理图谱）：描述染色体上限制性内切酶切割位点之间距离和顺序的图谱，通常以DNA的长度来代表距离，因此为遗传物质提供了物理图谱。
一种用高拷贝质粒载体制备BAC载体基本功能基因的新方法
崔红王 ， 王亚萍 徐明 薛 石星明 ， 德松 王云 ， ， 举 ， 永志 ， 。兰 ， 峰。童光志 。
（ ．河北北 方学 院动物科技学院动物医学系 ， １ 河北张家 口 ０ ５３ ；． ７ １ １２ 河北 省张家 口市宣化区动物检疫站 ， 河北张家 口０ ５ ０ ３ ７ １０；．中国农 业科学 院
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bac载体的重要工作元件
重要的bac载体工作元件包括：
1. 起始子（origin of replication）：用于启动DNA复制过程的特定序列，使得DNA在细胞中能够自主地进行复制。
2. 选择标记（selection marker）：用于筛选成功转化了bac载体的细胞。
常用的选择标记包括抗生素抗性基因，如氨苄青霉素抗性基因（ampicillin resistance gene）或氯霉素抗性基因（chloramphenicol resistance gene）等。
3. 多克隆位点（multiple cloning site，MCS）：是一个包含多个限制酶切位点的DNA序列，用于插入外源DNA片段。
MCS通常位于载体上的转录起始子和终止子之间。
4. 转录起始子（promoter）：用于启动DNA的转录，将外源DNA片段转录成RNA。
5. 5' 端终止子（terminator）：用于终止转录过程，保证转录的准确性和稳定性。
此外，还有一些辅助元件，如DNA复制起始子（replication origin），能够增强复制效率；反向选择标记（counter-selection marker），用于筛选未成功转化的细胞等。
这些元件共同协作，构建了有效的bac载体，可以稳定地携带和复制外源DNA。