探讨P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白及肺耐药相关蛋白在结直肠腺癌中的表达意义

探讨P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白及肺耐药相关蛋白在结直肠腺癌中的表达意义孙青云;李一凡【摘要】目的探讨P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及肺耐药相关蛋白(LRP)在结直肠癌中的表达情况,并分析其临床意义.方法回顾性分析2014年8月至2016年6月在第二军医大学长征医院南京分院接受治疗的120例结直肠癌患者的临床资料,观察在不同病理特征的结肠癌患者中P-gp、MRP及LRP蛋白的表达情况,并分析其与患者肿瘤标志物水平的相关性.结果不同年龄、性别、组织学分型、分化程度和肿瘤大小的结直肠癌患者的P-gp、MRP蛋白阳性表达率差异无统计学意义,而直肠癌患者的LRP蛋白阳性表达率明显高于结肠癌,有淋巴结转移的患者LRP蛋白阳性表达率高于未转移者;有淋巴结转移、分化程度较低的患者的CEA、CA19-9和CA125表达水平较高,而不同年龄、性别、组织学分型、肿瘤部位和大小的结直肠癌患者的肿瘤标志物水平差异无统计学意义;结直肠癌患者的P-gp和MRP水平与患者的肿瘤标志物水平无明显相关性,而LRP水平与CEA、CA19-9和CA125表达水平呈正相关.结论 LRP在直肠癌中以及存在淋巴结转移的结直肠癌患者中阳性表达率较高,且与患者的肿瘤标志物水平密切相关.【期刊名称】《国际消化病杂志》【年(卷),期】2017(037)005【总页数】4页(P334-337)【关键词】P-糖蛋白;多耐药相关蛋白;肺耐药相关蛋白;结直肠癌【作者】孙青云;李一凡【作者单位】210015江苏南京,第二军医大学长征医院南京分院普外科;210015江苏南京,第二军医大学长征医院南京分院普外科【正文语种】中文结直肠癌是临床上较为常见的消化系统恶性肿瘤，相关研究显示结直肠癌的发病率高达0.006%，且近年来呈现明显的上升趋势[1]。

临床上结直肠癌的发生发展将导致患者病死率上升，并导致不良临床结局发生。

近年来研究显示，在消化系统恶性肿瘤的发生发展过程中，肿瘤基因相关蛋白发挥了重要的调控作用[2-3]。

包括肿瘤耐药蛋白等在内的多种蛋白，可以通过影响肿瘤细胞对于化学治疗药物或者自身抗肿瘤成分的外排，进而导致肿瘤耐药发生，促进肿瘤细胞的持续性增殖[4-5]。

本研究通过回顾性分析2014年8月至2016年6月在第二军医大学长征医院南京分院接受治疗的结直肠癌患者的临床资料，探讨了P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及肺耐药相关蛋白(LRP)等的表达变化，现报道如下。

1.1 患者一般资料回顾性分析2014年8月至2016年6月在第二军医大学长征医院南京分院接受治疗的结直肠癌患者的临床资料。

纳入标准：(1)年龄≥50周岁；(2)术中诊断为结直肠癌；(3)未接受相关治疗者。

排除标准：(1)临床资料不全者；(2)合并其他系统严重疾病者。

本研究共纳入研究对象120例，其中直肠癌者52例，结肠癌68例；男65例，女55例，年龄53～77岁，平均(65.28±6.37)岁。

1.2 方法采用ELISA法检测P-gp、MRP及LRP水平，采用组织研磨法采集病灶部位组织，加入细胞裂解液，采用低温高速离心机进行离心，1000 r/min(离心半径为15 cm)，获得血清后抽取50 μL样品加入96孔板内，采用去离子水作为阴性对照，采用磷酸盐缓冲液作为阳性对照，平衡摇晃20 s混匀，室温下孵育2 h，采用TBSP缓冲液清洗3次，每次5 min，加入100 μL底物，平衡摇晃30～45 s，25 ℃室温下孵育40 min，加入250 μL终止物，直到96孔板中每孔的颜色变黄，最后以空白对照为基准，采用分光光度计进行读数。

P-gp、MRP及LRP抗体购自罗氏检测公司，相关配套试剂购自南京凯基生物科技有限公司，严格按照说明书的要求进行操作。

1.3 评价指标观察不同病理特征的结肠癌患者P-gp、MRP及LRP蛋白的表达情况，并分析其与患者肿瘤标志物表达水平的相关性。

1.4 统计分析采用SPSS 11.5统计软件进行分析。

计量资料采用均数±标准差表示。

不同病理特征的结肠癌患者P-gp、MRP及LRP蛋白表达情况的比较采用卡方检验进行分析，采用Pearson相关分析法分析P-gp、MRP及LRP蛋白表达情况与肿瘤标志物水平的相关性。

Plt;0.05表示差异有统计学意义。

2.1 不同病理特征的结肠癌患者P-gp、MRP及LRP蛋白的表达情况不同年龄、性别、组织学分型、分化程度和肿瘤大小的结直肠癌患者的P-gp、MRP蛋白阳性表达率差异无统计学意义，而直肠癌患者的LRP蛋白阳性表达率明显高于结肠癌，有淋巴结转移的结直肠患者LRP蛋白阳性表达率高于未转移的患者。

见表1。

2.2 不同临床特征患者肿瘤标志物水平的比较表2显示，有淋巴结转移、分化程度低者CEA、CA19-9和CA125表达水平较高，而不同年龄、性别、组织学分型、肿瘤部位和大小的结直肠癌患者的肿瘤标志物表达水平差异无统计学意义。

2.3 结肠癌患者P-gp、MRP及LRP蛋白表达情况与肿瘤标志物水平的相关性结果显示，结直肠癌患者的P-gp和MRP水平与患者的肿瘤标志物水平无明显相关性，而LRP与CEA、CA19-9和CA125水平呈正相关。

见表3。

饮食习惯的改变、过度饮酒及遗传易感因素等，均可以促进结肠癌的发生发展，特别是年龄gt;45岁的老年吸烟男性，结直肠癌的发病率可达0.005%以上，且近年来呈明显上升趋势[6]。

结直肠癌患者容易早期发生淋巴结及血行转移，临床预后较差，5年生存率lt;35%，中位生存时间lt;32个月[7]。

通过对结直肠腺癌发生发展过程中相关生物学分子表达的研究，可为早期诊断提供新的思路。

分子生物学的改变对于恶性肿瘤的发生具有重要的调控作用，肿瘤细胞内耐药蛋白的表达变化等，可以通过诱导线粒体的活性，导致细胞耐药的发生，从而保护肿瘤细胞的异常分化，导致肿瘤细胞过度增殖。

P-gp、MRP的氨基末端区域的某些专一位置形成N6-乙酰赖氨酸，通过H1位点的磷酸化，进而影响耐药蛋白的活性[8-9]；LRP可以通过其羧基末端的糖蛋白偶联作用，导致肿瘤细胞的分化和凋亡调控异常，促进肿瘤细胞的转移和侵袭[10]。

有研究探讨了P-gp、MRP及LRP等在结直肠癌患者肿瘤病灶中的异常表达，指出P-gp、MRP及LRP的表达可以显著促进肿瘤细胞的增殖和远处转移[11-12]，但迄今为止对于P-gp等与结直肠癌患者临床病理特征或者血清肿瘤分子标志物的关系研究仍不足。

本研究发现，P-gp、MRP的表达与结直肠癌的临床病理特征并不具有明显的相关性，在不同的肿瘤细胞分化程度、组织学分型或者肿瘤病灶大小的样本中，P-gp、MRP的表达差异无统计学意义，提示两者可能并不影响结直肠癌的发生发展。

这与Micsik等[13]的结论并不完全一致，他们认为结肠癌患者肿瘤病灶组织中的P-gp可平均上升25%以上，P-gp等表达水平的上升可促进病灶的侵袭，考虑到结直肠癌患者临床病例的入组偏倚、检测方法的不统一等，均可能导致最终结论的差异。

在结直肠癌患者中，LRP蛋白的表达水平较高，同时在细胞分化较差的组织中，LRP蛋白的表达可进一步上升，表明LRP蛋白可能参与了结直肠癌的发生或者细胞异常分化等病理过程。

LRP可以通过影响多重耐药蛋白-9的表达，导致肿瘤细胞间质成分降解，从而促进肿瘤病灶浸润或者进展。

Ma等[14]通过回顾性分析了137例结直肠癌患者的临床资料，发现LRP蛋白表达可以促进腹股沟淋巴结转移，并可增加5%左右的低分化肿瘤细胞的形成，这与本研究的结论相似。

CEA、CA19-9和CA125是评估肿瘤患者病情或者临床预后的重要指标，在淋巴结转移、分化程度低的患者中，CEA、CA19-9和CA125的表达明显上升，而通过相关关系分析也可以发现，LRP与CEA、CA19-9和CA125水平呈正相关，提示LRP与结直肠癌的病情密切相关。

综上所述，在结直肠癌患者病灶组织中，LRP的表达明显上升，且LRP的表达与结直肠癌患者的肿瘤生物学指标密切相关。

但本研究对于LRP的表达与患者远期临床预后指标如病死率等的研究不足，存在一定的局限性。

【相关文献】1 杨成万, 陶明珠, 龙汉安. 直肠黏液腺癌组织中四种耐药基因蛋白的表达变化及意义[J]. 山东医药, 2015, 25: 5-7.2 钟武, 张磊昌, 钟世彪, 等. 结直肠癌患者术前CEA、CA19-9浓度与临床病理特征及预后的关系[J]. 中国普通外科杂志, 2015, 24: 499-504.3 王振贤, 郑友峰, 梁勇, 等. 结直肠癌肺转移患者的临床特点、转移灶表现、治疗方式及预后情况[J]. 世界华人消化杂志, 2014, 22: 2513-2517.4 黎骋. 结直肠癌组织中耐药基因P-gp、GST、TopoⅡ的表达[J]. 胃肠病学和肝病学杂志, 2014, 23: 779-782.5 刘亿, 徐亮. 结直肠癌体外药敏与多药耐药基因表达的相关性研究进展[J]. 泸州医学院学报, 2015, 38: 222-224.6 Shen A, Chen H, Chen Y, et al. Pien tze huang overcomes multidrug resistance and epithelial-mesenchymal transition in human colorectal carcinoma cells via suppression of TGF-β pathway[J]. Evid Based Complement Alternat Med, 2014, 2014: 679436.7 Mullins CS, Eisold S, Klar E, et al. Multidrug-resistance proteins are weak tumor associated antigens for colorectal carcinoma[J]. BMC Immunol, 2011, 12: 38.8 贾晓艳, 孙静阳, 杨娟, 等. Pgp、Top-Ⅱ、EGFR在结直肠癌中的表达及意义[J]. 现代肿瘤医学,2015, 23: 381-384.9 宗明珠, 冯婉婷, 杜楠, 等. 结直肠癌奥沙利铂耐药相关蛋白的筛选与鉴定[J]. 肿瘤, 2013, 33: 223-228.10 Liang X, Xu X, Wang F, et al. E-cadherin increasing multidrug resistance protein 1 via hypoxia-inducible factor-1α contributes to multicellular resistance in colorectal cancer[J]. Tumour Biol, 2016, 37: 425-435.11 Xu K, Liang X, Cui D, et al. miR-1915 inhibits Bcl-2 to modulate multidrug resistance by increasing drug-sensitivity in human colorectal carcinoma cells[J]. Mol Carcinog, 2013, 52: 70-78.12 Xu K, Shen K, Liang X, et al. MiR-139-5p reverses CD44+/CD133+-associated multidrug resistance by downregulating NOTCH1 in colorectal carcinoma cells[J]. Oncotarget, 2016, 7: 75118-75129.13 Micsik T, Lörincz A, Mersich T, et al. Decreased functional activity of multidrug resistance protein in primary colorectal cancer[J]. Diagn Pathol, 2015, 10: 26.14 Ma B, Zhang H, Wang J, et al. HIV-1 viral protein R (Vpr) induction of apoptosis and cell cycle arrest in multidrug-resistant colorectal cancer cells[J]. Oncol Rep, 2012, 28: 358-364.。