小鼠早期胚胎发育和胚胎移植
小鼠胚胎操作实验手册
小鼠胚胎操作实验手册小鼠胚胎操作实验手册目录1. 引言1.1 胚胎操作实验的意义1.2 实验前的准备工作2. 实验器材和试剂准备2.1 实验器材清单2.2 试剂准备和储存要点3. 小鼠胚胎操作步骤3.1 小鼠交配和胚胎收集3.2 胚胎培养和处理3.3 胚胎移植和植入3.4 胚胎标记和观察4. 数据记录和结果分析4.1 数据记录要点和格式4.2 结果分析和统计方法5. 安全注意事项和实验规范5.1 生物安全操作要求5.2 实验规范和伦理要求6. 实验故障排除和常见问题解决6.1 常见操作问题和解决方案6.2 实验故障排除建议7. 参考文献和扩展阅读7.1 相关研究文献推荐7.2 扩展阅读和资源推荐引言1.1 胚胎操作实验的意义胚胎操作实验是研究胚胎发育和基因功能的重要手段，通过对小鼠胚胎的操作和处理，可以揭示胚胎发育的机制和影响因素。
1.2 实验前的准备工作在进行胚胎操作实验之前，需要进行充分的准备工作，包括实验器材和试剂的准备、实验操作流程的熟悉、实验动物的选取和饲养等。
实验器材和试剂准备2.1 实验器材清单列举常用的器材和仪器，并说明其用途、规格和供应商信息，包括显微镜、离心机、培养皿、吸管、移液器等。
2.2 试剂准备和储存要点介绍常用的试剂，包括培养基、胚胎染色剂、抗体等，说明其配制方法、储存条件和稳定性要求。
小鼠胚胎操作步骤3.1 小鼠交配和胚胎收集阐述小鼠交配的方法和时间安排，以及胚胎的收集和处理步骤，包括解剖、体外培养和胚胎筛选等。
3.2 胚胎培养和处理详细描述胚胎的培养方法和处理步骤，如细胞培养、转染、基因敲除、基因表达等实验操作。
3.3 胚胎移植和植入介绍胚胎移植和植入的方法和注意事项，包括手术操作、不同器官的移植方式和移植成功率的评估等。
3.4 胚胎标记和观察说明如何对胚胎进行标记和观察，包括荧光染料标记、显微镜观察和胚胎发育阶段的划分等。
数据记录和结果分析4.1 数据记录要点和格式指导实验者如何记录实验过程中的数据和结果，包括实验条件、样本信息、实验数据和观察结果等，并规范化数据记录格式。
胚胎移植
2.4 胚胎的采集
采集时间的确定：发育时程 采集方法： 手术法采集：适应范围广 非手术法采集：牛、马
2.5 胚胎的检查和鉴定
A级：发育阶段与胚龄一致；胚胎形态完整，轮廓清晰，呈球形，分裂球 大小均匀，结构紧凑，色调和透明度适中，无游离的细胞和液泡 B级：发育阶段与胚龄基本一致；胚胎形态完整，轮廓清晰，分裂球大小 基本一致，可见到少量游离的细胞和液泡 C级：轮廓不清晰，色调发暗，结构较松散，游离的细胞或液泡较多 D级：胚胎细胞无组织结构，碎片占主要成分；
2.胚胎移植技术程序及操作
供体和受体的选择 超数排卵处理 供体母畜的配种 胚胎的收集 胚胎的检查 胚胎的保存与培养 胚胎的移植 供体和受体的术后观察
胚胎移植程序示意图
同 期 发 情
×
胚胎收集 质量检查 ET
受体母牛
体外受精-胚胎移植（IVF-ET）技术流程图
2.1供体和受体的选择
早期胚胎的游离状态 子宫对早期胚胎的免疫耐受性 胚胎遗传物质的稳定性
Morula
solid ball of cells
Zygote Blastocyst
with blastocoele cavity
1.3.2 胚胎移植的基本原则
1.胚胎移植前后所处的环境的同一性
（1）供体和受体在分类学上属于同一物种 （2）胚胎发育阶段与受体发情时间上的一致性 （3）胚胎发育阶段与受体生殖道解剖位置的一 致性
12
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14
抗 血 清 配 种
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配 种
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18 检 查 黄 体
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20
冲胚
12:00 PMSG 2500IU
小鼠成长计划书
小鼠成长计划书1. 引言小鼠作为一种常见的实验动物，其生长发育阶段对于生物学研究具有重要意义。
本文档旨在提供一份小鼠成长计划书，以帮助研究人员更好地了解小鼠的成长过程和相关实验设计。
2. 小鼠的生长发育阶段小鼠的生长发育阶段主要分为胚胎期、初生期、幼年期、青年期和成年期。
具体的发育时间和特点如下：•胚胎期：从受精到出生，约为19-21天。
在此阶段，小鼠的器官和组织开始形成，神经系统和肌肉系统的发育突出。
•初生期：出生后的第1-2周。
小鼠身体逐渐适应外界环境，开始进行吸食和排泄。
•幼年期：第3-4周到第6-8周。
小鼠的生长速度加快，体重迅速增加，开始进行独立进食，并且有学会追逐和玩耍的行为。
•青年期：第8周到第16周。
小鼠的生长速度逐渐减缓，体重增长趋于稳定，性成熟开始出现。
•成年期：第16周以后。
小鼠达到生殖能力的完全成熟，维持体重和生长速度的平衡。
3. 小鼠成长的环境要求在小鼠成长过程中，提供良好的环境对其健康和正常发育至关重要。
以下是小鼠成长过程中的环境要求：3.1 温度和湿度小鼠对温度和湿度都非常敏感，需要在适宜的环境下生长。
一般来说，小鼠的舒适温度范围为20-26摄氏度，相对湿度在30％-70％之间。
3.2 日夜节律小鼠是夜行性动物，它们有明显的昼夜节律。
因此，为了保持小鼠的生物钟节律和正常行为，提供稳定的光照和黑暗周期是必要的。
一般建议使用12小时的光照和12小时的黑暗。
3.3 饮食小鼠需要提供均衡营养的饮食以支持其生长发育。
常用的小鼠饲料包括小鼠粮和蔬菜水果等。
此外，确保水源的干净和充足也是必要的。
3.4 社交环境小鼠是社交性动物，需要与同类保持一定社交互动。
因此，建议将小鼠群体放置在适宜大小的笼子中，以提供良好的社交环境和空间。
4. 进行小鼠相关实验的注意事项在进行小鼠相关实验时，需要注意以下事项：4.1 预实验准备在开始实验前，需要对小鼠进行特定的预实验准备，包括饲养条件、实验目的、实验操作步骤等。
动物胚胎培育技术的操作指南
动物胚胎培育技术的操作指南随着科学技术的不断发展，动物胚胎培育技术在畜牧业和生物医学领域扮演着重要的角色。
胚胎培育技术可以帮助我们研究生殖生物学、改良家畜品种，甚至是克隆动物。
在这篇文章中，我们将介绍动物胚胎培育技术的操作指南，以帮助读者更好地理解和掌握这一技术。
胚胎培育技术主要包括体外受精（IVF）和胚胎移植两个步骤。
在体外受精阶段，首先需要从母体动物中收集卵子和精子。
对于较大的动物，如牛、猪和马，可以通过超声波引导下的卵巢穿刺采集卵子。
对于较小的动物，如小鼠或小鸟，可以通过解剖手术或通过特殊仪器采集卵子。
精子可以通过自然排出或通过人工方式采集。
采集到卵子和精子后，需要进行体外受精。
首先，将卵子和精子放入含有适当培养液的离心管中。
然后，通过离心或通过特殊仪器的帮助，使卵子和精子接触，促进受精的发生。
接下来，将受精卵转移到培养皿中，并将其置于恒温灭菌的培养箱中。
培养皿中的培养液需要定期更换，以提供所需的营养物质和生长因子。
胚胎培养的下一步是胚胎移植。
胚胎移植是将成熟的胚胎植入到母体动物的子宫内，使其继续发育。
在进行胚胎移植前，需要将母体动物的子宫内膜准备好，以提供适宜的环境供胚胎着床。
这可以通过激素治疗或手术操作来实现。
在胚胎移植过程中，需要将培养的胚胎转移到母体动物的子宫内。
这可以通过经阴道插管或腹腔手术来完成。
移植后，需要密切观察胚胎在母体内的发育情况。
一些胚胎可能无法成功着床或在早期发展阶段产生问题，这是正常现象。
但一旦胚胎着床成功并进一步发育，将会带来新生仔动物。
动物胚胎培育技术的操作需要具备一定的专业知识和技能。
操作时，需要注意保持手术场所的清洁和无菌，以避免感染。
培养液的配制和保存也需要严格按照制定的方案进行。
此外，在胚胎移植过程中，要小心处理胚胎，以防止对其造成损伤。
动物胚胎培育技术的应用十分广泛。
不仅可以帮助畜牧业提高品种质量和数量，还可以为生物医学领域提供重要的研究工具和资源。
小鼠早期胚胎发育的研究 )
小鼠早期胚胎发育的研究（实验方案）基础生物学课程设计所在学院生物科学与工程学院专业班级生物科学学生姓名学生学号指导教师XXXX年XX月XX日小鼠早期胚胎发育的研究一、引言胚胎发育一词通常是指从受精卵起到胚胎出离卵膜的一段过程。
而无脊椎动物胚胎学家则常把其概念扩展到胎后发育直到性成熟，甚至整个生活史。
动物胚胎的发育过程虽然动物的种类繁多，但是胚胎的发育依然拥有相似的过程，能够分成受精、卵裂、桑葚胚、囊胚、原肠胚与器官形成等阶段。
此外脊椎动物的胚胎发育过程中，各种动物共同拥有的特征会首先出现(如皮肤)，之后才逐渐发展出特化的构造(如鱼鳞)，而且较复杂的物种与较原始的物种之间一开始相当类似，之后才随着发育的时间而慢慢增加变异。
受精:卵子和精子融合为一个合子的过程。
它是有性生殖的基本特征，普遍存在于动植物界，卵裂:精子与卵子结合之后会形成受精卵，由于卵黄的分布具有不对称的特性，因此受精卵可以分为动物极(会发展成外胚层)和植物极(会发展成中胚层与内胚层)。
在卵裂时期，卵子会先分裂成两个细胞，之后细胞通常会逐次倍增，但是对哺乳类而言，有时候会有不同时分裂并造成只有奇数个细胞的现象。
在这个阶段，胚胎的总体积大致不变。
不同的物种具有不同的卵裂方式，可以分为完全卵裂(holoblastic cleavege)和不完全卵裂(meroblastic cleavage)，分别又可以细分成许多不同方式。
如无脊椎动物的辐射卵裂与螺旋卵裂、哺乳动物的旋转式分裂等。
原肠胚:当细胞分裂成为囊胚之后，会经过一段称为原肠形成的型态发生过程，之后形成原肠胚。
原肠形成过程有许多不同方式，能够大致分成5种:内陷式(Invagination)、衰退式(Involution)、进入式(Ingression)、脱层式(Delamination)、包覆式(Epiboly)，动物的胚胎利用这5种方式形成了外胚层、中胚层与内胚层的组合，而这三种胚层在之后会形成各种细胞。
小鼠胚胎获得实验报告
一、实验目的1. 掌握小鼠胚胎的采集方法。
2. 了解小鼠胚胎的发育过程。
3. 培养实验操作技能。
二、实验原理小鼠胚胎的获得是通过人工操作，将雌鼠的受精卵取出，进行体外培养，直至发育成胚胎。
该实验旨在研究小鼠胚胎的发育过程，为后续的胚胎移植、基因编辑等研究提供基础。
三、实验材料1. 实验动物：雌性小鼠、雄性小鼠2. 实验仪器：显微镜、解剖显微镜、培养箱、离心机、培养皿、手术器械等3. 实验试剂：生理盐水、DEPC水、培养液、抗凝剂、消毒剂等四、实验步骤1. 实验动物处理（1）将雌性小鼠和雄性小鼠分别饲养于清洁、通风的动物房中，保持适宜的饲养条件。
（2）雌性小鼠和雄性小鼠分别进行交配，交配后观察雌性小鼠的阴道涂片，确认受精情况。
2. 胚胎采集（1）雌性小鼠交配后第2天，用解剖显微镜观察雌性小鼠的阴道涂片，确认受精情况。
（2）雌性小鼠交配后第3天，将雌性小鼠麻醉，固定于解剖显微镜下。
（3）用手术器械取出雌性小鼠的子宫，置于培养皿中。
（4）在解剖显微镜下，用镊子取出受精卵，置于培养皿中。
3. 胚胎培养（1）将受精卵放入培养箱中，在37℃、5%CO2、95%空气的条件下培养。
（2）观察受精卵的发育过程，记录胚胎的形态变化。
4. 实验结果分析（1）观察胚胎的发育过程，记录胚胎的形态变化。
（2）分析胚胎发育过程中各阶段的形态特征。
五、实验结果1. 胚胎发育过程（1）受精卵在培养箱中培养24小时后，可见胚胎开始分裂。
（2）培养24小时后，胚胎发育至桑椹胚阶段。
（3）培养48小时后，胚胎发育至囊胚阶段。
（4）培养72小时后，胚胎发育至原肠胚阶段。
2. 胚胎形态特征（1）受精卵：透明、圆形，直径约100μm。
（2）桑椹胚：细胞数目增多，排列紧密，形成桑椹状。
（3）囊胚：细胞分化明显，形成囊胚腔。
（4）原肠胚：细胞分化更加明显，形成原肠。
六、实验结论1. 通过人工操作，成功获得小鼠胚胎。
2. 小鼠胚胎在体外培养过程中，经历了受精卵、桑椹胚、囊胚、原肠胚等阶段。
采集小鼠受精卵
采集小鼠受精卵小鼠受精卵（早期胚胎）采集在基因工程小鼠的制备和保种中都是非常重要的步骤。
只有采集到足够数量和质量的受精卵，才能更有效地进行显微注射、胚胎移植或冻存复苏，保证获得高质量的子代小鼠。
那么受精卵到底是怎么采集的呢？今天我们就来介绍一下1细胞期与2细胞期胚胎的收集方法。
哺乳动物的受精过程发生在输卵管内，小鼠胚胎进入子宫着床时间大约为4天左右。
因此，需要在配种后或受精后的适当时间从超排供体收集不同时期的胚胎。
小鼠受精后4.5天内早期胚胎发育的过程：[图片来自：Genetics & Development]人、小鼠、大鼠胚胎发育阶段对应时间点：[图片来自：https://.au]受精卵获得的方法分自然排卵、激素诱发排卵和体外受精三种方法。
我们今天介绍的是诱发排卵（超排）后采集受精卵的方法。
雌鼠超排与合笼超排不同背景的小鼠超排周龄都是不同的，剂量也是不同的。
那以常用的C57小鼠为例，超排周龄为3-4周龄。
当达到超排周龄后，向雌小鼠腹腔内注射5个国际单位(IU)的孕马血清促性腺激素(PMSG)，然后约46-48h后再注射5 IU的人绒毛膜促性腺激素(hCG)，12h后即可诱发排卵。
图1. 雌鼠超排与受精卵早期发育时间轴[图片来自：Ivan Bedzhov, et al. In vitro culture of mouse blastocysts beyond the implantation stages. Nature Protocols volume 9, pages 2732–2739 (2014)]合笼1）雌小鼠给予hCG后与成熟雄性小鼠进行合笼。
雄鼠交配一般是在夜晚发生，交配过程中建议不换笼，交配过的雄小鼠，间隔一周后才进行下次交配。
2）交配后过夜易见小鼠的阴道栓。
1-cell期胚胎采集输卵管切开1）通过断颈快速处死见栓0.5天的小鼠。
2）将小鼠背部靠尾部剃毛并用70%的乙醇彻底涂搽手术部位。
第六章动物人工繁殖
3、异种体细胞克隆阶段
异种体细胞克隆就是将一种动物得体细胞核移植到另一种动物得去核(遗传物质)卵母细胞 中。 由于濒危物种得个体数量少,很难提供用于克隆得卵母细胞和代孕受体,这就促使科学家提 出了异种克隆得设想。 异种克隆研究面临着许多问题,如体细胞核能否在异种卵胞质中去分化并支持早期胚泡发育？ 异种核质能否相容？异种重构胚能否着床并进行全程发育等问题。 1999年,中科院动物所实验室将成年大熊猫体细胞作为供核体细胞移植到去核(遗传生物)日 本大耳白兔卵母细胞中成功地构建异种重构胚,体外培养获得孵化囊胚。 2001年将重构胚移植寄母子宫,获得了着床得重大进展。 2002年,不仅异种重构胚能够在异种寄母子宫中着床,而且还能发育,这就是异种克隆大熊猫 研究中攻克得最后一个难题中得最新进展。
试管婴儿得三个阶段:
第一代试管婴儿:最早成功得常规技术。 第二代试管婴儿:采用显微受精技术将单个精子注射进卵细胞内使其受精。适用 于男性原因得不孕,如少精、弱精等。1996年,我国第二代试管婴儿(ICSI)在中山 医科大学获得成功。 第三代试管婴儿:对体外受精得胚胎取出细胞进行遗传学诊断后再行胚胎移植。 我国第三代试管婴儿(PGD)在中山医科大学获得成功。 2000年3月,我国首例超快速冷冻胚胎移植得试管婴儿在湖南医科大学人类生殖 工程研究室诞生,标志着我国在该领域得研究已进入世界先进行列。 进一步,美国、日本、台湾正研制多胞胎和“人造子宫”以完成怀孕全过程。
胚胎工程---体外受精(IVF)(第一步骤)
精子获能就是精子获得穿透卵子透明带能力得阶段。
精子获能分为体内获能与体外获能 体内获能:精子在附睾内已经获得了受精能力,但由附睾分泌得一种物质附于精
子表面,抑制了她得受精能力,这种物质被称为去能因子。去能因子就是顶体 酶得抑制剂。 体外获能:精子通过用子宫液、卵泡液、子宫内膜提取液或血清等在体外培养获 能得过程。 2 、卵子回收及成熟培养 3 、卵子和精子得体外受精(in vitro fertilization IVF) 受精成功得标志至少就是看受精卵就是否可以发育至囊胚期阶段 4 、受精卵得体外发育及体外培养
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小鼠早期胚胎发育和胚胎移植
/4544.htm、
小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。
胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。
胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。
小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。
胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。
胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。
一些发达国家已有经营奶牛和肉牛胚胎移植的企业公司，向国外销售胚胎。
在我国，这一技术的研究起步较晚，1974年在绵羊上获得成功，1978年在奶牛上获得成功，80年代后期90年代初，奶牛、安哥拉山羊和绵羊的胚胎移植开始在生产上应用。
胚胎移植术也是显微操作中最基本的实验技术，是从事其它显微操作如嵌合体动物、胚胎干细胞、转基因动物和细胞核移植等实验必不可少的步骤。
下面以小鼠为例，介
绍哺乳动物的早期胚胎发育及胚胎移植的操作过程。
实验技术
一、人工催情和超数排卵
1. 小鼠的性别鉴定：
成年小鼠的性别较易鉴别。
雌鼠可见有明显的阴道开口和明显的五对乳头，雄鼠可见明显的阴囊，仔鼠或幼鼠则主要以它们的外生殖器与肛门的距离来区别，距离近的为雌鼠，距离远的为雄鼠。
2. 人工催情：
成年小鼠在非妊娠和非哺乳期间，任何时间都可发情，性周期为4-5天。
超数排卵一般选用体重在20-30g的雌鼠，注射孕马血清（PMSG）促使超排。
每头雌鼠注射PMSG 5-10IU，注射时间可在第一天下午4时左右，注射部位为腹腔。
在第三天的下午4时左右腹腔再注射绒毛膜促性腺激素（hCG）5IU，并和雄鼠合笼饲养让其自然交配。
第四天上午8时左右检查雌鼠，如有阴道栓形成者，即可供采卵。
阴道栓是雌鼠交配后精液与阴道分泌物及阴道上皮等凝结而成的，位于阴道口附近，一般在交配后数分钟即可出现
（图16.3）。
最初阴栓湿润而软，随后逐渐变硬转为黄色，最后阴栓缩入阴道液化而消失，此过程需10余小时，有的在24-48小时后仍可见。
在合笼后每天上午8-9 时，下午5-6时检查阴栓，出现阴栓即可认为是妊娠的第一天，即胚龄的第一天。
二、受精卵及囊胚的获得
1. 受精卵的获得：
将检查有阴栓的小鼠用脊椎脱臼法处死，70%酒精消毒腹部。
在腹部中央横剪一小口（0.5cm 宽），将两边皮肤肌肉沿切口部剪开，暴露腹部器官；用剪刀和镊子除去卵巢、输卵管和子宫周围的脂肪组织，把输卵管取出（图16.4，16.5），置于盛有培养液的表面皿中。
在解剖镜下找到输卵管膨胀的壶腹部，用镊子撕开一小口，卵子即自然流出（图16.6）。
如受精卵已迁移到输卵管的狭窄部，则可用冲洗法收集受精卵。
方法是：在解剖镜下找到输卵管喇叭口，可以用小玻璃探针帮助，将吸有冲卵液的注射器针头对准喇叭口，右手用小镊子轻轻将喇叭口套在针头上，套进约1mm即可，并用镊子把管
口轻轻夹住；左手轻推注射器，压出0.5ml冲卵液即可将输卵管中的卵冲出。
一般在一侧输卵管中可冲出4-10个卵。
收集到的受精卵带有卵丘细胞，必须在含有透明质酸酶（Hyaluronidase,1mg/ml）的培养液中溶去卵丘细胞，再将受精卵换到新鲜的培养液内洗涤3-4次才可用于移植。
冲卵液要保持37℃。
2. 囊胚的获得：
取妊娠第四天的供胚鼠，同法取出子宫，放在消毒滤纸上，吸净子宫周围的血液。
用装有冲卵液的注射器针头从上端（即靠近卵巢一端）插入子宫，将胚胎冲入培养皿中。
用移卵吸管吸取胚胎放入新的培养液中清洗一下，用于移植。
三、假孕鼠的制作
1. 不育雄鼠：
选性成熟且健壮的雄鼠，结扎输精管，恢复2-3周后，与性成熟的雌鼠交配，检查雌鼠有阴道栓但不怀孕产仔。
证明结扎手术成功，可作为不育雄鼠或称阉割鼠。
2. 供胚鼠：
选择性成熟且处于发情期的雌鼠，在下午4时左右与雄鼠合笼，第二天早晨挑出有阴道栓者为供胚鼠或称孕鼠。
3. 假孕鼠：
假孕鼠是胚胎移植时的受体。
其生殖系统生理状态与移入卵的发育阶段同步，从而为移植的胚胎提供着床和继续发育的条件。
一般选择生过一胎，母性较好的雌鼠和阉割鼠合笼，次日上午挑选有阴道栓者为假孕鼠。
四、胚胎移植
从受精卵到囊胚（受精0.5-3.5天），都可以转移至假孕鼠的生殖管道以完成发育。
胚胎移植有输卵管移植和子宫移植两种。
单细胞到桑椹期的卵可转移至受孕0.5天的假孕鼠的输卵管。
输卵管移植仅适用于被透明带包裹的卵；3.5天的囊胚转移至假孕鼠的子宫。
用于子宫移植的胚胎不需有透明带。
1. 输卵管移植（图16.7）：
（1）将假孕鼠麻醉后在背部偏下方表皮，70%酒精消毒。
（2）在背腰中央纵向剪开皮肤，开口约为0.7cm。
用镊子沿切口剥开皮肤、肌肉，透过肌层可见白色脂肪垫位于脊柱两侧约1cm处。
（3）在脂肪垫的位置剪开肌肉层，切开0.5cm的小口，用小镊子夹住脂肪组织，把一侧的卵巢、输卵管与子宫一起拉出，固定好，置于显微镜下。
（4）用移胚管吸取卵子。
可先吸入部分石蜡油，再吸卵以便于控制。
吸卵前先吸1个气泡，然后再吸一段培养液，接着吸卵，再吸一个气泡，最后吸进一些培养液。
（5）用镊子夹住输卵管喇叭口周围接合部，随即将移胚管插入喇叭口中，轻轻向输卵管内吹气，直至第二、第三个气泡进入输卵管内。
移胚管略停一下再行拔出，以防气泡与卵子逸出。
（6）将脂肪垫、卵巢、输卵管及子宫等复位，缝合伤口。
小鼠苏醒后单笼饲养，18天左右分娩。
2. 子宫移植（图16.8）：
（1）小鼠的麻醉和解剖同输卵管移植。
（2）解剖镜下用小镊子夹住子宫上端，在子宫上端血管分布少处，用4号针头刺破子宫壁。
拔出针头。
（3）用移胚管吸取囊胚，方法同输卵管移植，将移胚管沿原针刺孔隙插入子宫，轻轻将胚胎吹入子宫内。
（4）将子宫、输卵管及卵巢等复位。
缝合伤口，消毒后等待小鼠苏醒。
18天左右分娩。
实验观察
小鼠着床前的胚胎，直径约为90-100微米（包括透明带）。
在解剖镜（25×）下，只能看到它的存在，对细胞形态无法辨认。
在进行活体观察时，最好用150×或300×的相差显微镜，在视野内可以清楚地看到受精卵和周围的透明带，透明带内有1-2个极体，位于受精卵的一侧。
哺乳动物的卵裂是不同步的，2细胞期分裂球近圆形，大小不完全相等，在两分裂球之间有一极体，透明带清晰可见。
4细胞期与其他脊椎动物的分裂情况不同，可以看到四个分裂球交错排列。
8细胞期，仍可看到极体和透明带。
分裂球排列分成上下两层。
分裂球均呈圆形。
16细胞期为桑椹胚。
32细胞期，在分裂球之间出现缝隙，系囊胚腔的开始。
72小时后出现完整的囊胚腔，腔的一侧，集中有一群细胞，此即内细胞团。
围绕囊胚腔四周的单层扁平细胞，称为滋胚层。
此时的囊胚也称胚泡。
晚期胚泡的透明带逐渐膨胀分解，在着床前去除透明带的胚泡呈椭圆形
为了观察不同发育时期的胚胎，可以根据小鼠胚胎发育时间表（见附表），定时从孕鼠的输卵管或子宫内将胚胎取出进行观察（图16.9）。
实验材料
1.实验材料：
性成熟雌、雄昆明小白鼠
2.实验仪器：
解剖镜、显微镜、相差显微镜、注射器（1ml）、4号针头（磨平、末端磨细）、玻璃探针、微吸管（内径0.2mm）、表面皿、培养皿、双孔凹面玻片、外科手术器械。
3.实验药品：
孕马血清促性腺激素（PMSG）
绒毛膜促性腺激素（hCG）
冲卵液（杜氏磷酸缓冲液，pH7.2-7.4）：
NaCl 8.00g
KCl 0.20g
NaHPO4 1.15g
CaCl2 0.132g
KH2PO4 0.2g
MgCl2 0.1g
将上述药品称好后，放入试剂瓶内，再加重蒸水至1000ml，摇匀，用NaOH和HCl（0.1ml/1L）调pH到7.2-7.4即可使用，也可放入4℃冰箱中保存备用。
Whitten氏培养液：
NaCl 5.14g
KCl 0.356g
KH2PO4 0.162g
MgSO4.7H2O 0.294g
NaHCO3 1.9g
葡萄糖1.0g
乳酸钠（60%）3.7ml
乳酸钙0.527g
丙酮酸钠0.025g
青霉素0.075g
链霉素0.050g
1%酚红1ml
小牛血清白蛋白3.0g
双蒸水1000ml
麻醉剂（乙醚）、石蜡油、外科消毒药品、沙布、药棉等。