小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究
实验四 超数排卵
实验四 小鼠的超数排卵及胚胎收集
一、实验目的：利用外源生殖激素进行超 数排卵处理，收集胚胎及胚胎形态学的 观察。掌握超数排卵的各个技术环节， 了解胚胎的发育及质量评估。
二、实验材料
1．动物 4-6周龄供体昆白系雌性小鼠，成年雄 性小鼠与之1:1—1:3配比（亦可利用 其它实验动物）
2．药品 PMSG、hCG、FSH、LH；生理盐水、 75%酒精。
3．器械 一次性注射器（10 ml、5ml、1 ml）、 手术刀、剪刀、镊子、表面皿、培养 皿、显微镜。
三、鼠的超数排卵和胚胎收集
时间 Day 1 Day 2 Day 3 Day 4 Day 5 Day 6
药物 PMSG
剂量 30 IU
HCG
30 IU射 自然交配 检栓分笼
收集胚胎
12
2021/5/11
发 育 不 同 阶 段 的 正 常 胚 胎 和 退 化 变 性 13 胚
具体时间安排
周四（11.7）：注射PMSG 周五（11.8）：注射HCG及合笼 周六（11.9）：检栓及分笼（上午） 周二（11.12）：收集胚胎
四、记录内容 回收到的胚胎数
左输卵管/子宫
右输卵管/子宫
四、实验步骤
1、超数排卵
取4-6周龄性成熟雌性小鼠，第1天注射 30 IU PMSG, 第3天注射30 IU hCG，注射后 与性成熟的公鼠同笼，次日早晨检查阴道栓 （第4天），有栓的小鼠分开饲养。
2、胚胎的收集
注射hCG后72-84 h（第6天）处死小鼠 （颈椎脱臼法），将处死并固定好的小鼠， 沿腹中线剪开腹腔，向前方揭去肠胃内脏， 即可在肾脏后方看到两侧呈的卵巢、输卵 管和子宫，找到输卵管壶腹部，剪下，置 于表面皿或培养皿中，用细针将其划破， 能看见一团物质流出，此就是受精的胚胎。
小鼠的超数排卵
几种对母鼠繁殖有作用的激素A
类别 下
名称
简称
激 激 GnRH
来源
化学特征 生理功能
丘 脑 部 激 素
素 素
素 素 素 OXT ,
作用
几种对母鼠繁殖有作用的激素B
促 性 腺 激 素
促卵泡素 促黄体素 GnRH LH 腺垂体 腺垂体 糖蛋白 糖蛋白
促使卵泡发育和成熟，促 进精子发生 刺激排卵，促进黄体生成， 促进雄激素和孕激素的分 泌 促进泌乳，对某些动物刺 激黄体功能和孕酮的分泌， 增强母性行为 与促卵泡素类似，促进马 属动物辅助黄体的形成
小鼠的超数排卵
不同激素对不同小鼠超排的影响研究
指导老师:刘云海
Hale Waihona Puke 10131乙于昊研究的理论依据
造成超排效果（获卵率和可用的胚胎数）不 稳定的因素主要有两大类：一类是动物因素， 包括个体和遗传的差异、生理和营养状态、 开始超排的日期、季节及其它影响动物的环 境因素；另一类是药物因素，包括激素的半 衰期、激素制剂中的FSH／LH比例、给药途 径、剂量和频率等。
目前的研究进展
参考文献
①杨文胜 倪和民等 母兔超数排卵方法的研究 实验动物 科学与管理 1996. 4 ②徐平 不同日龄与品系小鼠超排卵、体外受精及受孕率的 比较研究 中国实验动物学杂志 2001. 6 ③李秦等 不同激素对哺乳动物超数排卵作用的研究 实验动 物科学与管理 1997.3
实验方法
主要实验内容： 主要实验内容：
实验方法
主要研究方法 c.实验器械
一次性塑料培养皿、显微镜、灭菌手术器械（眼科剪、眼科镊）、？ml 无菌注射器、吸管等。 d.实验步骤 将小鼠分为A、B及对照组三组，A、B每组6只，对照组8只，A组腹腔注 射PMSG + hCG ,B组腹腔注射PSMG + PG F2α ，对照组不作任何处理。 这样的注射一般在每天下午四点左右进行。先注射PMSG（A、C组）、 FSH（B组），在44小时候后注射hCG (B组)和PG F2α（C组）,在注射 组 （ 组 后第二天上午约八点左右将前一天处理过得小鼠处死，打开小鼠腹腔， 取出输卵管及卵巢，撕裂输卵管壶腹部，将胚胎冲出，在显微镜下检查 胚胎、卵巢，计数、记录 。
诱发性糖尿病小鼠体外受精早期胚胎的差异基因分析
人 类 代谢 疾 病 如 肥 胖症 、糖 尿 病 、心 血 管疾 病 已成 为一个世 界范 围 内的社会和 健康 问题 ，为深
８ ４
实验动物与 比较 医学 Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
Ａｐ ｒ ２ ０ １ ３ ． ３ ３ （ ２ ）
．
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ４ — ５ ８ １ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ２ ． ０ ０ ２
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实验动物与 比较医学 Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
６ ～８周 龄 Ｓ Ｐ Ｆ级雌 性 Ｉ ＣＲ小 鼠，２ ８ ￣３ ０ ｇ ，
【 通讯作 者】 胡建华（ １ ９ ６ １ － ） ， 男， 研究员， 硕士生导师， 主要从 事实验动物质量检测管理 。Ｅ ． ｍａ ｉ ｌ ： ｉ ｈ ｈ ｕ ＠ｌ ｉ ｖ ｅ ． ｃ ｎ
购 自上海 市西 普尔 一 必凯 实验动 物有 限公 司【 Ｓ Ｃ ＸＫ
高 小 鼠交 配 能力 下 降 ， 仅 为 ４ ６ ． ９ ％，流 产 率 高达 ７ ３ ． ９ ％， 胚胎 畸形 率 为 ９ ％， 仔 鼠 出生 死亡 率 ２ ０ ％【 Ｉ １ 。
因此本 实验采取 体外 受精 的方法 ，排 除母体 本身在 交 配环节对受精 率的影响， 着重研 究高血糖母体对 卵
1动物胚胎工程实验教程小鼠卵的体外成熟与体外受精材料与方法
《动物胚胎工程实验教程》王子玉自编南京农业大学动科院2005年8月实验一小鼠卵母细胞的体外成熟实验一、实验目的熟悉雌鼠的生殖器官的结构特点；掌握小鼠的超数排卵方案；掌握从卵巢上扎取未成熟卵母细胞的方法、卵母细胞的分类方法、体外成熟培养方法及核成熟情况和卵丘扩展程度的观察。
二、实验器材和材料1. 器材及药品体视显微镜，手术器械（眼科剪，眼科镊），1mL注射器，胶头滴管，口吸管，CO2培养箱，水浴锅，移液器，枪头，塑料培养皿，记号笔。
操作液（M2），成熟培养液（M－199），激素（PMSG和HCG），石蜡油。
2．实验动物：3-4周龄昆明系雌性小白鼠，自由采食饮水。
三、实验内容1.小鼠的超数排卵注射剂量皮下或腹腔注射PMSG 10 IU/只小鼠。
注射方法皮下注射：用手指捏住小鼠的头及尾部固定（图1-1），以酒精棉球消毒其背部，提起皮肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头微向上挑起不露出针尖时，再注入药物。
随着药物的推入，在皮下可看到鼓起一个小泡，即证实药物确已注入皮下部位。
皮下注射时防止药液从针孔处逸出。
腹腔注射：针头刚进入腹腔后向上挑，防止损伤小鼠腹腔内器官。
注射针头宜选用小号细针头。
注射药物后的小鼠自由饮水、采饲，自然光照。
2.卵巢的采集方法在注射PMSG后46h利用颈椎脱臼法处死小鼠（将供体鼠置于饲养笼上，鼠爪自然抓紧笼上铁支架，此时一只手拉紧鼠尾，另一只手食指与拇指压紧鼠颈部，或用镊子压紧颈部即可致死，此为引颈法。
用75%酒精喷湿鼠全身以消毒并防止毛发飞扬）。
将小鼠头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱臼的振动；也可用食指和拇指直接掐断颈椎致死。
然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上或鼠解剖台上。
图1－1 小鼠的固定将处死并固定好的小鼠，在下腹部中间剪开1个小口，一只手抓住鼠尾，另一只手抓住切开的皮肤向头部牵拉直至充分暴露腹部（图1-2）。
剪开腹膜，向前方揭去肠胃内脏，即暴露出生殖器官，可在肾脏后方看到两侧呈乳白色的卵巢及与输尿管相平行的两子宫角（图1-3）。
129／J小鼠超排效果的研究
２１ ０ ０年舅ｉ１ ３
１９Ｊ小鼠超排效果 的研 究 ２／
关文怡 曹授俊 齐军晶 （ 北京农业职业学院畜牧兽医系 １２４ ） ０４２
摘要 本试验 分别以近交 系Ｃ ７ Ｌ６ １９ ５Ｂ ／和 ２ Ｈ小鼠为试验 材料 ，研 究注射不 同剂量的Ｐ Ｇ和ＨＣ 对 小鼠超排效果 。 ＭＳ Ｇ
过１ 周的适应性饲 养后 ，按照注 射剂量不 同分别分为Ａ组
（ＭＳ ． Ｕ，ＨＣ ２５ｕ 、Ｂ组 （ＭＳ ．Ｉ Ｐ Ｇ２ Ｉ ５ Ｇ ． ） ｉ Ｐ ６ ５ Ｕ，ＨＣ ． ０ Ｇ５０ Ｉ 、Ｃ （ＭＳ ． Ｕ，Ｈ Ｇ ７５Ｕ ，每 组 ｌ只 。每 只 小 ｕ） 组 Ｐ Ｇ７５ １ Ｃ ． ） Ｉ ０ 鼠腹 腔 注 射 Ｐ Ｇ， 间 隔 ４ ｈ 分 别 注 射 ＨＣ ＭＳ ８后 Ｇ进 行 超 数 排
宁 波 市 激 素 制 品有 限 公 司 ； 其 余 试 剂 除 特 殊 说 明 外 均 为 Ｓｇ （ｉ ａ ｈｍｉ ｌＳ．ｏ ｉ ＭＯ， Ａ 公 司 产 品 。 ｉｍａＳｇ ｅ ｃ ， ｔ ｕｓ ｍ Ｃ ａ Ｌ ， ＵＳ ）
１ 试验方法 ． ４
选用５６ ， 周龄的１９Ｊ 鼠３ 只， 自由采食 － ２， 雌 ０
注 ：相 ｌ 母表 不差 异不 显著 （＞ ．５ ，不 Ｉ 司字 Ｐ Ｏ０ ） 司字母 表示 差异 显著 ｒ＜ ．５ Ｐ Ｏ０ ）
司） ；手 术器械：剪毛剪 、手术剪、镊子等 ；口吸式移卵
管。 Ｉ ． 试 验 试 剂 试 验 超 数 排 卵激 素（ＭＳ ３ Ｐ Ｇ，ＨＣ ） Ｇ 均购 自
剂 量 的Ｐ Ｇ和 Ｈ Ｇ对 小 鼠进 行超 数排 卵试 验 ，并 分 析 获 ＭＳ Ｃ
得卵母细胞 的数量和质量。
ｌ 材 料 和 方 法
江苏省南京市六校联合体2024-2025学年高三上学期11月联考生物试卷
2024-2025学年第一学期六校11月联合调研高三生物一、单项选择题：本题包括15小题，每小题2分，共30分。
每小题只有一个选项最符合题意。
1．下列有关“骨架”的叙述正确的是A．DNA分子中的核糖和磷酸交替连接，排列在外侧构成基本骨架B．生物大分子和单体都以碳链为基本骨架，所以碳是生命的核心元素C．磷脂双分子层构成了细胞膜的基本骨架，其他生物膜不一定有此结构D．真核细胞中有纤维素组成的细胞骨架，与物质运输、能量转化等密切相关2．研究发现，在酵母细胞的细胞核和液泡交界处有一个“垃圾场”，细胞内错误折叠的蛋白质会被囊泡转移到“垃圾场”，进而被转移到液泡内部进行降解。
下列叙述错误的是A．错误折叠的蛋白质能与双缩脲发生紫色反应B．酵母细胞内蛋白质合成都从游离的核糖体开始C．液泡内部含水解酶，因而能降解错误折叠的蛋白质D．错误折叠的蛋白质被降解后的产物可能会被细胞重新利用3．下列有关酶的实验叙述，正确的是A．可用淀粉溶液、淀粉酶、碘液等来探究pH对淀粉酶活性的影响B．在“探究温度对酶活性的影响”实验中，先将淀粉液与淀粉酶液混合后，再分别置于不同温度条件下相同且适宜时间C．在“探究淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用”实验中，可通过检测是否产生还原糖来证明酶的作用具有专一性D．在“比较过氧化氢在不同条件下的分解”实验中，加热、Fe3+和过氧化氢酶促使过氧化氢分解的原因都是降低了过氧化氢分解反应的活化能4．科学家发现了存在于高等生物细胞中的nuc-1基因，该基因编码的蛋白质能使DNA降解，所以nuc-1基因又被称为细胞“死亡基因”。
下列叙述错误的是A．癌变细胞中nuc-1基因的表达可能会受阻B．在胚胎发育过程中，细胞中的nuc-1基因也在表达C．该基因编码的蛋白质需要内质网和高尔基体的加工、运输D．靶细胞在细胞毒性T细胞的作用下死亡可能与nuc-1基因被激活有关5．图中①和②表示某精原细胞中的一段DNA分子，分别位于一对同源染色体的两条非姐妹染色单体的相同位置上。
小鼠早期胚胎发育的研究 )
小鼠早期胚胎发育的研究（实验方案）基础生物学课程设计所在学院生物科学与工程学院专业班级生物科学学生姓名学生学号指导教师XXXX年XX月XX日小鼠早期胚胎发育的研究一、引言胚胎发育一词通常是指从受精卵起到胚胎出离卵膜的一段过程。
而无脊椎动物胚胎学家则常把其概念扩展到胎后发育直到性成熟，甚至整个生活史。
动物胚胎的发育过程虽然动物的种类繁多，但是胚胎的发育依然拥有相似的过程，能够分成受精、卵裂、桑葚胚、囊胚、原肠胚与器官形成等阶段。
此外脊椎动物的胚胎发育过程中，各种动物共同拥有的特征会首先出现(如皮肤)，之后才逐渐发展出特化的构造(如鱼鳞)，而且较复杂的物种与较原始的物种之间一开始相当类似，之后才随着发育的时间而慢慢增加变异。
受精:卵子和精子融合为一个合子的过程。
它是有性生殖的基本特征，普遍存在于动植物界，卵裂:精子与卵子结合之后会形成受精卵，由于卵黄的分布具有不对称的特性，因此受精卵可以分为动物极(会发展成外胚层)和植物极(会发展成中胚层与内胚层)。
在卵裂时期，卵子会先分裂成两个细胞，之后细胞通常会逐次倍增，但是对哺乳类而言，有时候会有不同时分裂并造成只有奇数个细胞的现象。
在这个阶段，胚胎的总体积大致不变。
不同的物种具有不同的卵裂方式，可以分为完全卵裂(holoblastic cleavege)和不完全卵裂(meroblastic cleavage)，分别又可以细分成许多不同方式。
如无脊椎动物的辐射卵裂与螺旋卵裂、哺乳动物的旋转式分裂等。
原肠胚:当细胞分裂成为囊胚之后，会经过一段称为原肠形成的型态发生过程，之后形成原肠胚。
原肠形成过程有许多不同方式，能够大致分成5种:内陷式(Invagination)、衰退式(Involution)、进入式(Ingression)、脱层式(Delamination)、包覆式(Epiboly)，动物的胚胎利用这5种方式形成了外胚层、中胚层与内胚层的组合，而这三种胚层在之后会形成各种细胞。
去透明带方法的选择对小鼠早期胚胎体外培养的影响
ZP ） 是一层包绕在所有哺乳动 透明带（ zona pelluccida ， 物卵母细胞外围的非细胞的糖蛋白结构， 对卵子的发育、 受 精以及着床前胚胎发育起着关键性作用 。IVF（ in vitro fertilization， 体外受精） 、 体外人工核移植以及其他需要对早期胚 胎显微操作的研究都需要在着床前胚胎即透明带尚未消失 前进行， 所以透明带的存在成为上述研究的一种障碍， 因此 确定一种简单易行、 快速去除透明带且对胚胎损伤最小的方 法可以为上述研究打下良好的基础 。 现阶段去除透明带的方法主要为： 酸性台式液去透明带 0． 5% 链酶蛋白酶去透明带法 。 本研究观察了应用两种 法、 方法去透明带以后受精卵体外分裂的情况， 以单细胞受精卵 分裂为 2 － 细胞受精卵的卵裂率为观测指标， 探讨酸性台式 液去透明带法及 0． 5% 链酶蛋白酶去透明带法中哪种更适合 作为去除透明带的首选方法以及对小鼠早期胚胎体外培养 有何影响。 1 1． 1 材料与方法
第 20 卷第 2 期 2012 年 2 月
中国医学工程 China Medicaቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ Engineering
Vol． 20 No． 2 Feb， 2012
·临床研究·
去透明带方法的选择对小鼠早期胚胎 体外培养的影响
高 源， 秦书俭， 郑德宇， 刘建生， 马 刚
（ 辽宁医学院 人体解剖与组织胚胎教研室 ， 辽宁 锦州 121001 ）
0． 5% 链酶蛋白酶去透明 组： 分别为酸性台式液去透明带组 、 带组、 未去透明带组。 1． 2． 3． 1 台式液去透明带组 （ 在酸性台式液中添加 0． 5% PVP 的 以降低因去除透明带后受精卵产生的黏性） 将收集 用吸头的尖部上下 的单细胞受精卵部分移至酸性台式液中， 同时观察透明带的溶解情况 。 当透明带 反复轻柔吹打细胞， 立即将其转移到新的 FHM 液滴中反复洗涤以终止 溶解后， 酸性台式液的作用。 1． 2． 3． 2 链霉蛋白酶去透明带组 （ 在 0． 5% 链霉蛋白酶中 添加 0． 5% 的 PVP 以降低因去除透明带后受精卵产生的黏
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江丙农业学报2010，22(12)：144～146A c t a A g r i c uhu r ae J i an gxi小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究林峰，陈玉霞+，孙克宁，杨婷，田晓军(河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002)摘要：为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响，分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。
结果表明：子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0．01)，而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P< O．05)，两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P>0．05)，说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著，且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。
小鼠早期胚胎发育观察结果表明：超排处理后，在公母鼠合笼后76～79．5h采胚，胚胎大多处于桑椹胚期，而在公母鼠合笼后88～91．5h采胚，胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期；采用TC M l99+15％胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。
关键词：小鼠；超数排卵；早期胚胎；体外培养；冲胚方法中图分类号：Q132．8文献标识码：A文章编号：1001—8581(2010)12—0144—03St udy on E f f ect of Super ovul a t i on and i n vi t r o C ul t ur e of Ear l y Em br yo i n M ous eLI N Fe n g，C H E N Y u—xi a‘，SU N K e—ni ng，Y A N G Ti ng．T I A N X i ao—j u“(C ol l ege of A n i m a l H us ba ndr y a nd V et er i nar y M e di ci ne，H enan A矛c ul t ur al U ni ver si t y．Z he ngzhou450002，C hi na)A bs t r act：I n t hi s paper．t he e ffe c t of dif f erent m e t h ods of c o l l ec t i n g e m br yos on t he s uper ovul at i on of m i c e w a s s t udi ed，and t he e m br yos i n t he suoer ovul at ed m i Ce w er e coll ected by usi ng t he ut erus—m i nc i ng m e t ho d a nd ut er us—col l ect i ng m e t hod re s pec t i ve l y．ne r es ult s show e d t ha t t he aver age num ber of eggs and em bryos obt ai ned by t he ut er us—co l l ect i ng m e t ho d w er e,ext r em el y s ignif i ca ntl y hi gher(P<0．01)t han t hos e obt ai ned by t he ut e r us—m i nci ng m e t hod，an d t he aver age nu m ber of us abl e em bryos obt ai ned by t he u t e r r us—coll ect i ng m e t he d w强si gni f i cant l y hi gher(P<0．05)t han t ha t di d by t he ut erus—m i nc i ng m et hod．ne aver age num be r of an-fe r t i l i zed eggs obt ai ned by t hes e t w o m e t h ods w a s no t s ignif i cant ly di f f er e nt(P>O．05)．So t he s uper ovu l at i on e ffe c t of m i c e W a S s i g-nif i e ant lv i nnue nee d by t he m e t ho d of coll ect ing em bryos．T he obs er vat i on r es ult s of ear l y e m br yos de vel opm ent i ndi cat ed t hat m ost of t he em bryos coll ected76—79．5hour s aft er com bi ni ng cages w e r e at m or ul a s t age．w hi l e m os t of t}l e em bryos coll ected88～91．5 hour s a ft e r com bi ni ng cages w e r e a t com pa ct e d m or u l a s t a ge and bla s t o e yst s t ag e．I t W a S f eas i ble t ha t t he em bryos of m i c e w er e cul t i—vat ed i n vi t ro by usi n g t he m i xed s o l ut i o n of T C M l99and15％F C S．K e y w or ds：M ouse；Sup er ov ul at i on；E ar l y em br yo；I n vi t ro cul t ur e；M e t hod of coll ect ing em bryos雌性哺乳动物一生所产的卵子总数早在其胚胎发育形成卵巢的过程中已被确定，成熟卵子在成年后的发情周期中分别排出，但是单纯依靠动物的自然排卵，一方面所得到的卵母细胞数或胚胎数较少，另一方面又消耗大量的时间和浪费较多的动物．因此为了获取大最的胚胎，多采用超数排卵的方法，即利用外源性促性腺激素诱发多个卵泡同时发育并排出具有正常受精能力的卵子¨。
1。
该技术大幅度地开发利用了卵巢上的卵母细胞资源，为胚胎工程和转基因动物等相关领域的研究提供了大量的研究素材。
小鼠具有个体小、生长快、繁殖力强等特点，是畜牧兽医科学研究领域应用最为广泛的实验动物，研究小鼠超数排卵对动物胚胎工程等研究具有重要意义。
近年来，随着遗传工程小鼠的大量开发，人们对小鼠卵母细胞和胚胎的需求量日趋增多，因而完善的超数排卵技术是遗传工程小鼠研究获得成功的重要前提条件。
到目前为止，能够获得大量胚胎来源的技术仍为超数排卵。
超数排卵反应是一个极其复杂的生理过程。
研究资料表明，小鼠超排效果受激素的种类、剂鼍以及动物的生理状态等多种因素影响，这些因素错综复杂，使超数排卵效果很不稳定H—o。
为了进一步研究冲胚方法对超数排卵的影响及小鼠冲胚的有效方法，本试验在控制以上因素一致的条件下，采用两种不同的冲胚方法来进行对比，以期为今后的小鼠超数排卵研究提供一定的参考依据，为胚胎生物技术研究提供借鉴。
l材料与方法1．1试验地点和时间本试验于2009年l O月16日至2010年5月27日在河南农业大学牧医工程学院胚胎生物技术研究室进行。
1．2试验动物1．2．1试验动物的条件试验用昆明小白鼠购于河南省实验动物中心。
雌性小鼠(未经产)为17周龄、体重30收稿日期：2010一基金项目：河南省重点科技攻关计划项目(82102130005)；河南省蕈大科技攻关计划项目(0422011200)。
作者简介：林峰(1972一)。
男．山东栖霞人．副教授，博士，主要从事动物胚胎生物技术研究。
通讯作者：陈玉霞。
12期林峰等：小鼠超数排卵-了‘f1．期胚胎体外培养效果研究145—40g；雄性小鼠为17周龄，体重35—45g。
采用标准颗粒料(购于河南省实验动物中心)按常规饲养。
1．2．2试验动物的分组试验选择271只小鼠，随机分为A、B两组，A组140只，B组131只，全部采用10I U PM SG+10I U H C G腹腔注射。
A组采用于宫切碎法凹收胚胎，B组采用子宫冲胚法回收胚胎。
1．3试验药品1．3．1小鼠超数排卵药品孕马血清促性腺激素(PM S G)，杭州动物药品厂生产，1000IU／支；人绒毛膜促性腺激素(H C G)，杭州动物药晶厂生产，1000I U／支。
1．3．2小鼠冲胚与早期胚胎体外培养的主要试剂PBS溶液：G I B C O公司。
PBS冲胚液：在PB S溶液中加入15％的胎牛血清，再加入青霉素、链霉素各500I U／m L。
T CM l99培养液：G I B CO公司；胎牛血清：杭州四季青。
1．4小鼠超数排卵处理方法1．4．1试验方案A、B两组均按表l方案进行超数排卵．注射H C G后公母鼠按照l：l合笼。
A、B两组均于合笼后76-91．5h采集胚胎，观察超数排卵效果并记录胚胎发育情况。
表1小鼠超数排卵方案1．4．2试验分组和给药A、B两组小鼠均按表l方案腹腔注射给药，注射H C G后公母鼠按l：l合笼。
1．5冲胚1．5．1子宫切碎法1．5．1．1取出子宫、输卵管和卵巢采用颈椎脱臼法处死小鼠，将子宫连同输卵管和卵巢一并剪下，放入加有少许PB S冲胚液的平皿中。
1．5．1．2剥离子宫并切碎在低倍体视显微镜下，用手术刀片将子宫、输卵管和卵巢蒯围的脂肪组织尽量剥离干净，切掉卵巢并从子宫角与输卵管相连处剪断子宫，将带有少许输卵管的小鼠子宫置于加有少许PB S冲胚液的检胚皿中，用手术刀片将其切碎。
1．5．1．3检胚将上述得到的装有子宫碎片的检胚皿(静霞5～10m i n)置于体视显微镜下观察，用移胚管将观察到的胚胎吸出放人集卵皿中，并详细记录不同发育时期的胚胎数缝。
1．5．2子宫冲胚法1．5．2．1取出子宫、输9p管和卵巢方法同1．5．1．1。
1．5．2．2剥离子宫并冲胚在低倍体视显微镜下，用手术刀片将子宫、输卵管和卵巢周围的脂肪组织尽量剥离干净，切掉卵巢，但官管连接部要保持完整，并在靠近子宫颈的位置剪断子宫，将子宫放人检胚皿中，用l m L注射器(带有12号针头)吸取PB S冲胚液0．2m L，针头插入子宫，并用镊子夹紧，缓慢推注射器，观察子宫的充盈状态，同时防止有冲胚液从子宫后端流出。