脂溶性维生素的定量检测
保健食品中9种脂溶性维生素的测定BJS201717
附件5保健食品中9种脂溶性维生素的测定BJS 2017171范围本方法规定了营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的测定。
2原理试样经混合溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。
3试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1甲醇：质谱级。
3.1.2乙腈：质谱级。
3.1.3异丙醇：色谱纯。
3.1.4丙酮。
3.1.5二氯甲烷。
3.1.6提取溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）：取异丙醇50mL、二氯甲烷50mL，用甲醇稀释至500 mL，混匀。
3.1.7 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1 mL用水稀释至1 000 mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。
3.1.8 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1 mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。
3.2标准品维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液（100μg/mL）—41 —3.3.1.1维生素K1标准储备液：称取0.01 g（精确至0.000 1 g）的维生素K1标准品（3.2），加入5mL丙酮（3.1.4）溶解，用甲醇转移并定容于100 mL棕色容量瓶中。
3.3.1.2 β-胡萝卜素标准储备液：称取β-胡萝卜素标准品（3.2）0.01 g（精确至0.000 1 g），用二氯甲烷（3.1.5）溶解，转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。
血液中水、脂溶性的检测
血液中脂溶性维生素的检测1、仪器与试剂HP1220高效液相色谱仪、氮吹仪、漩涡振荡器、离心机维生素A、维生素D、维生素E标品；无水乙醇；正己烷；甲醇（色谱级别）2、标准溶液配制1mg/ml维生素标准储备液：3种维生素标品各0.01g于10ml 容量瓶中，甲醇定容。
工作液浓度（ug/ml) 量取的母液体积（ml）定容体积（ml）维生素A 40 2 50维生素D 10 1 100 维生素E 400 4 103、实验方法3.1 色谱条件设置色谱柱C18柱进样体积(ml）20ul泵流动相甲醇97%纯化水3%流速1ml/min 柱温25℃检测波长0-8min 315nm8-12min 265nm12-16min 290nm3.2 测定方法取血清0.2ml置5ml具塞离心管中，加入0.2ml无水乙醇沉淀蛋白质，后加入正己烷 1.0ml，旋涡振荡器振荡2min，8000r/min离心5min，吸取上层正己烷液0.5ml，氮气吹干，0.2ml流动相溶解残渣，旋涡振荡器振荡30s，15000r/min离心2min，取上清液到进样瓶。
4、上机进样测量物质波长设置V A标品315nmVD标品265nmVE标品290nm血清样品可变波长其他色谱条件与上述一致血液中水溶性维生素的检测1、仪器与试剂HP1220高效液相色谱仪、氮吹仪、涡旋振荡器、离心机、ODS C18固相萃取柱（100mg/1ml）维生素标准品：VB1、VB3、VC、叶酸；0.01mol/l HCL溶液；1mol/l KOH溶液; 甲醇；50mmol/l NH4H2PO4溶液（PH6.0）；VC提取溶剂：乙二酸四乙酸二钠0.005g，二硫苏糖醇0.05g，加适量水溶解，加入高氯酸1.42ml，加水定容至50ml。
2、标准溶液配制VB1、VB3、标准储备液（1mg/ml），用0.01mol/l HCL配制；叶酸标准储备液（1mg/ml）,以1滴1mol/lKOH溶解后，在用0.01mol/l HCL定容。
HPLC法测定脂溶性维生素注射液中维生素D2及维生素E的含量
HPLC法测定脂溶性维生素注射液中维生素D2及维生素E的含量目的建立测定脂溶性维生素注射液中维生素D2、维生素E的高效液相色谱（HPIC）分析方法。
方法应用高效液相色谱法。
维生素D2采用Kromasil 100-5sil（250mm×4.6mm）色谱柱：以正已烷：异丙醇（97.5：2.5）为流动相：流速为1ml/min）：检测波长为265nm：柱温室温：紫外测器。
维生素E采用Kromasil 100-5sil（250mm×4.6mm）色谱柱：以正已烷-异丙醇（99.5∶0.5）为流动相：流速为1mL/min：检测波长为298nm：柱温室温：紫外检测器。
结果维生素D2和维生素E分别在0.26～2.08?g/mL和0.64～3.20mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。
维生素D2和维生素E的平均回收率分别为98.90%、100.2%、RSD分别为1.2%、1.1%。
结论本方法准确、快速、重现性好。
标签：维生素D2；维生素E；高效液相色谱法；含量测定[Abstract ] Objective To develop the HPLC method for determination of vitamin D2，vitamin E content in the Fat-soluble vitamin injection. Methods High performance liquid chromatography（HPLC）was used.Kromasil 100-5sil （250mm×4.6mm）chromatographic column was used to determine vitamin D2，n-hexane：isopropanol（97.5：2.5）was as mobile phase，the flow rate was 1ml/min，wavelength was 265nm，under the condition of room temperature，and UV-detector were used.Kromasil 100-5sil（250mm×4.6mm）chromatographic column was used to determine vitamin E：n-hexane：isopropanol（99.5∶0.5）was as mobile phase，the flow rate was 1ml/min，the wavelength was 298nm，under the condition of room temperature，and UV-detector were used. Results There was a good linear relationship between the 0.26-2.08?g/mL range and peak area for vitamin D2，while the 0.64-320?g/mL range for vitamin E.The average recovery rate of vitamin D2 and vitamin E were 98.90% and 100.2%.RSD of vitamin D2 and vitamin E were 1.2% and 1.1%. Conclusion The method is accurate，rapid and reproducible.[Key words] Vitamin D2；Vitamin E；Chromatography（HPLC）；Determination脂溶性維生素注射液为含有维生素A、维生素D2、维生素E、维生素K1和注射用大豆油，卵磷脂等的灭菌乳剂，属维生素类药。
维生素e的含量测定方法
维生素e的含量测定方法维生素E的含量测定方法维生素E是一种重要的脂溶性维生素，对人体的正常生理功能发挥着重要作用。
因此，了解维生素E的含量十分重要。
以下将介绍维生素E含量测定的一般步骤和方法。
1. 原理测定维生素E的含量一般采用紫外-可见分光光度法或高效液相色谱法。
紫外-可见分光光度法利用维生素E在特定波长下的吸光度来测定其含量。
高效液相色谱法则是通过将样品在色谱柱上分离，再利用检测器检测峰面积或峰高来确定维生素E的含量。
2. 实验步骤以下是测定维生素E含量的一般步骤：步骤一：样品的制备首先，将待测样品如食品、保健品等进行充分打碎或细磨，以确保样品中的维生素E能充分释放。
然后，取一定量的样品并溶解或提取维生素E。
步骤二：预处理如果样品中存在其他干扰物质，需要进行预处理。
预处理的方法包括提取、分离、净化等。
例如，可以采用萃取方法将样品中的维生素E提取至有机溶剂中，以去除其他干扰物质。
步骤三：测定方法选择根据实验条件和要求，选择合适的测定方法。
常用的方法有紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法。
这两种方法各有优缺点，需要根据实际情况进行选择。
步骤四：仪器准备和参数设置根据选择的测定方法，准备好相应的仪器设备，如紫外-可见分光光度计或高效液相色谱仪，并进行相关参数的设置。
步骤五：标准曲线的绘制为了准确测定维生素E的含量，需要首先绘制标准曲线。
标准曲线可以通过制备一系列维生素E浓度逐渐升高的标准溶液，并测定其吸光度或峰面积/峰高，然后绘制曲线。
步骤六：测定样品取一定量的样品溶液，按照所选择的测定方法进行测定。
根据标准曲线，通过测定吸光度或峰面积/峰高，计算出样品中维生素E的含量。
步骤七：数据分析根据测定结果，可以计算出样品中维生素E的含量。
同时，还可以进行结果的统计分析，如平均值、标准差等。
步骤八：结果的解释及验证对于测定结果，需要进行合理解释，并与其他数据进行对比，以验证结果的准确性和可靠性。
3. 结论通过上述步骤，可以测定出样品中维生素E的含量。
食品中维生素ade的测定
食品中维生素ade的测定食品中维生素ADE的测定是食品质量检验中的重要一环。
维生素ADE是人体所必需的脂溶性维生素，对于身体的生长和发育、免疫系统的健康、视力的保护等起着重要的作用。
因此，准确测定食品中的维生素ADE含量，对于保障人体健康具有重要意义。
在食品中测定维生素ADE的方法有很多，其中常用的方法有高效液相色谱法、气相色谱法、荧光光谱法和分光光度法等。
下面将就这几种方法分别进行介绍。
高效液相色谱法是一种常用的测定食品中维生素ADE的方法。
该方法通过色谱柱对维生素ADE进行分离，再利用紫外检测器对各个分离的维生素ADE进行检测。
这种方法具有操作简便、准确度高、重复性好等优点，因此在食品中的应用较为广泛。
气相色谱法也是一种常用的测定食品中维生素ADE的方法。
该方法利用气相色谱仪对食品中的维生素ADE进行分离和检测。
相比于高效液相色谱法，气相色谱法更适用于测定食品中微量的维生素ADE含量，但操作相对复杂一些。
荧光光谱法是利用维生素ADE在特定条件下的荧光特性进行测定的方法。
该方法通常将维生素ADE与荧光物质反应，生成具有特定荧光的产物，然后利用荧光光谱仪对产物进行检测。
荧光光谱法的优点是敏感度高、选择性好，能够快速准确地测定食品中的维生素ADE含量。
分光光度法是一种经典的测定维生素ADE的方法。
该方法通过测量维生素ADE在特定波长下的吸光度来确定其含量。
利用分光光度计进行测量，该方法具有操作简单、成本低廉等特点。
但是相比于其他方法，分光光度法的准确度和重复性稍差一些。
总结来说，测定食品中维生素ADE的方法有高效液相色谱法、气相色谱法、荧光光谱法和分光光度法等。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于特定的实验要求和食品样品的特性。
无论采用哪种方法，准确测定食品中的维生素ADE含量是保障食品安全和健康的重要一环，对于提高食品检验的准确性和科学性具有重要意义。
维生素制剂中的维生素D化学分析方法
维生素制剂中的维生素D化学分析方法维生素D是一种重要的脂溶性维生素，它包括两种形式，即维生素D2和维生素D3、它们在人体中的主要功能是促进钙和磷的吸收和利用，有助于维持骨骼健康。
维生素D通常通过阳光照射皮肤或食物摄入来获得，但在一些情况下，人们可能需要通过维生素D补充剂来满足身体的需求。
因此，对维生素D制剂进行化学分析是至关重要的。
维生素D的化学分析主要包括两个方面：定性分析和定量分析。
定性分析用于鉴定样品中是否存在维生素D，而定量分析则用于确定维生素D的含量。
以下将介绍几种常用的维生素D化学分析方法。
1.高效液相色谱法(HPLC)HPLC是一种广泛应用于维生素D分析的方法。
该方法根据维生素D2和维生素D3的不同保留时间，通过比较待测样品与已知维生素D标准品的保留时间来定量测定维生素D的含量。
2.液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)LC-MS/MS是一种灵敏度极高的维生素D分析方法。
它结合了高效液相色谱和质谱技术，可以同时测定维生素D2和维生素D3的含量，并且不受样品基质的干扰。
3.放射免疫分析法(RIA)RIA是一种利用放射性同位素标记的抗体来测定维生素D的含量的方法。
该方法具有高度的选择性和灵敏度，可以测定较低浓度的维生素D，但需要使用放射性同位素，因此操作相对复杂。
4.高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)HPLC-UV是一种利用紫外光谱检测器来测定维生素D含量的方法。
该方法根据维生素D与紫外光的吸收特性，通过比较待测样品的吸光度与已知维生素D标准品的吸光度来定量测定维生素D的含量。
5.毛细管电泳法(CE)毛细管电泳是一种利用毛细管内部作为分离通道进行分析的方法。
该方法可以用于维生素D的定性和定量分析，具有分离效率高、操作简便等优点。
在进行维生素D制剂的化学分析时，需注意以下几点：1.样品处理：针对不同的分析方法，样品处理方式会有所不同。
例如，HPLC方法可能需要进行前处理步骤，如提取或萃取，而LC-MS/MS方法则可能需要对样品进行液-液萃取或固相萃取。
试验七食物中脂溶性维生素含量分析(高效液相色谱法——
实验七食物中脂溶性维生素含量分析（高效液相色谱法——HPLC）一、实验目的与要求1目的了解高效液相色谱仪的工作原理。
2要求掌握HPLC测定食物中脂溶性维生素含量的方法。
二、实验原理样品中的维生素A及维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。
用高效液相色谱法 C18反相柱将维生素A和维生素E分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。
最小检出量分别为维生素A： 0.8ng，αE： 91.8ng，γE： 36.6ng，δE： 20.6ng。
三、实验仪器与试剂1仪器（1）实验室常用设备；（2）小离心管： 1.5~3.0ml带盖塑料离心管（与高速离心机配套）；（3）高速离心机；（4）旋转蒸发器；（5）恒温水浴锅；（6）紫外分光光度计；（7）高压液相色谱仪带紫外分光检测器。
2试剂（1）高纯氮气；（2）无水乙醚：不含有过氧化物。
①过氧化物检查方法：用5ml乙醚加1ml 10%碘化钾溶液，振摇 1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉液，水层呈蓝色。
该醚需处理后使用。
②去除过氧化物的方法：熏蒸乙醚时，瓶中放入纯铁丝或铁末少许，弃去10%蒸馏水和10%残留液。
(3) 无水乙醇：不得含有醛类物质。
①检查方法：取2ml银氨溶液于试管中，加入少量乙醛，摇匀，再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。
②脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。
将两者倾入1L 乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50ml。
当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。
（4）无水硫酸钠。
（5）甲醇：重蒸后使用。
（6）重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。
（7） 10%抗坏血酸溶液（100g/L）：临用前配制。
（8） 1∶1氢氧化钾溶液。
（9） 10%氢氧化钠溶液（100g/L）。
（10） 5%硝酸银溶液（50g/L）。
HPLC测定注射用脂溶性维生素中4种成分的含量
·药物分析与检验·HPLC测定注射用脂溶性维生素中4种成分的含量张慧，裴志东*，初正云，翟延君(辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600)摘要：目的建立高效液相色谱法同时测定注射用脂溶性维生素中维生素A棕榈酸酯、维生素D2、E、K1含量的方法。
方法采用Intersil (ODS-2) C18 (150 mm×4.6 mm，5 µm)色谱柱，以甲醇-乙腈-乙醇-水(20∶55∶25∶6)为流动相，流速1.5 mL·min-1，检测波长265 nm。
结果维生素A棕榈酸酯、维生素D2、E、K1进样量分别在1.19～2.78 μg、6.14～14.33 ng、10.92～25.48 μg、0.19～0.44 μg内呈良好的线性关系；平均回收率分别为99.70%(RSD=0.48%)、100.13%(RSD=0.88%)、99.74%(RSD=0.69%)、99.97%( RSD=0.59%)。
结论方法操作简便、精确、结果可靠，可控制注射用脂溶性维生素的质量。
关键词：高效液相色谱法；维生素A棕榈酸酯；维生素D2；维生素E；维生素K1中图分类号：R917.793 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2009)06-0480-03Determination of Four Compounds in Fat-soluble Vitamin for Injection by HPLCZHANG Hui，PEI Zhidong*，CHU Zhengyun，ZHAI Yanjun(Department of drug，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600, China)ABSTRACT：OBJECTIVE To establish an HPLC method for simultaneous determination of retinol palmitate，vitamin D2，vitamin E and vitamin K1 in fat-soluble vitamin for injection. METHODS An Intersil (ODS-2) C18 (150 mm×4.6 mm，5 µm) was used as separation column. Methanol- acetonitrile- ethanol-water (1758255) was used as the mobile phase. Flo∶∶∶w rate was 1.5 mL·min -1. The detection wavelength was set at 265 nm. RESULTS The linear ranges for retinol palmitate，vitamin D2, vitamin E and vitamin K1 were 1.19-2.78 μg，6.14-14.33 ng，10.92-25.48 μg，0.19-0.44 μg, and the average recoveries were 99.70% (RSD=0.48%), 100.13% (RSD=0.88%)，99.74% (RSD=0.69%), 99.97% (RSD=0.59%), respectively. CONCLUSION The method is simple，accurate，reliable. It can be used for the quality control of fat-soluble vitamin for injection.KEY WORDS：HPLC；retinol palmitate；vitamin D2；vitamin E；vitamin K1注射用脂溶性维生素是由维生素A棕榈酸酯、维生素D2、E、K1等多种维生素成分制成的无菌冻干粉针，临床上用于各种内、外科手术、严重传染性疾病、昏迷等症的肠外维生素补充剂，是各种外科手术后必用的药物。
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脂溶性维生素的定量检测
维生素的化学多样性使得其难以同时被萃取和分析。
食物中的维生素含量介于纳克到毫克之间，婴儿配方奶粉等基质中的维生素含量进行标记时，水溶性和脂溶性维生素的分析通常分开进行，这就会延长分析时间。
维生素的不同，其分子结构的多样性会因为最大吸光度而不同。
脂溶性维生素包括维生素A、D、E和K，它们都含有环结构和长的、脂肪族烃链，这四种维生素都是高度疏水的，每一种都至少有一个极性基团。
脂溶性维生素由长的碳氢链或稠环组成的聚戊二烯化合物。
在研究中，我们采用了一种高灵敏度、可靠的方法，通过紫外检测技术，同时测定9种脂溶性维生素。
使用此方法能够对食品样品进行营养成分标记快速分析，可获得极高的色谱分离度。
峰面积和保留时间重现性的相对标准偏差值较低，这证实了所开发的方法的可靠性和灵敏度。
为了证明该方法能够有效用于营养成分的标记，我们对婴儿配方奶粉和复合维生素片中的维生素D进行定量分析，然后将所得结果与标示值进行比较。
采用回收率校正方法，计算得到的婴儿配方奶粉和复合维生素片中维生素D的含量数值与标示值非常接近。
结果表明该方法非常适用于定量食品样品中的维生素。
北京清析技术研究院在华北、华南、华中、华东、西北等地区，建立12大分院及配套实验室，秉承母校校训，以严谨、求实的工作态度，为数千家企业客户提供产品研发、成分分析、材料检测、工业诊断、模拟测试、大型仪器测试、可靠性验证等专业技术服务，还为全国范围内的公安局、法院、检察院、律师事务所、司法鉴定中心、医院、高等院校、中国科学院提供专业技术服务。
经过几十年的团队技术积累，北京清析技术研究院下设环境检测事业部、食品保健品检测事业部、药品化妆品检测事业部、失效分析事业部、公检法服务事业部、高校科研服务事业部、成分分析/配方分析事业部、生物医药事业部等10大部门。