【精品】植物抗寒性鉴定
植物的抗寒能力与适性分析
植物的抗寒能力与适性分析寒冷的冬季对植物来说是一个巨大的挑战。
在低温下，植物的生长和发育受到严重限制，甚至可能导致植物的死亡。
然而，一些植物却能够在极寒的环境中存活并繁衍。
这是因为它们具备了抗寒能力和适性，使其能够适应寒冷的环境。
植物的抗寒能力主要体现在其对低温的耐受性上。
一些植物能够通过产生特殊的抗寒蛋白来保护细胞结构，减轻低温对细胞的损伤。
这些抗寒蛋白可以稳定细胞膜的结构，防止细胞膜的流动性增加，从而保持细胞的正常功能。
此外，植物还能够调节细胞内的溶质浓度，提高细胞的耐寒性。
这些抗寒机制使得植物在低温下能够继续进行光合作用和呼吸作用，保持生命活动。
除了抗寒能力，植物的适性也是其能够在寒冷环境中存活的重要因素。
适性是指植物在特定环境中的适应能力。
不同植物对寒冷环境的适应能力有所差异。
一些植物具备了较高的冷冻耐受性，能够忍受低温下的冻结。
这些植物在冬季来临之前会积累大量的抗冻物质，如脂肪和糖类，以增加细胞的冷冻耐受性。
另一些植物则具备了较高的耐寒性，能够在低温下继续进行生长和发育。
这些植物通常在寒冷季节中停止生长，进入休眠状态，以减少能量消耗和水分流失。
植物的抗寒能力和适性还受到一系列环境因素的影响。
例如，光照、土壤湿度和风速等因素都会影响植物的抗寒能力和适性。
充足的光照可以提高植物的抗寒能力，促进抗寒蛋白的合成。
适宜的土壤湿度可以保持细胞的水分平衡，减轻低温对植物的损伤。
而较高的风速则会增加植物的水分蒸发，导致细胞脱水和冷冻损伤。
随着全球气候变暖，寒冷的环境正在逐渐减少。
这对一些依赖寒冷环境的植物来说可能是一个挑战。
它们可能面临着适应新环境的压力，甚至可能面临灭绝的危险。
因此，研究植物的抗寒能力和适性对于保护植物多样性和生态系统的稳定性至关重要。
总之，植物的抗寒能力和适性是其能够在寒冷环境中存活和繁衍的关键因素。
通过产生抗寒蛋白、调节细胞内溶质浓度和进入休眠状态等机制，植物能够在低温下保持生命活动。
植物抗寒生理的研究进展
植物抗寒生理的研究进展
植物抗寒生理的研究进展主要涉及以下几个方面：
1. 低温适应机制：植物在低温环境下生存和生长的能力是至关重要的。
研究已经发现，植物通过一系列的生理生化机制来适应低温环境，包括产生冷反应基因和相关的基因，以及这些基因之间的相互作用。
2. 植物激素在抗寒中的作用：植物激素在植物抗寒中起着重要的作用。
例如，脱落酸（ABA）可以诱导植物产生抗寒性，而细胞分裂素则可以保护植物免受低温的伤害。
此外，一些植物激素还可以调节植物对低温的响应，如钙调蛋白激酶和MAPK等。
3. 抗寒基因的鉴定和功能研究：随着生物技术的发展，越来越多的抗寒基因被鉴定和研究。
这些基因包括编码保护酶类（如SOD、POD、CAT等）的基因、调节ABA合成和信号转导的基因等。
对这些基因的研究将有助于我们更深入地了解植物抗寒的分子机制。
4. 抗寒锻炼和适应性生理变化：植物在经历低温锻炼后，可以产生一系列适应性生理变化，如增加膜的稳定性、提高保护酶的活性等。
这些变化有助于植物在低温环境下生存和生长。
5. 抗寒育种：通过选择具有抗寒特性的品种，培育出抗寒能力更强的植物，是植物抗寒研究的一个重要应用。
通过结合传统育种方法和现代生物技术，可以培育出既具有优良农艺性状，又具有较强抗寒能力的植物新品种。
总的来说，植物抗寒生理的研究进展在多个领域都有所涉及。
未
来，随着生物技术的不断发展，我们期待在植物抗寒生理的研究中取得更多的突破和进展。
园林植物抗寒性鉴定指标的分析
寒性 的高 低 。 比 值 大 时 ， 物 代 谢 缓 慢 ， 寒 性 植 抗 强； 比值 小时 ， 物代 谢 旺盛 ， 寒 性弱 。 植 抗 张 志法 等 ］ 冬 季 自然 低 温下 对金 叶莸 和 金 在 山绣线 菊扦 插 苗根 部 组 织 含 水 量 测 定 发 现 ： 叶 金 莸 的束 缚水 含量 、 束缚 水 ／ 自由水 的 比值都 高 于金 山绣线 菊 ， 这说 明金 叶莸 比金 山绣 线 菊 具 有 更 强
林 植 物 抗 寒 性 测 定 的 主要 方 法 ， 包括 形 态 学观 测 、 水 量 测 定 、 生 质 膜 透性 测 定 、 护 酶 系统 测 定 和 渗 透 调 含 原 保
节物质测定 。 关键词 ： 园林 植 物 ； 寒性 ； 定 指 标 抗 鉴
中 图 分 类 号 ：６ ８ ￥ ８
３ １ 电导 率 ．
王永 格等 ｌ通 过对 小果 卫矛 越冬 形态 学 的观 １ 测 及与 大 叶 黄杨 、 海 道 黄 杨 、 东 卫 矛 、 叶黄 北 胶 小 杨 和 女 贞 相 比较 ， 现 小 果 卫 矛 叶 片 抗 寒 性 高 于 发 大 叶黄 杨 和 女 贞 ， 条 抗 寒 性 高 于 女 贞 。金 华 枝 等 ｛ 通 过 对 北 京 引 种 栽 植 的 ７种 常 绿 阔 叶 植 物 的 越 冬 形 态 学 观 测 发 现 ： 室 中 盆 栽 的 植 物 表 现 良 温
温胁 迫下 ， 着处 理 温度 的下 降 已休 眠 的紫 叶 白 随
收 稿 日期 ： ０ 卜０ — ３ ２ １ ９１
第 一作 者 简 介 ： 兆 英 （ ９ ５） 女 ， 北 省 青 县 人 ， 士 ， 张 １ ７ 一， 河 硕 讲 师 ， 事 同 林 植 栽 培 及 种 子 生 理 研 究 。 Ｅ ｍａｌ ｚ ｙ ｌ ｌ 从 — ｉ ｚ Ｏ １ ＠ ：
植物的抗寒性
2.冷害对植物生理功能的影响
1) 对膜的结构与功能的影响
膜脂发生相变 (膜脂相变假说） 由液晶态变为凝胶态
▪ 改变膜上的功能性蛋白质，如ATP酶活 性
低温
质膜ATP酶活性
细胞器上 ATP酶的水解活性
主动吸收和运输功能
ATP缺乏
物质交换被破坏 生物合成速度↙
三、植物抗寒的生理基础 植物能够承受或部分承受低温而不引起伤害 或减轻伤害称为抗寒性。
抗寒锻炼（低温驯化） 解除锻炼（脱锻炼）
·膜及膜组分的变化
提高细胞膜体系稳定性 膜脂和膜蛋白的变化
• 植株含水量下降
束缚水/自由水比值增大； 原生质的粘度、弹性增大
·新陈代谢活动减弱
·激素变化
ABA↑，IAA、GA↓
植物组织结冰可分为两种方式： 胞外结冰与胞内结冰。
胞外结冰（胞间结冰）： 温度缓慢下降时 细胞间隙和细胞壁附近的水分结冰。
胞内结冰：温度迅速下降时，除胞间结冰 外，细胞内的水分也冻结。一般先在原生 质内结冰，然后在液泡内结冰。
胞间结冰的危害：
1. 结冰脱水导致胞内溶液浓度升高， 造成盐胁迫。
2. 原生质过度脱水，使蛋白质变性或 原生质发生不可逆的凝胶化。
中生植物：阴生高等植物，适于在10～ 30℃环境中生长，超过35℃会受伤害。
喜温植物：多数陆生高等植物，可在30以 上℃中生长，其中有些在45℃以上受伤害。 而有些低等植物在65～100℃才受伤害。
高温对植物的危害：
高温引起植物大量失水，因此植物的抗热 性机理与抗旱性机理有很多相似之处。高 温对植物的危害：首先是蛋白质变性，蛋 白质在高温下原有的分子空间构型受到破 坏，氢键和疏水键断裂，失去了原有的生 理功能。
植物抗寒指标的种类及测试原理
旋 标 记 Ｅ Ｒ波 谱 法 测 定 。 Ｓ 与植 物抗 寒 性呈 正 相关 。
１ ３ 膜 脂 过 氧 化 指 标 ．
法 测定 。Ｈ 在 Ｃ Ｔ 的作 用 下 ， 出 ： Ａ 放 ， 放 （ 量 与 其 ］ ？
（ Ｔ 的活性 成正 比， 出的 可 用氧 电极 定量测 定 。 Ａ 放 与植 物 抗 寒 性 呈 正 相 关 。 １ ２ ３ 过 氧 化 物 酶 Ｐ ）活性 ．． 过氧化物酶广泛存在于植物体 中． 呼吸作 用、 与 光
织 受 害 程 度 呈 正 相 关 。 为 了 消 除 实 验 中 多 种 误差 的
影 响便 于各 研 究结 果 之 间 的 相互 比较 ， 用 相 对 值 采
表 示 。用 相 对 电 导 率 作 为 细 胞 膜 透 性 的 重 要 指 标 ， 现 已被 多 数 实 验 证 实 ， 将 由 相 对 电 导 率 值 用 Ｌ — 并 ｏ ｇｓ ｃ 程 拟 合 的 半 致 死 温 度 作 为 评 价 抗 寒 性 的 主 ｉｉ方 ｔ
Ｈ 和 （ ０ ）。其 活 性 大 小 可 用 被 分 解 ｌ。 的 量 来 表 ＿Ｏ ｛
示 ． 可 用分 解 产 生 的 Ｏ 也 城 来 丧 示 。 。 。
一
定量的 （ 经过氧化后 ． 剩余的
可用碘量
并 制 成 甲酯 后 ， 可进 行 气 相 色谱 分 析 】 即 。也 可 用 自
与 植 物抗 寒 性 呈 负 相 关 。
１ ２ 维 持 膜 稳 定 指 标 ．
植 物 遭 受 低 温 胁 迫 的 主 要 特 征 是 活 性 氧 代 谢 的 失 调 。细 胞 内 活 性 氧 的 大 量 积 累 而 使 细 胞 受 到 了 氧 胁 迫 ， 细 胞 内 活性 氧 的产 生 与 清 除平 衡 遭 到 破 坏 ， 而 使 从
茶树种质资源的抗寒性鉴定
ｉｃｕ ｉｇｍｉ・ ａ ａｉｔ ｆＢｅ—ｈ ａ ， ａ ｙ ａ ａｉｔ Ｌ ｎ ｘ ａｉｔ ｄ Ｊｍｉｇｌａ ｙ ￣ ｅｙｗｅ ｅｅ ｔ ｕ ． ｅ ｒｓ ｌｓｃ ｕｄ ｐｏ ｎ ｌｄｎ ｄｌ ｆｖｒｅｙｏ ｉｃ ｕ Ｗ ｎ ｕ ｖ ｒｅｙ，ｏ ｇｉｖ ｒｅｙａ ｉ ｎ － ｎ ｅｖ ｔ ｒ ｓｌｃｅ ｏ ｔＴｈ ｅ ｕｔ ｏ ｌ ｒ－ ｅ ｎ ｎ ｎ ｕ ｅ ｄ
ｃ ｎ ｕ ｔ ｏｉｅ ｔｙ ｔｅｃｌ ｅ ｉｔｎ ｅｏ ９ｔ ｅｍｐａｍｓｆｏ Ｓｃ ｕ ｎ ａ ｄＣｈ ｎ ｑｎ ｎ ｅ ｅｍｐ８ ｍｓｗ ｔ ｉｈｃ ｌ ｅ ｉｔｎ ｅ． ｏ ｄ ｃｅ ｔ ｄ ｎｉ ｈ ｏｄｒｓｓａ ｃ ｆ１ ｅ ｇｒ ｌｓ ｒｍ ｉｈ ａ ｎ ｏ ｇ ｌｇａ ｄ４ ｔａｇ ｒ ｌｓ ｈｈｉ ｏｄ ｒｓｓ ｃ ｄ ｆ ａ ｉ ｓ ａ
茶 树种 质 资 源 的抗 寒 性鉴 定
侯渝嘉 ， 唐 敏， 胡 翔
（ 重庆市农业科学院茶叶研究所 ， 重庆市茶叶工程技术研究中心， 重庆 永川 ４ ２６ ） ０ １０
摘
要： 采用 电导法配合 Ｌｇｓｃ曲线方程推导 Ｉ （ ｏｉ ｉ ｔ 半致 死温度） 再结合茶苗低温处理试验 。 ， 对川渝两地 的 １ ９份茶树资源 的抗
Ｈ Ｕ Ｙ －ａ Ｔ Ｎ ｎ ＵＸｉ ｇ Ｏ ｕｊ ， Ａ Ｇ Ｍｉ，Ｈ ａ ｉ ｎ
（ ｅ ｅｅｒｈＩｓ ｔ ｅ ｆ ｈｎｑｎ ａｅ ｆ ｃｌ ｒｌ ｉ ｃｓ，ｈｎ ｎｉｅｒ ｇＲｓａｃ ｅｔ ｒ ｅ Ｃ ｏｇ ｉｇ ｏｇｈ ａ Ｔ ａＲ ｓａｃ ｔｕ ｏ ｇｌｇ ｄｍｙｏＡ ｕｔ ａＳ ｅ ｅ Ｃ ｏｇＥ ｇｎｅ ｎ ｅｅｒｈＣ ｎｅ ｆ ａ，ｈｎｑｎ ｎｅｕｎ ｎｉｔｏＣ Ａｃ ｕ ｎ ｃ ｉ ｒｏ Ｔ Ｙ ４ ２６ Ｃ ｉａ ０ １０。ｈｎ ）
不同植物种抗寒性研究
不同植物种抗寒性测定——过氧化氢酶（CAT）活性的测定一、实验目的：1．学习并掌握实验室间接鉴定植物抗寒性的方法和步骤。
2．测定出三种植物的抗寒性能力强弱顺序。
3.通过本实验的设计与实施，增加我们对植物抗寒性的了解，有利于我们对植物的种植与保护，也能使我们掌握基本的实验操作技术，培养探究性学习的能力，通过小组合作学习加强团队精神二、实验原理：低温胁迫下，细胞内易产生H2O2破坏膜系统的稳定，而过氧化氢酶（CAT）能把H2O2分解为H2O和O2，从而清除H2O2维护膜的稳定性。
研究表明，抗寒性强的品种有较高的过氧化氢酶活性，且随温度下降，以抗寒性强的品种下降幅度小，与抗寒性呈显著性相关。
CAT酶活性大小可用一定时间内分解的H2O2量来表示。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2，即可求出被CAT分解的H2O2量：三、材料及仪器：1．材料及处理：九里香、小叶罗汉松、圆柏将采回的枝条剪成40cm左右的长度，用自来水冲洗数遍（洗掉泥土、灰尘、虫卵），再用蒸馏水冲洗三次，然后用吸水纸吸干水分，最后将枝条末端进行蜡封。
将每个品种蜡封后的枝条分成相等的3份，在 0℃，6℃，12℃的恒温培养箱中各放入一份培养5天，备用。
2．试剂、药品：10%H2SO4 ，0.2mol/L 磷酸缓冲液（pH＝7.8），KMnO4 （AR），新煮沸冷却蒸馏水，0.1mol/L草酸，30%H2O2溶液，凡士林3．仪器：25ml容量瓶，研钵，50ml三角瓶4个，酸式滴定管，1000ml 锥形瓶，离心管，移液管（0.5ml和5ml），滴管，剪刀4．设备：高速台式离心机，恒温水浴锅，天平，玻璃棒，石英砂，恒温培养箱四、实验步骤：实验前的准备阶段，1．试剂配制10%H2SO4；0.2mol/L 磷酸缓冲液（pH＝7.8）；0.1mol/L 高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.160g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸标定；0.1mol/L H2O2：取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液在酸性条件下标定。
用电导法配合Logistic方程鉴定茶树的抗寒性
［￣ｓｃ 程是 一个典 型的 … 曲线方程 ．方程 为 ＇ ｘ ｉｉ方 ｇｔ Ｓ’ １ ＝
ｋ
，
ｂ为常数 。 在数学上 ， 拐点 — 时的 ｘ值， 即
ｆ ＿ ｚ Ｄ
供试材料取 自四川农 业大学教学实习茶 同，品种 有川茶
１ ｅ” ＋ａ
群体种 、 阳特早 、 平 乌牛早和 云南大叶种等 ４个 品种 ， ２ ０ 于 ０６
年 ５月下旬分别取各 品种 的一芽 三叶春梢和成熟 叶片。
１ 实 验方 法 － ２ １ ＿ 低 温处 理 ＿１ ２
为半致死温度（ ｎ 。因此 ， 者采用 电导法配合 Ｌ ｇ ｔ 方 Ｔ ） 俩 笔 ｏｉｉ ｓｃ
程来计 算不同茶树 品种 叶片和新 梢 的半 致ｌ 温度 （Ｔ 以该 死 Ｌ ，
随着低温加剧茶树叶片及新梢的相对电导率增加电解质渗透率表现出有规律的变化呈现慢快慢的变化规律即呈用直接观察的方法和测定叶片相对电导率的方法比较茶树抗寒性强弱顺序的结果吻合可见用测定叶片相对电导率的方法来反映茶树的抗寒性较为客观真实
维普资讯
实 验 方 法
用 电导法配 合 Ｌ ｇｓ ｃ方程 鉴定茶树 的抗 寒性 ｏｉｉ ｔ
低温处理 ，处理 温度分别是 ： ￣ 一 ℃ 、 １ ℃ 、２ ￣ 一 ５ ， ０Ｃ、８ 一 ５ 一 ０Ｃ、２ ℃
蒸馏水， ６ 后测定浸 液电导率 ， 浸泡 ｈ 其余方法 与 步骤同 １． ．。 ２ ２
成 熟 叶 片 组 织进 行 了抗 寒 性 测 定 。 并 结 合 Ｌ ｇ ｔ 程 分 别 计 算 了各 茶 树 品 种 ｏ ｉｉ ｓｃ方 的 低 温 半 致 死 温度 （ Ｔ （） 列 出了供 试 品种 抗 寒性 的相 对 强 弱 顺 序 为 ： 阳 特 Ｌ ５） ， 平
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植物抗寒性鉴定我国植物种类繁多，分布区域广，在晚秋和早春时期发生的冻害和冷害两种低温危害,常常给越冬作物和果木造成严重伤害.冻害由0℃以下低温造成，冷害由0℃以上低温引起，冷害对植物的伤害程度，除取决于低温外，还取决于低温维持时间的长短。
植物抗寒性的强弱决定其生长季节，因此蔬菜作物利用抗寒品种，可以将露地栽培提前，提早供应市场;而选育抗寒性强的果树品种，不仅是寒带果树育种者的主攻方向，而且也是温带甚至热带果树育种者重要育种目标之一。
本实验重点学习实验室间接鉴定果树抗寒性的方法和步骤。
一、试材及用具1．试材及处理：植物枝条或花朵，将采回的枝条剪成40cm左右的长度，用自来水冲洗数遍（洗掉泥土、灰尘、虫卵),再用蒸馏水冲洗三次，然后用吸水纸吸干水分，最后将枝条末端进行蜡封。
将每个品种蜡封后的枝条分成相等的6份，其中一份作为对照，其余每份作为一个低温处理，放于冰箱中(0℃~4℃）保存备用。
每次处理时,各取参试品种的一份枝条放于超低温冰箱或程控冰箱内进行低温处理,处理温度梯度为：CK（0℃），—20℃，—25℃，—30℃，-35℃，-40℃。
降温速度为4℃/h，达到目的处理温度后维持12h，然后逐步升温，升温速度亦为4℃/h。
花朵的处理温度梯度为：CK（0℃），—1℃，-3℃,—5℃，-6℃，-7℃，—8℃。
2．仪器烘箱，发芽箱，培养皿，标牌，电导仪，具塞刻度试管（20ml），恒温水浴锅，温度计，玻璃棒，天平，研钵，石英砂，高速台式离心机,分光光度计，微量进样器,荧光灯（4000lx），容量瓶（250ml、25ml)，聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳槽，刻度吸管(10ml、5ml)，离心管等。
二、内容说明植物的抗寒性鉴定可分为田间鉴定和实验室间接鉴定两种方法.1．田间鉴定田间自然鉴定就是在冻害发生期（早春及晚秋）对受冻的田间植株一定器官、组织以一定的标准进行评价、比较，然后根据冻害情况评价抗寒性。
陈学森等（2001）对山东省春季“倒春寒”发生后，受害的核果类果树的花器官的抗寒性进行了调查，选出了当地花期抗寒性较强的红荷包、红丰等杏品种，证明种间的抗寒力大小顺序是：桃﹥杏﹥李﹥大樱桃.赵玉田（1993）对不同生态型玉米的抗寒性进行了田间鉴定，测定的项目包括３个抗冷指标:相对出苗率（％)(RER）：幼苗干物重(SDW），取地上部三叶期10株幼苗，烘至恒重。
三个抗冷特性以总指数值（TIV）表示,即占各自等级顺序之和.其值反应了低温下种子出苗生长和干物质积累能力。
田间鉴定能最直接的反映不同品种在同一条件下的抗寒性差异。
该法直接、简单，可进行大范围、大群体的评价，但受地域、品种数量的限制，只能比较少数几个同一地段的品种之间的抗寒力差异，不能对他们的抗寒能力进行量化.2．实验室间接鉴定实验室间接鉴定，就是根据作物某些生理生化指标及物理指标间接推断供试材料的抗寒性。
物理指标Lyons和Raison（1970)证明植物低温发生时，生物膜首先发生膜脂的物相变化，膜的外形和厚度发生变化，膜上产生龟裂，因而膜的透性增大，电解质大量外渗。
抗寒性强的品种细胞膜透性增大程度轻，抗寒性差的品种与之相反.因此,测量电解质外渗量变化可以比较植物的抗寒性.在黑穗醋栗、梨、猕猴桃(ShaoliLu，1990）等许多种果树的不同器官，如花、枝、叶等都有相似结论。
另外，通过电导率值配以Logistic方程，可以求出半致死温度，确定植物的临界致死温度。
常用差示温度分析来测量深过冷。
以DTA法测定，一般植物在零下几度即散热结冰，称为高温散热。
经过低温锻炼的抗寒木本植物，在连续降温过程中，可见到有多次散热，第一次在零下几度，主要是细胞外结冰,最后一次散热可达—20~-45℃的低温以下，叫低温散热.在低温散热前一霎那的温度，即深过冷温度，用LTE温度表示.深过冷低温散热时，可出现细胞内结冰而使组织死亡.日本京都大学S.K。
Kang（1998）等对苹果、桃、梨、柿子和葡萄5种落叶果树通过温度分析测定了两种散热HTE和LTE，发现柿子与葡萄仅有LTE,所有树种的低温散热温度与花芽的半致死温度一致.生理生化指标主要包括超氧物歧化酶（SOD)、过氧化氢酶(CAT）、过氧化物酶（POD）活性测定及同工酶分析、丙二醛（MDA）及可溶性糖含量等方法。
三、方法步骤（一）质膜透性测定－电导法近年来的研究表明,在低温伤害尤其冷害中，膜系统常常是最先受到伤害的部位，寒害能使脂膜受损伤，透性加大,细胞内离子（主要是K＋离子）外渗量增多，电导率加大。
因此可以用电导仪测定溶液的电导率，求算电解质渗出率（或称伤害率）.伤害率愈高则愈不抗寒,反之则愈抗寒。
1．电解质渗出率的测定取处理和对照样品各0。
5g，放入试管中,加10ml去离子水，置25℃下10h。
用玻璃棒搅拌均匀，然后用电导仪测电导值分别为T1和C1。
再将试管放入沸水中10min,待其冷却至25℃时，测得处理和对照得电导值为T2和C2，按下式计算电解质渗出率和伤害度：2．绝对电解质渗出量的测定有时为了求得电解质的绝对渗出量,需要用分析纯的KCl配成不同浓度的标准液(0.01－10mmol/L），在25℃下测定其电导率值，并绘制电导率（μS/cm)—浓度(mg/ml）标准曲线。
由标准曲线查知样品的外渗电导率值相当于KCl的浓度，再折算每克材料的绝对外渗量（mg/g）,即绝对电解质渗出量（mg/g)，即绝对电解质渗出量(mg/g）＝A×B/W式中，A—根据样品电导率值，从标准曲线中查出的与KCl相当浓度（mg/ml）；B-浸泡液的体积（ml)；W-样品鲜重(g）。
2．注意事项(1)在电导测定中一般应用去离子水，若制备困难可用普通蒸馏水代替，但在测定中设一空白试管，测定样品时要同时测定其空白电导值，按下式计算相对电在水中的溶解度较高,导度：（2）CO2在测定电导时要防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试管，以免影响结果的稳定性。
(3）温度对溶液电导影响很大,故S1与S2必须在相同温度下测定。
（二）超氧物歧化酶（SOD）测定超氧物歧化酶（SOD）是一种清除超氧阴离子自由基的酶，普遍存在于植物体内。
本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。
在有可氧化物质存在下,核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲月朁，后者在560nm处有最大吸收。
而SOD可清除超氧阴离子自由基从而抑制了甲月朁的形成。
于是光还原反应后，反应液蓝色愈深说明酶活性愈低，反之酶活性愈高.据此可以计算出酶活性大小。
1．试剂配制0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）130mmol/L甲硫氨酸(Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml.750μmol/L氮蓝四唑(NBT)溶液：称取0。
06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml 避光保存。
100μmol/LEDTA—Na2溶液：称取0.03721gEDTA—Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml。
20μmol/L核黄素溶液：称取0.00753g核黄素定容至1000ml避光保存。
2．酶液提取称取处理和对照样品各0.5g，加入5ml磷酸缓冲液，冰浴研磨提取，然后15000rpm离心10min，所提上清液为酶液。
3．显色反应3ml反应液为0.05mol/L磷酸缓冲液1。
5ml，750umol.L—1NBT溶液、130mmol/L 甲硫氨酸（MET）溶液、100umol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA—Na2)液、20umol/L 核黄素各0。
3ml，蒸馏水0.25ml和0。
05ml酶提取液（对照管加蒸馏水)。
混匀后将１支对照管置暗处，其它各管于4000lx日光灯下反应20min(要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时间延长)。
4．SOD活性测定与计算反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的光吸收，已知SOD 活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示,按下式计算SOD活性。
式中：SOD总活性以每克鲜重酶单位表示;比活力单位以酶单位/mg蛋白表示;ACK-照光对照管的光吸收值;AE—样品管的光吸收值；V—样液总体积（cm3）；Vt-测定时样品用量（cm3）；W－样重（g）;蛋白质浓度单位为：mg蛋白/g样重。
研究表明，当遭受低温胁迫时,引起SOD活性的下降，下降的百分率与品种抗冷性呈负相关，故能反应品种间抗冷能力的高低。
（三）过氧化氢酶（CAT）活性的测定低温胁迫下，细胞内易产生H2O2破坏膜系统的稳定,而过氧化氢酶（CAT）能把H2O2分解为H2O和O2，从而清除H2O2维护膜的稳定性。
研究表明，抗寒性强的品种有较高的过氧化氢酶活性，且随温度下降,以抗寒性强的品种下降幅度小,与抗寒性呈显著性相关。
CAT酶活性大小可用一定时间内分解的H2O2量来表示。
在反应系统中加入一定量(反应过量）的H2O2溶液,经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下）滴定多余的H2O2，即可求出被CAT分解的H2O2量：1．试剂配制10％H2SO4；0。
2mol/L磷酸缓冲液（pH＝7。
8)；0。
1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR)3。
160g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml,用0。
1mol/L草酸标定；0。
1mol/LH2O2:取30％H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml,用标准0.1mol/LKMnO4溶液在酸性条件下标定。
2．酶液提取取剪碎的样品2.5g加入磷酸缓冲液（pH7.8)少量，研磨成匀浆，转移到25ml 容量瓶中，将研钵冲洗干净，冲洗液转至容量瓶中，并用同一缓冲液定容,4000×g离心10min，上清液为酶粗提液。
3．酶液滴定取50ml三角瓶4个（两个测定，两个对照），测定加入酶液2.5ml,对照为煮死酶液2.5ml;再加入2.5ml0.1mol/LH2O2，同时计算时间，于30℃恒温水浴中反应10min,立即加入10％H2SO42。
5ml。
然后用0.1mol/LKMnO4滴定，至出现粉红色（30min内不消失）为终点。
4．结果计算酶活性用每克鲜重样品在10min内分解H2O2毫克数表示。
A－对照KMnO4滴定ml数;B－酶反应后KMnO4滴定ml数；V－酶提取液总量（ml)；a－反应所用酶液量(ml）;W－样重（g）。
5．注意事项所用KMnO4溶液及H2O2溶液使用前要经过标定,0.1mol/LH2O2要新配制。
（四）过氧化物酶(POD)活性测定及同工酶分析1．过氧化物酶（POD）活性测定在过氧化物酶催化下，过氧化氢分解成水和原子氧，原子氧能氧化联苯胺产生一种蓝色的化学物质，该蓝色化合物在波长580nm处有一最大吸收峰。