萌发期大豆总蛋白提取及双向电泳体系的优化

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百合总蛋白的提取及双向电泳差异蛋白质图谱的获取方法[发明专利]

专利名称：百合总蛋白的提取及双向电泳差异蛋白质图谱的获取方法
专利类型：发明专利
发明人：张艺萍,王继华,杨秀梅,瞿素萍,许凤,王丽花,苏艳,张丽芳
申请号：CN201610027384.5
申请日：20160118
公开号：CN105527332A
公开日：
20160427
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开一种百合总蛋白的提取及双向电泳差异蛋白质图谱的获取方法。

该方法在百合总蛋白质的提取中设置转速为20000rpm，并反复沉淀离心至少3次，使得提取出来的百合总蛋白质颜色较白，质量好；增加了蛋白质的质量检测步骤，采取跑十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶的方式检测所提取出来蛋白质的质量，避免了后续第一向等电聚焦效果不好的问题。

改进了第一向等电聚焦过程中聚焦程序，将聚焦程序中的步骤S1和S2两个除盐步骤的时间延长至2.5h，较好地去除了蛋白质的盐分，从而较好地完成了聚焦程序。

本发明方法获得的百合总蛋白双向电泳差异蛋白质图谱背景清晰，蛋白质点多，蛋白质点分布均匀。

申请人：云南省农业科学院花卉研究所
地址：650205 云南省昆明市盘龙区北京路2238号
国籍：CN
代理机构：昆明合众智信知识产权事务所
代理人：康珉
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大豆水溶性蛋白提取的条件优化及动力学验证

大豆水溶性蛋白提取的条件优化及动力学验证摘要：本文从大豆一次膨化后的顶粒部分进行水溶性蛋白提取，利用正交试验设计优化提取条件，最终得到最佳条件为提取温度75℃，提取时间120分钟，料液比1:10，pH=8.0，浸提三次，每次30分钟，合并提取液进行过滤、浓缩和干燥，得到水溶性蛋白提取物。

试验结果表明，该方法所得到的水溶性蛋白质量较高，可达到82.57%。

动力学分析表明，水溶性蛋白的提取符合二级反应动力学模型，其中速率常数为0.0369 min^-1，半衰期为18.76 min。

该研究可为大豆蛋白的提取、分离和开发利用提供参考。

关键词：大豆水溶性蛋白；正交试验；二级反应动力学模型；提取Abstract:In this study, water-soluble protein was extracted from the top part of soybean after one-time puffing, and the optimal extraction conditions were obtained by orthogonal experimental design. The results showed that the optimal extraction conditions were: extraction temperature of 75℃, extraction time of 120 min, liquid-to-material ratio of1:10, pH=8.0, extraction for three times, 30 min each time. The extracted solution was filtered, concentrated and dried to obtain water-soluble protein extract. The experimental results showed that the quality of the water-solubleprotein obtained by this method was high, reaching 82.57%. Kinetic analysis showed that the extraction of water-soluble protein followed a second-order reaction kinetic model, with a rate constant of 0.0369 min^-1 and a half-life of 18.76 min. This study can provide a reference for the extraction, separation and development of soybean protein.Keywords: soybean water-soluble protein; orthogonal experiment; second-order reaction kinetic model; extraction。

植物蛋白质双向电泳样品制备研究进展

植物蛋白质双向电泳样品制备研究进展
陈舒博;丁彦芬;赵天鹏;吴琼;杜禹延
【期刊名称】《天津农业科学》
【年(卷),期】2015(021)006
【摘要】蛋白质双向电泳是蛋白质组学的支撑技术,在微生物和动物蛋白质分析上取得较大进展,但在植物蛋白质分析上却进展不大,究其原因在于难以制备到适于双向电泳的植物蛋白质样品. 笔者综述了植物蛋白质双向电泳样品制备的方法,分析各种方法的优缺点,并提出今后植物蛋白质样品制备的研究重点.
【总页数】4页(P7-10)
【作者】陈舒博;丁彦芬;赵天鹏;吴琼;杜禹延
【作者单位】南京林业大学风景园林学院,江苏南京 210037;南京林业大学风景园林学院,江苏南京 210037;南京林业大学风景园林学院,江苏南京 210037;南京林业大学风景园林学院,江苏南京 210037;南京林业大学风景园林学院,江苏南京210037
【正文语种】中文
【中图分类】Q51
【相关文献】
1.烟草根系蛋白质双向电泳样品制备方法的比较 [J], 林世锋;张拓;史跃伟;王东茂;王志红;杨志晓;谢升东;魏开华;任学良
2.三种大鼠骨髓间充质干细胞双向电泳样品制备方法的比较 [J], 覃万安;苏伟;黄钊;
崔向荣;郭杰
3.三种大鼠骨髓间充质干细胞双向电泳样品制备方法的比较 [J], 覃万安;苏伟;黄钊;崔向荣;郭杰
4.适用于条斑紫菜的双向电泳样品制备方法 [J],
5.植物组织双向电泳样品制备方法研究进展 [J], 李德军;邓治;陈春柳;陈守才
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耐盐性不同的大豆品种幼苗的蛋白质组学比较研究

ｓｅｓＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＪｉｎｇａｓｕＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ＆Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｊｕｒｏｎｇ２１２４００，Ｃｈｉｎａ）
ｃｏｍｐａｒｅｄｕｓｉｎｇｐｒｏｔｅｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｕｓｉｎｇａｔｒｉｅｈｌｏｒｏａｅｅｔｉｃａｃｉｄ／ａｃｅｔｏｎｅｐｒｏｔｏｃｏｌ，ｓｅｐ・ａｒａｔｅｄｂｙｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｌａｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎｄｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｃｏｏｍａｓｓｉｅｂｒｉｌｌｉａｎｔｂｌｕｅ．ＯｎｔｈｅｐＨ４ —７２－ＤＥｇｅｌｓｔｈｅｒｅｗｅｒｅａｂｏｕｔ６５０ｐｒｏｔｅｉｎｓｐｏｔｓ，ｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅｒｅｗｅｒｅ５２ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｐｏｔｓｉｎａｂｕｎｄａｎｃｅｂｅ — ｔｗｅｅｎｔｈｅ２一ＤＥｍａｐｓｏｆｔｈｅＬｅｅ６８ａｎｄＮ２８９９ｓｏｙｂｅａｎｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．Ｔｈｅｎ６ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｉｅｆｄｂｙＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ．ＴｈｅｐｅｐｔｉｄｅｍａｓｓｉｎｆｇｅｒｐｒｉｎｔｗａｓｓｅａｒｃｈｅｄａｇａｉｎｓｔｔｈｅｓｏｙｂｅａｎＵｎｉＧｅｎｅｄａｔａｂａｓｅａｎｄ４ｐｒｏｔｅｉｎｓ

大豆种子醇溶蛋白提取及SDSPAGE体系优化

应用技术　张艳馥等：大豆种子醇溶蛋白提取及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ体系优化收稿日期：２０１８－１０－１３基金项目：黑龙江省教育厅科学研究项目（１２５３１７５５）。

作者简介：张艳馥（１９６４—），女，副教授，主要从事植物解剖及生理生化研究；Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｆｕ７１０＠１６３．ｃｏｍ。

大豆种子醇溶蛋白提取及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ体系优化张艳馥，　车睿棋，　谢明博（齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，　黑龙江齐齐哈尔１６１００６）Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｏｙｂｅａｎ　Ｓｅｅｄ　Ｇｌｉａｄｉａ　ａｎｄ　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＤＳ－ＰＡＧＥＺＨＡＮＧ　Ｙａｎｆｕ，ＣＨＥ　Ｒｕｉｑｉ，ＸＩＥ　Ｍｉｎｇｂｏ摘　要：采用正交试验法对大豆种子醇溶蛋白进行提取，并进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ体系优化。

结果表明：在所设置的２个提取体系中，提取时间是影响大豆种子醇溶蛋白提取的最大因素，提取温度为影响提取的最小因素；提取体系Ⅰ为大豆种子醇溶蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ较优化体系。

关键词：　大豆种子；醇溶蛋白；提取；ＳＤＳ－ＰＡＧＥＤＯＩ编码：　１０．１６５９０／ｊ．ｃｎｋｉ．１００１－４７０５．２０１９．０３．１４１中图分类号：　Ｓ　５６５．１文献标志码：　Ａ文章编号：　１００１－４７０５（２０１９）０３－０１４１－０２醇溶蛋白是存在于植物种子中的一种储藏蛋白，目前对于小麦、玉米、高粱等植物醇溶蛋白的提取及应用研究都有较多的报道［１－３］，但对豆类种子醇溶蛋白的相关研究较少。

本实验采用２种不同的提取体系对大豆种子醇溶蛋白进行提取，并进行了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ体系的建立，旨在对豆类作物醇溶蛋白的研究提供参考。

１　材料与方法１．１　实验材料实验材料为垦农１６大豆种子，市购。

１．２　实验方法采用２个混合提取体系提取大豆种子醇溶蛋白，每一体系均采用正交试验，设计三水平四因素试验（见表１），提取大豆醇溶蛋白。

提取后采用考马斯亮蓝Ｇ　２５０法［４］测定体系中醇溶蛋白浓度。

大豆叶片蛋白质双向电泳技术的改良

自从 1994 年 Wilkins 和 Williams 提出了蛋白质组的概念，蛋白质组、蛋白质组学及相关技术的研 di究已经取得了重大进展。双向电泳技术（ two2DE ）是能同时对上千种 mensional electrophoresis，蛋白质进行分离的高分辨率方法。目前仍是蛋白质组学分析的基本工具
第 30 卷 2011 年
第4 期 8月
大豆科学 SOYBEAN SCIENCE
Vol． 30 Aug．
No． 4 2011
大豆叶片蛋白质双向电泳大豆研究所，教育部大豆生物学重点实验室，黑龙江哈尔滨 150030 ）
摘
要：以大豆叶片为材料，比较分析了 3 种蛋白质的提取方法，讨论了等电聚焦时间和染色方法等关键因素对双向 7 （ 17 cm） IPG 胶条，适当延长和改变等电聚焦的第 2 步和第 3 步的
中图分类号：S565． 1
文献标识码：A
9841 （ 2011 ） 04066305 文章编号：1000-
Improvement of Twodimension Electrophoresis for Soybean Leaves Total Protein
GU Xianpeng， LUO Qiulan， GAO Jiguo， LI Wenbin
在昼温 24 其培养于光照培养箱中，
－2 －1
（ Key Laboratory of Soybean Biology of Chinese Education Ministry，Soybean Research Institute，Northeast Agricultural University，Harbin 150030 ， HeiChina） longjiang，

大豆蛋白提取技术研究进展

大豆蛋白提取技术研究进展近年来，随着人们对健康食品的需求日益增加，大豆蛋白提取技术得到了广泛的关注和研究。

大豆蛋白具有高营养价值和功能特性，可以广泛应用于食品、医药、化工等领域。

因此，提高大豆蛋白的提取效率和品质成为了研究的重点。

本文将针对大豆蛋白提取技术的研究进展进行探讨。

目前，大豆蛋白提取技术主要包括碱提法、酸提法、酶解法、超声波提取法、微波提取法等。

碱提法是最常用的大豆蛋白提取技术之一，在一定浓度的氢氧化钠溶液中将大豆材料浸泡，通过溶解甲氧基化豆蛋白和纤维素等非蛋白质物质来提取大豆蛋白质。

酸提法则是通过酸液的作用，溶解非蛋白质物质和卵磷脂等杂质，进而提取纯净的大豆蛋白质。

酶解法是利用特定的酶对大豆材料进行处理，通过酶解反应将大豆蛋白质和非蛋白质物质分离。

超声波提取法是利用超声波的作用，通过震荡、溶解和分散的方式提取大豆蛋白质。

微波提取法则是利用微波的加热效应，通过温度升高和物质的迅速扩散来提取大豆蛋白质。

在大豆蛋白提取技术研究中，一些新的方法和工艺引起了研究者的关注。

例如，超声波辅助提取技术能够提高大豆蛋白的提取效率和品质。

超声波能够产生剪切力和折射力，使大豆材料充分混合和分散，从而加快物质的扩散速率。

研究表明，超声波辅助提取技术能够提高大豆蛋白的提取率，同时降低蛋白质的损失和非蛋白质物质的残留。

另外，微波辅助提取技术也被广泛应用于大豆蛋白提取中。

微波加热可以通过分子振动和摩擦产生热量，在短时间内提高物质的温度。

研究发现，微波辅助提取技术能够大大缩短提取时间，并且能够提高蛋白质的提取率和品质。

此外，微波辅助提取技术还可以减少传统提取方法中对化学试剂的使用，从而降低环境污染。

在大豆蛋白提取技术研究中，还有一些新兴的方法值得关注。

例如，离子液体提取技术被广泛应用于大豆蛋白的提取。

离子液体具有独特的溶解性能和热稳定性，能够提高大豆蛋白的提取效率和品质。

近年来，研究者通过优化离子液体的结构和性质，进一步提高大豆蛋白的提取效果和经济效益。

大豆不同生长时期基因组DNA提取方法的优化

大豆不同生长时期基因组DNA提取方法的优化
王月月;范龙;张洁;王冬梅
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2013(29)36
【摘要】以探索大豆嫩叶期基因组提取方法为基础,探索从富含酚类、多糖等代谢物质的大豆开花期叶片中获得高质量DNA的提取方法。

采用不同的方法提取5种大豆品种在不同生长时期的叶片基因组,并通过对提取的DNA的含量测定、琼脂糖凝胶电泳分析和内参基因的PCR扩增,对不同方法所提取的DNA质量进行综合评价。

在嫩叶期,利用前人改进的CTAB法能够分离出纯度高、质量好的DNA,而在开花期,采用本试验新改良的CTAB法可以更有效去除多糖、酚类等物质得到完整性和纯度较好的大豆基因组。

前人改进的CTAB法和本试验摸索的新改良CTAB 法分别适用于嫩叶期、开花期大豆基因组DNA提取,为大豆的分子生物学研究奠定了基础。

【总页数】7页(P319-325)
【关键词】大豆;不同生长时期;DNA提取方法;PCRi;多糖
【作者】王月月;范龙;张洁;王冬梅
【作者单位】河北农业大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q943.2
【相关文献】
1.不同方法提取大豆基因组DNA的效果比较 [J], 王桂华;余丽芸;刘术闫;曹宁
2.适于SSR分析的不同生长型桃幼叶基因组DNA提取方法 [J], 连晓东;谭彬;郑先波;叶霞;冯建灿
3.玉米基因组DNA不同提取方法及提取部位的比较研究 [J], 楚海娇
4.植物基因组DNA提取试剂盒提取玉米基因组DNA的条件优化 [J], 刘捷
5.不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较 [J], 王振东;孙仓;王惠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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（１．ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｙｏｒＳｏｙｂｅａｎＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ／ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＧｅｎｅｔｉｃ
组学研究提供了实验方法。关键词：大豆；萌发；蛋白组学；双向电泳
中图分类号：￥５６５．１０３
文献标识码９０８４（２０１５）０２— ０２２０— ０７
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｔｗｏ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅＩｅｃｔｒＯｐｈＯｒｅｓｉｓｓｙｓｔｅｍｆｏｒｓｏｙｂｅａｎｓｅｅｄｄｕｒｉｎｇｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
中国油料作物学报
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ
２０１５，３７（２）：２２０—２２６ｄｏｉ：ｌ０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７ —９０８４．２０１５．０２．０１５
萌发期大豆总蛋白提取及双向电泳体系的优化
王新芳，郭娜，郭祥龙，牛景萍，张海鹏，卜远鹏，彭洋，邢邯，赵晋铭
（１．南京农业大学／国家大豆改良中心／农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室（综合）／作物遗传与种质创新国家重点实验室，江苏南京，２１００９５；２．圣丰种业院士工作站，山东济宁，２７２０００）
２．ＳｈｏｉｎｆｅＡｃａｄｅｍｉｃｉａｎＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ，ｉｆｎｉｎｇ２７２０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓａｍｐｌｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｐｌａｙｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｐｒｏｔｅｏｍｉｃｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ｙｅｔｔｈｅｙｃａｎｂｅｐｒｏｂｌｅｍａｔｉｃ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｃｏｍｐａｒｅｄｔｈｒｅｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇＴＣＡ／ａｃｔｏｎｅｍｅｔｈ— ｏｄ，ｐｈｅｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｐｈｅｎｏｌ／ＳＤＳｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｗｅａｌｓｏｏｐｔｉｍｉｚｅｄｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆｔｗｏ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓｏｙｂｅａｎｓｅｅｄｄｕｒｉｎｇｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｐｈｅｎｏｌ／ＳＤＳＣＸ—
ａｎｄｅｒＧｍｐｌａｓｍＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ；
ＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆＳｏｙｂｅａｎ（Ｇｅｎｅｒａ１），ＭｉｎｉｓｔｒｙｆｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ￣ＮａｔｉｏｎａｌＫｅｙａｂＬｏｒａｔｏｒｙｆｏＣｒｏｐＧｅｎｅｔｉｃｓ
ＷＡＮＧＸｉｎ—ｆａｎｇ，ＧＵＯＮａ，ＧＵＯＸｉａｎｇ—ｌｏｎｇ，ＮＩＵＪｉｎｇ—ｐｉｎｇ，
ＺＨＡＮＧＨａｉ —ｐｅｎｇ，ＢＵＹｕａｎ—ｐｅｎｇ，ＰＥＮＧＹａｎｇ，ＸＩＮＧＨａｎ，ＺＨＡＯＪｉｎ—ｒｕｉｎｇ
摘要：蛋白质样品的制备和双向电泳条件是蛋白组学研究中很关键同时也是很棘手的问题。本文比较了ＴＣＡ／丙酮法、酚抽提、苯酚／ＳＤＳ法３种不同的蛋白提取方法，并对双向电泳的一些条件进行了优化，建立了适合萌发期大豆总蛋白的双向电泳体系，即采用１７ｃｍ、ｐＨ４—７的ＩＰＧ胶条，凝胶浓度为１２％，蛋白质上样量为０．２ａｇｒ。ＩＥＦ程序为：２５０Ｖ１ｈ，５００Ｖｌｈ，３０００Ｖ３ｈ，８０００Ｖ１ｈ，１００００Ｖｌｈ，１００００Ｖ６００００Ｖｈ。本研究为萌发期大豆的蛋白