大豆蛋白的提取与含量测定
黄豆中蛋白质含量测定
黄豆中蛋白质含量测定——凯氏定氮法一、仪器和试剂主要仪器:定氮仪。
试剂（除注明外均为分析纯）：1. 浓硫酸。
2. 30%氢氧化钠溶液。
3. 2～4%硼酸溶液。
4. 0.1mol/L 盐酸溶液。
5. 催化剂：硫酸钾——硫酸铜的混合物（K 2SO 4:CuSO4·5H 2O=3.5g:0.1g ）。
二、操作步骤1. 消化准确称取粉碎均匀的黄豆粉0.5g 左右，小心移入干燥的消化瓶中（注意用称量纸将样品加入到消化管底部，勿粘附在瓶壁上），加入适量催化剂及10mL 浓硫酸，按要求安装好消化装置后,设置好消化程序,打开冷凝水, 开始消化程序。
(160℃, 40min; 250℃, 20min; 350℃, 60min; 420℃, 30min)消化程序结束后，消化至溶液透明呈蓝绿色，冷却至室温。
同时做空白对照。
2． 蒸馏、吸收及滴定按要求安装好UDK142蒸馏仪，并将蒸馏仪与自动电位滴定仪连接好。
将所需试剂装到相应的试剂瓶中。
设置好蒸馏程序及滴定程序后，将冷却好的消化管装到蒸馏仪上，打开冷凝水，然后开始程序。
三、结果计算X ——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g ）C —— HCl 标准溶液的浓度mol/LV 1 —— 滴定样品吸收液消耗的HCl 标准溶液的体积mLV 2 —— 滴定样品空白液消耗的HCl 标准溶液的体积mL0.0140——1.0mL 盐酸（C(HCl)＝1.000mol/L ）标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（g ）m ——试样的质量或体积，单位为克或mL1000140.0)(21⨯⨯⨯⨯-=F mc V V XF ——氮换算为蛋白质的系数。
一般食物为6.25，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵5.30。
计算结果保留三位有效数字。
大豆蛋白的功能性测定
大豆蛋白的功能性测定专业：生物工程班级：08一班学号：060508131 姓名：戴璐成绩：摘要：利用考马斯亮蓝G250测定样品中蛋白含量为百分之十左右远不及样品包装上所说的82%的含量；紫外分光光度计测定大豆蛋白紫外吸收特征，其紫外光谱显示含较多无法除尽的杂质，荧光光度计观察其荧光效应，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其相对分子质量关键词：大豆蛋白蛋白含量测定紫外吸收电泳功能性1.概述蛋白质是组成人体的重要物质。
是人体生命活动的物质基础，是食品的第一大营养素。
大豆是重要的粮油兼用作物，它富含蛋白质、脂肪，是一种营养平衡的食物。
其籽粒含蛋白质一般为40%左右，比一般谷物高2-4被，也比牛奶、鸡蛋和瘦猪肉的蛋白质含量高。
大豆是豆科植物中最有营养而又易于消化的食物，是蛋白质最丰富最廉价的来源。
另外，大豆蛋白不含淀粉，氨基酸也组成比较平衡。
所以，目前许多蛋白质营养品都是用的大豆蛋白。
2.材料与方法1.考马斯亮蓝G250测定蛋白含量【材料】标准蛋白液，样品蛋白，722型分光光度计【方法】1>.标准曲线的制作取7支干净试管，按表一进行编号并加入试管混匀，室温静置3分钟，以第1管委空白，于波长595nm处比色，读取吸光度，以吸光度为纵坐标，各标准浓度作为横坐标作图的标准曲线2>.样液的测定另一支干净试管，加入样液1.0ml及考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀，室温静置3min，于波长595nm处比色，读取吸光度，由样液的吸光度查标准曲线即可求出蛋白含量2.大豆蛋白质的紫外吸收特征【材料】标准蛋白液，样品蛋白，UV-9100型紫外分光光度计【方法】将大豆蛋白溶于1mol/L PH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成2.0mg/mL的蛋白质溶液，以对应的Tris-HCl作参比，做紫外-可见扫描，速度10nm/s，范围200-400nm 之间3.大豆蛋白质的疏水性及荧光光谱【材料】标准蛋白液，样品蛋白，日本岛津RF-5310PC型荧光光度计，离心机，100mL 烧杯2个，玻璃棒1个【方法】将大豆蛋白溶于1mol/L PH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成0.5，1.0，2.0mg/mL的蛋白质溶液，3000r/min离心10min，以以相对应的Tris-HCl作参比，采用日本岛津RF-5310PC型荧光光度计进行荧光测定，激发波长280nm,发射波长300-800nm之间4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳【材料】直流稳压电泳仪，垂直平板电泳槽⑴分离胶缓冲液 1.5mol/L Tris-HCl (pH8.8)取18.15g Tris, 加80ml重蒸水，用1mol/L的HCL调pH至8.8，用重蒸水稀释至最终体积为100ml，4℃冰箱保存。
大豆中蛋白质含量的测定实验报告
大豆中蛋白质含量的测定实验报告大豆是一种富含蛋白质的植物，因此对大豆中蛋白质含量的测定非常重要。
本实验旨在通过化学方法测定大豆中蛋白质的含量，并对结果进行分析和讨论。
实验材料和仪器：1. 大豆样品2. 硫酸钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 酸性消化液5. NaOH溶液6. 氮气吹扫装置7. 精密天平8. 恒温水浴9. 离心机10. 紫外分光光度计实验步骤：1. 准备大豆样品：将大豆磨成粉末，并将其过筛以获得均匀的颗粒大小。
2. 水解反应：取一定量的大豆样品加入酸性消化液中，放入恒温水浴中进行水解反应，使蛋白质完全水解为氨基酸。
3. 碱解反应：将水解后的溶液中加入适量的NaOH溶液，使溶液呈碱性，以便将其他干扰物质转化为不溶性沉淀。
4. 沉淀处理：将碱解后的溶液进行离心处理，将沉淀分离出来。
5. 沉淀洗涤：用硫酸钠溶液对沉淀进行洗涤，去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的沉淀放入烘箱中干燥，直至恒定质量。
7. 称重：使用精密天平称取干燥后的沉淀质量。
8. 光度计测定：将一定量的沉淀溶解于适量的NaOH溶液中，使用紫外分光光度计测定溶液的吸光度。
9. 蛋白质含量计算：根据标准曲线，计算出大豆中蛋白质的含量。
实验结果与分析：根据实验测定，我们得到了大豆样品中蛋白质的含量。
通过对标准曲线的分析，我们可以得知大豆样品中蛋白质的浓度。
从实验结果中可以看出，大豆中蛋白质的含量较高，这也符合我们对大豆富含蛋白质的认识。
在实验中，我们采用了水解和碱解的方法，这是常用的蛋白质测定方法之一。
水解反应将蛋白质水解为氨基酸，使其更容易测定；碱解反应则将其他干扰物质转化为不溶性沉淀，方便后续步骤的进行。
为了准确测定大豆中蛋白质的含量，我们进行了沉淀处理和洗涤步骤，以去除杂质。
这些步骤的目的是提高测定的准确性和精确度。
同时，干燥步骤的进行可以保证质量的恒定，进一步提高测定结果的可靠性。
通过紫外分光光度计的测定，我们可以得到溶液的吸光度，进而计算出蛋白质的浓度。
测定大豆蛋白粗蛋白含量的不确定度评定
３ ０ ． ２ ０ ０ １ ６ ３ ７ ． ７ ６ Ｏ． １ ０ ０ ２ ９
⑤ 空 白试 验消 耗盐 酸溶 液 引起 的相 对 不确定 度 Ｕ ⑥ 盐酸 标 准溶液 浓 度 引起 的相 对不确 定 度 Ｕ
ｓ ： 、 ／ ∑（ Ｘ —Ｘ ） Ｖ ｎ （ ｎ 一 １ ） ＝ ３ ． ８ ７ ７ ×１ ０
Ｕ １ ＝ ３ ． ８ ７ ７× １ ０ ５ ． ５ ５ ０１ ％ ＝４ ． ５ ３ ２× １ ０ 卅
度评定与分析》计算在测定过程 中的随机效应和系统效应导致的不
确定度 ， 最 终 评 定 结 果 的 不确 定 度 。 关键词 ： 粗蛋 白 不 确 定 度
０ ． ０ ０ ０ １ ／ ｘ ／ ３＝ ５ ． ７ ７ ４ Ｘ １ ０
（ 设 备 ： Ｋ ｊ ｅ ｌ ｔ ｅ ｃ ２ ０ ０ ０ 全 自动 凯 式 定 氮 仪 ＣＰ ２ ２ ５ Ｄ
型 电子天 平。
（ 环境 条件 ： 温度 ２ １ 。 Ｃ 湿度 ５ ５ ％Ｒ Ｈ。
（ 被 测 对象 ： 大豆 蛋 白。
１概 述
４ ． ２ Ｕ ｒ ２ 的计算 检 测蛋 白含量 时 实验 室环 境 温度 为 ２ １度 ， 由此 ， 相 对 不确 定度 为 ：
ｕ ｒ ２ ＝ ２ ． １ ×１ ０ 。 ４ Ｘ １ ／ 、 ／ ３＝ １ ． ２ １ ２ Ｘ １ ０ ４ ． ３ Ｕ 的计 算 电子 天平 ， ｅ ＝ ０ ． ０ ０ ０ １ ｇ，按 矩 形 分布 则 由天平 引起 的 不确 定 度为 ：
化， 使蛋 白质 分解 ， 再用 凯 式定 氮 仪进 行蒸 馏 ， 记 录仪 器 上
显示 的数 据 即 为粗 蛋 白含 量 。
２ 建立 数 学模型
大豆分离蛋白 标准
大豆分离蛋白标准大豆分离蛋白是一种优质的植物蛋白，其蛋白含量高，氨基酸组成均衡，且易于消化吸收。
在食品加工行业中，大豆分离蛋白被广泛应用于肉制品、调味品、乳制品等产品中，以提高其蛋白质含量，改善口感和营养价值。
本文将对大豆分离蛋白的标准进行介绍，以便生产加工企业和相关研究人员了解其质量要求和技术规范。
一、外观特征。
大豆分离蛋白的外观呈淡黄色至浅棕色粉末状，无异物和明显气味。
其颜色应均匀，无结块和异物，符合食品卫生标准要求。
二、蛋白含量。
大豆分离蛋白的蛋白含量应不低于90%，通过蛋白质测定方法进行检测，确保产品的蛋白质含量符合标准要求。
三、氨基酸组成。
大豆分离蛋白的氨基酸组成应符合国家食品安全标准，特别是必需氨基酸的含量要达到一定比例，保证产品的营养价值和生理功能。
四、水分含量。
大豆分离蛋白的水分含量应控制在一定范围内，一般不超过8%，以确保产品的稳定性和保存期限。
五、微生物指标。
大豆分离蛋白产品应符合国家相关的微生物指标标准，包括总菌落数、大肠菌群和霉菌、酵母菌等指标，保证产品的卫生安全。
六、重金属和有害物质。
大豆分离蛋白产品中的重金属和有害物质含量应符合国家相关标准，特别是铅、镉、汞等重金属的含量要符合食品安全标准，保证产品的安全性和可持续发展。
七、储存和包装。
大豆分离蛋白产品在储存和包装过程中，应采取适当的措施，防止产品受潮、变质和污染，保证产品质量的稳定性和持久性。
综上所述，大豆分离蛋白作为一种重要的植物蛋白资源，在食品加工行业中具有广阔的应用前景。
生产加工企业在生产过程中，应严格按照相关标准和技术规范进行生产，确保产品质量符合国家食品安全标准，为消费者提供安全、营养、健康的食品产品。
同时，相关研究人员也应加强对大豆分离蛋白的质量研究和控制技术，推动行业的可持续发展和创新。
希望本文所述的大豆分离蛋白标准能够为相关行业提供参考，促进行业的健康发展和科技进步。
国家标准粮油检验大豆蛋白质脂肪含量测定近红外法编制说明
国家标准《粮油检验大豆蛋白质、脂肪含量测定近红外法》编制说明《粮油检验大豆蛋白质、脂肪含量测定近红外法》国家标准起草组二〇〇八年十月十六日1.工作简况（包括任务来源、协作单位、主要工作过程、国家标准主要起草人及其所做工作等）项目背景和来源近红外分析方法(NIR)是近年来在粮食质量测定中作为迅速、简便、非破坏性检测发展起来的新技术，它是利用粮食中某一成分在近红外谱段中（700nm—2500nm）对特定波长近红外光能量与其含量有等比吸收的原理。
近年来，我国粮食和农业部门引进了世界各国多种型号近红外分析仪，使我国近红外应用技术迅速发展，在农产品质量控制上发挥了一定作用。
近红外分析方法自二十世纪七十年代被美国确定为非破坏检测粮食水分、蛋白质、脂肪的标准方法以来，在美国、法国、丹麦、瑞典、日本、澳大利亚等农业发达国家已经将NIR检测装置作为大豆蛋白质、脂肪证明的认定基准装置。
实践验证，近红外分析仪不仅可以为生产企业的品质控制提供直接快速的信息，使生产企业能够及时调整生产工艺，而且近红外光谱分析仪在粮食质量检测中充分体现了它快速、准确、节省人力物力等优点。
多年来，粮食检验部门和加工企业陆续购置了不少近红外分析仪器，但是由于缺乏标准的支撑，近红外分析技术在粮食检验机构一直未能得到真正应用。
为了规范近红外光谱仪的使用，确保测定结果的可靠性，使各级检测部门、研究机构及厂家在使用近红外光谱分析仪时有标准方法可依据。
通过近红外粮食质量检测系列标准的建立，将为粮食质量保证体系提供良好的技术支撑。
根据国家标准化管理委员会《关于下达2007年第四批国家标准制修订计划的通知》（国标委计[2007]85号）的要求，项目编号为-T-449的《粮油检验大豆蛋白质、脂肪含量测定近红外法》国家标准起草任务由河南工业大学负责起草。
在国家粮食局标准质量中心的组织、协调下，河南工业大学连同有关单位组成了本标准起草小组。
本标准制定主要工作过程本标准重点研究了AACC、ISO等关于近红外测定大豆或饲料方法的标准（草案），同时研究了国内有关近红外测定方法的标准。
D1--MCR-03-01大豆分离蛋白检验标准201108
1、适用范围本标准适用于分离蛋白的检验验收,适用品项：高凝胶蛋白、普通分离蛋白。
2、要求2.1本标准参照GB/T 20371-2006《食品工业用大豆蛋白》要求，产品应符合该标准中大豆分离蛋白的指标要求，另有指标﹡根据公司质量要求修订而成。
2.2感观要求 2.2.1感观要求外观呈淡黄色或乳白色粉末，具有产品应有的滋味和气味，无异味；不含有正常视力可见的外来杂质。
2.2.2理化指标水份≤10％；蛋白质含量（以干基计）≥90％ 灰分（以干基计）≤8％粗纤维含量（以干基计）≤0.5％菌落总数≤30000cfu/g 大肠菌群≤30MPN/100g 致病菌不应检出 总砷（以As 计）≤0.5mg/kg 铅（Pb ）≤1.0mg/kg 2.2.3凝胶强度指标普通分离蛋白，凝胶值>40g.cm 高凝胶分离蛋白，凝胶值>80g.cm2.3符合技术部提出的其它要求；有合同要求的，符合合同附加的合同条款要求。
3、检验方法3.1抽样：3.1.1每批次/货柜随机抽取3～5个样本 3.2理化指标根据GB/T 20371-2006《食品工业用大豆蛋白》测定。
3.2 凝胶强度指标3.2.1用电子称准确称取样品100g ，溶于500g 冰水，稍搅拌均匀；4标签、包装、运输、贮存4.1标签、包装符合GB/T 20371-2006《食品工业用大豆蛋白》要求。
4.2运输运输工具应采用清洁、干燥的车箱，不得与有毒、有害物品混装。
4.3贮存产品贮存于干库中阴凉干燥处。
5、检验要求5.1原料检验合格后，质量部出具检验报告单，方可办理入库。
否则走异常原料处理流程。
5.2厂家变更或有其它大的变更因素时，应填写《样品确认记录表》重新确认样品。
泰州安井食品有限公司编 制 葛真 审 核 类 型 受控文件 批 准 标 题 大豆分离蛋白检验标准版 本 1.0 修改状态 / 编 号TZAJ/FSMS-WP-D001页 数1发布日期201303203、入厂必检3.1检查供应商三证资料是否过期（营业执照，生产许可证，型式检验）；3.2批次检验报告是否合格。
大豆品质分析
大豆品质分析摘要：大豆是豆科大豆属的一年生草本植物，原产于中国，在中国各地均有栽培，同时广泛栽培于世界各地。
大豆是中国重要粮食作物之一，已有五千年栽培历史是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物，大豆用处很广泛，大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质。
是数百种天然食物中最受营养学家推崇的食物。
而大豆的品质对大豆的价值起了决定性作用。
关键词：大豆品质、蛋白质含量测定、脂肪含量测定论文主体内容一、研究背景及意义大豆是我们常见的农作物。
作为食品，大豆富含蛋白质和氨基酸，可提供人们必须的营养物质。
除了直接食用，大豆还可以加工成豆腐、豆浆、豆干、腐竹，酿造酱油、制作豆豉，极大丰富了人们的餐桌。
除此之外大豆用来榨油，加工成饲料，在工业上也是重要的原材料。
大豆的品质和大豆的价值息息相关，只有提升大豆的品质、了解大豆品质的测定方法以选择出优质的大豆，才能让大豆更好的发挥作用。
二、优质大豆品质分析测定指标大豆的测定指标有很多，包括大田产量及各类物质含量，以下几点就是1、蛋白质含量高，则大豆蛋白质含量达45%以上，产量比当地同类品种增产5%。
2、脂肪含量高，则大豆脂肪含量23%以上，产量比当地同类品种增产5%。
3、双高含量的大豆，蛋白质含量42%以上，脂肪含量21%以上，产量比当地同类品种增产5%。
4、适于菜用的大粒品种大豆鲜荚长5.3 cm，宽1.3 cm，含糖量7%，蛋白质36%～37%。
5、外观光滑整洁，无畸形，种脐颜色淡的大豆商品价值最高。
三、大豆品质分析方法（一）、大豆蛋白质的测定（凯氏定氮法）1、把大豆用粉碎机粉碎,取3-5g于已经称量好的皿盒中,在120度的烘箱中烘30分钟。
拿出等待凉后称重,减去皿盒重量，计算水分的百分比。
2、称取0.2gH2SO4，6gK2SO4，把0.5g粉碎好的大豆（不用测量水分的）用滤纸包好放入定氮瓶中，加20ml硫酸,（瓶口上放一个小漏斗,防止蛋白跑掉）开小火在电炉子上消化,等没有碳化颗粒,并处于澄清状态时,拿下来凉一会，再加过氧化氢直到把瓶颈上的蛋白冲洗干净为止，再消化30min，拿下来，等凉.。
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蛋白质产物重量 蛋白质产率= ×100% 原料总重量
Folin酚法测定蛋白质浓度见第二实验部分
二、Folin酚法测定蛋白质含量
目的要求
掌握Folin酚法测定蛋白浓度的原理和方法
实验原理
蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如比重、紫外 吸收，折射率等测定而得知；或用化学方法，如定氮、双缩脲 反应，Folin酚试剂反应等方法来计算。其中双缩脲法和Folin 酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便，迅速，不需 要复杂而昂贵的仪器。 Folin 酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏 100倍。 Folin酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双缩 脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙中的磷钼酸 和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈兰色（钼兰 和钨兰混合物）。
0
0 0
1
0.2 0.04
2
0.4 0.08
3
0.6 0.12
4
0.8 0.16
5
1.0 0.2
S
提取的样品液（ml）
PH7.8的buffer（ml）
0.8
1 1 0.8 1 0.6 1 0.4 1 0.2 1 0 1 0.2 1
Folin-甲试剂 （ml
）
Hale Waihona Puke 于室温下不停地振荡10min
Folin-乙应用液（ml）
由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸还原呈兰色，溶液 兰色的深浅与蛋白浓度成正比。因此用Folin酚法测定 蛋白质含量，灵敏度较高。 样品中含酚类化合物及柠檬酸均有干扰作用，如果样 品酸度较高则显色较浅，要提高碳酸钠一氢氧化钠的 浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸和色氨酸的浓度。 Folin酚法有不少个别改进的操作方法，但基本原理都 是一个，只是在各溶液的浓度及填加量上、保温的温 度及保温时间上有所不同而已，本实验所介绍的是本 室常用的，灵敏度较高的操作方法。
4
4
4
4
4
4
立即摇匀，在55℃恒温水浴中保温5min，用流水冷却1min后，测A650
A650值
0
0.184
0.317
0.425
0.536
0.668
？
2、样品测定：取三支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品液1ml和空
白 ，如下操作：
试管号
蛋白质稀释液（ml） （mg)
PH7.8的buffer（ml）
实验原理
大豆中含有丰富的蛋白质、根据提取方法及其其性质的不同， 可以分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白。将豆粉依 次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的 干粉。本实验主要是水溶提取大豆蛋白。 称出提出蛋白质的重量，已知原料重量，可以求出蛋白质的收 率。
试剂和器材
1、试剂 （1）10%Nacl （2）0.2%NaoH （3）75%乙醇 （4）6mol/L HCL （5） 1mol/L HCL （6）1 mol/L NaoH 2、器材 （1）离心机 （2）烧杯 （3）滴管 （4）PH试纸等
3、器材：
试管10支 试管架一个 移液管：（5ml、1ml） 移液管架 洗瓶 恒温水浴 723型分光光度计
Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：
取6支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测定 K=0.308 B=--0.009 R*R=0.9909
试管号
蛋白质标准液（ml） （mg)
操作方法
1、水抽提 将豆粉5g用约50毫升左右的蒸馏水少量多次的添加 搅 拌 ， 常 温 下 搅 拌 抽 提 1 5 min， 3800r/min 离 心 15min，取上清液，如上清液不清澈再经过滤。取上 清液1毫升稀释100倍留做蛋白测定。 其余上清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用滴 管少量多次慢慢滴加（搅拌），用6mol/L和1 mol/L HCL， 调 PH4.5~5.0，3800r/min， 离 心 1 5 min， 收集沉淀物，反复用丙酮搅拌洗涤离心2次，放入表面 皿上， 60 度烘干，得到粉末状蛋白质干粉，称重，计 算粗产率。
大豆蛋白的提取与含量测定
指导老师 赵建军 曲宁 夏婷
孟繁新
蛋白质性质与应用技术关系图
肽 氨基酸
疏 水 性 纸 层 析 亲 水 性 极性
酸 碱
酶 离子交换层析 电荷 电泳
蛋白质
形 状
分 子 量
离 心
凝 胶 层 析
一、大豆蛋白的提取
目的要求
1、掌握大豆蛋白的提取原理和方法 2 、计算粗提产率 2、学习计算蛋白质收率
4、Folin试剂乙：在2升磨口回流装置的烧瓶内，加钨酸钠 （ NaWO4· 2H2O）100g，钼酸钠（ NaMoO· 2M2O）25g， 蒸馏水 700ml，85%的磷酸 50ml，浓盐酸 100ml，充分 混合后，小火回流 10 小时，再加硫酸锂（ Li2SO4）150g， 蒸馏水50ml及数滴溴。然后开口沸腾15min，以驱除过量 的溴，冷却后定容到1000ml，过滤后呈金黄色，于棕色瓶 中保存，可使用多年。 上述制备的 Folin试剂乙的贮备液浓度一般在2mol/L左右， 几种操作方案都是把 Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为 应用液，我们是把贮备液于作用前稀释 18 倍，使之浓度为 0.1mol/L 略高。这种稀释 18 倍后的 Folin 试剂乙就是下文称 之为应用液， Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚 酞 为 指 示 剂 ， 用 Folin 试 剂 乙 去 滴 定 1 mol/L 左 右 的 标 准 NaOH溶液，当溶液颜色由红变为紫灰色，再突然变成黑绿 既为终点。如果用 NaOH 去滴定 Folin 乙，终点不太好掌握， 溶液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。
试剂和器材
1、材料： 本实验所提取大豆蛋白水提取液，经合适稀释至可测 定范围。 2、试剂： （1）0.03mol/L PH7.8的磷酸缓冲液。 （2）200μg/ml的标准酪（牛血清）蛋白溶液。 （3）Folin试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：10g NaoH溶于400ml水中，再加50gNa2CO3； 称 取 0 . 5 g 酒 石 酸 钾 钠 溶 于 8 0 mlH2O 中 ， 再 加 0.25gCuSO4；以上两溶液混合定容到 500ml，冰箱 保存可用一个月。
空白
0
1 1
0 1 4
2 1
0 1 4
1 Folin-甲试剂 （ml） 1