植物查尔酮合成酶(chalconesynthase)活性比色法定量检
植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途
植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A缩合反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂后，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定植物裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等查尔酮合成酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
查尔酮合成酶（chalcone synthase；CHS；EC2.3.1.74）是聚酮体合成酶（polyketide synthase；PKS）大家属中的一员，是启动类黄酮（flavonoid）化合物合成通路中第一步关键酶，形成植物系统性获得性抗性（systematic acquired resistance；SAR）的基础。查尔酮合成酶存在于细菌、植物和真菌中。在所有裸子植物（gymnosperm）和被子植物（angiosperm）的各种不同发育阶段中的不同组织中表达。查尔酮合成酶为同源二聚体，分子量为40至4000Kd，由环境压力，包括UV照射、伤口、病原菌袭击等诱导，通过丙二酰辅酶A脱羧基反应（decarboxylation）、与香豆酰辅酶缩合、聚酮体链延展（chain elongation）、中间产物环状化（cyclization）和芳构化（aromatization）产生查尔酮，一种类黄酮化合物前体，作为化学信使，由此生成各种后续继发性代谢化合物，参与抗病原微生物例如异黄酮植物保护素（isoflavonoid phytoalexin）、花青素花色素化、抵御环境压力（UV光保护）、花粉育性（pollen fertility）、抗氧化、共生根系结瘤（symbiotic root nodulation），以及作为抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤和抗真菌的药物作用。还在细菌的囊肿形成和阿米巴细胞分化中产生作用。基于香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A，在敏感性抑制剂木犀草素（Luteolin）存在与否的情况下，受到查尔酮合成酶的作用，缩合产生查尔酮，并释放出巯基辅酶A（CoA-SH），进而与Ellman 试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5,-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析查尔酮合成酶的活性。查尔酮合成酶反应系统为：
产品内容
清理液（Reagent A）毫升
裂解液（Reagent B）毫升
缓冲液（Reagent C）毫升
反应液（Reagent D）毫升
底物液（Reagent E）毫升
专性液（Reagent F）微升
产品说明书1份
保存方式
保存缓冲液（Reagent C）、反应液（Reagent D）和底物液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent D）和底物液（Reagent E）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞
微型台式离心机：用于样品操作
200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
一、样品准备
1．准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量
2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4．即刻用刀片切碎组织
5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6．加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
7．涡旋震荡5秒，充分混匀
8．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）
9．将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
10．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
11．（选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
12．即刻移入到1.5毫升离心管
13．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）14．放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用
二、测定准备
1．开启并设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长412nm，间隔5分钟，读数7次（共30分钟），并置零
2．从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；反应液（Reagent D）和底物液（Reagent E）避免光照；缓冲液（Reagent C）室温下预热
三、背景对照测定
1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2．加入xx微升底物液（Reagent E）
3．在30℃温度下孵育3分钟
4．加入20微升待测样品（200微克蛋白）（注意：样品须清澈）
5．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
6．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（30分钟读数－0分钟读数）
四、样品总活性测定
1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2．加入xx微升反应液（Reagent D）
3．加入xx微升底物液（Reagent E）
4．上下倾倒数次，混匀
5．在30℃温度下孵育3分钟
6．加入20微升待测样品（200微克蛋白）（注意：样品须清澈）
7．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
8．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（30分钟读数－0分钟读数）
五、样品非特异活性测定
检测开始前，分别移取xx微升专性液（Reagent F）和待测样品（注意：200微克蛋白）到1.5毫升离心管，混匀后，放进30℃培养箱里孵育15分钟。然后继续下列操作。
1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2．加入xx微升反应液（Reagent D）
3．加入xx微升底物液（Reagent E）
4．上下倾倒数次，混匀
5．在30℃温度下孵育3分钟
6．加入40微升上述预处理的待测样品
7．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
8．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（30分钟读数－0分钟读数）
六、计算样品活性
1）样品总活性和非特异活性计算
2）样品特异活性计算
七、酶标仪测定
1）样品总活性测定
1．在96孔板上做好相应标记：背景对照和待测样品
2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到96孔板的所有孔里
3．加入xx微升缓冲液（Reagent C）到背景对照孔里
4．加入xx微升反应液（Reagent D）到待测样品孔里
5．分别加入xx微升底物液（Reagent E）到96孔板的所有孔里
6．在30℃温度下孵育3分钟
7．分别加入20微升待测样品（200微克蛋白）到96孔板的所有孔里（注意：样品须清澈）
8．轻轻摇动96孔板
9．即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和30分钟读数数
10．活性计算：
2）样品非特异活性测定
检测开始前，分别移取xx微升专性液（Reagent F）和待测样品（注意：200微克蛋白）到1.5毫升离心管，混匀后，放进30℃培养箱里孵育15分钟。然后继续下列操作。
1．在96孔板上做好相应标记：待测样品
2．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到96孔板的孔里
3．加入xx微升反应液（Reagent D）
4．加入xx微升底物液（Reagent E）
5．在30℃温度下孵育3分钟
6．加入40微升上述预处理的待测样品
7．轻轻摇动96孔板
8．即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和30分钟读数数
9．活性计算：
3）样品特异活性计算
注意事项
1．本产品为20次操作
2．操作时，须戴手套
3．建议使用比色皿测定
4．样品须澄清，至关重要
5．加样后3秒内比色测定
6．测定值由低到高变化；测定可持续60分钟
7．比色测定后，比色皿须清洗彻底
8．样本测定30分钟读数高于0分钟读数表明具有酶活性
9．如果待测样本为总蛋白，其蛋白浓度为200微克/20微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）
10．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
11．查尔酮合成酶单位活性定义为：在30℃，pH 7.8条件下，每分钟内能够释放1微摩尔辅酶A所需的酶量作为一个活性单位
12．本公司提供系列聚酮体代谢检测试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感
植物查尔酮合成酶(chalconesynthase)活性比色法定量检
植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途 植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A缩合反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂后，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定植物裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等查尔酮合成酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。 技术背景 查尔酮合成酶（chalcone synthase；CHS；EC2.3.1.74）是聚酮体合成酶（polyketide synthase；PKS）大家属中的一员，是启动类黄酮（flavonoid）化合物合成通路中第一步关键酶，形成植物系统性获得性抗性（systematic acquired resistance；SAR）的基础。查尔酮合成酶存在于细菌、植物和真菌中。在所有裸子植物（gymnosperm）和被子植物（angiosperm）的各种不同发育阶段中的不同组织中表达。查尔酮合成酶为同源二聚体，分子量为40至4000Kd，由环境压力，包括UV照射、伤口、病原菌袭击等诱导，通过丙二酰辅酶A脱羧基反应（decarboxylation）、与香豆酰辅酶缩合、聚酮体链延展（chain elongation）、中间产物环状化（cyclization）和芳构化（aromatization）产生查尔酮，一种类黄酮化合物前体，作为化学信使，由此生成各种后续继发性代谢化合物，参与抗病原微生物例如异黄酮植物保护素（isoflavonoid phytoalexin）、花青素花色素化、抵御环境压力（UV光保护）、花粉育性（pollen fertility）、抗氧化、共生根系结瘤（symbiotic root nodulation），以及作为抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤和抗真菌的药物作用。还在细菌的囊肿形成和阿米巴细胞分化中产生作用。基于香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A，在敏感性抑制剂木犀草素（Luteolin）存在与否的情况下，受到查尔酮合成酶的作用，缩合产生查尔酮，并释放出巯基辅酶A（CoA-SH），进而与Ellman 试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5,-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析查尔酮合成酶的活性。查尔酮合成酶反应系统为： 产品内容 清理液（Reagent A）毫升 裂解液（Reagent B）毫升 缓冲液（Reagent C）毫升 反应液（Reagent D）毫升 底物液（Reagent E）毫升 专性液（Reagent F）微升 产品说明书1份 保存方式 保存缓冲液（Reagent C）、反应液（Reagent D）和底物液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent D）和底物液（Reagent E）避免光照；有效保证6月
查尔酮的合成
引言 二苯基丙烯酮，又叫查耳酮，是合成黄酮类化合物的重要中间体，其广泛的存在于自然界中，在许多文献中都有过从天然产物中分离提取查尔酮的报道[1]。 它对植物抵抗疾病、寄生虫等起重要作用。其本身也有重要的药理作用。由于其分子结构具有较大的柔性,能与不同的受体结合,因此具有广泛的生物活性[2,3]。由于其显著的生物药理活性及独特的可塑性结构,近年来引起了化学工作者的研究兴趣。如：Laliberte R.报道了查耳酮的抗蛲虫作用[4]；程桂芳，何克勤等在1996年报道了查尔酮的抗过敏性作用[5],表现了多种药理作用。DE VINCENZOR等在2000年发现了类黄酮化合物中的查尔酮,具有化学预防和抗肿瘤活性[6-11]。同时，它还可作为抗生素、抗疟疾的药物成分。因此，查耳酮化合物在医药化学方面有广泛的用途。 具有C=C-C=O结构的查耳酮化合物，和两端的苯环形成一个大的π键。当受到光波的照射后，电子在一定方向上发生移动，产生超极化效应；此时的π电子趋于离域，往往表现出较大的非线性光学效应。因而，这一类的化合物在非线性光学材料方面具有广泛的应用前景。同时，查耳酮化合物还可以作为聚合物的支链，在液晶领域也有广泛的用途[12,13]。除此之外查尔酮还是一种重要的有机合成中间体,可用于香料和药物等精细化学品的合成[14]。 合成查尔酮的方法很多,经典的合成方法是使用强碱如醇钠或者强酸在无水乙醇中催化苯乙酮和苯甲醛的羟醛缩合,合成路线为: O CH3 R CHO H+orOH- O R Scheme 1
该反应体系对设备腐蚀较大,产物不易分离且污染严重，且副反应多,产率较低,产率在10% ～70% [15]。 近年来也有报道采用金属有机化合物 、NaOH 和1.2丁基2.3.2甲基六氟磷酸咪唑盐、KF 2Al 2O 3等作为碱性催化剂在溶液中合成查尔酮, 但催化剂制备较困难,价格比较昂贵,反应时间较长,且产率不高。随着各种催化剂的不断发现及对反应条件的大量探索,查尔酮的合成方法已趋向于多样化。其代表性的合成方法有： 1.溶液合成 2007年董秋静等报道[16]：以苯甲醛和苯乙酮衍生物为原料,在氢氧化钠乙醇水溶液中,室温下制备了一系列的查尔酮衍生物。方法简单,操作容易,后处理方便,收率在60%～90%之间,特别适合于羟基查尔酮的合成。合成路线为： COCH 312CHO NaOH/CH 3CH 2OH R 1R 2O Scheme 2 2.微波合成 自从Gedye 等[17]1986年将微波辐射用于有机合成反应以来,微波技术在有机合成中已得到了广泛的应用[18,19]。 2007年朱凤霞等[20]报道了用NaOH 作催化剂、无水乙醇作溶剂,在微波辐射条件下使乙酰基二茂铁与芳醛发生缩合反应以制备9个二茂铁基查尔酮衍生物。反应时间只需0. 5～4 min,产率61% ～84%之间,操作简便。 2006年徐洲[21]等报道了用2-羟基苯乙酮与取代苯甲醛在20%NaOH 水溶液中,在四丁基溴化铵( TB2AB)存在下,微波辐射3～7min,合成了13种羟基查尔酮及其衍生物,收率良好,在57%～85%之间。反应路线为：
植物硝态氮的比色测定
中国海洋大学实验报告 2017年11月3日星期五姓名：郑志胜专业年级：2014级生物科学 学号：140500110098课程：植物生理学实验 题目：植物硝态氮的比色测定 一、目的 学会植物组织中硝态氮含量的测定方法，了解植物组织中硝态氮的含量。 二、材料用具及仪器药品 花生植株、分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、试管、移液管、亚硝酸钠 20%醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。 混合粉剂配法：硫酸钡100g、a一萘胺2g、锌粉2g、对氨基苯磺酸4g、硫酸锰10g、柠檬酸75g。 上述各试剂分别研细，再分别用等分的硫酸钡和其他各试剂混合成无颗粒状灰白色的均匀体，粉剂宜在黑暗干燥条件中保贮，七天后方可使用。 三、原理 硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸,a一萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮染料，其颜色深浅与氮含量在一定范围内成正比关系，主要化学反应式如下： 四、方法步骤 1.标准曲线绘测： 取恒重亚硝酸钠（NaNO2）0.6071g溶于1升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液，随后稀释成2、4、8、10ug/ml。分别吸取2ml转入50ml有塞试管中，加冰醋酸溶液18ml。并作试剂对照，再加入0.4 g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，将试管中悬浊液过量倾入离心管中，使部分流出管外，白色粉即可去除，离心5分钟（4000rpm）。取上清液在520nm波长下比色测定，绘制标准曲线，本方法适用范围在20ug ml以内。 2.组织液的提取 称取花生功能叶柄0.5克，剪成1—2mm的碎片，充分混匀置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1—3分钟，放置澄清后，取上清液2 ml，再按标准曲线制作方法测定，叶柄中硝态氮含量根据下述公式计算： 植物组织中硝态氮含量（ug/g=c.v） 式中C为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮ug/ml).V为1g植物组织所制备的提取液的总体积（ml），如本法为40ml。 五、实验报告 计算植物组织中硝态氮的含量。 六、思考题
植物查尔酮异构酶的生物信息学分析
第一作者简介:雷桅(1982 ),男,硕士研究生,主要从事药用植物代谢工程研究。E mail:weil06@https://www.360docs.net/doc/0f12745021.html, 。通讯作者:孙敏。 基金项目:三峡库区生态环境教育部重点实验室开放基金资助(EF200609)。 收稿日期:2007-09-01 植物查尔酮异构酶的生物信息学分析 雷 桅1 ,邹 祥2 ,向 阳1 ,汤绍虎1 ,孙 敏 1 (1.西南大学生命科学学院,三峡库区生态环境教育部重点实验室,重庆400715;2.西南大学药学院,重庆400715) 摘 要:采用生物信息学方法和工具对GenBank 中的洋葱、豌豆、番茄和茶等植物的黄酮类化合物合成关键酶查尔酮异构酶(CHI)的核酸和氨基酸序列进行了比对、分析和建模,进而对其分子结构、理化性质、亚细胞定位、蛋白转运肽、跨膜结构域、疏水性、分子系统进化、蛋白质二级和三级结构等重要参数进行了预测和推理。结果表明:该类酶基因的全长包括5 、3 非翻译区和一个开放阅读框,无蛋白转运肽,且定位于细胞质基质,是一个疏水性蛋白,二级结构均以随机卷曲和 螺旋为主要构件,洋葱和豌豆的CHI 三维建模成功。 关键词:查尔酮异构酶;生物信息学;黄酮类化合物 中图分类号:Q 946.5;Q 558 文献标识码:A 文章编号:1001-0009(2008)02-0193-05 黄酮类化合物是由苯丙烷类化合物衍生得到的一大类植物次生代谢产物,其特点是具有C6 C3 C6的基本骨架,并可根据中间吡喃环的不同氧化水平和两侧A 、B 环上连接的各种取代基,而分为不同的黄酮类型。研究证明黄酮类化合物对植物自身进行正常的生理活动起着重要作用,如调节生长、UV 防护、抗虫抗病、花色形成,影响花粉育性,诱导植物根部与共生菌相互作用等。因此作为园艺植物中一类重要的化学成分,一直备受农艺界的广泛关注,是花色基因工程和天然产物代谢工程研究的一类主要目标产物。 查尔酮异构酶(c halcone isomerase,CHI)是第1个被认识的黄酮类化合物合成相关酶,也是黄酮代谢途径中的关键酶之一,它催化柚皮苷查尔酮异构化形成有生物活性的二羟基黄烷酮。CHI 一般可分为两种类型,一种主要存在于豆科植物中,催化6 脱氧查尔酮和6 羟基查尔酮生成异黄酮类化合物和黄酮类化合物;另一种主要存在于非豆科植物中,催化6 脱氧查尔酮生成5 羟基黄烷酮[1] 。目前CHI 基因已先后从豌豆、矮牵牛、苜蓿等多种植物和人类粪便厌氧细菌中被克隆出来[2 5] ,通过代谢工程的研究证明改变CH I 活力可以有效调控黄酮类化合物的含量,例如超量表达牵牛花CHI 基因使番茄果皮中的黄酮水平提高了78倍[6] ,降低康乃馨中的CHI 酶活得到奇特的黄色花朵[7],而CH I 失活 的洋葱突变体中槲皮素水平明显下降[8]。因此对CHI 的研究是当前一个十分重要的热门话题。现利用生物信息学的方法,以洋葱(Allium cep a)为重点,对豌豆(Pisum sativum )、番茄(Lycop ersicon esculentum )、茶(Camellia sinensis)等园艺植物查尔酮异构酶的基因及相应氨基酸序列的理化性质、结构特征、生化功能及系统演化关系等进行预测和分析,以期为今后深入研究CH I 家族蛋白的酶学特性和黄酮生物合成的分子机理提供理论依据。 1材料与方法 数据来源于NCBI 核酸和蛋白质数据库中已登录的查尔酮异构酶(CH I)的核酸序列及其对应的氨基酸序列:洋葱(Acc ession:AY541034)、豌豆(Accession:U03433)、番茄(Accession:AY348871)、茶(Accession:DQ120521)。 利用Vector NTI 8、Clustal X 、MEGA3、ViewerLite 4.2软件和ww https://www.360docs.net/doc/0f12745021.html, 、https://www.360docs.net/doc/0f12745021.html, 等网站提供的各种在线生物信息学工具进行预测和分析。核酸及氨基酸序列的分子结构和理化性质分析、开放阅读框的查找和翻译使用Vector NTI 8软件完成;核酸及氨基酸序列的同源性比对使用Clustal X 软件和NCBI 上的Blast 在线工具完成;分子系统发生树使用MEGA3的Phylogeny 中的Neighbor Joining 方法构建;亚细胞定位情况的考察使用TargetP 1.1Server 在线完成,并对其结果进行SignalP 及ChloroP 分析,得到蛋白质信号肽和叶绿体转运肽的相关信息;跨膜结构域和疏水性分析分别使用TMHMM 和ProtScale 完成;蛋白质二级结构预测和三级建模分别使用GOR 和SWISS MODEL 完成。 2结果与分析 193
查尔酮的合成
引 言 二苯基丙烯酮，又叫查耳酮，是合成黄酮类化合物的重要中间体，其广泛的存在于自然界中，在许多文献中都有过从天然产物中分离提取查尔酮的报道[1]。 它对植物抵抗疾病、寄生虫等起重要作用。其本身也有重要的药理作用。由于其分子结构具有较大的柔性,能与不同的受体结合,因此具有广泛的生物活性[2,3] 。由于其显著的生物药理活性及独特的可塑性结构,近年来引起了化学工作者的研究兴趣。如：Laliberte R.报道了查耳酮的抗蛲虫作用[4] ；程桂芳，何克勤等在1996年报道了查尔酮的抗过敏性作用[5] ,表现了多种药理作用。DE VINCENZOR 等在2000年发现了类黄酮化合物中的查尔酮,具有化学预防和抗肿瘤活性[6-11] 。同时，它还可作为抗生素、抗疟疾的药物成分。因此，查耳酮化合物在医药化学方面有广泛的用途。 具有C=C-C=O 结构的查耳酮化合物，和两端的苯环形成一个大的π键。当受到光波的照射后，电子在一定方向上发生移动，产生超极化效应；此时的π电子趋于离域，往往表现出较大的非线性光学效应。因而，这一类的化合物在非线性光学材料方面具有广泛的应用前景。同时，查耳酮化合物还可以作为聚合物的支链，在液晶领域也有广泛的用途[12,13] 。除此之外查尔酮还是一种重要的有机合成中间体,可用于香料和药物等精细化学品的合成[14] 。 合成查尔酮的方法很多,经典的合成方法是使用强碱如醇钠或者强酸在无水乙醇中催化苯乙酮和苯甲醛的羟醛缩合,合成路线为: O CH 3 R CHO H +orOH -O R Scheme 1 该反应体系对设备腐蚀较大,产物不易分离且污染严重，且副反应多,产率较低,产率在10% ～70% [15] 。 近年来也有报道采用金属有机化合物 、NaOH 和1.2丁基2.3.2甲基六氟磷酸咪唑盐、KF 2Al 2O 3等作为碱性催化剂在溶液中合成查尔酮, 但催化剂制备较困难,价格比较昂贵,反应时间较长,且产率不高。随着各种催化剂的不断发现及对反应条件的大量探索,查尔酮的合成方法已趋向于多样化。其代表性的合成方法有： 1.溶液合成 2007年董秋静等报道[16] ：以苯甲醛和苯乙酮衍生物为原料,在氢氧化钠乙醇水溶液中,室温下制备了一系列的查尔酮衍生物。方法简单,操作容易,后处理方便,收率在60%～90%之间,特别适合于羟基查尔酮的合成。合成路线为： COCH 31 2 CHO NaOH/CH 3CH 2OH R 1R 2 O Scheme 2 2.微波合成 自从Gedye 等[17] 1986年将微波辐射用于有机合成反应以来,微波技术在有机合成中已得到了广泛的应用[18,19] 。
溶剂提取法提取银杏叶中得黄酮实验报告
溶剂提取法提取银杏叶中得黄酮实验报告 小组成员：周璟、胡静、左兵华、刘云飞 2014年5月一、实验目的 ⅰ）掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取 ⅱ）掌握紫外分光光度计的应用，以及origin软件绘图的基本操作ⅲ）学会自主设计实验，培养团队合作精神 二、实验原理 ⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用； ⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm; ⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因 为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。 其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二
酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应） 三、实验药品及仪器 ⑴药品：银杏叶（阴干碾碎储藏备用），芦丁，无水乙醇，亚硝酸钠，氯化铝和氢氧化钠； ⑵仪器：电子天平，旋转蒸发仪，索氏提取器，uv-1800型紫外分光光度计，研钵，比色皿，容量瓶（10ml*6,50ml*1,100ml*2），移液管，量筒，烧杯，玻璃棒。 四．实验步骤 Ⅰ）配制60%的乙醇溶液（黄酮同时具有水溶和油溶性）。 Ⅱ）准确称取10g银杏叶粉末置于索氏提取器中，加入60%的乙醇溶液10ml，回流提取3h，然后用旋转蒸发仪浓缩并回收乙醇溶液，抽滤得到银杏叶黄酮粗提物。再用60%的乙醇定容到100ml。 Ⅲ）芦丁标准液的配置：准确称取芦丁标准品0.005g，用60%的乙醇溶液加热溶解，并转移到50ml容量瓶内用乙醇溶液定容，摇匀，得质量浓度为0.1mg/ml的芦丁标准液。 Ⅳ）分别吸取上部配制的母液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml于6只10ml容量瓶中摇匀，先加入5%的亚硝酸钠0.5ml摇匀，静置6min，再加入10%的氯化铝溶液0.31ml，摇匀，静置6min，再加入4%的氢氧化钠溶液4ml，用60%的乙醇溶液定容到10ml，放置20min。其中，加入
实验7土壤硝态氮的紫外分光光度法.doc
实验土壤硝态氮的紫外分光光度法 根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可 为合理施肥，肥料规划和估产提供依据。 一 .目的要求 了解紫外 / 可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的 测定技术，用校正因数法测定土壤硝态氮的含量。 二 .方法原理 用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210 和 275 纳米的吸光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机 质为主的杂质的吸收。 因为 275 纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在 275 纳米处的吸收值是 210 纳 米处的 f 倍，故可将 A275 校正为有机质在 210 纳米处的干扰吸收，从 A210 中减去，即得硝酸根在 210 纳米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮 得含量。 三 .器皿与试剂 1.紫外、可见分光光度计和xx 比色皿。 2.50 毫升容量瓶 10 个， 100 和 250 毫升锥形瓶各 4 个，漏斗 4 个，普通试 管 4 支， 50 毫升胖肚吸管 1 支， 5、10 毫升和 2 毫升刻度吸管各一只，滴管 2 支。 3.氯化钠溶液 1mol/L: 称取氯化钠 58.44 克溶于 400 毫升水中，转入 1 升容量瓶中，稀释至刻度。 4.硝态氮标准溶液100μ g/ml: 称取于 105℃烘制 2 小时得硝酸钾 0.3609 克溶于水，转移至 500 毫升容量瓶中，用水定容。临用时再稀释至 20μg/ml。
5.硫酸溶液， 10％（ V/V） 四 .测定步骤 1.待测液制备 称取 10.00 克风干土样于 250 毫升锥形瓶中，加入50 毫升 1 mol/L 的氯化钠溶液，加塞振荡30 分钟，过滤于干净干燥的100 毫升锥形瓶中，初液弃去。同时做试剂空白。 2.标准曲线绘制与测定 吸取 20μg/ml硝态氮标准溶液0. 00、0. 50、1. 00、2. 00、3. 00、4.00 毫升分别置入 50 毫升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入 2 毫升 10％硫酸溶液，摇匀。浓度分别为 0. 00、 0. 20、0. 40、0. 80、1.20 和 1.60 μ g/ml。以零浓度标液作参比，于 210 米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归方程。 去土壤浸体液和试剂空白液各 10 毫升入试管中，加入 0.8 毫升 10％硫酸，摇匀。以试剂空白作参比，分别于 210 纳米和 275 纳米处测定吸光度，不要每
羟醛缩合合成查尔酮
广东石油化工学院《研究型实验》羟醛缩合合成查尔酮 学院（系）：化学工程学院 专业：化学工程与工艺
摘要： 查尔酮是一种黄酮类化合物,是合成多种天然化合物重要的有机合成中间体。查尔酮的化学结构为1,3-二苯基丙烯酮,以它为母体的天然化合物存在于甘草、红花等植物中,这些天然查尔酮常含酚羟基。其常见合成方法是以苯甲醛和苯乙酮为原料,加入碱、酸或金属等物质作为催化剂进行羟醛缩合反应,但产率较低,副产物多。本次实验是以苯甲醛和苯乙酮为原料,选择了适当的催化剂，还运用了搅拌装置、重结晶装置、薄层色谱分离装置等，由于其显著的生物药理活性及独特的可塑性结构,近年来引起了化学工作者的研究兴趣。本研究实验的进行是有必要的。 关键词查尔酮羟醛缩合反应搅拌装置重结晶装置薄层色谱分离装置
Aldol condensation combining Chalcone Abstract: Flavonoids is a kind of Chalcone is synthesis of a variety of natural compounds are important organic intermediates.The chemical structure of Chalcone 1 3 - diphenyl ketone of propylene,Maternal natural compounds for it exists in Licorice safflower plants, etc,this naturally flavonoids often phenol hydroxyl.It is the usually way to carry out the condensation reaction of hydroxyl aldehyde with the addition of alkali, acid or metal as catalyst, the benzene formaldehyde and benzene ethyl ketone were used as raw materials.But the yield was lower and the by-products were more.In this experiment, the suitable catalyst was selected as the raw material of benzene formaldehyde and benzene ethyl ketone.Stirring device, recrystallization device, thin layer chromatography separation device, etc. are also used.Because of its significant biological and pharmacological activity and plasticity of the unique structure, in recent years has attracted the interest of chemists.It is necessary to carry out the experiment in this research. Key words Flavonoid Aldol condensation reaction Mixing plant Recrystallization device Thin layer chromatographic separation device
植物中硝态氮的测定方法
硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。 （一）原理 在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。 （二）仪器与用具 （1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。 试剂： 500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。 5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。置冰箱保存一周有效。 8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。 （三）实验步骤 1. 标准曲线的制作 （1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。 （2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。 （3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。以NO3-N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 2. 样品中硝酸盐的测定 （1）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克分别放入三支刻度试管中，加入10ml无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分钟，到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。 （2）样口液的测定吸取样品0.1 ml分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液0.4 ml，混
聚酮合酶
聚酮合类药物和聚酮合酶 一、聚酮类药物 聚酮类化合物是由简单脂肪酸在聚酮合酶催化下经过类似长链脂肪酸的合成途径生成的，其中心骨架是通过丙二酸(或有取代基的丙二酸)硫酯重复的脱羧缩合而形成的。包括聚次甲基酮基团( (CH2一CO)n)化合物及其加水、脱水或者脱羧的衍生物。 常见的聚酮类药物主要有洛伐他汀、阿霉素、红霉素、四环素、两性霉素、南昌霉素、普拉固（普伐他汀）等 二、聚酮合酶 聚酮合成酶通过催化前体物质进行反复的缩合反应,可以形成多种聚酮体,再经过甲基化、氧化还原、糖基化等修饰反应形成各种各样结构复杂的聚酮类化合物。 尽管聚酮类化合物在结构上是多样的,但其生物合成有其共同的机制,其核心结构均由聚酮合酶催化合成。根据聚酮合酶的结构及其它性质,聚酮合酶被分成Ⅰ型(typeⅠPKS,又称模件型)、Ⅱ型(typeⅡPKS,又称迭代型)和Ⅲ型(typeⅢPKS,查尔酮型)3大类。 Ⅰ型PKSⅠ型PKS是以模块形式存在的多功能酶,每一模块含有一套独特的、非重复使用的催化功能域,其非重复使用的催化功能域与聚酮生物合成的反应顺序呈线性对应,主要催化合成大环内酯类、聚烯及聚醚类化合物。 Ⅱ型PKS 1984年Malpartida和Hopwood首次报道了Ⅱ型PKS是一个多功能酶复合体,只包含一套可重复使用的结构域,每一结构域在重复的反应步骤中都多次地用来催化相同的反应。 Ⅲ型PKSⅢ型聚酮合酶(TypeⅢPKSs)以植物中的查耳酮合酶为代表(chalcone synthases)。1999年,Funa等发现了一种类似苯基苯乙烯酮合成酶的PKS(chalcone synthase-like PKS)———Rp-pA,后来被称为Ⅲ型PKS。Ⅲ型PKS和其它两种PKS迥然不同,它在不需要ACP的情况下直接催化泛酰辅酶A间的缩合,主要负责单环或双环芳香类聚酮化合物的生物合成。 全球现在已有两个聚酮合酶数据库，一个是印度国家免疫学研究所的Yadav G等人于2003年构建的PKSDB数据库；另一个是在PKSDB数据库基础上，韩国SmallSoft公司Tae H等人对PKSDB数据库加以改进和补充，在2007年构建的ASMPKS数据库。 三、聚酮合酶与组合生物药物 3.1聚酮化合物的组合生物合成的理论依据 组合生物合成(eombinatorial biosynthesis)或组合生物学(eombinatorial biology)是近年发展起来的技术，是在微生物次级代谢产物生物合成基因和酶学研究基础上形成的。是指应用基因重组技术重新组合微生物药物的基因簇(duster)，产生一些新的非天然的基因簇，从而合成许多新的非天然的化合物，为微生物药物的筛选提供丰富的化合物资源。 负责延伸1个二碳单位的所有结构域称为1个模块，I型聚酮合酶包括多个模块。每个模块上分别携带有参与聚酮生物合成所必需的各种具有不同催化功能的结构域(Domain),包括酰基转移酶、酰基载体蛋白、β-酮酰-ACP合酶、酮还原酶、脱水酶、烯酰还原酶、硫酯酶等。 利用组合生物合成技术进行非天然聚酮类化合物的理论依据是：这些模块是线性排列的，在不同的PKS中都能发挥各自相应的酶活性，催化相应的底物进行合成，并且对底物的特异性要求并不十分严格。这为聚酮化合物的组合生物合成的发展奠定了基础。利用组合生物合成技术使PKS中的某些模块互换、插入或缺失就可以得到许多“非天然”具有活性
何首乌苯甲酮合成酶基因的克隆及序列分析
何首乌苯甲酮合成酶基因的克隆及序列分 析 (作者：__________ 单位：___________ 邮编：___________ ) 【摘要】目的克隆何首乌苯甲酮合成酶基因并作序列分析。 方法以何首乌Polygo num multiflorum Thu nb.为材料，根据其它植物苯甲酮合成酶(Benzalacetone synthase ，BAS)基因cDNA序列的保守区域设计引物，利用RT PCR和3〔RACE，克隆其基因。结果从何首乌叶cDNA中克隆出了长度为1 049 bp的基因片段。序列分析表明该片段具有典型的CHS基因家族的结构域，为何首乌的BAS基因片段，命名为PmBAS。将得到的序列提交Gen Ba nk，序列号为FJ601686。对获得的PmBAS的氨基酸序列进行比较分析，发现PmBAS不含有 Phe215，这种差异可能是CHS与BAS催化不同反应的重要原因之一。何首乌BAS与其它植物CHS的氨基酸序列的进化分析表明，其与同为蓼科的虎杖和掌叶大黄的同源性较近。结论对利用基因工程技术促进何首乌蒽醌合成具有重要意义。 【关键词】何首乌；苯甲酮合成酶；基因克隆；序列比较蒽醌(Anthraquinone)是一类重要的中草药活性成分，常见于何首乌、决
明、大黄、虎杖、芦荟和茜草等植物中，具有抗菌、泻下、利尿、抗氧化和过氧化作用、抗诱变和保肝等多种功效［1, 2］。Dewick 等］3］与VELl［EK等［4］认为，蒽醌的合成大致分为3个阶段： ①以乙酰辅酶A为起始单元，连续与8个丙二酸单酰辅酶A发生缩合，引入8个二碳单位，最后生成蒽醌的基本骨架——八酮化合物； ②八酮化合物经过还原、脱羧及氧化等步骤，形成大黄酚、芦荟大黄 素与大黄酸等蒽醌类化合物；③八酮化合物经过水解、脱羧、脱水与甲基化等步骤，形成大黄素与大黄素甲醚等蒽醌类化合物(见图 1 )。在第1阶段中，催化乙酰辅酶A与丙二酸单酰辅酶A缩合的反应是由植物查尔酮合成酶系催化完成的。查尔酮合成酶系属于植物皿型聚 酮合成酶的一个家族，包括了查尔酮合成酶(Chalcone synthase， CHS )、芪合成酶(Stilbene synthase ，STS )、吡喃酮合成酶 (2［pyrone synthase，2PS)、苯甲酮合成酶(BAS)、吖啶酮合成酶(Acrido ne syn thase ，ACS )和芦荟松合成酶(Aloes one synthase，ALS)等成员，它们的氨基酸序列相似性达60%?70% :5，6］。近几年来，一系列功能不同的查尔酮合成酶系不断从蓼科植物中被克隆和鉴定。如Abe等］5］从蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum Linn.中克隆得到CHS与BAS °CHS能催化3分子的丙二酸单酰辅酶A和1分子对香豆酰［辅酶A结合形成查尔酮。BAS能催化1分子pcoumaroyl _辅酶A与1分子的丙二酸单酰辅酶A，缩合生成具有抗炎作用的苯乙烯基丙酮。Junghanns等］7］也从掌叶大黄中克隆得到ALS，能够催化6分子的乙酰辅酶A，形成芦荟松。
开题报告查尔酮合成
毕业设计（论文）材料之二（2） 本科毕业设计(论文)开题报告题目：KF/MgO催化合成查尔酮的研究 课题类型：实验研究 学生姓名：王成磊 学号：3130405305 专业班级：应化133 学院：生物与化学工程学院 指导教师：朱逸伟 开题时间：2017年2月20日 2017年3月17日
一、本课题的研究意义、研究现状和发展趋势（文献综述） 1催化合成查尔酮的研究意义 查尔酮是黄酮类化合物的一种，其化学结构为1，3-二苯基丙烯酮，是一类重要的天然产物，多分布在菊科，豆科，苦苣苔科植物中，在玄参科，败酱科植物中也有发现。由于查尔酮分子结构具有较大的柔性，可以与许多受体结合，表现出多方面的生物学活性。作为植物内合成黄酮的前体，其本身也有重要的药理作用，人们从天然产物中提取分离以及通过化学、生物等方法合成的查尔酮类化合物中表现出抗肿瘤、抗寄生虫、抗病毒、抗菌、抗炎、抗血小板凝集等多种药理学性质［1］。因此，对查尔酮类化合物的研究与开发成为药物化学的一个研究热点。 近年来, 还有文献报道查尔酮的共轭效应使其电子流动性非常好, 且具有不对称的结构, 所以是优越的有机非线性光学材料, 可以作为光储存、光计算、激光波长转换材料[2,3]。此外, 查尔酮还可用作光化学中的光交联剂、荧光材料和液晶材料等[ 4,5]。除此之外查尔酮还是一种重要的有机合成中间体, 可用于香料和药物[6]等精细化学品的合成。 2查尔酮合成方法的研究现状 查尔酮的经典合成方法是使用强碱或强酸催化苯乙酮及其衍生物和芳香醛的羟醛缩合,收率10%—70%。近年来,各种催化剂的不断发现及对反应条件的大量探索,查尔酮的合成方法已趋向于多样化。 2.1碱性催化剂 董秋静[7]以苯甲醛和苯乙酮衍生物为原料,在氢氧化钠乙醇水溶液中,室温下制备了一系列的查尔酮衍生物,收率在60%—90%。此方法简便易操作,但缺点是该反应体系对设备腐蚀性比较大。 另有作者以未保护羟基的取代邻羟基查尔酮和取代苯甲醛为原料,在NaOH/乙醇溶液中,室温反应,合成了23种2'-羟基查尔酮,收率48%～90%。该法反应条件温和,步骤简捷,为类似化合物的合成提供了依据[8]。其缺点是查尔酮衍生物不易分离,且反应污染比较严重。使用碱性催化剂催化合成查尔酮的方法,是目前实验室中最为常用的,但是产品收率较低(10%～70%),而且副产物多。 2.2酸性催化剂 采用4-羟基苯乙酮与取代苯甲醛为原料, 在乙二醇溶液中,以硼酸为催化剂, 于110—120℃反应6 h,再经柱分离精制可得羟基查尔酮衍生物,反应收率为30%—54%[ 9]。此法较酚羟基保护法反应步骤短,易于分离和精制,为研究多羟基查尔
银杏叶提取黄酮及分离纯化
银杏叶提取黄酮及分离纯化 组员：李佳辉、黄埔、赵超武 一、实验目的 1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取 2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置 3.学会自主设计实验，培养团队合作精神 二、实验原理 ⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用； ⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm; ⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因 为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。 其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述
试剂时是不显色的。（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应） 目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。 其工艺流程如下： 银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物 由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。 三．实验材料及器材 1.材料 酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸 2.相关溶液的配制和树脂预处理 0.20mg／mL芦丁标准溶液（500mL）、5％NaNO2（500mL）、10％AI(NO3)3（500mL）、1mol／LNaOH 、0.4mol／LNaOH（500mL）、0.4mol ／L HCl(500mL)、30%乙醇（500mL）30%乙醇 （1）D101树脂预处理(500g)：商品树脂均残留惰性溶剂，故使用前根据应用需要，必须进行不同深度的预处理，在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3—4小时，然后放净洗涤液，
植物组织中硝态氮的测定植物伤流液中无机磷含量的测定
植物组织中硝态氮的测定 【实验目的】伤流是植物根系主动吸水的证明，不同植物或同一种植物在不同季节的伤流强度均不同，伤流强度反应根系生理活动强弱和根系又吸收面积大小。伤流除含有大量水分外，还含有各种无机盐及根部合成有机物包括植物激素。硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。 【原理】硝态氮与硝酸试粉作用，生成粉红色的偶氮化合物，其颜色深浅与硝态氮的浓度成正相关，将样品显示的颜色与标准比色阶进行比较，可快速求得硝态氮的浓度。硝酸试粉主要是由锌粉、柠檬酸、ɑ-萘胺、对氨基苯磺酸混合而成，硝态氮与硝酸试粉反应如下： NO 3-+H + NO 2-+Zn 2++H 2O SO 3H NH 2+2H SO 3H N +N +2H 2O 对氨基苯磺酸重氮化合物NH 2 SO 3H N +N + N NH 2 ɑ-萘胺重氮化合物对-苯磺酸-偶氮-萘胺 【实验材料】接骨木伤流液 【实验试剂】硝酸试粉、50%醋酸、50mg/L 氮流液 【实验步骤】在比色盘的五个孔中加入如表所示溶液： 5min 后即成5个不同浓度20、40、60、80、100 mg/mL 硝态氮的比色阶。再用6号孔中加入伤流液5滴及硝酸试粉1勺，搅拌，5min 后，将其所显粉红色与标准比色阶比较确定样品液中硝态氮的浓度。 【实验结果及处理】 1.经过比色样品溶液的颜色介于2~3之间。 2.根据结果，伤流液中硝态氮的浓约为(10/5+20/10)/2=2mg/mL 【讨论】 1. 如若伤流液浓度过高，超过容量范围可先将伤流液稀释一定倍数后在进行滴加。
植物生理综合实验答案
综合设计实验1矿质元素对植物的作用(红色的问题见后附照片) 1、本次实验名称？分为哪两部分？ 诱导产生NR，增强其活性 2、NR有何特性？何谓诱导酶？ NR为诱导酶，不供应硝酸根之前，不会产生。诱导酶 3、针对上述特性实验中采取何措施？“真空渗入法”在步骤中何处体现？ 措施：提前一天用硝酸盐叶面喷施，增强活性 体现：反应时，将三角瓶放在真空干燥器中，用真空泵抽气放气，直至叶片沉入瓶底 4、实验中NO3-所起作用？ 诱导产生NR，增强其活性 5、何谓磺胺比色法？ 亚硝态氮在酸性溶液中与对氨基苯磺酸形成重氮盐，再与a-萘胺定量生成红色偶氮化合物，在520nm有最大吸收峰. 6、NR活力以什么表示？步骤中何处有关键作用？ 用产生的亚硝态氮的量表示。关键作用就是21页的注意事项。 7、标准曲线操作顺序如何？两人如何配合？ 制备标准溶液、制备显色液、绘制标准曲线。要默契地配和，一人在做实验的同时，另一人要负责记录。 8、为何标准溶液用NaNO2溶液不用NaNO3？标准溶液浓度是多少？ 因为硝酸还原酶活性可由产生亚硝态氮的量表示，而不是用NO3-表示，所以用NaNO2表示。标准溶液浓度是1微克每毫升。 9、标准溶液和谁在什么条件下显色多久？比色波长是多少？ 在硝酸还原酶活性的测定实验中，三角瓶30度下置于黑暗处（恒温箱、水浴锅等）保温30min，在520nm波长下比色；硝态氮含量测定实验中，常温下放置20min，再加入8%NaoH溶液9.5ml，摇匀冷却至室温，在410nm波长下比色
10、如何获得标准曲线或回归方程？ 通过使用标准溶液得到的实验数据，确立好横竖坐标运用电脑软件制作。11、取样应注意什么？ 第一、仪器不能混用，严格按照组别及标签按要求使用；第二、材料（叶片）要用湿纱布擦拭干净，用蒸馏水冲洗，滤纸（或干纱布）吸干。 12、植物材料如何净化？ 采回来的材料（叶片）要用湿纱布擦拭干净，用蒸馏水冲洗，滤纸（或干纱布）吸干。 13、叶圆片如何获得，需要多少个叶圆片？ 14、如何确保叶片等重？为何要等重？每份重量是多少？ 15、两个三角瓶中为何一个加入H2O，另一个加KNO3？ 16、三角瓶中为何放入PH7.5缓冲液？ 17、为何要用真空泵抽气？使用中应注意什么？ 真空泵抽气影响NO2-的浸出量。防止液态水进入泵腔 18、抽气时有何现象发生？抽气到何时（何种程度）为止？ （1）因为反复抽气放气，溶液可渗入叶组织取代叶片空气，叶片便沉于溶液底部，酶促反应可以相对完全的进行。 （2）抽气到叶片沉淀 19、抽气后三角瓶置于何处？什么条件？多长时间？ 显色反应在黑暗处（恒温箱、水浴锅等）进行30分钟 20、三角瓶取出后显色反应在何容器中进行？为何先加磺胺，后加苯胺？ 21、上述溶液显色反应时间多长？波长？空白？ 30min，520nm，空白组一样 22、若三角瓶取出后显色反应不立刻进行，对实验结果有无影响？更高还是 更低？ 有影响，更高还是更低我也不知道，我个人觉得更低 23、请演算(板书)NR活性计算公式