鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用_黄敏 (1)
蛋清溶菌酶提取技术的研究共3篇
蛋清溶菌酶提取技术的研究共3篇蛋清溶菌酶提取技术的研究1蛋清溶菌酶提取技术的研究概述在医学、食品、制药等行业中，蛋清溶菌酶（ovomucin）是一种重要的蛋白质，在不同领域中有不同的应用价值。
目前，提取蛋清溶菌酶的方法有多种，根据对目标产物的要求，选择合适的提取工艺是提高提取效率、降低成本，同时保证产品品质的关键。
传统的蛋清溶菌酶提取方法包括酸碱处理、物理打碎等方法，虽然能得到目标产物，但这种方法存在不少问题，例如操作复杂，产物纯度不高等。
近年来，一些新技术如超声波提取、微波提取等逐渐被应用到蛋清溶菌酶提取中，为蛋清溶菌酶提取研究带来了新思路和新突破。
酸碱处理法酸碱处理法是传统的蛋清溶菌酶提取方法，主要是通过对蛋清的酸碱性调节使得蛋清溶菌酶在溶液中释放。
酸碱处理法操作简单，但是由于酸碱处理对蛋清溶菌酶的结构影响较大，使其产物的纯度较低。
物理打碎法物理打碎法是另一种常用的蛋清溶菌酶提取方法，主要是通过机械力的作用使蛋清溶菌酶从细胞中释放。
其优点是成本低，但存在操作复杂、易受外界因素影响，同时产物纯度低的缺陷。
超声波提取法超声波提取法是一种新兴的蛋清溶菌酶提取技术，该方法通过超声波的力量使细胞壁破裂，从而使蛋清溶菌酶易于释放。
相比传统的提取方法，该方法具有操作简单，提取效率高，提取速度快，产物纯度优等明显优点。
微波提取法微波提取法是另一种新兴的提取技术，该方法主要是通过微波辐射使蛋清细胞壁被加热；随着温度升高，蛋清溶菌酶会逐渐释放。
该方法具有提取速度快、提取效率高等优点，但是同时由于微波剩余辐射等原因，该方法的应用还存在一些安全隐患。
总结综上所述，提取蛋清溶菌酶是目前相关行业中的重要问题之一，选择适合的提取方法具有重要的实际应用价值。
传统的方法虽然操作简单，但存在许多问题，因此越来越多的新技术被应用到该领域。
超声波提取、微波提取是比较新兴的技术，在提取效率，产物纯度等方面都具有很大的优势。
我们需要深入研究新技术在蛋清溶菌酶提取中的应用，不断探索新的提取方案，为相关行业的发展贡献力量提取蛋清溶菌酶是一个重要的问题，不仅在生命科学研究中有广泛应用，而且在食品工业、医药等领域也有着重要的应用价值。
鸡蛋溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡蛋溶菌酶的提取方法。
2. 了解溶菌酶的性质和功能。
3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质，主要来源于鸟类的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液等。
溶菌酶具有水解细菌细胞壁的作用，能够有效抑制细菌生长，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的提取原料，通过酶解、离心、透析等步骤提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、NaCl、NaOH、丙酮、硫酸铵、蒸馏水等。
2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸、透析袋等。
四、实验步骤1. 酶解：将新鲜鸡蛋打破，取出蛋清，加入适量的NaCl溶液（浓度为0.5mol/L），搅拌均匀，置于恒温水浴锅中，温度控制在37℃，酶解1小时。
2. 离心分离：将酶解后的溶液以3000r/min的速度离心10分钟，收集上清液。
3. 盐析：在上清液中加入适量的硫酸铵固体，搅拌溶解，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
4. 透析：将沉淀用蒸馏水洗涤，去除杂质，然后将其放入透析袋中，置于蒸馏水中，透析24小时，去除小分子物质。
5. 浓缩：将透析后的溶液在50℃下减压浓缩，使蛋白质浓度提高。
6. 纯化：将浓缩后的溶液加入适量的丙酮，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
7. 干燥：将沉淀在50℃下真空干燥，得到溶菌酶粉末。
五、实验结果与分析1. 酶解过程中，蛋清逐渐变得透明，表明溶菌酶开始释放。
2. 离心分离后，上清液中溶菌酶浓度较高，下清液中含有其他杂质。
3. 盐析过程中，蛋白质沉淀较多，表明溶菌酶在硫酸铵溶液中具有较好的溶解性。
4. 透析过程中，透析袋中的溶液逐渐变得清澈，表明小分子物质已被去除。
5. 浓缩过程中，蛋白质浓度逐渐提高，有利于后续的纯化。
6. 纯化过程中，丙酮沉淀的蛋白质较多，表明溶菌酶在丙酮中具有较好的溶解性。
7. 干燥后，得到白色粉末，表明溶菌酶已被成功提取。
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究蛋清是一种富含蛋白质的食品，其中含有一种叫做溶菌酶的酶类物质。
溶菌酶具有很强的抗菌作用，可以在食品加工和医药领域中发挥重要的作用。
因此，对蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究具有重要的意义。
一般来说，蛋清中溶菌酶的提取方法可以分为化学法和物理法两种。
化学法主要是利用酸、碱等化学试剂来提取溶菌酶，但这种方法存在一定的毒性和污染性，不太适合在食品加工中使用。
物理法则是利用高压、超声波等物理手段来破坏蛋白质的结构，使溶菌酶释放出来。
这种方法相对来说比较安全，但提取效率较低。
为了提高蛋清中溶菌酶的提取效率，研究人员提出了一种新的方法，即利用离子交换色谱技术来提取溶菌酶。
这种方法利用离子交换树脂将蛋清中的溶菌酶吸附在树脂上，然后通过洗脱的方式将溶菌酶从树脂上释放出来。
这种方法具有提取效率高、操作简单、无毒无害等优点，因此在实际应用中得到了广泛的应用。
除了提取方法的研究外，对蛋清中溶菌酶的定量测定方法也是非常重要的。
目前常用的定量方法有比色法、荧光法、酶联免疫吸附法等。
其中，比色法是一种简单易行的方法，可以通过测定溶菌酶与底物反应后产生的色素来确定溶菌酶的含量。
荧光法则是利用荧光染料与溶菌酶结合后产生的荧光信号来测定溶菌酶的含量。
酶联免疫吸附法则是利用特异性抗体与溶菌酶结合后产生的信号来测定溶菌酶的含量。
这些方法各有优缺点，可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
总之，蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究对于食品加工和医药领域具有重要的意义。
未来，我们可以继续探索新的提取方法和测定方法，以提高溶菌酶的提取效率和测定精度，为人类健康和生活带来更多的福利。
鸡蛋中溶菌酶的提取
鸡蛋中溶菌酶的提取，纯化及纯度鉴定李莹姝蒋华云*（南京师范大学生命科学学院，南京 210046）摘要：从蛋清中用724弱酸性阳离子交换树脂提取溶菌酶，然后用硫酸铵溶液洗脱，盐析得到溶菌酶。
用葡聚糖凝胶层析（SephadexG-75）纯化溶菌酶，收集峰值处样品。
用SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳鉴定个步骤留样及所得溶菌酶样品的纯度。
溶菌酶得率为0.0474mg/100ml（0.03g/kg）；葡聚糖凝胶层析过程纯化样品得到了洗脱峰曲线，但未能收集到峰值处样品；电泳结果显示在纯化过程中溶菌酶纯度不断升高。
本实验溶菌酶得率较低，提取工艺有待改进，需进一步减少样品损失；层析过程需进一步熟练掌握，以更好达到纯化效果。
关键词：溶菌酶；离子交换树脂，凝胶层析；SDS-PAGEExtraction, purification and purity of Egg lysozymeYings Li Huay Jiang*(College of Life Science, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, China)Abstract:From egg white, with 724 weak acid cation exchange resin extraction of lysozyme, and then eluted with ammonium sulfate, salting to be lysozyme. With dextran gel chromatography (SephadexG-75) purified lysozyme, the peak of the sample collection. By SDS-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) electrophoresis and identified steps to stay kind of purity of the samples from lysozyme. Lysozyme yield 0.0474mg/100ml (0.03g/kg); dextran gel chromatography purified samples obtained during elution peak curve, but failed to collect samples at the peak; electrophoresis showed that the purification process of lysozyme enzyme purity rising. In this study, lysozyme was the low rate of extraction process could be improved, the need to further reduce sample losses; chromatography process needs further proficiency in order to better achieve purification.Key words:lysozyme, Ion exchange resin, Gel chromatography, SDS-PAGE溶菌酶( Lysozyme , 1,4－β－N－溶菌酶) 是一种专门作用于革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的β-1,4- 糖苷键的水解酶, 因而又称为胞壁质酶或者N- 胞壁质聚糖水解酶。
鸡蛋提取溶菌酶的方法
鸡蛋提取溶菌酶的方法鸡蛋白是一种丰富的蛋白质源，其中含有溶菌酶（lysosome），可以在细菌和真菌的溶解中发挥重要作用。
溶菌酶是一种具有溶菌、抗菌活性的酶类。
鸡蛋提取溶菌酶的方法主要包括以下几个步骤：1. 鸡蛋的分离：首先将新鲜的鸡蛋进行分离，只保留蛋清（蛋白质）部分，去除蛋黄。
2. 蛋清处理：将蛋清中的蛋白质与溶菌酶分离，可以采用酸碱沉淀法。
将蛋清加入适量的酸（如醋酸）中，使酸度下降到pH 4以下，随后使用碱（如氢氧化钠）中和酸性溶液，使溶液pH回升到中性左右。
这一过程中，溶菌酶会发生沉淀现象，可以方便地分离出来。
3. 溶菌酶的除杂：蛋清中可能还存在其他酶类或蛋白质，为了获得纯净的溶菌酶，可以进行一轮或多轮的洗涤与纯化。
例如，可以使用盐析法，通过逐渐增加溶液中的盐浓度来沉淀溶菌酶，然后用溶液洗涤沉淀物，最后得到纯净的溶菌酶。
4. 溶菌酶的浓缩与干燥：将纯净的溶菌酶溶液通过浓缩技术（如超滤或冷冻干燥）使溶液浓度增大，得到较为浓缩的溶菌酶溶液。
5. 溶菌酶的活性测定：对提取得到的溶菌酶进行活性测定，可以通过测定其对特定底物的溶解能力来评估溶菌酶的活性。
常见的测量方法包括显色法和滴定法等。
鸡蛋提取溶菌酶的方法相对简单，但有一些需要注意的注意事项：1. 鸡蛋的新鲜度对溶菌酶的提取效果有一定影响，新鲜的鸡蛋中溶菌酶的含量较高。
因此，在进行实验时应选择新鲜的鸡蛋。
2. 溶菌酶的活性与条件相关，如温度、酸碱度等。
在提取过程中需要控制好这些条件，以保证溶菌酶的稳定性和活性。
3. 提取得到的溶菌酶需储存于低温（通常-20C）下，否则易失活。
4. 鸡蛋中的蛋白质含量较高，在提取过程中需要留意对蛋白质的处理，避免产生其他影响或污染。
需要特别注意的是，提取溶菌酶并非只有上述方法，还可以根据实际需要结合其他技术和方法进行提取，例如离心、层析、电泳等。
总结起来，鸡蛋提取溶菌酶的方法包括鸡蛋的分离、蛋清处理、溶菌酶的除杂、溶菌酶的浓缩与干燥以及溶菌酶的活性测定等步骤。
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化
四、实验材料和方法
四、实验材料和方法
1、实验材料：新鲜鸡蛋、磷酸缓冲液（PBS）、乙酸乙酯、正丁醇、蛋白酶 抑制剂、透析袋。
四、实验材料和方法
2、实验设备：高速离心机、真空泵、氮气仪、色谱柱。 3、实验方法： （1）鸡蛋卵清的收集：将新鲜鸡蛋打破，分离出卵黄和卵清， 收集卵清备用。 （2）粗提：将收集的卵清加入磷酸缓冲液（PBS），搅拌均匀 后进行高速离心，取上清液即为粗提液。 （3）沉淀：向粗提液中加入等体积的 乙酸乙酯，充分混合后静置分层，取下层沉淀。 （4）
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与 纯化
目录
01 一、背景介绍
03 三、实验原理
02 二、研究目的 04 四、实验分析
07 参考内容
06 六、结论与展望
一、背景介绍
一、背景介绍
溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的天然抗菌酶，具有抗菌、抗炎、抗病毒 等多种生物活性。近年来，随着人们对食品安全和药物研发的度不断提高，从天 然生物资源中提取和纯化溶菌酶成为了一个热门领域。鸡蛋卵清作为一种丰富的 天然资源，具有较高的溶菌酶含量，因此成为了提取和纯化溶菌酶的重要来源。 本次演示旨在探讨鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化方法，以期为相关领域的研究 提供参考。
四、实验材料和方法
复溶：将沉淀物真空干燥后，加入适量正丁醇溶解，再加入透析袋中透析去 除小分子杂质。 （5）色谱分离：将透析后的溶液通过色谱柱进行分离，收集流 出液，检测其中溶菌酶的纯度和含量。 （6）鉴定：采用光谱分析、分子量测定 等方法对纯化的溶菌酶进行鉴定。
五、实验结果及分析
五、实验结果及分析
二、研究方法与技术
1、材料与设备
1、材料与设备
本研究采用新鲜鸡蛋作为原料，使用离心机、分光光度计、电泳仪等设备进 行实验。
从蛋清蛋壳中提取溶菌酶的关键技术
从蛋清蛋壳中提取溶菌酶的关键技术2010-03-01 点击数：327华南理工大学食品学院郑建仙鸡蛋清中溶菌酶的含量约为3.5％，是提取溶菌酶的方便来源。
但不同产地的鸡蛋，其蛋清中溶菌酶的含量有所不同。
工业上多采用直接结晶法、亲和色谱法、离子交换法、超滤和亲和色谱联合使用法等方法生产溶菌酶。
●直接结晶法在鸡蛋清中加入5%的NaCl，调节pH到10左右，加入溶菌酶晶种，在0℃—5℃静置结晶，分离蛋清，得到结晶物，经纯化后再进行重结晶。
●离子交换法溶菌酶是一种阳离子型蛋白质。
它由阴离子交换树脂吸附，使其从蛋清中分离出来，然后用0.3mol/L以上食盐水洗脱树脂，洗脱液经透析、超滤、冷冻干燥便得粉状产品。
●亲和色谱法利用酶与底物专一性结合形成复合物的特点，以羧甲基甲壳素（CM-CH）为底物专一性结合溶菌酶，然后用水和稀醋酸洗脱，洗脱液经透析、超滤、喷雾干燥或真空干燥便得粉状产品。
利用亲和沉淀从蛋清中分离溶菌酶也是溶菌酶制备研究的一个热点。
Stermberg等1974年报道了应用聚丙烯酸（PAA）形成PAA-溶菌酶聚电解质复合物。
Chern等于1996年应用pH敏感的亚微粒丙烯酸胶浆以及Eudragit L100作为溶菌酶的沉淀剂。
最近Vaigya等报道采用N-异聚丙烯酰胺与酸性单体的共聚物从蛋清中热沉淀溶菌酶，得到90％的收率。
他们认为使用共聚物从蛋清中热沉淀溶菌酶比使用pH敏感聚合物具有更多的优点，因为后者通常只有较低的得率。
●其他方法用水或稀酸将鸡蛋清稀释2.5—10倍，调整液体pH至2.5—7.0，在此弱酸性水溶液中加入少量钙并加热，使溶菌酶以外的蛋白质大部分凝固，从分离出的上清液和凝固物的洗净液中提取溶菌酶。
Owen等1997年报道，使用连续逆流、膨胀床吸附系统分离溶菌酶，该技术克服了一般填充床柱层析的一些存在问题，诸如填充材料的压实、沟槽的形成和由于上样溶液微粒引起的柱阻塞等。
Ghosh等报道，采用小型的中空纤维超率系统从蛋清干粉中分离溶菌酶。
蛋清中溶菌酶的提取及蛋清蛋白的综合利用[发明专利]
![蛋清中溶菌酶的提取及蛋清蛋白的综合利用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/f142d695f424ccbff121dd36a32d7375a417c6df.png)
(10)申请公布号 CN 101768577 A(43)申请公布日 2010.07.07C N 101768577 A*CN101768577A*(21)申请号 201010134655.X(22)申请日 2010.03.01C12N 9/36(2006.01)C12P 21/00(2006.01)A23J 3/04(2006.01)(71)申请人德州天康食品有限公司地址251500山东省德州市临盘镇工业园18号(72)发明人孙维军 孟庆文 王超 孙京新李兆顺(54)发明名称蛋清中溶菌酶的提取及蛋清蛋白的综合利用(57)摘要本发明涉及一种从禽蛋(鸡蛋、鸭蛋或鹅蛋)中提取溶菌酶的新方法，通过酸盐(盐酸或乳酸、氯化钾)控温组合法酶提取分离、冷却、离心、调pH 值、中空纤维超滤膜法酶浓缩提纯、喷雾干燥法等一系列工艺联合制取蛋清溶菌酶。
该工艺简单可行，操作方便，适合于工业化生产，既能保证产品质量，又能降低生产成本。
提取后剩余的蛋清蛋白既可以真空干燥制成蛋白片又可利用细菌中性蛋白酶水解法制备成蛋清活性肽粗品。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 3 页权 利 要 求 书CN 101768577 A1/1页1.蛋清中溶菌酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蛋清液的制备：蛋清以打蛋机慢速搅打(10～20r/min)均匀且不发泡(加适量0.1％～0.2％色拉油)为度。
(2)酶提取(酸盐控温组合法)：将一定量的食品级盐酸(2％)或乳酸(6％)、氯化钾(4％)溶于与蛋清相等体积的纯净水中，然后在75℃温度下与蛋清混合均匀。
整个混合过程控制在10min内完成。
(3)冷却及离心：上述混合液混匀后保温10min，再迅速冷却到25℃以下。
4000r/min 离心6～8min。
上清液用食品级NaOH调pH到中性。
(4)超滤(中空纤维超滤膜法)：采用截留量为11000的中空纤维超滤膜，控制氮气压力为0.20MPa，进行超滤脱盐及浓缩。
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图 4 保温时间对溶菌酶精制率的影响
试验研究 中国食品添加剂 ChinaFoodAdditives
2.6 溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制 图 5清楚地显示蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金
HUANG Min1 , KONGMing-hang2 , WANG Li-ming1
(1.CollegeofLifeScience, YangtzeUniversity, Jingzhou434025; 2.StateFarmofDayuan, Hubei, Dayuan433300)
Abstract:TheextractionandantibacterialeffectofLysozymefrom Hen-eggWhite(HEW) werestudied.Theextractionprocessoflysozymefrom HEW wereasbelow:HEW weregotandfiltrated, dissolvedwithdistilledwater, NaClwasadded, thepHofthesolutionwasadjustedto5.0, thenlysozymeseedwasadded, thecrystallinewasaccomplishedat4℃, andcrudeLysozymewasgot.Thecrudelysozymewasrefinedbydissolutionandrecrystallization. TheantibacterialeffectoflysozymeonEscherichiacoliandStaphylococcusaureuswasestimatedbyfilterpapermethod. TheresultsshowedthatthebetterprocessingparameterforHEW extractionwerebelow:thepHofHEW solutionwas 10.0, HEW wasdilutedby2 timesvolumedistilledwaterand5% (w/vNaClHEW) wasadded.Theyieldofrefiningwashighestwhentempetaturekept5 minat70℃. HEW hadevidentantibacterialeffectonEscherichiacoliand Staphylococcusaureus.Processingat80℃ for30 minhadnearlynoeffectonantibacterialeffectofHEW. Keywords:lysozyme;hen-eggwhite(HEW);extraction;antibacterialeffect
试验研究 中国食品添加剂 ChinaFoodAdditives
操作 3次 , 结晶经冷冻干燥后即得精制溶菌酶 。 1.3.2 溶菌酶粗提取单因子试验
主要考察氯化钠的用量 、 蛋清稀释倍数 、 酶 液 pH对溶菌酶粗提取率的影响 。 试验中蛋清液 的用量固定为 100mL, 比较氯化钠添加量为 4%、 5%、 6%、 7%;蛋 清 稀 释倍 数 为 1、 2、 3、 4; 酶液 pH为 8.5、 9.5、 10、 10.5。 1.3.3 溶菌酶粗提取条件优化
3
10.0
5
3
4
10.5
6
1.3.4 溶菌酶提取率测定 用万分之一电子天平称取冷冻干燥后溶菌酶
晶体质量 , 减去作为晶种加入的溶菌酶质量 , 除 以蛋清液体积 。 1.3.5 溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑 制作用 [ 7 -8]
采用滤纸片法 。用打孔器打出直径 5mm滤纸 圆片 , 高压灭菌 。 分别吸取 0.1mL大肠杆菌与金 黄色葡萄球菌菌悬液加在已倒好的牛肉膏蛋白胨 平板培养基表面 , 涂布均匀 。 用无菌镊子夹取已 在溶菌酶溶液中浸渍 30min滤纸片 , 放到上述含 菌平皿上 , 每皿三片 , 于 37℃恒温培养 24h后取 出, 量取抑菌圈直径 , 取其平均值作为实验结 果。
收稿日期 : 2009 -05 -14 作者简介 :黄敏 (1975 -), 女 , 讲师 , 硕士 , 主要从事食品生物技术的教学与科研工作 。
1 54
学等领域有着广泛的应用 [ 1 -3] 。 溶菌酶广泛存在于鸟 、 家禽的蛋清 、 哺乳动
物的泪液 、 唾液、 血浆、 尿 、 乳汁和组织细胞 中 , 以蛋清中含量最为丰富 。目前 , 多数商品溶 菌酶是从蛋清中提取的[ 4 -6] 。 本文优化从鸡蛋蛋 清提取与精制溶菌酶的工艺条件 , 并观察溶菌酶 对大肠杆菌 、 金黄色葡萄球菌的抑制作用 。
1 材料与方法
1.1 试验材料 鸡蛋 :长江大学西校区市售的新鲜鸡蛋 ; 大大肠杆菌 (Escherichiacoli)、 金黄色葡 萄
球菌 (Staphylococcusaureus):长江大学生命科学 学院微生物实验室提供 ;
溶菌酶 标准 品 :为鸡 蛋清 溶 菌酶 , 活 力 ≥ 20000U/mg, 上海源聚生物科技产品 ;
表 2 蛋清溶菌酶提取正交试验结果
试验 蒸馏水添加 号 量 (A)
酶液 pH 氯化钠加入 溶菌酶粗提取率
(B)
量 (C) (mg/100mL)
1
1
1
1
352
2122Fra bibliotek488
3
1
3
3
460
4
2
1
2
356
5
2
2
3
447
6
2
3
1
396
7
3
1
3
406
8
3
2
1
389
9
3
3
2
354
K1
1300
K
2
1199
K3
1149
1 55
中国食品添加剂 试验研究 ChinaFoodAdditives
图 1 水加入量对溶菌酶粗提 取率的影响
释 , 溶菌酶提取率比其他稀释倍数的低很多 , 正 交试验可不考虑这一稀释倍数 。 2.2 酶液 pH值对溶菌酶粗提率的影响
固定蒸馏水添加量为蛋清体积的 2倍 , 氯化 钠加入量为蛋清溶液的 5%, 在 4℃下静置 1w结 晶 , 分 别 调 节 酶 液 pH为 8.5、 9、 9.5、 10、 10.5, 测得溶菌酶粗提取率的结果见图 2。由图 2 可见 , 酶液 pH可选 9.5、 10.0、 10.5 作为正 交 试验的条件 。
按 2.4优化的条件提取溶菌酶 , 取粗制冻干 溶菌酶 1g加入到 20 倍质量的 5%氯化钠水溶液 中 , 用盐酸溶液 调 pH4.5, 离心除 去不溶 沉淀 , 升温到 70℃, 水浴 中分别 保温 5、 10、 15、 20、 25、 30min, 过滤 , 调 pH10.0, 冷却 至 4℃下结 晶 , 蛋清溶菌 酶精制率如图 4 所示 。由 图可见 , 70℃下保温 5min最有利于蛋清溶菌酶的精制 。
关键词 :溶菌酶 ;鸡蛋清 ;提取 ;抑菌作用 中图分类号 :TS201.2 +5 文献标识码 :A 文章编号 : 1006 -2513(2010)03 -0154 -04
Theextractionandantibacterialeffectof lysozymefrom hen-eggwhite
R
151
1114 1324 1210 210
1137 1198 1313 176
对表 2数据进行方差分析 , 结果表明 3 个因 素对蛋清溶菌酶粗提取率的影响均达到显著水平
(Pr>0.5)。 从表 2看 , A1 B2 C3下溶菌酶的粗提 取率最高 。 但考虑氯化钠加入量超过 5%后 , 溶 菌酶呈胶状 , 易裹带杂质 , 不利于精制 , 故确定 A1 B2 C2 , 即蛋清液用 2倍体积蒸馏水稀释 、 酶液 pH调节至 10.0、 氯化钠加入量为 5%作为提取蛋 清溶菌酶的条件 。 2.5 热处理时间对溶菌酶精制率的影响
由图 3可见 , 氯化钠加入量越大 , 溶菌酶的 粗提取率越高 , 但氯化钠加入量超过 5%后 , 溶 菌酶呈胶状 , 易裹带杂质 , 不利于精制 。 故氯化
1 56
钠加入量以 5%左右为宜 。 2.4 蛋清溶菌酶粗提取条件的优化
按表 1的因素水平 , 进行正蛋清溶菌酶提取 的正交试验 , 结果间表 2。
将制得的粗品结晶溶于适量的蒸馏水中 , 调 节酶液的 pH至 5.0, 静置 2h, 过滤除去不溶物 , 收集起滤液并量出其体积, 慢慢加入氯化钠细 粉 , 用氢氧化钠溶液调节酶液 pH至等电点 , 向 酶液中加入定量标准溶菌酶晶种 , 4℃静置结晶 。 待结晶完全后 , 用布氏漏斗滤出结晶 。 重复上述
中国食品添加剂 试验研究 ChinaFoodAdditives
鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
黄敏 1 , 孔明航 2 , 王丽明 1
(1.长江大学生命科学学院 , 荆州 434025;2.湖北省国营大垸农场 , 大垸 433300)
摘 要 :研究从鸡蛋清中提 取与精制溶菌酶的方法 , 观察溶 菌酶对大肠 杆菌与金黄 色葡萄球 菌的抑 制作 用 。 从鸡蛋清提取溶菌酶的方法 :取出鸡 蛋清 , 过 滤 , 用蒸 馏水溶解 , 加氯化钠 , 调节溶液 pH至 5.0, 加入 溶菌酶晶种 , 4℃下静置结晶 , 过滤 , 可以得到溶菌酶粗品 。 将粗品溶菌酶溶解 , 按上述步骤溶解后结 晶 , 重 复 3次 , 可以精制溶菌酶 。 用滤纸片法观察溶菌酶对 大肠杆菌与 金黄色葡 萄球菌的 抑菌作 用 。 结果表 明 , 鸡 蛋清溶菌酶提取的较优条件是 :酶液 pH 10.0、 氯化钠加入量 5%、 蛋清液用 2倍体积蒸馏水稀 释 。 70℃下保 温 5min, 鸡蛋清溶菌酶的精制率最高 。 鸡蛋清溶菌酶对大 肠杆菌与金黄色葡 萄球菌有 明显抑制作 用 , 80℃加 热 30min对鸡蛋清溶菌酶的抑菌作用影响很小 。