高效抗肿瘤抗生素卡里奇霉素的分离纯化与鉴定
酶联免疫法检测卡那霉素的应用进展
酶联免疫法检测卡那霉素的应用进展摘要：本文查阅了相关文献，对酶联免疫方法（ELISA）应用于卡那霉素含量检测的进展进行综述。
酶联免疫法主要用于检测食品、饲料和医药行业样本中的卡那霉素，食品的样本包括牛奶，鸡蛋，鸡肉，鸡肝、猪肉、猪肝、奶粉等，医药行业检测样本有疫苗，细胞培养液，质粒等。
酶联免疫法目前在中的检出限分别可以达到，准确性最高加标回收率，利于大家建立能够用于食品和医药中卡那霉素等抗生素残留量检测的有效方法,以加强对产品中抗生素残留量控制，进一步提高食品医药的安全性。
关键词：卡那霉素；酶联免疫；定量检测卡那霉素，英文名Kanamycin，一种氨基糖苷类抗生素。
对多数肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、肠杆菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、普罗菲登菌属、耶尔森菌属[1]等均有良好作用；流感杆菌、布鲁菌属、脑膜炎球菌、淋球菌等对卡那霉素也大多敏感。
不良反应：1.在疗程中可能发生听力减退、耳鸣或耳部饱满感，此为影响耳蜗神经所致。
少数患者，尤其原来有肾功能减退者可在停药后发生，须引起注意。
影响前庭神经功能时可出现眩晕、步履不稳，但并不多见; 2.可出现血尿、排尿次数减少或尿量减少、食欲减退、恶心、呕吐、极度口渴等肾毒性反应。
在国标GB31650-2019中规定所有食品动物（产蛋期禁用，不包括鱼）的肌肉或皮脂中的卡那霉素含量不能超过100µg/kg,奶的卡那霉素不能超过150µg/kg，肝脏的卡那霉素不能超过600µg/kg，肾的卡那霉素不能超过2500µg/kg。
目前检测卡那霉素的方法有微生物法，HPLC，液质法，免疫法等[1]，但是微生物法培养时间很长，色谱质谱法程序复杂，过柱一次只能测一个样品，不适合大量样品筛查,免疫胶体金法只能做到半定量[2]。
选择用酶联免疫法来检测样本里的卡那霉素，能进行样品的大量筛查和定量检测。
ELISA测定卡那霉素的方法建立竞争法是目前比较流行的一种ELISA方法，在中国的发展应用是近20多年开始流行的。
利迪链霉菌A02拮抗产物的分离纯化和鉴定的开题报告
利迪链霉菌A02拮抗产物的分离纯化和鉴定的开题报告
一、研究背景及意义
利迪链霉菌A02是一种广泛存在于自然环境中的细菌，在土壤、水体等处均有分布。
该细菌具有多种代谢活性，例如产生抗生素、生物素、核酸等物质，具有较大的研究
价值。
其中，利迪链霉菌A02产生的抗生素具有一定的抗菌性，可用于保健、农业等
领域。
近年来，利用微生物降解有害物质、抑制病原微生物等的研究引起了越来越多的关注。
然而，利迪链霉菌A02的抗生素生产成分及其生物合成途径仍未得到完全阐明，且其
具体的抗菌机制也不清楚，因此有必要对利迪链霉菌A02产生的抗生素进行研究。
二、研究目的
本研究旨在从利迪链霉菌A02中分离和纯化其拮抗产物，并通过多种方法对该产物进
行鉴定，以期了解其化学结构和生物活性，并为该产物的产生机理研究提供参考。
三、研究内容
1.利迪链霉菌A02的分离和鉴定
2.利用离子交换层析、凝胶层析等方法对利迪链霉菌A02拮抗产物进行纯化
3.对纯化后的产物进行色谱分析（超高效液相色谱、高效液相色谱等）及谱学鉴定
（紫外-可见吸收光谱、质谱、核磁共振等）。
4.初步进行该产物的生物活性评价，如抗菌试验、抗氧化试验等。
四、预期效果
通过本研究，预期可以从利迪链霉菌A02中获得含量较高的拮抗产物，并对其结构进
行鉴定。
使用生物活性评价方法评估拮抗产物的生物活性。
这将为该产物的精细化合
成以及其在抗菌、抗氧化等领域的应用提供理论基础和实验依据。
9-(E)-红霉素A肟杂质的分离与鉴定
9-(E)-红霉素A肟杂质的分离与鉴定孟祥燕;李娜;彭凤;刘瑶;黄鑫;沈永淼【摘要】目的分离、纯化HPLC图谱中紧跟着9-(E)-红霉素A肟的一个未知的杂质,并鉴定它的化学结构.方法通过柱层析色谱法和重结晶法分离该杂质,然后通过1H-NMR、MS、X-射线单晶衍射确定了该杂质的结构.结果实验最终确定了该杂质最佳的分离条件:流动相为CHC13∶C2H5OH∶NH4OH =10.0∶1.2∶0.1,重结晶的溶剂为氯仿和丙酮(V∶V=7∶3).并用双倍稀释法对红霉素A肟和杂质红霉素E 肟进行了抗菌活性研究.结论未知杂质为红霉素E的E式肟化产物,红霉素E肟的抗菌活性远低于红霉素A肟.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2016(041)004【总页数】5页(P280-284)【关键词】红霉素A肟杂质;红霉素E肟;柱层析分离;结构鉴定;抗菌活性【作者】孟祥燕;李娜;彭凤;刘瑶;黄鑫;沈永淼【作者单位】绍兴文理学院化学化工学院,绍兴312000;浙江震元制药有限公司,绍兴312000;绍兴文理学院化学化工学院,绍兴312000;绍兴文理学院化学化工学院,绍兴312000;绍兴文理学院化学化工学院,绍兴312000;绍兴文理学院化学化工学院,绍兴312000;绍兴文理学院化学化工学院,绍兴312000【正文语种】中文【中图分类】R917红霉素(EA)是目前最广泛使用的高效抗大多数革兰阳性菌和一些革兰阴性菌的大环内脂类抗生素[1]。
由于红霉素在酸性条件下不稳定，红霉素经口服后很容易在胃酸作用下经分子内反应生成无抗菌活性的螺缩酮衍生物，造成生物利用率低[2]。
为了提高其稳定性，人们合成了一系列半合成的红霉素衍生物。
而9-(E)-红霉素A 肟(9-(E)-oxime erythromycin A)则是新一代大环内酯类红霉素衍生物罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素和地红霉素等抗生素的共用中间体(图1)[3]。
因此，对此关键中间体的合成从20世纪60年代开始就一直是国际医药界研究的一个热点，红霉素肟的有关物质的研究与分析也受到很多研究人员的关注[4-7]。
QuEChERS法结合液质联用快速检测大米中的桔霉素
第42卷第5期肇庆学院学报V ol.42,No.5 2021年9月JOURNAL OF ZHAOQING UNIVERSITY Sep.2021QuEChERS法结合液质联用快速检测大米中的桔霉素朱培杰，张洁，吴燕秋，潘永洁，王婉婷，周家欢，汪洪武（肇庆学院食品与制药工程学院，广东肇庆526061）摘要：研究采用改良的QuEChERS样品前处理法结合超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）快速检测大米中的桔霉素.样品经5%甲酸/乙腈溶液提取，超声25min，加入150mg无水硫酸镁、50mg C18和100mg PSA净化吸附，离心取上清液，进液质联用仪检测.实验采用ACQUITY UPLC BEH C18（50mm×2.1mm×1.7µm）色谱柱，流动相为80%乙腈-5mmol乙酸铵缓冲液(pH8.2)，桔霉素的峰型与响应值良好.结果表明：桔霉素在2~200μg/kg浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系，线性方程为y=213.23x+1076.9(R2=0.9994)，检出限为0.20μg/kg，定量限为0.67μg/kg，加标回收率范围为99.2%~101.4%，相对标准偏差为0.45%~1.86%.该方法简便、快速、准确，可适用于大米等谷物中桔霉素残留的快速测定.关键词：桔霉素；QuEChERS法；超高效液相色谱-串联质谱；大米中图分类号：O652.6文献标志码：A文章编号：1009-8445（2021）05-0045-07桔霉素又称橘霉素、桔青霉素，是青霉及曲霉菌的次级代谢产物，有损害肝脏和肾脏代谢，致癌、致畸、致突变的作用，并可能对中枢神经系统产生抑制[1-2].欧洲及中国、美国、日本等国家都对红曲霉菌发酵产品中桔霉素的限量标准进行了严格规定.在储存不当而霉变的大米、小麦、玉米等谷物中，也发现了桔霉素的存在，严重危害消费者的生命安全[3].因此，建立快速、准确、灵敏高效的分析方法对于农产品中桔霉素的监测尤为重要.目前，桔霉素的检测方法主要有薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱-荧光检测（HPLC-FLD）、酶免疫分析法（EIA）以及液质联用法（HPLC-MS/MS）等[4-6].其中液质联用法由于其分离效果好、灵敏度高、操作简便和适用范围广等特点，已被广泛应用于农产品中各种真菌毒素的检测[7].由于桔青霉素在农产品中的含量较低，且基质中存在很多干扰物，因此需要进行一定的样品前处理步骤.目前，样品前处理技术主要有液液萃取（LLE）、分散液液微萃取（DLLME）、分子印迹技术（MIT）、固相萃取（SPE）和QuEChERS法等[8].QuEChERS法是近年在分析检测领域迅速发展起来的一种快速的样品前处理方法，与其他方法相比，具有操作简便、试剂用量少、回收率与精密度高等优点[9-10].本实验采用QuEChERS法作为大米样品的前处理方法，通过对实验条件的系统优化，建立了大米中桔霉素的快速定量检测方法，并将其应用于实际样品的检测.1实验部分1.1实验仪器与试剂蒸馏水（广州屈臣氏食品饮料公司）；乙腈（ACN）（阿拉丁试剂有限公司，色谱纯）；乙醇、无水硫酸镁（阿拉丁试剂有限公司，分析纯）；甲酸、乙酸、乙酸铵（山东西亚化学工业有限公司，色谱纯）；甲酸铵、甲醇（上海收稿日期：2020-11-06作者简介：朱培杰（1998-），男，河南濮阳人，肇庆学院食品与制药工程学院教师，硕士.通信作者：汪洪武（1972-），男，江西九江人，肇庆学院食品与制药工程学院教授，博士.肇庆学院学报第42卷麦克林生化科技有限公司，色谱纯）；乙酸乙酯（上海穗试化工科技有限公司，分析纯）；十八烷基键合硅胶吸附剂（C18）、石墨化炭黑吸附剂（GCB ）、乙二胺基-N -丙基吸附剂（PSA ）（上海安谱科技实验有限公司）.600Y 多功能粉碎机（永康市铂欧五金制品有限公司）；ATY124电子天平（日本岛津公司）；DGG-9030BD 电热恒温干燥箱（上海封信实验仪器有限公司）；KX1613T 超声机（北京科玺世纪科技有限公司）；TL80-1离心机（江苏天力医疗器械有限公司）；Waters Xevo TQD 液相质谱联用仪（美国waters 公司）.1.2标准溶液的配制取5.0mg 桔霉素标准品，置于100mL 容量瓶中，用乙腈定容至100mL ，置于超声仪中超声5min ，即得50mg/L 的桔霉素标准溶液，避光储存于4℃冰箱.标准溶液的使用：添加不同体积的桔霉素标准溶液至1.00g 大米粉末，制成添加浓度分别为2、5、10、20、100以及200μg/kg 的大米样品，经前处理步骤后，进液质联用仪检测.1.3样品前处理步骤将购买的大米样品用粉碎机打磨成粉，过0.047mm 筛网，备用.准确称取1.00g 大米粉末样品于10mL 离心管，加入4mL 蒸馏水，手动混匀30s ，置于超声仪中超声15min.随后向离心管中加入4mL 的5%甲酸/乙腈混合溶液，继续超声25min 后加入2.00g 的无水硫酸镁和0.50g 的氯化钠，剧烈振荡30s 后，于3000rpm 速度下离心15min.吸取3mL 上层清液于新的10mL 干净离心管中，加入150mg 无水硫酸镁、50mg C18和100mg PSA ，于4000rpm 速度下离心15min.离心完成后，取上清液1mL ，过0.22μm 滤膜，进UPLC-MS/MS 检测.1.4液相色谱条件色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18（50mm×2.1mm×1.7µm ）；流动相：乙腈-5mmol 乙酸铵缓冲液(80/20,v/v)；柱温：40℃；进样体积：10.0µL ；流速：0.3mL/min.1.5质谱条件离子源：正离子模式（ESI+）；扫描方式：多反应监测（MRM ）；毛细管电压：2.50kV ；锥孔电压:32V ；脱溶剂气温度：450℃；脱溶剂气流量：650L/h ；吹扫气流速：50L/h ；离子源温度：150℃.2结果与讨论2.1色谱条件优化2.1.1缓冲液种类的考察在水相中加入合适缓冲盐可使流动相的pH 值保持稳定，改善峰型，避免拖尾等现象.实验以乙腈-缓冲液(80/20,v/v)为流动相，通过改变缓冲液的种类，观察其对桔霉素出峰情况和响应信号的影响.选取水、甲酸（Formic acid ）、甲酸铵（Ammonium formate ）、乙酸（Acetic acid ）、乙酸铵（Ammonium acetate ）等5种溶液作为缓冲液，缓冲盐的浓度均为5mmol/L.以保留时间为横坐标，质谱响应强度（In-tensity,I ）为纵坐标作图，桔霉素的出峰情况如图1所示.当缓冲液为水或乙酸溶液时，桔霉素的色谱峰有严重的拖尾现象.而选取甲酸和甲酸铵作为缓冲盐时，响应信号相对较低.当缓冲盐为乙酸铵时，桔霉素响应值较高，峰型对称，没有拖尾分叉等现象，故选取5mmol 乙酸铵溶液作为缓冲液.1234I /105t /min Acetic acid Ammonium acetate Ammonium formate Formic acid water 0714212835图1缓冲液种类对CIT 响应值的影响46第5期朱培杰等：QuEChERS 法结合液质联用快速检测大米中的桔霉素2.1.2流动相组成的考察实验分别考察了不同体积比的乙腈-乙酸铵缓冲液（60:40、70:30、80:20、90:10)对桔霉素的出峰情况和响应信号的影响.结果如图2所示，当流动相中乙腈含量为80%时，桔霉素的响应值最高，峰型对称，无拖尾现象，故选取乙腈-5mmol/L 乙酸铵缓冲液(80/20,v/v)为最佳流动相.90% ACN80% ACN70% ACN60% ACNI /104t /min50% ACN12361218240图2流动相中乙腈含量对桔霉素色谱峰的影响2.1.3缓冲液pH 值的考察合适的缓冲液pH 值可以促进化合物的电离，有利于提高分析方法的灵敏度.实验采用乙酸和氨水作为添加剂，调节乙酸铵缓冲液的pH ，考察了不同pH 值(6.2、7.2、8.2、9.2)的条件下，桔霉素的出峰情况和响应信号.结果如图3所示，随着pH 的升高，桔霉素的响应信号也越来越强，当pH 为8.2时，桔霉素的响应值达到最大，随着pH 的继续升高，桔霉素的响应信号开始减弱.故选择pH8.2作为乙酸铵缓冲液的最佳pH.I /105t /min9.28.27.26.212312345670图3pH 值对桔霉素色谱峰的影响2.2样品前处理优化2.2.1提取剂种类的优化桔霉素的分子结构中含有一个羧酸基团，在水溶液中显弱酸性，所以在大米样品的提取液里添加少量甲酸，有助于抑制桔霉素的电离，提高其在有机溶剂的溶解度.本实验分别考察了甲醇、乙腈、乙醇以及乙酸47肇庆学院学报第42卷乙酯（均含有体积分数为5%的甲酸）作为提取溶剂时，对大米样品中桔霉素提取效果的影响.其中以甲醇或乙醇作为提取溶剂时，桔霉素的响应值过低，无法被检测到.当以含5%甲酸的乙腈作为提取溶剂时，对桔霉素的提取效果最好，响应值最高，基线较乙酸乙酯平稳（见图4）.因此选取含5%甲酸的乙腈作为提取溶剂.I /105t /min5% Formic acid/ ACN5% Formic acid/ Ethyl acetate123436912150图4提取剂种类对CIT 响应值的影响2.2.2超声时间的优化提取时间的长短会影响目标化合物的提取效率.实验考察了20、25、30、35及40min 等超声提取时间对大米样品中桔霉素提取效果的影响.结果如图5所示，随着超声提取时间的延长，桔霉素的响应信号也随之增大，在25min 时，响应值达到最高.随着超声时间的继续升高，其响应值开始下降.因此选取25min 作为最佳的超声时间.I /105t /min129182736020 min25 min30 min35 min 40 min图5超声提取时间对CIT 响应值的影响2.2.3净化吸附剂种类的优化QuEChERs 法中常用的净化吸附剂主要有C18（主要吸附脂肪和非极性物质）、PSA （主要吸附脂肪酸、糖以及有机酸和花青素色素等）、GCB （主要吸附色素）等.由于大米中的色素含量较低，因此实验只选取C18和PSA 作为净化吸附剂.分别考察了3种净化吸附剂方案:（1）250mg C18;（2）250mg PSA;（3）150mg C18+100mg PSA ，对大米样品中桔霉素提取效果的影响，从而选择最佳净化吸附剂.结果如图6所示，使用15048第5期朱培杰等：QuEChERS 法结合液质联用快速检测大米中的桔霉素mg C18+100mg PSA 混合吸附剂净化时，相较其他2种方案更好.I /105t /min150 mg C18+100 mg PSA250 mg C18250 mg PSA1234812160图6吸附剂对CIT 响应值的影响2.2.4净化吸附剂用量的优化确定以PSA 与C18作为吸附剂组合后，继续考察PSA 与C18的用量对净化效果的影响.首先保持150mg C18用量不变，将PSA 用量分别调整为50、100、150以及200mg.结果如图7A 所示，PSA 用量在100mg 时的峰面积最高.因此选用100mg 作为PSA 的最优用量.在确定PSA 用量为100mg ，继续考察C18用量.保持100mg PSA 不变，考察C18用量为50、100、150、200以及250mg 时对大米样品中桔霉素净化效果的影响.结果如图7B 所示，当C18的用量为50mg 时测得的响应信号最强.因此选用50mg C18和100mg PSA 作为净化吸附剂的组合.AB图7PSA (A)和C18(B)用量对桔霉素响应信号的影响2.3线性关系、检出限和定量限等量称取6份1.0g 的大米样品，分别添加2、5、10、20、100以及200μg/kg 的桔霉素，按1.3样品前处理方法对样品进行提取和净化，取上清液并按1.4和1.5的LC-MS 条件进行检测分析，每个加标水平做5次平行实验，取其平均值.以桔霉素质量浓度为横坐标（x ），所测得的峰面积为纵坐标（y ），得出相应的回归方程和相关系数.如图8所示，桔霉素在2~200μg/kg 浓度范围内与其峰面积有良好的线性关系，线性方程y =213.23x +1076.9，相关系数R 2为0.9994.以信噪比S/N=3对应的浓度为目标物的最低检出浓度，可得出本方法的检出限为0.2μg/kg ，同理，信噪比S/N=10换算得出本方法的定量限为0.67μg/kg.49肇庆学院学报第42卷图8桔霉素的标准曲线2.4方法回收率考察称取9份1.0g大米样品，分为3组，分别添加高（200μg/kg）、中（100μg/kg）、低（10μg/kg）3个水平，样品前处理参照1.3处理方法，提取溶液经UPLC-MS/MS检测，将仪器记录的桔霉素峰面积代入标准曲线，从而计算得到大米样品中的桔霉素含量.计算可得本方法的平均回收率为99.2%~101.4%，RSD<2%（见表1）.表1加标回收率与相对标准偏差(n=3)添加浓度/(μg·kg-1)10100200平均回收率/%101.499.2100.1RSD/%1.861.210.452.5精密度选取添加水平为100μg/kg的桔霉素提取溶液，连续进样10次，其峰面积的RSD为1.0%，表明方法的日内精密度良好.连续3天，每天进样3次，其峰面积的RSD值为2.1%，表明该方法的日间精密度良好.2.6实际样品的检测从本地市场购买了5种品牌的大米，按照1.3的样品前处理法进行操作，提取溶液经UPLC-MS/MS检测，结果均未检测到桔霉素.3结论实验采用优化后的QuEChERS法，对大米样品进行提取净化，净化液按优化后的色谱条件进行UPLC-MS/MS检测，成功建立了大米中桔霉素的快速检测方法，并应用于实际样品的检测.本方法回收率为99.2% ~101.4%(RSD<2%)，检出限为0.2μg/kg，定量限为0.67μg/kg.本方法具有快速简便、准确度高、灵敏度好等优点，可适用于大米等谷物中桔霉素残留的快速检测.参考文献：[1]URRACA J L,HUERTAS-PEREZ J F,CAZORLA G A,et al.Development of magnetic molecularly imprinted polymersfor selective extraction,determination of citrinin in rice samples by liquid chromatography with UV diode array detection [J].Analytical and bioanalytical chemistry,2016,408:3033-3042.50第5期朱培杰等：QuEChERS法结合液质联用快速检测大米中的桔霉素51 [2]FLAJS D,PERAICA M.Toxicological properties of citrinin[J].Archives of industrial hygiene and toxicology,2009,60(4):457-464.[3]HUERTAS-PEREZ J F,ARROYO-MANZANARES N,GARCIA-CAMPANA A M,et al.High-throughput determination ofcitrinin in rice by ultra-high-performance liquid chromatography and fluorescence detection(UHPLC-FL)[J].Food additives &contaminants:Part A,2015,32(8):1352-1357.[4]XU B J,JIA X Q,GU L J,et al.Review on the qualitative and quantitative analysis of the mycotoxin citrinin[J].Food Con-trol,2006,17:271-285.[5]FRANCO C M,FENTE C A,V AZQUEZ B,et al.Simple and sensitive high-performance liquid chromatography-fluorescencemethod for the determination of citrinin application to the analysis of fungal cultures and cheese extracts[J].Journal of chro-matography A,1996,723:69-75.[6]DUAN Z H,LIN Z S,YAO H R,et al.Preparation of artificial antigen and egg yolk-derived immunoglobulin(IgY)of citrininfor enzyme-linked 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Jiahuan,WANG Hongwu(School of Food and Pharmaceutical Engineering,Zhaoqing University,Zhaoqing,Guangdong526061,China) Abstract:In this paper,A modified QuEChERS method combined with ultra high performance liquid chro-matography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)was proposed for the determination of citrinin in rice. The effect of extraction solvent,ultrasonic time,the type and amount of purification adsorbent were systematical-ly studied for the extraction of citrinin.Under optimized experimental conditions,the proposed method provided a good linearity in the range of2~200μg/kg.The linear equation was y=213.23x+1076.9.The detection limit (LOD)was0.2μg/kg and the limit of quantification(LOQ)was0.67μg/kg.The recoveries ranged from99.2% to101.4%,with a relative standard deviation(RSD)of0.45%to1.86%.This method is simple,rapid and accu-rate,and can be applied to the rapid determination of citrinin residues in grains such as rice.Keywords:Citrinin;QuEChERS method;UPLC-MS/MS;rice（责任编辑：张宝杰）。
三种农用抗生素降解真菌的筛选及其降解性能
三种农用抗生素降解真菌的筛选及其降解性能王强锋1，2，朱彭玲2，夏中梅1，2，王赟2，曾芸2，侯勇1，2*（1.四川省农业科学院生物技术核技术研究所，成都610066；2.四川省兰月科技有限公司，成都610207）收稿日期：2018-03-19录用日期：2018-06-15基金项目：四川省财政创新能力提升工程青年基金项目（2015QNJJ-002）；四川省财政创新能力提升工程优秀论文基金项目（2016LWJJ-001）；四川省科技支撑计划项目（2017SZ0188）作者简介：王强锋（1988—），男，四川平昌人，助理研究员，从事土壤与环境微生物研究。
E-mail ：wqf198808@朱彭玲与王强锋同等贡献*通信作者：侯勇E-mail ：yonghou@摘要：为了从重金属污染的土壤中分离筛选出能降解土霉素、诺氟沙星、磺胺二甲嘧啶的真菌菌株，利用抗生素作为唯一碳源进行抗生素降解真菌富集驯化培养，分离纯化耐受真菌，将纯化后的菌株回接到以抗生素作为唯一碳源的液体培养基中，运用高效液相色谱法（HPLC ）及紫外分光光度法对各菌株抗生素降解能力进行检测，并通过菌落形态学特征、ITS 序列和系统发育树对菌株进行分子鉴定。
筛选到4株抗生素降解真菌KS248、KS256、KS257、KS272，分别鉴定为轮状镰刀菌（Fusarium verticillioides ）、腐皮镰刀菌（Fusarium solani ）、聚多曲霉（Aspergillus sydowii ）、微紫青霉（Penicillium janthinellum ）。
其中，菌株KS248、KS256、KS257具有土霉素、诺氟沙星、磺胺二甲嘧啶降解能力；菌株KS272具有土霉素、诺氟沙星降解能力。
在抗生素初始浓度1500μg·L -1、30℃、150r·min -1条件下避光培养7d 后，菌株KS272降解土霉素、诺氟沙星能力最强，降解率分别达到40.29%、10.59%，菌株KS256降解磺胺二甲嘧啶能力最强，降解率达到18.53%。
卡那霉素在植物转基因中的应用及
卡那霉素在植物转基因中的应用及其抗性基因的生物安全性评价3王紫萱 易自力33(湖南农业大学细胞工程重点实验室 长沙 410128)摘要 介绍了卡那霉素在转基因植物筛选中的作用机理及其在植物转化过程和转化后代中的应用现状。
卡那霉素不仅在植物转化过程中可起到筛选作用,而且在转化后代中可通过其对后代进行遗传分析和测定种子纯度,同时还可用于后代田间成株的筛选。
随着卡那霉素的广泛使用,卡那霉素抗性基因的安全性问题日益受到重视。
概述了转基因植物的杂草化、卡那霉素抗性基因的水平扩散、抗生素医疗安全性和食用安全性等方面的研究进展。
关键词 卡那霉素 转基因植物 生物安全性收稿日期:2002212226 修回日期:20032032103863基金项目资助(101201201201)33通讯作者,电子信箱:yzlzj @public.cs.hn.g ov 转基因植物中的外源基因主要有两大类,即目的基因和标记基因。
标记基因是帮助对转基因生物工程体进行筛选和鉴定的一类外源基因,它包括选择标记基因和报告基因[1]。
在选择压力下,不含标记基因及其产物的非转化细胞和组织死亡,而转化细胞由于有抗性,可以继续存活,因而有利于从大量的非转化细胞和组织中选择出转化克隆[1,2]。
目前,在植物转基因中使用的筛选剂主要有抗生素类,除草剂类,氨甲喋呤,氨基酸类。
在抗生素类中,主要有卡那霉素(kanamycin ,K an )、潮霉素(hygromycin ,Hyg ),庆大霉素衍生物(geneticin ,G 418)等,其中卡那霉素在植物的遗传转化中是应用最早最广泛的一种筛选剂。
因此其筛选效果和抗性基因的生物安全性问题受到了人们的普遍关注。
1 卡那霉素的作用机理卡那霉素是目前植物基因工程中被广泛应用的选择标记。
选择标记的功能是在选择压力下把转化体选择出来。
为达到这一目的,首先要在选择培养基或选择溶液中加入筛选剂,产生一种选择压力,使未转化细胞不能生长;其次是选择标记基因的产物对筛选剂产生抗性使转化细胞不受筛选剂的影响,能正常生长、发育、分化,从而把转化体筛选出来。
抗卡那霉素单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立
抗卡那霉素单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立齐红莉;杨广;刘金兰【摘要】采用碳二亚胺(EDC)法合成卡那霉素完全抗原,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得3株能稳定分泌抗卡那霉素单克隆抗体的杂交瘤(5D7、6H8、7G4).选择其中的5D7株抗体,经ELISA鉴定,细胞上清的效价达103以上,腹水效价达到5×104以上;建立了间接竞争ELISA法,通过优化,其检测限为0.5 ng/mL,抗体IC50为3.7 ng/mL,与妥布霉素交叉反应率为63.8%,与其他抗生素无交叉.可见ELISA 具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于KAN残留的快速检测,具有较高的推广应用价值.【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2010(025)002【总页数】4页(P121-124)【关键词】卡那霉素;单克隆抗体;ELISA【作者】齐红莉;杨广;刘金兰【作者单位】天津农学院,水产科学系,天津市水产生态及养殖重点实验室,天津,300384;天津农学院,水产科学系,天津市水产生态及养殖重点实验室,天津,300384;天津农学院,水产科学系,天津市水产生态及养殖重点实验室,天津,300384【正文语种】中文【中图分类】Q813.2氨基糖苷类药物是含有氨基糖分子的一类抗生素，主要包括链霉素(Streptomycin,STR)、庆大霉素(Gentamicin,GEN)、新霉素(Neomycin,NEO)、新霉胺(Neamine,NEA)、卡那霉素(Kanamycin,KAN)和妥布霉素(Tobramycin,TOB)等，此类药物为广谱抗菌药物，能有效抑制细菌生长与繁殖，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果，是我国农牧业和水产业常用的兽药之一，也常被添加到饲料中促进动物的生长发育。
但此类药物的耳毒性和肾毒性较为严重[1,2]，因此，其在动物性产品中的残留问题也日益引起人们的关注。
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（ 江海 正药业股份 有限公 司中研院微 生物研 究所 ，台州 ３ ８ ０ ） 浙 １０ ０
摘 要 ： 目的 研 究 从 株 棘 饱 小 单 孢 菌 高 产 突 ／ ９ ２３ ．（ ｃｏ ｎｓ ｏａｅ ｈｎｓ ０ ９ ２３ —） 变株 ｌ．６．Ｍｉｒｍｏ ｏｐ ｒ ｃｉｏｐ １，６２ 的发 酵 液 中 分 离 纯 化 抗 ２
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关 键 词 ：抗 肿 瘤 抗 牛 素 ； 卡 奇 莓 素 ； 分离 纯 化 ： 鉴 定
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文 献 标 识 码 ：Ａ
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