DAPI染色封片剂
DAPI-抗荧光淬灭封片剂
DAPI-抗荧光淬灭封片剂
产品编号：F-0045 规格：10ml
产品简介
DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，它能与DNA结合，在紫外光下可观察到蓝色荧光，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm。
使用范围
本产品为即用型工作液，无须稀释，直接用于FISH、IF、TUNEL等细胞核的荧光染色。
储存条件
-20℃，避光
本产品需要严格避光，可放于铝饭盒中或用锡纸包裹。
本产品为淡黄色粘稠液体，由于其中的抗荧光淬灭成分会吸收光，使用时间长后，液体会慢慢变深，最终为变为深褐色时，请勿使用。
使用方法
FISH
杂交结束，标本经过洗液洗涤、再经梯度酒精脱水、干燥，直接在标本上滴加10～20μl DAPI，加上盖玻片，室温下，大约20分钟后可观察荧光。
IF
孵育二抗结束，PBS洗涤后，直接在标本上滴加10～20μl DAPI，加上盖玻片，避光，室温下，大约20分钟后可观察荧光。
注意：
本产品含有甘油、抗荧光淬灭剂，也具备封片作用，在细胞核染色后，无须清洗，可减缓荧光淬灭，在严格避光情况下，4℃保存一周，荧光仍不会淬灭。
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广州市外显子生物技术有限公司
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DAPI染色
DAPI染色1．原理DAPI为4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6—diamidino-2—phenylindole)能与双链DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。
当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA的方法。
DAPI的荧光强度虽较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst；其特异性较溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘化丙啶(propidium iodide，P1)高。
2．溶液配制(1)0．01mol／L PBS(pH7．0)：取0．1mol／L NaH2PO4·H2O 34ml、0．1mol／LNa2HPO4 66ml、NaCl 0．9g，溶于900m1双蒸水；(2)DAPI储存液：将0．5mgDAPI溶于5．0ml PBS中，分装，低温长期保存；(3)DAPI工作液：用PBS稀释DAPI储存液，终浓度为0．1ug／ml。
3．染色程序(1)培养的单层细胞(未固定)或新鲜组织的冰冻切片等，PBS漂洗5分钟；(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；(3)PBS漂洗；(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；(5)荧光显微镜观察。
结果：正常的细胞核呈强荧光，细胞质无荧光；固定的组织细胞同样处理，亦可得到相似的染色结果。
在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光，在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。
DAPI分子式C16H17Cl2N5 分子量350.25 性质 1. 外观黄色粉末2. 纯度≥95%HPLC3. 产品描述DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。
和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。
DAPI染色
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)的配
制
贮存液：70%酒精溶解，浓度100 μg/ml，配好后用锡纸包起来，避光，可在4摄氏度下长期保存。
使用浓度：贮存液用1xPBS稀释1000倍，最终浓度100 ng/ml。
10x PBS的配制
80 g NaCl
2 g KCl
6.1 g 无水Na2HPO4
2 g 无水KH2PO4
加水到1000ml
贮存液可根据需要用蒸馏水稀释
荧光封片液
0.5 mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，pH9.5
染色与观察：
制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm.
注意事项：
DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
上：正常绍鸭成纤维细胞核，下：凋亡核。
dapi染色方法
dapi染色方法
DAPI染色方法是一种常用的细胞核染色方法，它可以用于检测DNA含量、核型分析、染色体计数和核型鉴定等方面。
DAPI染色方法的原理是利用DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole）这种荧光染料，它可以与DNA结合，使DNA发出蓝色荧光，从而实现对细胞核的染色。
DAPI染色方法的步骤如下：
1.将细胞固定在载玻片上，可以使用甲醛、乙醛、乙醇等固定剂进行固定。
2.用PBS（磷酸盐缓冲液）或者其他缓冲液进行洗涤，去除细胞表面的蛋白质和其他杂质。
3.将DAPI染料加入到载玻片上，使其与细胞核中的DNA结合。
4.在黑暗中孵育10-15分钟，使DAPI染料充分结合到DNA上。
5.用PBS或其他缓冲液进行洗涤，去除未结合的DAPI染料。
6.在显微镜下观察细胞核的荧光信号，可以使用荧光显微镜或者激光共聚焦显微镜进行观察。
DAPI染色方法的优点是可以快速、简单地染色，同时可以同时检测多个样本。
此外，DAPI染色方法还可以与其他荧光染料结合使用，
如FITC、TRITC等，从而实现多重染色，提高检测的准确性和灵敏度。
但是，DAPI染色方法也存在一些缺点，如DAPI染料对细胞有毒性，需要控制染色时间和浓度，避免对细胞造成伤害。
此外，DAPI染色方法只能检测DNA含量和核型分析等方面，不能检测其他细胞器和分子的信息。
DAPI染色方法是一种常用的细胞核染色方法，具有快速、简单、灵敏等优点，可以用于多种细胞学研究和临床检测中。
DAPI染DNA的原理及应用方法
DAPI染DNA的原理及使用方法DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式为C16H15N5·2C3H6O3，分子量457.48。
DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。
它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。
结合到双链DNA上DAPI 分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定DNA的量。
另外，因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。
单独DAPI的最大吸收波长为340nm，最大发射波长为488nm；当DAPI与双链DNA结合时，最大吸收波长为364nm，最大发射波长为454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM N aCl，10 mM EDTA），其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。
DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5，其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的配制及贮存固体粉末：避光，2-8 ℃保存，3年没有问题。
贮存液：用无菌水配制成浓度1 mg/ml的贮存液，配好后用锡纸包起来，避光，可在-20 ℃下长期保存。
（DAPI易溶于水，在PBS中溶解度不高）使用浓度：贮存液用1xPBS稀释到终浓度100 ng/ml。
荧光封片液：0.5 mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，pH9.5染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm。
注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
推荐厂商：Invitrogen，Sigma资料下载：点击下载结构式：DAPI结构式DAPI与DNA的复合物晶体结构以下英文介绍摘自Wikipedia。
DAPI染色
DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用与荧光显微镜观测1。
因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
DAPI - 染色机理DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ，且对活细胞无毒副作用。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。
a、正常的烟草细胞核：核形完整，染色质均匀。
b、染色质固缩，向外周聚集，形成周边化。
c、染色质进一步固缩，形成很多颗粒物质。
d、细胞核破裂形成碎片，核解体。
DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。
使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
在细胞移植前，将DAPI 以一定的浓度加入培养基中，与细胞共同孵育过夜，用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI，在用酶消化后离心收集细胞，加入DMEM培养基制成细胞悬液以备用。
储存条件-20℃避光保存1、DAPI强烈致癌，操作时要戴上手套。
2、贮存液用70%酒精配制，浓度100 µg/ml，可用黑纸包住，长期冻存。
抗荧光淬灭封片剂配方
抗荧光淬灭封片剂配方一、简介抗荧光淬灭封片剂是一种用于荧光显微镜下观察细胞的试剂。
在荧光显微镜下，由于荧光分子的不可逆性猝灭作用，会导致样品中的荧光信号逐渐减弱或消失，影响观察效果。
抗荧光淬灭封片剂可以有效地减轻这种猝灭作用，提高样品中荧光信号的稳定性和持久性。
二、配方1. PVA（聚乙烯醇）：PVA是本试剂的主要成分之一，在封片剂中起到增稠、降低表面张力、防止气泡生成等作用。
常见的PVA型号有17-88和10-98两种，前者的粘度较低，后者较高。
2. Glycerol（甘油）：甘油是一种具有保湿性质的化合物，在本试剂中起到保持细胞膜完整性、减少蒸发和挥发等作用。
3. DABCO（1,4-二氨基环己烷）：DABCO是一种具有活性氮原子的化合物，在本试剂中起到抗荧光淬灭的作用。
它可以与氧气、水和其他有机分子形成复合物，从而减少荧光分子的不可逆性猝灭作用。
4. PBS（磷酸盐缓冲液）：PBS是一种缓冲液，可以调节试剂的pH 值，使其适合于细胞生长和显微镜观察。
5. DAPI（4',6-二氨基-2-苯基吡啶）：DAPI是一种DNA染料，在本试剂中起到标记细胞核的作用。
它可以与DNA结合，发出蓝色荧光。
6. Mounting medium（封片剂）：封片剂是一种用于固定细胞和显微镜观察的介质。
常见的封片剂有DABCO、Vectashield等。
三、制备方法1. 加入PVA：将适量的PVA加入PBS中，并在50℃下搅拌至完全溶解。
2. 加入甘油：将适量的甘油加入PVA溶液中，并搅拌至均匀混合。
3. 加入DABCO：将适量的DABCO加入甘油-PVA溶液中，并搅拌至均匀混合。
4. 加入DAPI：将适量的DAPI加入甘油-PVA-DABCO溶液中，并搅拌至均匀混合。
5. 制备封片：将制备好的样品滴在载玻片上，加入适量的封片剂，然后用盖玻片覆盖。
最后用胶水固定盖玻片。
四、注意事项1. 避免过度搅拌：过度搅拌会使PVA分子链断裂，导致溶液黏度降低。
DAPI染DNA的原理及使用方法
DAPI染DNA的原理及使用方法DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式为C16H15N5·2C3H6O3，分子量457.48。
DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。
它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。
结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定DNA的量。
另外，因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。
单独DAPI的最大吸收波长为340nm，最大发射波长为488nm；当DAPI与双链DNA结合时，最大吸收波长为364nm，最大发射波长为454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM NaCl，10 mM EDTA），其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。
DAPI也可以和RNA 结合，但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5，其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的配制及贮存固体粉末：避光，2-8 ℃保存，3年没有问题。
贮存液：用无菌水配制成浓度1 mg/ml的贮存液，配好后用锡纸包起来，避光，可在-20 ℃下长期保存。
（DAPI易溶于水，在PBS中溶解度不高）使用浓度：贮存液用1xPBS稀释到终浓度100 ng/ml。
荧光封片液：0.5 mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，pH9.5染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360 -400nm。
注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
推荐厂商：Invitrogen，Sigma资料下载：点击下载结构式：DAPI结构式DAPI与DNA的复合物晶体结构以下英文介绍摘自Wikipedia。
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北京雷根生物技术有限公司
DAPI 荧光封片剂
简介：
DAPI 荧光封片剂是一种专门用于染色体C 带的DA-DAPI 染色的减缓荧光淬灭的封固剂。
DA 和DAPI 易与A-T 碱基对结合，DAPI 染色可同时检测C 带和G 带，进行DA 对比染色后图像荧光强度减弱，只能特异的C 带呈强荧光染色。
按每个样本需要50～100μl 封片剂计算，5ml 可以用于至少50样本的封片。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 染色样本用DA 染色液染色，McIlvaine 缓冲液轻轻清洗。
2、 DAPI 染色液染色，McIlvaine 缓冲液轻轻清洗。
3、 滴一滴DAPI 荧光封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽
量避免气泡封片。
4、 用透明黏合剂密封盖玻片。
注意事项：
1、 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2、 在使用DAPI 荧光封片剂的情况下，虽然可减缓淬灭，仍需尽量避光。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 DZ0125 Storage DAPI 荧光封片剂 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1份。