DB13T1358-2011养殖用水中孔雀石绿快速测定方法激光拉曼光谱法
水产品中孔雀石绿药物残留检测技术研究进展
水产品中孔雀石绿药物残留检测技术研究进展孔雀石绿是一种广泛应用于水产品中的药物残留检测技术。
它是一种有机物，常被用于治疗和控制水中的细菌和寄生虫。
然而，孔雀石绿的使用可能会对人体造成危害，因为它可以影响人体对细菌和寄生虫的免疫系统。
因此，许多国家对水产品中孔雀石绿的使用提出了限制。
然而，由于水产品野生和养殖的差异以及孔雀石绿对不同物种的不同响应，使得孔雀石绿药物残留检测变得相当困难。
本文将介绍当前孔雀石绿药物残留检测技术的研究进展。
常用的孔雀石绿药物残留检测技术包括高效液相色谱法、荧光光谱法、气相色谱法和液相串联质谱法等。
这些技术具有高灵敏度和高选择性，但也存在一些缺点。
例如，这些技术需要昂贵的仪器设备、高技术人员操作，并且需要花费大量时间进行样品制备。
此外，它们还需要处理大量的样品，这使得这些技术的成本和时间都非常高。
随着科技的发展，出现了一些新型的孔雀石绿药物残留检测技术。
这些技术以其快速、精确和经济的特点受到研究人员的青睐。
1、表面增强拉曼光谱法表面增强拉曼光谱法是一种新型的孔雀石绿药物残留检测技术。
它利用纳米颗粒表面的等离子共振增强拉曼散射，可以增强样品中分子振动的强度，从而提高信号强度和灵敏度。
与传统的检测技术不同，这种技术无需对样品进行复杂的前处理步骤，样品可以直接进行检测。
此外，这种技术还具有快速、稳定和经济的特点。
三、结论随着科技的发展，越来越多的新型孔雀石绿药物残留检测技术已经被开发出来。
这些新技术不仅具有高灵敏度，而且速度和经济性也得到了显著的提高。
这些新型技术的出现为水产品中孔雀石绿药物残留的检测提供了更加快速、准确和可靠的手段。
我们相信，在不久的将来，这些新技术将成为孔雀石绿药物残留检测的主要方式，帮助确保水产品的质量和安全。
高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物的含量
高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物的含量作者：黄昌兴来源：《食品安全导刊·下》2023年第09期摘要：建立了高效液相色谱-荧光法测定水产品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿的方法。
样品经乙腈超声提取、硼氢化钾还原、离心、旋转蒸发及中性氧化铝柱净化后，经微孔滤膜过滤，滤液经液相色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。
结果表明，孔雀石绿和隐色孔雀石绿在1.0～20.0 μg·mL-1均具有很好的线性关系，相关系数≥0.999 8，检出限为0.5 μg·kg-1，定量限为1.5 μg·kg-1，加标回收率为88.1%～96.6%，RSD为0.9%～3.8%。
关键词：孔雀石绿；水产品；液相色谱；荧光法Determination of Malachite Green and Its Metabolites in Aquatic Products by High Performance Liquid ChromatographyHUANG Changxing（Shantou Inspection and Testing Center， Shantou 515041， China）Abstract： A method for the determination of malachite green and leucomalachite green in aquatic products by high performance liquid chromatography with fluorescence detection was established. After ultrasonic extraction with acetonitrile， reduction with potassium borohydride，centrifugation， rotary evaporation， purification with neutral aluminum oxide column， the sample is filtered by microporous membrane， and the filtrate is separated by liquid chromatography column， detected by fluorescence detector， and quantified by external standard method. The results showed that malachite green and leucomalachite green showed good linearity in the range of 1.0～20.0 μg·mL-1 with the correlation coefficients ≥0.999 8， the limits of detection of 0.5 μg·kg-1 and the limits of quantification of1.5 μg·kg-1， and the recoveries of spiked standards ranged from 88.1% to 96.6% with the RSD of 0.9%～3.8%.Keywords： malachite green; aquatic products; liquid chromatography; fluorimetry孔雀石绿（Malachite Green，MG），别名孔雀绿、孔雀绿草酸盐、碱性绿、草酸孔雀石绿等，是人工合成的一种三苯甲烷类化学物，可杀真菌、细菌、寄生虫，因其对养殖水域中的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病和寄生虫病等具有良好的疗效，被作为杀菌剂在水产养殖业广泛使用[1-2]。
水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法
水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法1范围本方法规定了水产品及其养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于鱼肉及养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的快速测定。
2原理样品中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿经有机试剂提取，吸附剂净化，正己烷除脂后，加入氧化剂将隐色孔雀石绿氧化成为孔雀石绿，经浓缩复溶后，孔雀石绿与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1正己烷。
3.1.2乙腈。
3.1.3冰乙酸。
3.1.4盐酸。
3.1.5吐温-20。
3.1.6氯化钠。
3.1.7对-甲苯磺酸。
3.1.8无水乙酸钠。
3.1.9盐酸羟胺。
3.1.10无水硫酸钠。
3.1.11中性氧化铝：层析用，100目~200目。
3.1.12二氯二氰基苯醌。
3.1.13氯化钾。
3.1.14磷酸二氢钾。
3.1.15十二水合磷酸氢二钠。
3.1.16饱和氯化钠溶液：称取氯化钠（3.1.6）200 g，加水500 mL，超声使其充分溶解。
3.1.17盐酸羟胺溶液（0.25 g/mL）：称取2.5 g 盐酸羟胺（3.1.9），用水溶解并稀释至10 mL，混匀。
3.1.18乙酸盐缓冲液：称取4.95 g 无水乙酸钠（3.1.8）及0.95 g 对-甲苯磺酸（3.1.7）溶解于950 mL 水中，用冰乙酸（3.1.3）调节溶液pH 为4.5，用水稀释至1 L，混匀。
3.1.19二氯二氰基苯醌溶液（0.001 mol/L）：称取0.0227 g 二氯二氰基苯醌（3.1.12）置于100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，混匀。
养殖水体中孔雀石绿的快速检测技术
孔雀石绿残留。2 个不同加标浓度的颜色变化情况见表 ’。
表 !" % 个不同加标浓度的颜色变化情况
实验组浓度 . ,-·/0 % ’
步骤 样品
+* # ’#*பைடு நூலகம்#
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富集 %
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% 淡绿色可见 淡绿色明显
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% 淡绿色可见 淡绿色明显
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! ! 从实验结果看，当水样中含有 +#* # ,- . /0 浓度的孔 雀石绿时候，能比较明显地在富集、显色和洗脱过程中观
! ! 收稿日期："##$ % #& % &# 作者简介：张晓辉，’()) 年生，男，浙江衢州人，工程师，主要
从事水产品药残检测和水生生物学研究*
’# /9,。 ’* 2* "* &! 洗脱! 加 ’* # /0 洗脱液于筛选柱，收集洗脱 液。
#" 结果与讨论
! ! 本实验通过筛选柱在富集、显色、洗脱过程中的颜色 变化来定性判断水体中孔雀石绿残留情况，若检测的 & 个过程中出现 颜 色 变 化，即 可 初 步 判 定 检 测 水 体 中 含 有
察到淡绿色，当水样中样品浓度达到 ’##* # ,- . /0 时，& 个过程颜色变化明显，而当水样中孔雀石绿浓度为 +* # ,- . /0 和 ’#* # ,- . /0 时，未发现颜色变化。因此，我们可 以初步判定当水样中含 +#* # ,- . /0 或以上时，该筛选柱 能很好的进行 定 性 检 测，此 结 果 可 以 满 足 广 大 基 层 养 殖
摘要：利用筛选柱快速检测养殖水体中孔雀石绿，发现当水样中孔雀石绿浓度为 +* # ,- . /0 和 ’#* # ,- . /0 时，检测过程中未发现颜色变化；当水样中孔雀石绿浓度为 +#* # ,- . /0 或以上时，检测过程中颜色变化 较明显，该结果能满足广大基层养殖户快速筛选的需求。
高效液相色谱法测定水体中孔雀石绿残留量
107实验研究孔雀石绿，又称为碱性绿、孔雀绿等，其为一类生物染色剂、染料，商品名中含有草酸盐及氯化锌两种规格，呈现翠绿色结晶体，主要包含两种结构式，即盐酸盐和无色孔雀石绿，易溶于水、乙醇及甲醇中，其水溶液呈现蓝绿色，在水生生物体内代谢产物变为无色孔雀石绿。
当前水产品感染孔雀石绿途径主要包含养殖、运输及存放，其中养殖户进行鱼苗孵阶段，会利用孔雀石绿将其各类鱼病防治。
孔雀石绿不仅拥有高毒素特征，而且致癌及致畸性较强，可在动物内长期存留，通过动物代谢之后转化为无色孔雀石绿，对人们健康构成严重威胁。
本次实践的主要内容是使用高效液相色谱法测定水体中孔雀石绿的残留量。
检测结果的准确性、稳定性有利于有关监管部门对水产养殖基地兽药使用的监控，对食品安全起到预警、监督作用。
1.材料与方法1.1仪器与设备本试验中主要涉及以下设备：Agilent 1100型高效液相色谱仪：配荧光检测器；Mettler Tolledo(PL202-L/100)百分一天平；IKA MS3 basic旋涡混合器；OA-SYS氮吹仪；CNW固相萃取装置;Thermo移液器（1mL 5mL 10mL ）；Microman微量移液器（20μL~100μL ）1.2材料与试剂乙腈：色谱纯；二氯甲烷；冰乙酸；氨水；孔雀石绿标准品(Dr.Ehrenstorfer GmbH)：纯度≥98%。
提取液：盐酸羟胺3g，对甲苯磺酸0.24 g溶于100 mL水中。
硼氢化钾溶液［ 0.2% ］：称取0.2 g硼氢化钾溶于100 mL水中，现配现用。
乙酸铵缓冲溶液［ 0.125mol /L］：称取9.64 g无水乙酸胺溶解1000 mL水中，用氨水调pH至4.5，过0.45μm滤膜备用。
乙酸铵缓冲溶液［ 0.1mol /L］：称取7.71 g无水乙酸胺溶解1000 mL水中，用氨水调pH至10.0，过0.45μm 滤膜备用。
PRS柱洗脱液：乙酸铵缓冲溶液（0.1mol /L）+乙腈=1+1，现配现用。
水产品中孔雀石绿的测定
6. 液相色谱法
6.1. 原理 试样中的残留的孔雀石绿、结晶紫及其代谢物用孔雀石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盒提 供的试剂提取、浓缩后用液相色谱进行检测，外标法定量。 6.2. 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。 6.2.1. 乙腈:色谱纯。 6.2.2. 无水乙酸钠。
作业指导书
水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定酶联免疫法db34t14212011水产品中孔雀石绿和结品紫及其代谢产物的快速测定方法snt17682006水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法gbt203612006概述孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体既是杀真菌剂又是染料
XXX 实验室检测中心 管理体系文件
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题：水产品中孔雀石绿的测定
颁布日期：2014 年 月 日
1. 目的
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题：水产品中孔雀石绿的测定
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5.6.2. 定量判定 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以第一个标准(0 标准)的吸光度 值(BO)再乘以 100%，即百分吸光度值。 B 百分吸光度值 % = × 100% B0 B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值。 BO—0ng/ml 标准溶液的平均吸光度值。 以标准品百分吸光率为纵坐标，以孔雀石绿标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标，绘制标 准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其 对应的稀释倍数即为样本中孔雀石绿的实际浓度。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。 5.7. 方法的检出限、回收率、重复性 5.7.1. 检出限 本方法孔雀石绿及其代谢残留物的检出限为 0.2μ g/kg。 5.7.2. 回收率 在样品中添加 0.1μ g/kg～4μ g/kg 浓度水平时，回收率为 70％～120％。 5.7.3. 重复性 本方法的批内变异系数≤10％，批间变异系数≤10％。 5.8. 结果表述 当所对应的样品的测定值小于其检出限时， 报告为孔雀石绿未检出。 当测定值大于检出限时， 报告为孔雀石绿检出。 出现阳性值时（超过相关标准、规定的限量值） ，需用液相色谱-串联质谱法（LC/MS-MS）加 以确证。
表面增强拉曼光谱法快速检测水产品中的孔雀石绿
表面增强拉曼光谱法快速检测水产品中的孔雀石绿顾振华;赵宇翔;吴卫平;彭少杰;赵建丰;胡耀铭;喻文娟;韩奕奕【期刊名称】《化学世界》【年(卷),期】2011(52)1【摘要】基于表面增强拉曼光谱技术的便携式拉曼光谱仪运用于水产品养殖、运输过程水样中孔雀石绿的快速测定进行了研究。
利用孔雀石绿位于432～437 cm-1,1166～1170 cm-1,1613～1617cm-1的拉曼光谱特征峰及其强度,对孔雀石绿进行定性及半定量的快速测定。
检测限为5.0μg/L,常见含氮化合物尿素、亚硝酸钠以及零售环节所用海水晶等物质对本快速测定方法无干扰。
对每个样品的检测时间从样品制备到结果显示一般只需3 min。
【总页数】4页(P14-16)【关键词】表面增强拉曼光谱技术;便携式拉曼光谱仪;孔雀石绿;水产品【作者】顾振华;赵宇翔;吴卫平;彭少杰;赵建丰;胡耀铭;喻文娟;韩奕奕【作者单位】上海市食品药品监督所,上海200233;复旦大学分析与测试中心,上海200433;上海交通大学分析测试中心,上海200240;农业部食品质量监督检验测试中心上海,上海200436【正文语种】中文【中图分类】O613.71;O647.33【相关文献】1.Au@Ag纳米粒子表面增强拉曼光谱法高灵敏检测孔雀石绿 [J], 王利华;王佳慧;韩艳云;朱运峰;吴文辉;肖康飞;战艺芳;曾令文2.表面增强拉曼光谱法快速检测中成药中吡罗昔康 [J], 宋健3.表面增强拉曼光谱法快速检测减肥类保健食品中的比沙可啶 [J], 张烨;杨国伟;陈煜;阎安婷4.表面增强拉曼光谱法快速检测调味品中的百草枯 [J], 张洁;谈铭5.表面增强拉曼光谱法快速检测猪肉中左旋咪唑残留 [J], 施思倩;杨方威;姚卫蓉;于航;谢云飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水产品中孔雀石绿的检测及残留提取技术
关键 词 ： 孔雀石绿 ； 水产品 ； 提取技术 ； 检测技术
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文章 编 号 ：０６００ （０ １１－ １０ ０ １０—６Ｘ ２ １）ｌ００— ３
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湖南农业科学
２ １，１）１ ～０， ３ ０ １（ １ ：０ １２１ ０ ０
Ｈ ｎｎａ ｎ ｕ ｕ ｌ ｃ ｎ ｅ ｕ ａ ｇ ｃｌ ｒ ｉ ｃ ｔ ａＳ ｅ ｓ
水 产 品 中孔 雀 石 绿 的检 测 及 残 留提 取 技 术
曹 慧， 管 骁， 张小刚， 上 上海 ２ ０ ９ ） ０ ０ ３
孔 雀石 绿 （ ｌｃｉｔ ｇｅｎ 属 三 苯 甲烷 类 化 Ｍａ ｈｎｅ ｒｅ ） ａ 学物质 ， 常作 为 驱 虫剂 、 杀菌 剂 等 应 用 于水 产 养 殖 业 中 。研 究发 现 ， 孔雀 石绿 易残 留在 人类 或 动物机 体内， 并产 生致癌 、 畸 、 致 致突 变等 副作 用 １ 了 。为 有效 监控 孔雀 石绿 在水 产 品 中的残 留量 ，快 速 、 简 便、 准确 的测 定方法 已成 为研 究 的热点 。目前 ， 内 国
ｍｅｔｏ ｗｅ ｅ ０．￣２ Ｉｇ＇ ｈ ｄ ｒ ２ ￣ ｃ ｍＬ ｎ ９ ．ｒｓ ｅ ｔｖ ｌ Ｔｈｅ ｃ ｅ ｃ ｌｃ ｍ ｐ ｕ ｓ ｉ ｘｔａ ｔｎ ｏ ｕ ｉｎ ｗｅ ｅ ａ ｏｌｗｓ Ｈ ａ ｄ ０．９９ ５ ｅ ｐ ｃ ｉｅｙ． ｈ ｍｉ ａ ｏ ｏ ｎｄ ｎ ｅ ｒ ｃｉ ｇ ｓ ｌ ｔｏ ｒ ｓｆ ｌｏ ：ｐ
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ICS65.150
B 50 DB13 河北省地方标准
DB 13/T 1358—2011
养殖用水中孔雀石绿快速测定方法 激光拉曼光谱法The qualitative determination of malachite green in aquiculture water
by surface-enhanced laser raman spectrometry
2011-01-28发布2011-02-28实施
前言
本标准由GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。
本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、欧普图斯光学纳米科技有限公司、国家果类及农副加工产品质量监督检验中心
本标准主要起草人：李挥、张敬轩、张会军、张岩、刘春伟、贾茜、范斌、李强、庞坤
养殖用水中孔雀石绿快速测定方法 激光拉曼光谱法
1 范围
本标准规定了利用激光拉曼光谱法快速检测水产品养殖、销售用水或其他水体中微痕量孔雀石绿的定性定量检测方法。
本标准适用于水产品养殖、销售用水或其他水体中孔雀石绿的激光拉曼光谱法的现场快速筛查检测。
本方法在水中孔雀石绿的定量限为5.0μg/L。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T 6682—2008，ISO 3696:1987，MOD）。
3 原理
试样经高速离心后直接测定。
样品中的孔雀石绿分子与表面增强试剂混合后，分子吸附在表面增强纳米颗粒上，其拉曼散射信号可增强106倍以上，使用便携式激光拉曼检测仪通过自动判别其特征峰即可定性检测出孔雀石绿。
通过对测定的拉曼谱图进行基线调整和归一化处理，应用外标法可进行定量分析。
4 试剂与材料
除另有规定，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。
4.1 孔雀石绿标准品：CAS 2437-29-8，纯度大于99％。
4.2 表面增强试剂：OTR201，银纳米溶胶，或相当者。
4.3 无机盐凝聚剂：1％ 氯化钠水溶液。
4.4 无机盐离子促进剂：2％ 溴化钾水溶液。
4.5 孔雀石绿标准溶液（1 000 μg/mL）：准确称取0.1 000 g孔雀石绿标准品，用乙腈溶解后，定容到100 mL，4℃避光保存。
5 仪器与设备
5.1 激光拉曼光谱仪。
5.2 高速离心机：转速不低于14 000 r/min（转/分钟）。
6 分析步骤
6.1 样品采集、保存
取具代表性样品，装于棕色瓶中，于2℃～5℃冷藏保存，并在24小时内完成检测。
6.2 样品制备
取1.0mL待测水样，14000r/min离心5min，上清液即为待测液。
6.3 仪器参考条件
a)激光功率：200 mW
b)积分时间：10 sec
c)平均次数：2
d)平滑参数：3
6.3.1 定性测定
依次加入0.25 mL表面增强试剂（4.2）、0.10 mL无机盐凝聚剂（4.3）、0.25 mL待测液和0.10 mL 无机盐离子促进剂（4.4），混匀后开始检测。
根据谱图435 cm-1（±3 cm-1）、1171 cm-1（±3 cm-1）和1615 cm-1（±3 cm-1）处特征拉曼光谱，对水样中的孔雀石绿进行评估：如同时存在上述特征峰，则可判定样品中含有孔雀石绿；否则，不能证明样品中含有孔雀石绿，需要进一步实验验证。
水中孔雀石绿表面增强拉曼光谱图参见附录A。
6.5 定量测定
对测定的拉曼谱图进行基线调整和归一化处理，基本操作如下：
(1) 首先将测定的拉曼光谱数据进行基线调整；
(2) 以1171 cm-1（±3 cm-1）处的特征拉曼峰作为定量基准峰，对孔雀石绿特征拉曼峰进行归一化处理；
(3) 归一化后得到的特征拉曼峰强度可根据当天测得的标准曲线进行定量。
6.4 计算
7.1 绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程。
7.2 结果按式（1）计算：
………………….. …………………….
（1）
式中：
X —样品中孔雀石绿的含量，单位为毫克每千克（mg/L）；
c —从标准曲线得到的孔雀石绿含量，单位为毫克每升（mg/L）；
V —样品定容体积，单位为毫升（mL）；
m —样品量取体积，单位为毫升（mL）。
6.5 允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均数的10%。
6.6 验证试验
对阳性样品需经相关国家标准方法进行确证。
附 录 A
（资料性附录）
水中孔雀石绿表面增强拉曼光谱图
图A.1 水中孔雀石绿表面增强拉曼光谱图________________________________。