实验5 高效液相色谱应用实验
高效液相色谱法测定饲料中环丙氨嗪的含量
高效液相色谱法测定饲料中环丙氨嗪的含量周灿谭美英杨彦宁张港关静渊魏唯周玉洁张瑞祺隆雪明*(湖南省兽药饲料监察所，湖南长沙410006)摘要：本实验建立饲料中环丙氨嗪含量的分析方法。
试样采用1%三氯乙酸/乙腈（20:80）溶液提取，经MCX 固相萃取柱净化，采用磷酸缓冲盐+甲醇+乙腈（93:5:2）为流动相洗脱，C18色谱柱（4.6×250mm，5μm）分离，在检测波长214nm下进行测定，外标法定量。
在浓度0.2-50.0mg/L范围内线性关系良好（R≥0.999），在0.5μg/kg、5μg/kg和50μg/kg添加水平下，平均回收率为75.3%-97.9%，相对标准偏差均少于10%，方法定量限0.5mg/kg。
该方法灵敏、简单、重复性好，适用于饲料中环丙氨嗪的测定。
关键词：高效液相色谱法；饲料；环丙氨嗪1概述环丙氨嗪（Cyromazine，Cyr）又名灭蝇胺，其化学名为2-环丙氨基-4，6-二氨基三嗪，结构式如图1所示，属三嗪类化合物[1-2]，是一种高效抑制昆虫生长剂类杀虫剂，抑制蝇类幼虫的生长发育和羽化，1994年获农业部批准作为杀虫剂在我国上市。
2002年农业部将环丙氨嗪批准为三类新兽药。
近年来，为改善畜禽养殖场环境卫生，许多养殖户把环丙氨嗪长期应用于产蛋期饲料和肥育猪饲料中而没有休药期，易造成鸡蛋、奶和肉等动物性产品中的药物残留[3]。
环丙氨嗪被认定为具有潜在致癌性的化合物，同时研究发现环丙氨嗪在环境中具一定的迁移性，且在土壤中比较稳定，土壤中的环丙氨嗪通过环境转归再次进入食物链，对基金项目:《兽药饲料中非法添加物快速筛查方法学研究与应用》（2022JJ90055）*通信作者34不同营养级生物和人体的健康造成潜在隐患[4]。
目前测定环丙氨嗪药物的检测方法有薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法[5-6]和质谱法[7]。
暂无饲料中环丙氨嗪的检测方法。
本文拟建立一种利用高效液相色谱法快速测定饲料中环丙氨嗪的方法，为有效监控饲料中环丙氨嗪药物提供简便、快速、高效的检测方法，杜绝动物源性食品潜在风险产生，保障食品安全。
高效液相色谱法测定市售月饼中的三种防腐剂
高效液相色谱法测定市售月饼中的三种防腐剂张 丰（萍乡市食品药品检验所，江西萍乡 337000）摘 要：以从市场购买的15种月饼样品为研究对象，采用高效液相色谱法测定月饼中3种常见防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸）的含量。
结果表明，3种防腐剂的标准曲线方程线性相关系数均在0.99以上，说明该方法可以应用于月饼中防腐剂的检测。
15种月饼样品中，有8种检出山梨酸，含量为0.016 2～0.746 0 g·kg-1；有9种检出脱氢乙酸，含量为0.080 3～0.250 0 g·kg-1；有3种未检出防腐剂；15种月饼样品中均未检出苯甲酸。
市售的15种月饼样品中3种防腐剂含量均符合最新的食品安全国家标准。
关键词：高效液相色谱法；月饼；苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸Determination of Three Preservatives in Mooncakes by HPLCZHANG Feng(Pingxiang Food Medicines Inspection Office, Pingxiang 337000, China) Abstract: Using 15 mooncake samples purchased from the market as the research object, the content of three common preservatives (benzoic acid, sorbic acid, dehydroacetic acid) in mooncakes was determined by high performance liquid chromatography. The results showed that the linear correlation coefficients of the standard curve equations of the three preservatives were all above 0.99, indicating that the method could be applied to the detection of preservatives. Among the 15 kinds of moon cake samples, 8 kinds of sorbic acid were detected, and the content was 0.016 2～0.746 0 g·kg-1; 9 kinds of dehydroacetic acid were detected, and the content was 0.080 3～0.250 0 g·kg-1; three preservatives were not detected; benzoic acid was not detected in 15 kinds of moon cake samples. The contents of three preservatives in 15 kinds of moon cake samples sold in the market all met the latest national food safety standards.Keywords: high performance liquid chromatography; mooncake; benzoic acid; sorbic acid; dehydroacetic acid月饼又称月团、丰收饼、团圆饼等，是中秋节不可或缺的美食[1]。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法实验报告导言：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本实验旨在通过HPLC技术对某种药物样品进行分析，并探讨其应用的可行性和优势。
实验方法：1. 仪器设备：HPLC仪、色谱柱、样品溶液、流动相、检测器等。
2. 实验步骤：a. 样品制备：将药物样品粉末溶解于适当的溶剂中，制备成一定浓度的样品溶液。
b. 色谱柱准备：根据样品特性选择合适的色谱柱，并进行柱平衡处理。
c. 流动相制备：根据样品特性选择合适的流动相组成，并进行气泡排除和气体除湿处理。
d. 参数设置：根据样品特性和实验要求，设置适当的流速、温度、检测波长等参数。
e. 样品注射：使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入色谱柱。
f. 数据采集：通过检测器采集样品在色谱柱中的峰值信号，并记录相关数据。
g. 数据处理：利用计算机软件对采集的数据进行峰面积计算、峰高度计算等处理。
实验结果：通过HPLC技术对药物样品进行分析，得到了以下结果：1. 样品在色谱柱中产生了明确的峰值信号，峰形对称且峰高度适中。
2. 根据峰面积计算，得到了样品的浓度为X mg/mL。
3. 通过与标准品的比对，确认了样品的成分和含量。
讨论：1. HPLC技术在药物分析中的应用优势：a. 高灵敏度：HPLC技术能够检测到极低浓度的物质，对于药物分析中微量成分的检测非常重要。
b. 高选择性：通过调整流动相的组成和色谱柱的特性，可以实现对复杂样品中不同成分的分离和检测。
c. 高分辨率：HPLC技术能够有效地分离样品中的各个成分，提供准确的分析结果。
d. 自动化程度高：HPLC仪器配备了自动进样器和数据采集系统，能够实现实验过程的自动化操作和数据处理，提高了实验效率和准确性。
2. 实验中可能存在的误差和改进方法：a. 样品制备过程中的误差：药物样品的溶解度、稳定性等因素可能会对实验结果产生影响。
实验5 高效液相色谱分析HBIW产品纯度
高效液相色谱分析HBIW产品纯度一、实验目的1.理解高效液相色谱原理；2.了解高效液相色谱站工作原理；3.掌握HBIW的纯度分析方法。
二、实验原理高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是20世纪60年代末，在经典也想色谱和气象色谱的基础上发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。
与经典液相色谱相比较，HPLC采用微球填料（5-10μm），使用了高压输液泵，所以传质快、柱效高（可达20000-80000塔板/米），能分离多组分复杂混合物或性质及相近的同分异构体，并可实现快速分离。
高效液相色谱还可以称为高压液相色谱（high pressure liquid chromatography），高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分力度液相色谱（high resolution liquid chromatography）或现代液相色谱（modern liquid chromatography）。
HPLC法原理：一固液色谱法为例。
固定相是固相吸附剂，它们是一些多孔性的极性微粒物，如硅胶、氧化铝等。
它们的表面存在着分散的吸附中心，溶质分子流动相分子在吸附剂表面呈现的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种作用还存在于不同荣哲分子间，以及同一溶质分子中不同官能团之间。
由于这些竞争作用，便形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡，这就是液相色谱具有选择性分离能力的基础。
本实验所采用的HPLC就是液相色谱。
HPLC色谱仪简介：高效液相色谱仪分为分析型和制备型，虽然它们的性能各异，应用范围不同，但其基本组件类似。
主要部件如下：储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器数据处理装置等。
HPLC法的特点：高效液相色谱采用液体流动相，流动相也影响分离过程，这对分离的控制和改善提供了额外的因素，它能分析气象色谱不能分析的高沸点有机物、高分子和热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质。
高效液相色谱-串联质谱法检测动物性食品中氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯残留量
高效液相色谱-串联质谱法检测动物性食品中氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯残留量陈 盛（上海必诺检测技术服务有限公司，上海 201114）摘 要：建立高效液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯残留量的方法。
样品采用QuEChERS法净化，以0.1%甲酸水溶液（含10 mmol乙酸铵）及乙腈为流动相进行梯度洗脱，通过Poroshell 120 EC-C18液相色谱柱分离，以电喷雾正离子（ESI+）多反应监测模式对目标物进行定性定量分析。
该方法在2～200 μg·L-1线性良好，相关系数均＞0.992，方法检出限为0.01 mg·kg-1，定量限为0.03 mg·kg-1。
在加标水平为0.03 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.30 mg·kg-1时，方法的回收率为80.3%～94.3%，RSD在4.3%～8.7%。
该方法操作简便、检测效率高，分离目标物效果好，可以满足动物性食品中氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯残留量的检测。
关键词：高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）；动物性食品；氟吡菌胺；氟吡菌酰胺；螺虫乙酯High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for the Determination of Fluopicolide, Fluopyram and Spirotetramat Residues in Animal FoodCHEN Sheng(Shanghai Bino Testing Service Co., Ltd., Shanghai 201114, China)Abstract: Establish a method for the determination of residues of fluopicolide, fluopyram and spirotetramat in animal food by high-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The sample was purified using the QuEChERS method, with 0.1% formic acid aqueous solution (containing 10 mmol ammonium acetate) and acetonitrile were used as mobile phases for gradient elution, separated by Poroshell 120 EC-C18 liquid-phase column, and the target substance was qualitatively and quantitatively analyzed by electrospray positive ion (ESI+) multi reaction monitoring mode. This method had good linearity in the linear range of 2～200 μg·L-1, and the correlation coefficients were＞0.992, the detection limit of the method is 0.01 mg·kg-1, and the quantitative limit is 0.03 mg·kg-1. At the spiking levels of 0.03 mg·kg-1, 0.10 mg·kg-1, and 0.30 mg·kg-1, the recovery rate of the method is 80.3% to 94.3%, and the RSD is 4.3% to 8.7%. This method is easy to operate, has high detection efficiency, and has good separation effect of the target substance, which can meet the detection of residues of fluopicolide, fluopyram, and spirotetramat in animal food.Keywords: high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS); animal food; fluopicolide; fluopyram; spirotetramat氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯均属于广谱类杀菌剂。
高效液相色谱法在化妆品检测中的应用研究
62《轻工标准与质量》2019年第3期捍卫生活品质 推动产业升级高效液相色谱法在化妆品检测中的应用研究刘敬玄（广东产品质量监督检验研究院，广东广州 510670）摘要：化妆品当中有很多对人皮肤及身体有危害的物质成分，如含量超高或是使用了禁用物质都会严重影响皮肤健康，通常使用的检测方法是高效液相色谱法。
为此本文章主要对高效液相色谱法其在化妆品各项物质含量检测中的具体应用实施了深入的研究和分析，并同时对这一检测法中存在的优点和缺点进行了汇总和总结，望可以为化妆品的质量提升提供相应的参考依据。
关键词：高效液相色谱法；化妆品；有害物物质含量；应用中图分类号：TQ658 O657.7+2 文献标识码：A DOI：10.19541/ki.issn 1004-4108.2019.03.016计量与检测在高效液相色谱仪构成部分中的储液器构件当中，运行时流动相会在高压泵的作用下而进入到系统中，随后样品溶液会途经进样器构件而流到流动相内，之后，通过流动相，进入色谱柱当中，利用检测仪，可以检测出样品成分的浓度。
现时期因为化妆品需求的不断提升，市场对于产品功效需求也在不断提高，特别是防紫外线、美白祛斑功效的化妆品受到很多人的喜爱。
因为化妆品是与皮肤直接接触的，如禁止使用的一些着色剂和雌激素用在化妆品当中，一定会造成反作用，对人的皮肤产生损害，为此对于这类物质含量的检测便显得特别重要。
1化妆品中多种着色剂检测在化妆品当中，含有很多化学成分，因为着色度和遮盖度都非常强，为此合成的色素被大量的应用在化妆品当中，还有更为严重的，有些化妆品当中还含有禁止使用的色素成分。
这种物质通常具有较大毒性，严重的情况下会致癌和造成畸形等现象。
结合化妆品的相关规范和用料标准，对一到四类着色剂禁止使用，在化妆品的生产过程中，较易形成着色剂超标使用的情况，因此对于这几类着色剂的用量进行检测是非常有必要的。
可使用HPLC 来对I 类着色剂实施检测，通过净化、离心和萃取等环节，选择使用柱分离和DAD 检测，获得十种着色剂及质量浓度系数。
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度杨涛;沈杰【摘要】目的建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(highperformance liquid chromatography,HPLC).方法血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2羧乙基)膦盐酸盐[tris (2 carboxyethyl) phosphine hydrochloride,TCEP]还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7氟苯呋咱4硫酸铵盐(7 fluorobenzofurazan-4 sulfonic acidammonium salt,SBD F)进行衍生化反应,荧光检测器检测.色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6mm,5 μm),柱温29℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5:96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱.激发波长385 nm,发射波长515 nm.采用外标法定量.结果 Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50～800 μmol/L、4～64 μmol/L、10～160 μmol/L和2.5～40μmol/L.Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L.各组分日内、日间精密度RSD均＜12％.平均回收率为95.01 ％～116.17％.结论该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2014(041)005【总页数】6页(P679-684)【关键词】高效液相色谱法(HPLC);同型半胱氨酸(Hcy);半胱氨酰甘氨酸(CysGly);半胱氨酸(Cys);谷胱甘肽(GSH)【作者】杨涛;沈杰【作者单位】复旦大学附属华东医院药剂科上海200040;上海市老年医学研究所老年临床药理研究室上海200040;复旦大学附属华东医院药剂科上海200040;上海市老年医学研究所老年临床药理研究室上海200040【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2生物硫醇，如半胱氨酸（cysteine，Cys）、同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）、半胱氨酰甘氨酸（cysteinylglycine，CysGly）和谷胱甘肽（glutathione，GSH），在生物组织和体液中广泛分布，并且在生物系统中起着非常重要的作用［1-2］。
高效液相色谱法测定清肺颗粒中甘草酸的含量
高效液相色谱法测定清肺颗粒中甘草酸的含量引言清肺颗粒是一种中药颗粒剂，常用于治疗咳嗽、喘息等呼吸系统疾病。
其中的甘草酸作为主要有效成分之一，具有镇咳、平喘、化痰等功效。
准确测定清肺颗粒中甘草酸的含量对于保证其药效，具有重要意义。
本文将利用高效液相色谱法对清肺颗粒中甘草酸的含量进行测定。
实验方法1. 仪器和试剂本实验使用的仪器主要包括: 高效液相色谱仪、电子天平、PH计等；试剂有：甘草酸标准品、乙腈、甲醇、磷酸、二甲基亚砜等。
2. 样品制备取清肺颗粒0.5g，加入50ml的乙醇水溶解液中，超声提取3次，每次15分钟，离心，取上清液，合并，浓缩至1ml，称取1ml装入10ml量瓶，加纯水至刻度。
3. 色谱条件色谱柱：C18色谱柱；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（25:75）；检测波长：254nm；柱温：25℃；流速：1.0ml/min。
4. 色谱峰识别用甘草酸标准溶液进行色谱峰识别，测定其保留时间。
5. 色谱峰积分将制备好的清肺颗粒提取液进行色谱测定，测得其峰面积值。
6. 含量计算由色谱峰面积值和标准曲线得出清肺颗粒中甘草酸的含量。
结果与分析通过上述实验方法，我们测定了清肺颗粒中甘草酸的含量。
例如：得到清肺颗粒中甘草酸的含量为Xmg/g。
根据国家药典规定的标准范围，我们可以判断该批次的清肺颗粒中甘草酸的含量是否符合要求。
通过对多个批次的清肺颗粒进行测试，得出结果稳定可靠。
讨论通过本次实验，我们成功地利用高效液相色谱法对清肺颗粒中甘草酸的含量进行了测定。
该方法简单、精确、灵敏，能够满足对清肺颗粒中甘草酸含量的要求。
该方法还可以应用于其他中药颗粒剂中甘草酸含量的测定，具有重要的实际应用意义。
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实验5高效液相色谱应用实验
一、实验目的
1、熟悉高效液相色谱分离分析的原理。
2、掌握根据保留值，用已知纯物质对照定性的分析方法。
3、掌握用归一化法定量测定混合物各组分的含量。
4、掌握用微量进样器进样的基本操作和色谱软件的一般操作。
二、方法原理
高效液相色谱法是一种重要的色谱分离技术。
根据所用固定相和分离机理的不同，一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K：
组分在固定相中的浓度
K= ————————————
组分在流动相中的浓度
显然，K值越大，组分在固定相上的保留时间越长固定相与流动相之间的极性差值也越大。
因此，出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相色谱法和流动相为极性而固定相为非极性的反相色谱法。
目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。
若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离常用的有机化合物。
三、仪器与试剂
高效液相色谱仪、紫外（254nm）检测器、色谱柱C18柱（250mm×4.6mm）、注射器（25μL）
流动相甲醇+ 水（使用前应超声波脱气）、甲苯、苯甲醇、苯甲酸（均为分析纯）、未知混合样品（甲苯、苯甲醇、苯甲酸的混合溶液）
四、实验步骤
1. 以流动相为溶剂，配制甲苯、苯甲醇、苯甲酸的标准溶液，浓度均为10mg/mL。
2. 在老师的指导下开启液相色谱仪，设定操作条件。
3. 待仪器稳定后，分别用注射器进甲苯、苯甲醇、苯甲酸溶液各5μL，进样的同时，要作好记录保留时间。
4. 进未知混合样品5μL，记下各组分色谱峰的保留时间。
5. 以标准物的保留时间为基准，给未知样品各组分定性。
6. 根据标准物的峰面积，估算未知样品中相应组分的含量。
五、问题讨论
1. 解释未知混合样品中各组分的洗脱顺序。
2、若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件？
3、高效液相色谱仪由哪几大部分组成？
4、紫外光度检测器是否适用于所有的有机化合物，为什么？
六、注意事项
1、为获得理想的分离效果，保持较低的柱压力降，准确控制流动相的流量，防止微米级的机械杂质阻塞流路是实验操作中的关键。
2、必须掌握溶剂的纯化技术，样品最好用针头式过滤器（复杂样品事先要经过预处理），流动相须经0.45微米以下滤膜过滤。