安捷伦1100培训手册
Agilent 1100高效液相色谱仪操作指导书
1 操作规程1.1开机1.1.1 启动计算机，完成后系统自动运行Bootp Server程序。
打开色谱仪各组件电源，待Bootp Server里显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击【Instrument Online】图标启动化学工作站，工作站自动与仪器建立通讯。
1.1.2 打开10％异丙醇溶液控制阀，用针筒抽吸至管路中有液体流出。
调节控制阀松紧，控制流量至流出量约为每分钟5～15滴。
1.1.3 将流动相放入溶剂瓶中，打开Purge 阀，单击【Pump】→【control】，选中on，单击【OK】，启动泵。
再单击【Pump】→【Set up Pump】，设Flow为5ml/min，流动相A调节为100%，其它流路关闭，单击【OK】，则系统开始Purge流动相A。
3min后依次切换管路至B、C、D，确保所需管路均无气泡。
1.1.4 建立新方法时执行“1.2方法的编辑”的操作。
仪器配置无更改，运行已建立的方法则直接进入“1.3方法运行”操作。
1.2 编辑分析方法1.2.1 点击【Method】→【Edit entire method】或【New method】选项，进入方法编缉界面。
在Method Comments 中加入方法的信息如色谱条件、方法的用途等点击【OK】进入下一界面。
1.2.2 泵参数设定：设定流速、流动相比例、梯度/运行时间表、平衡时间等参数。
点击Ok进入下一界面。
1.2.3 柱温箱参数设定：在Temperature下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击【more>>】键,选中Same as left使柱温箱的温度左右一致。
点击【OK】进入下一界面。
1.2.4 UV检测器参数设定：在Wavelength下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在Peakwidth (Response time)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)，在Timetable 中可以Insert 一行输入随时间切换的波长。
Agilent 1100 LC现场培训教材-print
Agilent 1100 LC现场培训教材基本操作步骤:(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。
2、打开1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show T op T oolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow：5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purge valve。
11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。
12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积。
单击Ok。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：●从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis”外的三项，单击Ok，进入下一画面。
2、方法信息：●在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。
安捷伦1100工作站详细图文操作手册
每个模块右下方都有开关键，点击 后出现开泵、开灯等提示，选择 “Yes”即将泵、灯等打开。
点击“on”将打开所有模块，点 击“off”将关闭所有模块。
2021/2/16
7
Author：Tianyou Yue
改变仪器运行参数
对着仪器模块点击左键然后 点击Set up Pump…,显示右 面的对话框,在此对话框中可 以设置泵的参数。
2021/2/16
4
Author：Tianyou Yue
通过View改变GUI不同的显示风格
自动进样控制
打开Offline
显示快捷工具条 显示状态工具条
在线信号显示
显示仪器控制区
2021/2/16
5
Author：Tianyou Yue
输入流动相的量
对着瓶子击左键，然后左键单击Solvent bottles Filling，显示右面对话框
在Total Volume下输入溶剂瓶容量，一 般为1.00Liter，Actual Volume下输入溶 剂实际加入的量，比如0.5Liter
选中下面两个选项后，在溶剂低于 0.1Liter时停止样品分析，溶剂用完后泵 自动关闭。
2021/2/16
6
Author：Tianyou Yue
在工作站上开启仪器
Control为泵的控制，点击 Not Ready Information则显 示没有准备好或错误信息。 Help为在线帮助。
2021/2/16
柱箱、检测器、自动进样器等 参数改变操作与此相同
8
Author：Tianyou Yue
选择在线显示信号
在Online Plot上点击“Change”， 显出右面对话框，在此对话框中左 面为可用信号，右面为在线显示信 号，通过“Add””Remove”改变不 同的显示信号。
AgilentHPLC1100ChemStation高级操作培训(安捷伦科技公司)
2020年9月25日
授课教师 纪学海
2005-3-212020/9/25
Slide 1
HPLC 1100 Advance操作培训日程安排
第一天 第二天
上午： 1 课程简介及相互介绍 2 化学工作站各个工作界面介绍 3 完整方法的编辑、修改、存储及运行 4 HPLC 1100 仪器配置及参数设置
进样和运行位置
2005-3-212020/9/25
Slide 19
标准自动进样器的程序进样
2005-3-212020/9/25
Slide 20
Wellplate自动进样器参数
2005-3-212020/9/25
Slide 21
柱温箱参数设置
控温范围：低于室温10℃～80℃ 两个单独的加热区 安装切换阀可以进行柱切换 可以容纳30 cm长色谱柱 安装柱识别可以自动记录进样次 数
从View菜单选择Logbook，单击Current Logbook 显示当前Logbook内容。
2005-3-212020/9/25
Slide 12
第二章 方法编辑、保存
•方法的概念：方法是一个参数集，它包括分析一个样品所需要 的所有参数。
•方法文件名：xxx.m。
•方法的组成： 方法信息(Method information) 仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition) 数据分析参数(Data Analysis) 运行时间表(Run Time Checklist)
2005-3-212020/9/25
Slide 5
化学工作站Views菜单
显示当前日记本，察 看错误信息等内容
安捷伦1100液相色谱仪的使用说明书
（３） 单击Ｏｋ． （４） 从 Ｒｅｐｏｒｔ 菜单中选择 Ｐｒｉｎｔ
ｒｅｐｏｒｔ 则报告结果将打印到屏幕上 如想输出到打印机上 则单击Ｒｅｐｏｒｔ 底部的 Ｐｒｉｎｔ 钮
（四） 关机：
关机前 用 １００％的水冲洗系统２０分钟 然后用有机溶剂冲洗系统１０分钟 如ＡＣＮ 然后关泵 适于 反相色谱柱 ［正相色谱柱用适当的溶剂冲洗］
色谱柱： Ｚｏｒｂａｘ ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ Ｃ８，１５０ｍｍ ４．６ｍｍ ｉ．ｄ ２ 溶剂准备 色谱级纯或优级纯乙腈 ＡＣＮ 或甲醇 二次蒸馏水
基本操作步骤： （ 一） 开机 １ 打开计算机，进入Ｗｉｎｄｏｗｓ ＮＴ 或Ｗｉｎｄｏｗｓ ２０００ 画面，并运行Ｂｏｏｔｐ Ｓｅｒｖｅｒ程序
样 品 波 长 －－一般选择最大吸收处的波长 样品带宽ＢＷ —
一般选择最大吸收值一半处的整个宽度 ＢＷ Ｎｏｉｓｅ
参比波长—
一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域
参比带宽ＢＷ —
至少要与样品信号的带宽相等 许多情况下用１００ｎｍ作为缺省值 Ｐｅａｋ
AgilentHPLC1100工作站高级操作培训(1)
Update: 2005-3-21
Slide 23
Sample Signal and Reference Signal:
设置样品吸收波长与参比波长遵从下列规则：
•样品吸收波长选择在样品的最大吸收波长，而且在此吸收波长下没有流动相吸收的 干扰。
•选择样品信号的谱带宽度应覆盖样品吸收谱带的半峰宽（假设样品吸收谱带为高斯 峰）。
自动进样器的扩展功能
Update: 2005-3-21
Slide 35
色谱柱信息的输入
Update: 2005-3-21
Slide 36
VWD停泵扫描采集光谱
使用VWD停泵扫描的功能，可以采集样品的吸收光谱， 主要操作步骤如下：
1.在Online工作站界面的View菜单下打开VWD Scans窗口；
Slide 18
标准自动进样器的程序进样
Update: 2005-3-21
Slide 19
Wellplate自动进样器参数
Update: 2005-3-21
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柱温箱参数设置
控温范围：低于室温10℃～80℃ 两个单独的加热区 安装切换阀可以进行柱切换 可以容纳30 cm长色谱柱 安装柱识别可以自动记录进样次 数
Update: 2005-3-21
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可变波长检测器VWD的停泵扫描功能
扫描所得的流动相吸收光谱
Update: 2005-3-21
Slide 40
可变波长检测器VWD的停泵扫描功能
出现色谱峰时，点击 Sample Scan ， 扫 描 样品峰的吸收光谱
Update: 2005-3-21
Update: 2005-3-21
Slide 12
GAgilent 1100 LC5……CHS
Agilent 1100 LC现场培训教材（中文版）安捷伦科技有限公司生命科学与化学分析仪器部一、培训目的：●基本了解1100LC硬件操作。
●掌握化学工作站的开机，关机，参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。
二、培训准备：1、仪器设备：Agilent 1100LC●G1310A :(单元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。
● G1313A（自动进样器）。
● G1316A（柱温箱）。
● G1314A（VWD检测器）。
● G1362A（示差检测器）。
● G1315A/B/C (DAD检测器)。
● G1321A (FLD检测器)。
●色谱柱: Zorbax C18,150mm×4.6mm i.d。
2、溶剂准备：●色谱级纯或优级纯乙腈（ACN）或甲醇。
●二次蒸馏水基本操作步骤:(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows ＸＰ画面。
2、打开 1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 （联机）图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 单击“视图”菜单中的“显示顶部工具栏”，“显示状态工具栏”，“系统视图”,”样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge（冲洗）阀。
（逆时针旋３圈）7、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击设臵泵选项，进入泵编辑画面。
8 、设流速：３ml/min，单击确定。
9、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击控制泵选项，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击泵图标，设流速：0ml/min，单击确定。
关闭冲洗阀。
11、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击设臵泵选项，进入泵编辑画面，设流速：1.0ml/min。
Agilent1100色谱工作站操作培训课件 PPT资料共42页
安捷伦广州培训中心 于保生
14.11.2019
一、标样 1
C标 A标
RF
二、样品
1′
A样
外标法
∵ CRF A ∴ ES样 T R D FA 样
ES样 TRD F A 样 k
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14.11.2019
一、标样
1 ISTD
二、样品
C标 C标内 A标 A标内 RF标 RF标内
平均/取代 平均/取代
平均/取代 平均/取代
平均/取代 平均/取代
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14.11.2019
5、校正设置（Calibration Setting）
样品单位 Amount units
校正曲线 Calibration Curve
类型Type 原点Origin 权重Weight
6、设定报告格式
工作站 系统初始化：（主要目的：排除系统中的气泡）；
打开Purge 阀； 加大泵流量并开启泵，快速冲洗实验所用的各个通道，至无气泡从废液管排出，（eg. 设A通道100%，5mL/min，冲洗A通道至无气泡
排出；再分别依次冲洗所需其余通道B、C、D等）； 降低流量及溶剂比例成实验初始条件，并单击OK确认执行；（eg. 实验二的条件Flow: 1.0mL/min，A：20% (H2O), B: 80% (MeOH)； 关闭Purge阀，完成系统初始化。
后运行 时间表
压力限
Posttime Timetable PressureLimits
大于溶剂的截止波长20nm以上 ≥Slit 尽量靠近样品的最大吸收
安捷伦广州培训中心 于保生
14.11.2019
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No.24
第二章 HPLC 仪器工作原理
本章内容：
•往复活塞泵的结构及工作原理 •手动进样器（六通阀）结构及工作原理 •常见检测器检测原理
No.25
溶剂传输系统
往复活塞泵(单向阀)
Gold Seal Sapphire Insert Ruby Ball Spring Insert
60℃
0
5 Time in Minutes
10
No.14
柱效
Detector Response Inject
低柱效
高柱效
Time
No.15
计算柱效
tR
Inject
W 1/2
W Time
B
N = 16
t R WB L N
2 = 5.54
t R W 1/2
2
HETP =
No.16
扩散
范德姆特方程 The Van Deemter Equation
150 4.0
100 3.0 2.0
50
1.0
10
No.6
高效液相色谱 (HPLC)
进样口 混合器 泵 色谱图 色谱柱
检测器
溶剂
No.7
液相色谱类型
Types of Compounds Separated Neutrals Weak Acids Weak Bases
Mode
Stationary Phase
No.31
Necessity for More than One Detector
Selectivity
Flecainide in Serum
UV signal FL signal
Therapeutic concentration: 1.8mg/l, 20ul injected UV and fluorescence signal
第四天
下午：1 考试 2 发结业证 3 自由练习、讨论
No.3
第一章 色谱基础
本章内容：
•液相色谱发展史
•液相色谱的基本概念 •影响峰形扩展的因素
No.4
历史回顾
1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919)
碳酸钙吸附剂 石油醚 1940‘s - 分配色谱和纸色谱 1950‘s - 气相, 薄层，凝胶过滤色谱 梯度洗脱色谱 1960‘s - 商业高效液相色谱.
160 180 200 220
200
Wavelength (nm)
250
60
80
100
Mass/Charge
No.33
紫外－可见检测器
根据Beer定律，通过检测池透射光的强度与溶质浓度成正比。
Detector Cell Io C b I
Log
I0 = 入射光强度 I = 透射光强度 A = 吸光度
Photodiode Array (UV/Visible) Light Source Holographic Grating
第二天
上午：1 化学工作站View菜单介绍 2 方法的编辑、修改、存贮及运行 3 Agilent 各部件采集参数设置 4 填写样品信息表、进样分析（实验二） 下午：1 数据处理参数设置 （谱图优化、积分优化） 2 练习 3 谱图处理、手动积分
No.2
第三天
上午：1 各种定量方法原理及其优缺点 2 建立多级外标校正曲线，用外标法定量 3 练习（实验三） 下午：1 建立多级内标校正曲线，用内标法定量 2 再校正、设定报告类型 3 练习（实验四） 4 高级功能简介（序列、DAD光谱功能……） 上午：1 系统日常维护和保养 2 工作站故障诊断功能的应用 3 Agilent 1100泵的维护 （拆泵头，更换泵头消耗品） 4 Agilent 1100检测器的维护（VWD、DAD易耗品的 更换，清洗流通池） 5 练习 结业午餐
溶剂洗脱强度强
2000 1600 mA U 1000 600 0 2 4 Time (min.) 6 8 10
80% Acetonitrile 20% Water
对于反相色谱，增加10％的有机组成等于降低每个色谱峰的K’值的1/2 到2/3。
No.12
分离选择性
(α)
α
= k' B
k' A
A
B
A B
A B
2
3
1
2
1
2
t0=1
α
=
k' B k' A
=
1.64 1.58
=
1.04
α
=
1.15 0.85
= 1.35
α
=
0.95 0.63
=
1.50
改用不同的流动相 改变流动相的组成 改变流动相pH值 改变柱温 应用特殊的化学效应 改变固定相
改变分离选择性α的方法
No.13
温度对分离选择性α的影响
40 ℃
195 190 195 205 210 200-210 310 202, 255 220, 275
-C=CC=O - COOR - CHO - COOH - NO
2
-
max
= wavelength of absorption maximum
No.35
Instrumentation - Absorbance Detectors
R = 1.5
Excellent efficiency Poor selectivity R = 0.5
Excellent efficiency Moderate selectivity
R=4
No.23
如何提高分离度
通过下述方法增加保留时间:
选择合适的分离参数 增加色谱柱长度 增加固定相浓度
通过下述方法降低谱带宽度:
No.30
Necessity for More than One Detector
Sensitivity
UV-signal
WL 241/394
WL 270/388
WL 248/411
WL 302/420
WL 247/504
Fluorescence
Solv.: H2O/CH3OH= 10:90 PAH's extracted from soil; Col.: Sup.LC-PAH 150x4.6mm;
Agilent 1100 化学工作站 操作培训
Agilent 1100 化学工作站培训日程安排
第一天 上午： 1 2 3 下午：1 欢迎，相互介绍 液相色谱基础 HPLC仪器工作原理 Agilent 1100 硬件的结构及特点 （真空脱气机、泵、自动进样器、检测器） 2 Windows操作系统简介 3 化学工作站的重新安装、配置及启动 4 练习（实验一）
No.26
溶剂传输系统
减小流量脉冲－并联柱塞泵
P 单向阀 B A A B 柱塞A前进
Single Piston Delivery P
Combined Delivery
柱塞B后退
相消干扰 通常也需要阻尼器 增加了单向阀的使用数量
No.27
溶剂传输系统
消除流量脉冲－串联柱塞泵
单向阀
P
Agilent 1100 Series Pumps: Solvent Compressibility Compensation
High MW Compounds Polymers
Size Exclusion
Gel FiltrationAqueous Gel PermeationOrganic
No.8
色谱参数 －定性和定量
tR(B)
tR(A)
Detector Response
t0
Inject A B
W Time
A
W
B
t R = 保留时间 t 0 = 死时间
I0 I
= A = abc
a = 摩尔吸光系数 b = 检测池长度
c = 溶质浓度
No.34
发色团吸收波长
Chromophore
Amine Ethylene Ketone Ester Aldehyde Carboxyl Nitro Phenyl Naphthyl
Structure
- NH 2
max(nm)
Variable Wavelength (UV/Visible)
Slits Light Source Detector Element
flow Cell Mechanical Grating Monochromator
No.36
Instrumentation - Absorbance Detectors
Mobile Phase
Reversed-Phase
C-18, C-8, C-4, C-2
Water/Organic Modifiers
Ionics, Bases, Acids
Ion-Pair
C-18, C-8
Water/Organic Ion-Pair Reagent
Compounds Insoluble in Water, Organic Isomers
W = 峰底宽度
R=2
K’=
tR(B) - tR(A)
WA + WB
= 1.176
tR(B) - tR(A)
W1/2A + W1/2B
tR-t0 t0
No.9
不同R值的峰重叠
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
1.00
1.25