实验九HPLC法测定磺胺嘧啶片的含量(精)
磺胺嘧啶钠_实验报告
一、实验目的1. 了解药物杂质检查的意义。
2. 掌握杂质检查的原理和方法。
3. 掌握杂质限量的计算方法。
二、实验原理磺胺嘧啶钠是一种广谱抗菌药物，主要用于治疗敏感菌引起的各种感染。
在进行磺胺嘧啶钠的质量控制时，杂质检查是一个重要的环节。
本实验通过一系列的化学试剂和实验方法，对磺胺嘧啶钠中的杂质进行定性、定量分析，以确保药品的质量符合国家标准。
三、实验仪器及材料1. 试剂：蒸馏水、甲基红、溴麝香草酚蓝、硝酸、硝酸银、氯化钡、草酸铵、醋酸、对氨基苯磺酸--萘胺、锌粉、碱性碘化汞钾、氯化铵、氢氧化钙、硫酸、高锰酸钾、醋酸铵、盐酸、硫代乙酰胺、氢氧化钠、甘油。
2. 仪器：烧杯，50ml试管，50ml具塞量筒，电子天平，电炉，恒温水浴箱、烘箱。
四、实验方法与步骤1. 酸碱度取磺胺嘧啶钠样品10ml，加入甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10ml，加入溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
2. 氯化物、硫酸盐与钙盐取磺胺嘧啶钠样品，分置3支试管中，每管各50ml。
- 第一管中，加入硝酸5滴与硝酸银试液（0.1mol/L）1ml；- 第二管中，加入氯化钡试液（取氯化钡的细粉5g，加水使溶解成100ml）2ml；- 第三管中，加入草酸铵试液（草酸铵3.5g，加水使溶解成100ml）2ml；观察3支试管，均不得发生浑浊。
3. 重金属取磺胺嘧啶钠样品，加入硫代乙酰胺试液1ml，观察是否产生黄色沉淀。
4. 异常毒性物质取磺胺嘧啶钠样品，加入氢氧化钠试液1ml，观察是否产生沉淀。
5. 杂质限量计算根据实验结果，对杂质进行定量分析，计算杂质限量是否符合国家标准。
五、实验结果与分析1. 酸碱度实验结果显示，磺胺嘧啶钠样品的酸碱度符合国家标准。
2. 氯化物、硫酸盐与钙盐实验结果显示，磺胺嘧啶钠样品的氯化物、硫酸盐与钙盐含量均未超过国家标准。
3. 重金属实验结果显示，磺胺嘧啶钠样品未检测到重金属。
4. 异常毒性物质实验结果显示，磺胺嘧啶钠样品未检测到异常毒性物质。
药物分析实验习题答案
药物分析实验思考题参考答案实验一 甲硝唑片溶出度的测定-----------------------------------------------------------------------------------------------1 实验二 RP(Reverse Phase)-HPLC(High Performance Liquid Chromatography)测定醋酸地塞米松片的含量2 实验三 Gas Chromatography(GC,气相色谱法)测定维生素E软胶囊的含量-----------------------------------------2 实验四 永停滴定法测定磺胺嘧啶的含量-----------------------------------------------------------------------------------3 实验五 复方磺胺甲噁唑片的含量测定--------------------------------------------------------------------------------------4 实验六 阿司匹林Aspirin的红外光谱(IR, Infrared Spectroscopy)鉴别-------------------------------------------------4 实验七 薄层扫描法测定卷烟中尼古丁的含量-----------------------------------------------------------------------------5 实验八维生素B1注射液的含量测定------------------------------------------------------------------------------------------5 实验九 荧光分光光度法测定维生素B2片的含量-------------------------------------------------------------------------6 实验十AAS法龙牡壮骨颗粒中钙的含量--------------------------------------------------------------------------------------6实验一 甲硝唑片溶出度的测定1. 何为溶出度？哪些类型药物需做溶出度实验？溶出度：是指药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。
磺胺类药物检测(高效液相色谱法)
高效液相色谱法Байду номын сангаас
兽药残留检测
原理
样品经乙腈提取，混合型分散固相萃取净化，分步溶 剂洗脱，最后用HPLC法进行分析。
试剂
本实验用水均为去离子水，试剂为分析纯度或优级纯。 1．磺胺嘧啶（SD）对照品 纯度≥98.0%。 2．磺胺二甲嘧啶（SM2）对照品 纯度≥98.0%。 3. 磺胺间甲氧嘧啶（SMM）对照品 纯度≥98.0%。 4．磺胺甲恶唑（SMZ）对照品 纯度≥98.0%。 5．磺胺喹恶啉（SQ）对照品 纯度≥98.0%。 6．乙腈：色谱纯。
测定步骤
3．色谱条件
色谱柱：C18（4.6×250mm，5μm）； 流动相：磷酸三乙胺溶液-乙腈（25:75）； 进样量：20mL； 柱温：30℃； 检测波长：270nm；
测定步骤
4．定量测定
取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图， 按外标法以峰面积进行计算。
测定步骤
5．结果计算
按照下式计算试样中各种药物残留的含量：
试剂
15．标准贮备液（1mg/mL）：准备称取SD、SM2、SMM、SMZ、SQ对照品各 100mg，用乙腈溶解并稀释至100mL容量瓶中，必要时超声。贮存于0℃8℃冰箱中，有效期90d。 16．标准工作液：取上述标准贮备液，用流动相稀释，得到磺胺类药物 0.02μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL的标准混 合溶液。贮存于0℃-8℃冰箱中，有效期7d。
测定步骤
2．试样提取净化
称取（6±0.05g）均质动物组织样品于50mL离心管中，依次加入14mL氯仿乙 腈溶液、1.0ml 10%硫酸钠溶液，振荡提取15min，以5000r/min离心5min。准确吸 取10mL提取液，氮吹或浓缩至近干，用4mL氯仿乙腈溶液溶解后，分别加入C18粉、 中性氧化铝粉各100mg，涡旋混2min，8000r/min离心3min。准确移取1.0mL上清液 于另一10mL离心管中，氮气吹干，加入1.0mL流动相，涡混溶解残渣，过0.45μm 滤膜。待HPLC测定。
磺胺嘧啶生物利用度的测定实验报告
磺胺嘧啶生物利用度的测定实验报告以下是一份磺胺嘧啶生物利用度测定的实验报告:摘要：本实验采用口服给药的方式，通过雄性大鼠的生物利用度测定，探究磺胺嘧啶的生物利用度和药物动力学参数。
实验结果有助于深入了解磺胺嘧啶在人体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，为药物的临床应用提供科学依据。
一、实验目的：本实验旨在通过雄性大鼠的生物利用度测定，探究磺胺嘧啶的生物利用度和药物动力学参数，为药物的临床应用提供科学依据。
二、实验材料：1. 磺胺嘧啶钠原料药;2. 雄性大鼠;3. 注射用水;4. 氢氧化钠溶液;5. 甲基红指示液;6. 溴麝香草酚蓝指示液;7. 硝酸银试液;8. 氯化钡试液;9. 草酸铵试液;10. 蒸馏水。
三、实验方法：1. 磺胺嘧啶钠原料药的制备：将磺胺嘧啶钠原料药倒入烧杯中，加入适量的蒸馏水和氢氧化钠溶液，用电子天平准确称取一定量，加热煮沸，然后慢慢加入注射用水，直至磺胺嘧啶钠原料药完全溶解，然后过滤，得到磺胺嘧啶钠原料药溶液。
2. 雄性大鼠的生物利用度测定：将雄性大鼠随机分为对照组和实验组，每组 5 只。
对照组大鼠口服磺胺嘧啶钠原料药溶液，实验组大鼠口服相同剂量的磺胺嘧啶钠原料药溶液，然后用注射用水将大鼠处死，取血液样本，进行分析。
3. 药物动力学参数的计算方法：通过实验得到的数据，采用二室开放模型进行药物动力学参数的计算，药物动力学参数包括清除率、分布容积、半衰期等。
四、实验结果：1. 磺胺嘧啶钠原料药的制备：实验结果显示，磺胺嘧啶钠原料药的制备过程符合实验要求，制备的磺胺嘧啶钠原料药溶液质量符合要求。
2. 雄性大鼠的生物利用度测定：实验结果显示，磺胺嘧啶钠原料药溶液在雄性大鼠体内的生物利用度较高，口服给药的生物利用度约为 90%。
3. 药物动力学参数的计算方法：实验结果显示，磺胺嘧啶钠原料药溶液在雄性大鼠体内的药物动力学参数符合二室开放模型的要求，半衰期约为 3.2 小时，清除率为 0.16ml/(kg·h)。
磺胺嘧啶原料药的质量检验
氯化 物
干燥 失重
炽灼 残渣 ， 重金 属
取本品，在105°C干燥至恒重，减失重量不得过0.5% (通则 0831) 不得过0.1% (通则0841)。 取本品1.0g，依法检查（通则0821第三法），含重金属不得过 百万分之十。
取本品约0.5g，精密称定，照永停滴定法(通则0701)，用亚硝酸钠滴定液 (0.1mol/L )滴定。每lml亚硝酸钠滴定液(0. lmol/L )相当于25.03mg 的 C10H10N4O2S。
性状
鉴别
含量测定
检查
取一定量供试品至白色板上，用肉眼仔细观察其颜色，晶型等。必要时检查 溶解度
取本品约0.1g， 加水与0.4%氢氧 化钠溶液各3ml， 振摇使溶解，滤 过，取滤液，加 硫酸铜试液1滴， 即生成黄绿色沉 淀，放置后变为 紫色。
本品显芳香第一 胺类的鉴别反应 （通则0301) 。
药品1611
周帅康
化学名为N-2-嘧啶基-4-氨基苯磺酰胺 结构式
【性状】本品为白色或类白色的结晶或粉末，无臭，遇光色渐变暗。本品在 乙醇或丙酮中微溶，在水中几乎不溶，在氢氧化钠试液或氨试液中易溶，在 稀盐酸中溶解。
磺胺嘧啶又称磺胺哒嗪、地亚净，目前是我国临床上常用的一种磺胺类药 物。本品对溶血性链球菌、葡萄球菌、脑膜炎双球菌、肺炎球菌、淋球菌、 大肠杆菌、痢疾杆菌等敏感细菌以及沙眼衣原体、放线菌、疟原虫、星形 奴卡菌和弓形虫等微生物均有抑制作用。 磺胺嘧啶的优点是血中有效浓度较高，血清蛋白结合率低，药物易于渗入 脑脊髓液，为治疗流行性脑膜炎的首选药物，但近年来脑膜炎双球菌对磺 胺药的耐药菌株有所增加(国内报告20%，国外报告33%对本品耐药)。对本 品耐药者，可用青霉素治疗。 本品缺点为在尿路中较易析出结晶，因而需同服碳酸氢钠。
磺胺嘧啶检验操作规程欧洲药典
一、目的：制订详尽的工作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。
二、范围：适用于原料药磺胺嘧啶成品的标准操作程序。
三、职责：1. 检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；2. 化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。
四、内容：1. 性状：取1g样品于洁净的玻璃皿上观察，本品应为白色、黄白色或粉白色结晶粉末或晶体。
溶解度：本品在稀酸和稀碱液中溶解，在96%乙醇和丙酮中微溶，在水中不溶。
2. 鉴别：2.1 红外鉴别：2.1.1 仪器：红外分光光度计2.1.3试剂：光学溴化钾、磺胺嘧啶对照品2.1.3 测试方法：按《XYK/SOP-QC7040红外分光光度法检查操作规程》操作，本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。
2.2 薄层色谱：2.2.1 仪器：干燥箱、硅胶G薄层板、三用紫外仪、电子天平2.2.2 试剂：氨水、硝基甲烷、二恶烷、甲醇、磺胺嘧啶对照品2.2.3 测试方法：混合溶剂：浓氨水：甲醇（4:96）测试溶液：溶解20mg样品于3ml混合溶剂并稀释至5ml对照溶液：溶解20mg磺胺嘧啶对照品于3ml混合溶剂中并稀释至5ml展开剂：稀氨水-水-硝基甲烷-二恶烷（3:5:40:50）稀氨水:取浓氨溶液（25%~30% m/m）41g，用水稀释至100ml（100g/L~104g/L NH3）。
照《XYK/SOP-QC7024薄层色谱法检查操作规程》检查，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以稀氨水-水-硝基甲烷-二恶烷（3:5:40:50）为展开剂，展开至板的3/4后，在105℃下干燥，在254nm的紫外灯下检查，供试品溶液与对照溶液薄层板上的主斑点的大小和位置应保持一致。
2.3 熔点：2.3.1 仪器:熔点仪、油浴锅、干燥箱2.3.2 试剂：硅油、甲苯2.3.3 测定方法：取样品3.0g置于干燥洁净的试管中，将试管以45°倾斜浸泡在270℃的硅油中，样品将会分解形成白色或者黄白色的升华物，取升华物加入甲苯进行重结晶，结晶物在100℃条件下干燥，按XYK/SOP-QC7036熔点检验操作规程测定，其熔点应为123～127℃。
紫外分光光度法测定复方磺胺嘧啶片的含量
C
N N NH2
NH2
C. TMP + SD. 溶剂：盐酸溶液
（9 → 1000）
H2N
磺胺嘧啶(SD)
甲氧苄啶(TMP)
A
SD 和TMP分子结构中均有共轭双键，显紫外 吸收特征。 在盐酸溶液（9→1000）中，SD的 λmax = 308 nm，而此波长处TMP无吸收，所以可直接 测定SD的含量。
吸光度； 另取 SD 对照品适量 (0.2g) ，精密称定，加 0.4 % 氢氧化钠溶液使 SD 溶解，并用 0.4% NaOH 稀释至 100 ml ；精密量取该溶液 2 ml ， 置另一 100 ml 量瓶中，加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，得 每 1 ml 中约含 40 g 的溶液，同法测定。
14
五、思考题
武汉大学药学实验教学中心
1．双波长分光光度法测定复方磺胺嘧啶片中TMP含量 的主要误差来源是什么？
2．简述差示分光光度法消除干扰吸收、测定组分含量 的基本原理。
15
计算分光光度法
比色法
吸光度后，按下式计算供试品溶
液中待测物的浓度：
C供试
A供试 A对照
C对照
5
二、实验原理 一、中心建设简况
武汉大学药学实验教学中心
（三）双波长分光光度法消除干扰吸收、测定含量的原理
ab ab a b a b A A A ( A A ) ( A A 2 1 1 2 2 ) 1
100 100 W 5 AR W
△AX 和△AR——供试液和对照液在测定波长（λ2）和参比波长（λ1）处测得吸光度之差值
CR ——对照品溶液（1）的稀释液的浓度，mg/ml
W ——称样量，g
HPLC测定磺胺多辛粗品含量方法的建立医药
HPLC测定磺胺多辛粗品含量方法的建立，医药，《医药》：李瑾周淑琴摘要：建立HPLC方法测定磺胺多辛（SDM’）粗品含量的方法。
采用ZORBAX SB C18 (4.6 mm ×250 mm，5 μm)色谱柱，乙腈：磷酸盐缓冲液(0.01 mol L-1磷酸二氢钾溶液，加入1mL 三乙胺，用磷酸调pH为2.5)[38：62]为流动相；流速为1.0 mL ／min；检测波长为270 nm；进样体积为5uL。
结果显示：SDM’的进样质量在0.1011 ~ 5.0529 ug 范围内与主峰面积呈良好的线性关系，相关系数R=0.9998。
平均回收率为99.36％，RSD为1.3％(n=9)。
该方法简便、灵敏、准确度高，适用于SDM’粗品的含量测定。
关键词：高效液相色谱；磺胺多辛；含量磺胺多辛(Sulfadoxine)，为长效磺胺类药物，具有广谱抑菌作用。
可用于气管炎、溶血性链球菌、肺炎、菌痢、尿路感染、皮肤软组织感染及预防风湿热等。
本品与乙胺嘧啶联合可用于防治耐氯喹的恶性疟原虫所致的疟疾。
在本品合成反应的中间阶段，往往杂质较多，利用永停滴定法测定磺胺多辛粗品的含量，不能确切反映中间体的真实含量，而且作为中间控制，需要快速提供检测结果。
本文采用外标法进行SDM’的含量测定，该法分析时间短，分离度为1.5，且具有操作简便，测定准确、精密等优点，为更好的控制原料的质量提供了依据。
1 仪器与试药Agilent 1260高效液相色谱仪，含四元泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器和Agilent ChemStation色谱工作站（美国安捷伦公司）；MS105DU分析天平（0.01 mg，梅特勒-托利多仪器有限公司）；FA2104N分析天平（0.1 mg，上海精密科学仪器有限公司）；SK5200超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；Milli-Q型超纯水制备仪（密理博中国有限公司）。
磺胺多辛对照品（批号：SZBED45XV，西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司）；SDM’粗品3批（批号分别为140416、140522和140829，自制）；磷酸二氢钾（优级纯，国药集团化学试剂有限公司）；磷酸（优级纯，国药集团化学试剂有限公司）；三乙胺（优级纯，国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，默克化工技术（上海）有限公司）；水（自制超纯水）。
【免费下载】实验九 双波长分光光度法测定复方制剂含量
实验器材：
试药：磺胺嘧啶对照品，甲氧苄啶对照品，复方磺胺嘧啶片，安替比林对照品，安痛 定注射液。
仪器：紫外分光光度仪，石英比色皿，100mL 容量瓶，移液管。
实验内容与方法：
（一）复方磺胺嘧啶片（Compound Sulfadiazine Tablets） 本品每片中含磺胺嘧啶（C10H10N4O2S）应为 0.360~0.440g；含甲氧苄啶（C14H18N4O3） 应为 45.0~55.0mg。 [处方]
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根保通据护过生高管产中线工资敷艺料设高试技中卷术资配，料置不试技仅卷术可要是以求指解，机决对组吊电在顶气进层设行配备继置进电不行保规空护范载高与中带资负料荷试下卷高总问中体题资配，料置而试时且卷，可调需保控要障试在各验最类；大管对限路设度习备内题进来到行确位调保。整机在使组管其高路在中敷正资设常料过工试程况卷中下安，与全要过，加度并强工且看作尽护下可关都能于可地管以缩路正小高常故中工障资作高料；中试对资卷于料连继试接电卷管保破口护坏处进范理行围高整，中核或资对者料定对试值某卷，些弯审异扁核常度与高固校中定对资盒图料位纸试置，.卷编保工写护况复层进杂防行设腐自备跨动与接处装地理置线，高弯尤中曲其资半要料径避试标免卷高错调等误试，高方要中案求资，技料编术试5写交卷、重底保电要。护气设管装设备线置备4高敷动调、中设作试电资技，高气料术并中课3试中且资件、卷包拒料中管试含绝试调路验线动卷试敷方槽作技设案、，术技以管来术及架避系等免统多不启项必动方要方式高案，中；为资对解料整决试套高卷启中突动语然过文停程电机中气。高课因中件此资中，料管电试壁力卷薄高电、中气接资设口料备不试进严卷行等保调问护试题装工，置作合调并理试且利技进用术行管，过线要关敷求运设电行技力高术保中。护资线装料缆置试敷做卷设到技原准术则确指：灵导在活。分。对线对于盒于调处差试，动过当保程不护中同装高电置中压高资回中料路资试交料卷叉试技时卷术，调问应试题采技，用术作金是为属指调隔发试板电人进机员行一，隔变需开压要处器在理组事；在前同发掌一生握线内图槽部纸内故资，障料强时、电，设回需备路要制须进造同行厂时外家切部出断电具习源高题高中电中资源资料，料试线试卷缆卷试敷切验设除报完从告毕而与，采相要用关进高技行中术检资资查料料和试，检卷并测主且处要了理保解。护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
磺胺嘧啶方法学验证报告
磺胺嘧啶微生物限度检查方法学验证报告1适用范围本验证方案适用于磺胺嘧啶微生物限度检查法的验证。
2目的建立该产品的微生物限度检查方法，并对其有效性进行评价，确保试验方法的完整性，保证检验结果的可靠性。
3概述3.1通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的需氧菌、霉菌及酵母菌的测定；确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查。
根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
4验证所需要的仪器设备及文件4.1验证需用仪器设备4.2验证所需要的文件及存放地方5可接受的限度范围标准5.1氢氧化钠微生物限度检查质量标准5.2计数方法适用性试验结果判断在3次独立的平行试验中,采用薄膜过滤法,若菌液对照组生长菌落符合要求，阴性对照组无菌落生长且试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5~2范围内；若各试验菌的回收试验均符合要求，照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。
5.3控制菌检查方法验证结果判断在3次独立的平行试验中，采用薄膜过滤法(沙门氏菌用平皿法）,若阳性对照组检出试验菌（检出试验菌判断如下 5.3.1），阴性对照组未检出试验菌且实验组检出试验菌（检出试验菌判断如下 5.3.1）按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；若试验组未检出试验菌，应采用其他方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行验证。
5.3.1大肠埃希菌检查方法适用性试验结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠杆菌。
5.3.2金黄色葡萄球菌检查方法适用性试验结果判断若甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上有黄色菌落或外周有黄色环的白色菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为金黄色葡萄球菌；若平板上没有与上述形态特征相符或疑似的菌落生长，或虽有相符或疑似的菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。
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实验九 HPLC法测定磺胺嘧啶片的含量
【实验目的】1.掌握仪器分析药品制剂的方法。
2.熟悉HPLC的基本操作。
【实验内容】
1．色谱条件：C18柱，以乙腈-0.3%醋酸铵（20：80）为流动相，检测波长
260nm，理论板数不得低于3000。
2．测定法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于磺胺嘧啶0.1g），置100ml量瓶中。
加0.1mol/LNaOH10ml，振摇，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度。
精密量取40μl注入色谱仪，记录色谱图。
另取磺胺嘧啶对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/LnaOH2.5ml，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。
同法测定。
按外标法以峰面积计算，即得。
【色谱图】
【实验数据记录及处理】
计算公式：标示量%=AX·CR·V·D·W平/AR·W样·W标
中国药典（2010年版）规定应为标示量的95.0%~105.0%。
【实验结论】本品依法测定含量，药典规定。