免疫组化结果的分析和判断汇总.
免疫组化结果判断及常见问题的分析
精选
25
精选
26
四、免疫组化异常着色及对策
1.非特异性着色及其对策
非特异性着色原因 操作过程冲洗不充分 内源性过氧化物酶
内源性生物素 电荷吸附 抗体不纯
切片制片不当 加试剂后切片干燥
对策 每步冲洗3×5min
3％H2O2封闭 使用生物素阻断试剂盒阻断
非免疫动物血清封闭
采用单克隆抗体
改善取材和制片
2.染色的不均一性 阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布 染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少
3.排除人为造成的非特异性染色 切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。
4.颗粒性显色 DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。
精选
5
免疫组化标准化照片
CK10 ER CD44v6
精选
6
精选
切片制片不当 加试剂后切片干燥
对策 每步冲洗3×5min
3％H2O2封闭 使用生物素阻断试剂盒阻断
非免疫动物血清封闭 采用单克隆抗体 改善取材和制片 防止切片干燥
精选
43
无信号片
精C选D30
44
2. 染色的假阴性及其对策
染色假阴性原因
组织处理不当（固定、浸蜡） 一抗与二抗种属连接错误 抗体失效 显色系统不相适配 操作不当，遗漏重要步骤
精选
CD34
21
K-ras
精选
VEGF
22
附：定量分析——图象处理系统
1、图象处理：
利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变 换、特征提取和测量。 1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正 畸变。 2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征 进行测量。
精选
免疫组化结果判断及常见问题的分析
非特异性染色
总结词
非特异性染色是由于抗体与非目标组织成分的交叉反应导致的。
详细描述
非特异性染色是免疫组化实验中常见的问题，通常是由于抗体与组织中非目标成分的交叉反应。为了减少非特异 性染色，可以尝试降低抗体浓度、增加洗涤步骤或使用阻断剂等方法。
背景染色
总结词
背景染色是由于组织中其他成分的非特异性染色或由于抗体与组织中其他成分的交叉反应导致的。
免疫组化结果判断及常见问题 的分析
目
CONTENCT
录
• 免疫组化基本概念 • 免疫组化结果解读 • 常见问题及解决方法 • 免疫组化在临床上的应用 • 免疫组化技术新进展
01
免疫组化基本概念
定义与原理
定义
免疫组化是一种利用抗原-抗体反应原理，通过标记的抗体在组织 或细胞中检测特定抗原的方法。
免疫组化可以与其他技术如原位杂交、原位PCR等联合应用，以同时检测抗原和 相关基因的表达，提供更全面的分子信息，有助于深入了解疾病的发生发展机制 。
联合应用多种技术可以相互补充，提高检测的敏感性和特异性，为临床诊断和治 疗提供更可靠的依据。
THANK YOU
感谢聆听
数字免疫组化技术
数字免疫组化技术是一种基于数字图像分析的免疫组化技术 ，通过高分辨率数字成像系统获取组织切片图像，利用计算 机软件进行图像分析和处理。
数字免疫组化技术能够实现自动化、高通量的组织切片分析 ，提高检测效率，减少人为误差，特别适合大规模临床筛查 和流行病学研究。
免疫组化与其他技术的联合应用
04
免疫组化在临床上的应用
肿瘤诊断与鉴别诊断
肿瘤诊断
免疫组化技术可以检测肿瘤组织中特定抗原 的表达，从而确定肿瘤的性质和来源。通过 对不同肿瘤标志物的检测，有助于医生对肿 瘤进行准确的诊断。
免疫组化实验结果分析
免疫组化实验结果分析在免疫组化实验中，结果分析是一个关键的步骤，它能够帮助研究者准确评估目标分子的表达情况。
通过对免疫组织染色结果的观察和分析，我们可以了解到免疫反应的程度和位置，从而为研究提供有力的依据和指导。
本文将围绕免疫组化实验结果的分析展开讨论。
1. 实验结果描述在开始分析之前，首先要对实验结果进行描述。
描述应当包括样本编号、实验日期、染色报告等基本信息，并对结果进行文字描述，如颜色的强度、分布情况、阳性细胞数量等。
此外，还可以结合图像或照片进行结果展示，以便更直观地表达实验结果。
2. 染色结果的分析根据染色结果的颜色强度和阳性细胞的分布情况，可以分析免疫反应的程度和位置。
通常，颜色较深且阳性细胞较多的区域表示目标分子的高表达区域，而颜色较浅或无阳性细胞的区域则表示其低表达或无表达区域。
通过对颜色和阳性细胞数量的定量分析，可以量化目标分子的表达水平，并与其他样本进行比较和分类。
3. 阳性细胞计数和分布情况在免疫组化实验中，阳性细胞的计数和分布情况是结果分析的重要指标之一。
通过对染色结果图像的定量分析，可以计算出阳性细胞的数量，并使用统计学方法对不同样本之间的差异进行比较和验证。
此外，还可以通过细胞计数的分析，了解阳性细胞在组织中的分布情况，从而为目标分子的功能和作用机制提供线索。
4. 结果的统计学分析除了定性和定量分析，还可以使用统计学的方法对结果进行进一步的分析。
例如，可以计算平均值、标准差和标准误等统计指标，并进行方差分析和t检验等统计检验，以评估不同样本之间的显著性差异。
此外，还可以使用聚类分析、主成分分析等多元分析方法，对大规模的实验结果进行系统整理和分类。
5. 结果的生物学意义和临床应用最后，要将实验结果的分析归纳到生物学意义和临床应用上。
通过对目标分子的表达情况进行分析，可以了解其在生理和病理过程中的功能和作用机制，进而为相关疾病的预防、诊断和治疗提供新的线索和靶点。
此外，还可以将实验结果的分析与其他实验数据进行综合，构建更完整和准确的分子机制模型。
免疫组化常见结果及解读
免疫组化常见结果及解读免疫组化是一种常用的实验技术，用于检测组织或细胞中特定蛋白质的表达情况。
通过免疫组化可以确定细胞或组织中特定蛋白质的存在、定位和表达水平，从而为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。
下面将介绍免疫组化常见结果及其解读。
1. 阳性结果：阳性结果表示目标蛋白质在组织或细胞中存在。
阳性结果可以分为强阳性、中阳性和弱阳性。
强阳性表示目标蛋白质的表达水平很高，中阳性表示表达水平适中，弱阳性表示表达水平较低。
阳性结果的解读需要结合临床病史和其他检查结果来综合判断。
2. 阴性结果：阴性结果表示目标蛋白质在组织或细胞中不存在。
阴性结果可能有多种原因，如目标蛋白质在该组织或细胞中不表达、表达水平很低或实验操作不当等。
阴性结果的解读需要排除其他可能的原因，并结合临床病史和其他检查结果来综合判断。
3. 异常表达：有时免疫组化结果显示目标蛋白质的表达情况与正常组织或细胞有明显差异，称为异常表达。
异常表达可能是疾病的标志，也可能是实验操作不当或其他因素导致的假阳性结果。
解读异常表达结果需要结合临床病史和其他检查结果来综合判断。
4. 亚细胞定位：免疫组化可以确定目标蛋白质在细胞中的亚细胞定位。
常见的亚细胞定位结果包括细胞核、细胞质、细胞膜和细胞器等。
亚细胞定位结果的解读可以提供有关目标蛋白质功能和调控机制的重要信息。
5. 异常分布：有时免疫组化结果显示目标蛋白质在组织中的分布与正常组织有明显差异，称为异常分布。
异常分布可能是疾病的标志，也可能是实验操作不当或其他因素导致的假阳性结果。
解读异常分布结果需要结合临床病史和其他检查结果来综合判断。
6. 异常表达模式：有时免疫组化结果显示目标蛋白质的表达模式与正常组织有明显差异，称为异常表达模式。
异常表达模式可能是疾病的标志，也可能是实验操作不当或其他因素导致的假阳性结果。
解读异常表达模式结果需要结合临床病史和其他检查结果来综合判断。
总之，免疫组化常见结果的解读需要结合临床病史和其他检查结果来综合判断。
免疫组化结果判断标准
免疫组化结果判断标准免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过使用特定的抗体来检测组织样本中特定蛋白质的方法。
通过对免疫组化结果进行判断和分析，可以为临床医生提供重要的诊断和预后信息。
在免疫组化结果的判断中，常见的标准有阳性标记、定量分析、判定阴性、强度评分等。
免疫组化结果按照阳性标记分为阴性和阳性。
阳性结果表示目标蛋白质的表达存在，而阴性结果表示目标蛋白质的表达不存在。
在判断免疫组化结果时，需要注意结果的可靠性和准确性。
一般来说，阳性结果需要出现明显的染色反应，在组织样本中产生特定的颜色变化，而阴性结果则需要获得几乎无染色反应的结果。
除了阳性标记外，还可以通过定量分析来判断免疫组化结果。
定量分析可以通过使用计算机软件或图像分析系统，对免疫组化结果图像中的染色强度和染色面积进行计算和量化。
通过定量分析，可以量化目标蛋白质的表达水平，并与其他样本进行比较和分析，从而得出更加客观和可靠的结果。
在免疫组化结果的判断中，还有一种常见的标准是判定阴性。
判定阴性是指使用阴性对照和负对照来确定免疫组化染色的结果是否是阴性。
阴性对照是指在免疫组化实验中使用无目标蛋白质的组织样本或细胞，负对照是指在免疫组化实验中使用无抗体的组织样本或细胞。
通过对阴性对照和负对照的染色结果进行比较和分析，可以确定是否存在非特异性染色或假阳性结果。
除了以上几种标准外，免疫组化结果的判断还可以通过强度评分进行。
强度评分是根据染色的强烈程度对结果进行判断和评分的方法。
一般来说，免疫组化结果的强度可以分为负（0）、弱（1+）、中（2+）和强（3+）四个等级。
这种评分方法可以为临床医生提供蛋白质表达的定量信息，并帮助他们作出更加准确和可靠的诊断和预后判断。
总之，免疫组化结果的判断标准包括阳性标记、定量分析、判定阴性和强度评分等。
通过合理地应用这些标准，可以为临床医生提供重要的蛋白质表达信息，从而指导临床诊断和治疗决策。
免疫组化实验结果分析
免疫组化实验结果分析免疫组化实验作为一种常用的分子生物学实验技术，广泛应用于医学研究和临床诊断中。
免疫组化实验通过使用特异性抗体与目标分子结合，并通过染色反应来检测分子的存在和定位位置，从而提供关于生物体内蛋白质表达的重要信息。
本文将对免疫组化实验结果进行深入分析，探讨其应用和解读。
免疫组化实验结果分析的第一步是对免疫组织化学染色图像的观察和评估。
通常，免疫组化实验后的标本会显现出不同程度的染色反应，而反应的强度则取决于目标分子在样本中的表达水平。
通过观察染色的颜色强度和分布范围，我们可以初步判断目标分子的表达情况。
一般来说，染色越强，表示目标分子的表达水平越高。
然而，仅凭免疫组化实验的染色结果进行定性判断是远远不够的，我们还需要进一步进行定量分析和解读。
为了准确评估目标分子的表达水平，在免疫组化实验中常会使用数字图像分析技术。
这种技术可以通过对数字图像进行计算和统计分析，获得更加客观的结果。
数字图像分析的方法有很多种，其中最常用的是计算染色物的光密度。
通过光密度值的计算和比较，我们可以比较不同样本之间目标分子表达的差异。
通常情况下，光密度越高表示目标分子的表达水平越高，反之则较低。
除了光密度，我们还可以利用数字图像分析来计算目标分子在特定区域的表达强度。
通过在数字图像上划定感兴趣的区域，计算其中目标分子的表达强度，可以帮助我们更加准确地评估目标分子的表达水平。
同时，这种方法也可以用来检测目标分子在不同区域之间的表达变化。
另外，在免疫组化实验的结果分析中，我们还需要考虑到一些可能的干扰因素。
例如，免疫组化实验中的染色剂和抗体可能会出现非特异性反应，导致某些背景噪声。
此外，不同的样本处理和实验条件可能会对结果产生一定的影响。
因此，在结果的解读过程中，我们需要仔细分析和对比不同样本之间的差异，并确保所得的结论是可靠和可重复的。
免疫组化实验结果的分析不仅可以用于科学研究，还可以在临床诊断中发挥重要作用。
免疫组化实验结果分析
免疫组化实验结果分析免疫组化实验是一种用特异性抗体与目标蛋白质相互作用的技术，通过对细胞内或组织切片中目标分子的免疫染色来观察、分析目标分子在细胞或组织中的表达与定位情况。
本文将对免疫组化实验结果进行分析，以揭示其在研究领域中的应用与意义。
1. 实验设计与控制免疫组化实验前，首先需要进行实验设计。
在实验设计过程中，应明确需要检测的目标分子以及合适的抗体选择。
同时，合理设定实验组与对照组，用以对比分析不同处理条件下目标分子的表达变化。
控制变量的同时，还需确保实验操作的准确性和可重复性。
2. 结果解读与定量分析在免疫组化实验中，常见的结果表达形式是显微镜下对目标分子免疫染色的图像。
通过观察图像，可以初步判断目标分子在不同组织、细胞种是否存在表达，并探讨其表达差异。
同时，需着重对结果进行定量分析，使用专业软件对图像进行数字化处理，计算光密度或荧光强度等指标，以实现对不同样品之间的比较与分析。
3. 结果分析与比较在进行免疫组化实验结果分析时，需要将不同样品之间的实验结果进行对比与分析，以探究目标分子的表达变化与信号定位。
常见的分析方法包括：(1) 目标分子的表达量分析：通过计算光密度或荧光强度等指标，对不同样品中目标分子的表达量进行定量比较。
可以使用统计学方法对数据进行处理，比如均值、标准差等分析，以评估目标分子的表达水平是否存在显著差异。
(2) 信号定位与定量：通过观察光学显微镜下的染色结果图像，可以初步判断目标分子在细胞或组织中的定位情况。
同时，也可以使用数字化图像分析软件，对染色信号进行定位与定量，以精确描述目标分子在特定位置的表达情况。
(3) 目标分子与疾病发生的关联性：通过对不同疾病样本中目标分子的表达和定位进行研究，可以分析目标分子与疾病的关联性。
比如，某一分子在肿瘤组织中的高表达与某种癌症的发生相关性等。
4. 结果讨论与展望在对免疫组化实验结果进行分析后，可以从结果出发进行讨论与展望，以揭示目标分子的功能与潜在作用。
免疫组化实验结果的判定和分析
免疫组化实验结果的判定和分析免疫组化实验结果的判定和分析就实验结果而言，免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容。
只有严格的实验设计、标准的实验操作、专业化的结果分析才能满足客户的要求，更好地为客户提供最优质的服务。
免疫组化结果的判定原则：1•必须同时设对照染色。
没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。
2•抗原表达必须在特定部位。
如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53 蛋白应定位在细胞核内；EMA 应定位在细胞膜上等等。
不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。
3•阴性结果不能视为抗原不表达。
由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。
4•尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。
因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。
5•对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。
对照染色设计：（一）对照染色的目的设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。
假阴性的原因主要有三种：①组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；②抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）；③染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液pH 和离子强度不当等。
假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：①自发荧光或内源酶等干扰；②抗体试剂不纯（特别是一抗）；③操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；④Fc 受体的干扰，等等。
（二）对照的种类及其选用目的对照染色大致可分为四类：即阳性组织对照、阴性组织和阴性试剂对照及自身对照。
•阳性组织对照指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。
正确的结果应呈现阳性，目的是为了证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。
免疫组化实验结果分析
免疫组化实验结果分析免疫组化（Immunohistochemistry）是一种通过特异性抗体和组织切片相互作用的方法，用于检测和定位蛋白质在组织或细胞中的表达情况。
通过观察免疫组化实验的结果，我们可以深入了解细胞或组织中的分子水平变化，并从中推断出相关的生物学功能和病理变化。
在进行免疫组化实验之前，我们需要准备组织切片。
通常，组织切片是通过石蜡包埋和切片制备的。
然后，我们需要选择适当的抗体，并确定最佳的抗体浓度和反应条件。
接下来，我们开始进行免疫组化实验。
免疫组化实验的结果分析过程中，我们首先需要观察组织切片的染色情况。
正常的染色应呈现出明显的染色反应，并且染色反应应该出现在目标蛋白所在的细胞或组织区域。
如果染色不明显或者染色反应位点有其他异常情况，我们需要重新评估实验操作步骤和条件。
其次，我们需要分析免疫组化实验的染色强度。
通常，我们可以使用显微镜观察染色结果，并根据染色反应的颜色深浅来判断染色强度。
常见的判断标准有阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性。
同时，我们还可以使用图像处理软件对染色结果进行定量分析，得到精确的染色强度数值。
免疫组化实验的结果分析还需要考虑染色的定位情况。
正常情况下，我们期望目标蛋白的染色结果在细胞或组织的特定位置出现，如细胞核、细胞浆或细胞膜等。
如果染色结果出现在不适合的位置，或者出现在其他异常位置，我们需要仔细评估实验操作是否存在问题。
最后，我们还需要对染色结果进行定性和定量的分析。
通过对免疫组化实验的结果定性分析，我们可以判断目标蛋白在组织中的表达情况是阳性还是阴性。
同时，通过对染色结果进行定量分析，我们可以计算出目标蛋白的表达水平，并与其他样本进行比较。
总结而言，免疫组化实验结果的分析需要综合考虑染色情况、染色强度、染色定位以及定性和定量的分析。
通过对免疫组化实验结果的准确分析，我们可以进一步深入了解细胞或组织中蛋白质表达的情况，为生物学研究和病理诊断提供重要的信息。
免疫组化实验结果分析
免疫组化实验结果分析免疫组化实验是一种常用的检测方法，用于检测组织或细胞中特定蛋白质的表达情况。
通过使用特异性抗体与待检测蛋白质结合，再通过染色或荧光技术来观察和分析结果。
本文将对免疫组化实验结果进行详细的分析和解读。
1. 实验方法本实验采用了免疫组化染色法来检测特定蛋白质的表达情况。
其中，我们选择了抗体A作为主要的检测抗体，用于对待测样本中目标蛋白质进行特异性结合。
同时，我们还使用了辅助抗体B，用于与抗体A结合并提供染色或荧光信号。
2. 样本来源本实验使用的样本来自于XXX组织/细胞，这是一个重要的背景信息。
样本的来源可能对结果的解读产生一定的影响，因此需要在结果分析时进行综合考虑。
3. 实验结果分析3.1 强阳性表达强阳性表达表示目标蛋白质在待测组织/细胞中高度表达。
在免疫组化染色结果中，强阳性表达通常呈现出深色的染色信号或明亮的荧光信号。
强阳性表达可能具有以下几个意义：3.1.1 与生理功能相关某些蛋白质的强阳性表达可能与特定的生理功能相关。
例如，在肿瘤标记物的检测中，强阳性表达可能意味着该蛋白质与肿瘤发生发展密切相关。
3.1.2 指示疾病状态在疾病的诊断中，某些蛋白质的强阳性表达可能成为判断疾病的重要指标。
例如，在乳腺癌的诊断中，HER2/neu蛋白的强阳性表达是肿瘤治疗策略选择的重要依据。
3.2 弱阳性表达弱阳性表达表示目标蛋白质在待测组织/细胞中低度表达。
在免疫组化染色结果中，弱阳性表达通常呈现出浅色的染色信号或弱荧光信号。
3.2.1 可能存在变异弱阳性表达可能意味着目标蛋白质表达量较低，但仍存在。
这可能与样本来源、疾病进展阶段或其他因素相关。
3.2.2 值得进一步研究虽然弱阳性表达表明目标蛋白质的表达水平较低，但仍值得进一步研究其在特定生理或病理过程中的作用和意义。
4. 阴性表达阴性表达表示目标蛋白质在待测组织/细胞中未被检测到。
在免疫组化染色结果中，阴性表达通常呈现出无染色信号或荧光信号。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
结果的正确判断。内容包括定性、定位
和定量三方面。
免疫显色强度和阳性细胞密度是定
性定量指标，实际工作中常采用强度和
密度结合的方法综合计量，与抗原含量 有关；阳性细胞的着色形态及组织分布
特点主要是定位指标，与功能有关。
一、阳性标记免疫特征：分 " 弱 (+) 、中(++)、强(+++)"三级。免疫荧光法（ FITC为例） 则表现为浅绿色荧光、明显
这类阴性试剂对照的选用原则是：
①空白对照不能省，其他对照在预实验
中应尽量多做，尤其是应用新抗体试剂 ；②对照必需与实验片同步进行染色； ③对照的结果应附合要求。
⒋自身对照
是指在同一标记切片上的自
身组织成分的阴性背景对照。即与靶抗原 阳性反应细胞或成分相邻的阴性背景结构 的显色，结果应为阴性或着色较浅，需与 阳性着色成分呈鲜明对比。目的在于排除
第一抗体上清液取代第一抗体，其他步骤 不变的免疫染色试剂对照。结果应是阴性 或阳性着色明显减弱（吸收不全时）。
⑷抑制试验 是指用标记抗体和未标记抗
体（可以是一抗，也可以是二抗或桥抗
体）两者的混合物作试剂，其他步骤不 变的免疫组化染色试剂对照，结果其阳 性着色应成比例的减弱（等量或 1 ： 9 ） 。此试剂对照多用于直接法。
三 、 阳 性 标 记 组 织 学 特 征 （ 以 HRPDAB/H2O2为例） 免疫组化染色阳性细胞在 组织中的分布排列形式可以有如下 7 种：① 局灶型；②弥漫型；③片块型；④网状型； ⑤腺管型；⑥腔缘型和⑦菊团型，等。这主
要取决于抗原抗体复合物在细胞内的分布和
阳性细胞在组织内的群体分布特点。
免疫组化结果的分析和判断
第一节 免疫组化结果的判断原则
免疫组化结果的判断原则概括起来有 以下几点：
⒈必须同时设对照染色。没有对照染 色的免疫组化染色结果是不可信的。 ⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应 定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内； PCNA 及 p53 蛋白应定位在细胞核内； EMA 应
四、阳性标记强度特征
依照细胞阳性
着色程度（抗原含量），可分为弱阳性 （ + ）┅ 1 分；中等阳性（ ++ ）┅ 2 分；
强阳性（+++）┅3分。依照阳性细胞数
量，可分为：弱阳性（+ ，指阳性细不当(组织固定不及时或固定 不良所导致的抗原弥散移位、洗涤不充 分所导致的游离试剂残留等)。
纠正的方法视原因而异，可在预实 验基础上，采用有针对性的纠正对策，
即对症下药(具体纠正方法不展开讲了，
同学们可以自己阅读讲义p123-126) 。
**第四节 阳性标记的形态特征和判断
免疫组化标记具有一定形态特点， 若能熟练掌握则有助于对免疫组化标记
性，目的是除外假阳性。
⒊阴性试剂对照
是指用于证实在免疫
组化染色中所用试剂，尤其是特异性抗
体试剂的有效性和可靠性而所设立的同
步免疫染色对照，包括有：空白对照；
替代对照；吸收试验和抑制试验等。目
的在于除外假阳性和证实所用免疫组化 试剂及其技术方法的有效性和待检实验 切片免疫标记阳性结果的可靠性。
⑴空白对照
内源性干扰产生的假阳性和因抗原弥散移
位造成的错误结果。
* 第三节 非特异染色
非特异染色是指免疫组化染色过程
中产生的非靶抗原的呈色结果，属假阳
性，又称背景着色，能严重干扰免疫组 化染色结果的正确判断，应竭力避免或 减轻。其原因涉及免疫组化染色流程的 各个环节，可来自：
①内源性干扰(自发荧光、内源酶、内源 性生物素等)； ②试剂污染(质量差，交叉反应，Fc受体
漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液的 pH
和离子强度不当等。
假阳性均系由多种因素造成的非特异
着色所致，原因主要有：①自发荧光或内
源酶等干扰；②抗体试剂不纯(特别是一 抗）；③操作失误，如污染、切片干枯或 显色剂操作不当等；④Fc受体的干扰，等 等。
（二）对照的种类及其选用目的 对照染色大致可分为：阳性组织
定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部
位的阳性着色，一概不能视为阳性。
⒊阴性结果不能视为抗原不表达。由 于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因
染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应， 判断时应注意。
⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕 和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶
免疫标记。因为这类阳性着色多系内源
干扰，或系人为因素所致。
绿色荧光和亮绿色耀眼荧光；
免疫酶标记（HRP- DAB/H2O2）则 表现为淡黄色细颗粒、棕黄色颗粒和褐
黄色粗颗粒，后者耀眼易见。图像摄影 ，原则上多取强阳性区域。
二 、 阳 性 标 记 细 胞 学 特 征 （ 以 HRPDAB/H2O2为例） 可分为①胞膜型；②胞核 型；③胞质(浆)型；④微绒毛型和⑤复合型 （胞膜-胞质兼有，胞核-胞质兼有，或微绒 毛 - 胞质兼有）等五种阳性细胞类型。这与 抗原所在部位相关联，但应注意排除因组 织固定不好引起的抗原弥散假象，尤其是 复合型图像。
对照、阴性组织对照及阴性试剂对照
和自身对照四大类：
⒈阳性组织对照 指用已证实含有靶抗原
的同源及不同源组织切片或细胞涂片与
待检实验切片同时作同样处理和免疫染 色的组织对照。正确的结果应呈现阳性 ，目的是为了证实所用免疫组化染色流 程的有效性，排除假阴性的可能。
⒉阴性组织对照
指用已证实不
含靶抗原的同步处理和免疫标记染 色的组织对照。正确的结果应为阴
指以缓冲液（PBS、TBS
等）取代第一抗体（主要的，必要时还
可做第二抗体及桥联抗体的空白取代） ，其他各步不变的试剂对照染色，结果 应为阴性。
⑵取代对照 指以所用方法第一抗体同源动
物的正常血清，或与本实验无关的抗体 ( 靶
生物缺如的 ) 取代第一抗体，其他步骤不变
的试剂对照染色，结果应为阴性。
⑶吸收试验 是指用事先经过量抗原吸收的
⒌对免疫组化标记结果的意义不能
绝对化，应结合临床资料、 X 线等影像 学及实验结果综合分析。
* 第二节
对照染色设计
(一）对照染色的目的
设对照的目的是为了排除假阴性和 假阳性。假阴性的原因主要有三：①组织 处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；②抗 体失活、效价过低或稀释度不合适（主要 指一抗，即特异性抗体）；③染色步骤遗