柱前衍生化HPLC分析白花蛇舌草多糖中单糖组成

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柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成

柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【摘要】The reversed - phase high performance liquid chromatographic ( HPLC) method of pre-column - derivatization with l-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) was developed to separate the traditional eight monosaccharides and detect the monosac-charide composition of crystallization solution of xylose. The results showed that crystallization solution of xylose consisted of mannose, rharanose, cellobiose, glucose, galactose, xylose, arabinose, fucose, and the dominant component monosaccharides were glucose, ga-lactose, xylose and arabinose. Peak height was used to quantify. The concentration of eight kinds of monosaccharide was liner with correspond peak area with correlation coefficients (r2) of 0.9897 -0.9994. The detection limit was 0.002 1 -0.003 1 mg/mL. The recovery was 98.4% - 101.0% , and relative standard deviation of detection results was 0.66% -0.21 % (n = 6). The HPLC method is simple, rapid, sensitive, convenient and can be applied to the quality control of crytallization solution of xylose.%采用1-苯基-甲基-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-反相高效液相色谱(HPLC)法建立了8种常见单糖的分离模式,并用于木糖结晶母液单糖组成的定量分析.结果表明:木糖结晶母液至少由甘露糖、鼠李糖、纤维二糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖及岩藻糖8种单糖组成,其中以葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖为主.以峰高定量,8种单糖的浓度与相应的峰高呈良好的线性关系,相关系数r2在0.9897 -0.9994范围内,方法检出限为0.0021-0.0031 mg/mL,回收率为98.4% -101.0%,测定结果的相对标准偏差为0.66%-1.21%(n=6).该方法简单、快速、灵敏,可用于木糖结晶母液的质量控制.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】3页(P47-49)【关键词】木糖结晶母液;单糖组成;衍生化;高效液相色谱【作者】孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【作者单位】济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204【正文语种】中文木糖、阿拉伯糖作为一种良好的食品添加剂已被广泛应用于食品生产中。

柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成

图 3 当归多糖经 TFA 水解的时间对各组成单糖的测定影响
F ig. 3 The e ffects of com ponent m onosacchar ides o f A ngelica polysaccha rides fo r different trifluoacetic ac id ( T FA ) hydro lysis tim e 1. 葡萄糖醛酸 ( glu cu ron ic acid) ; 2. 甘露糖 ( m annose) ; 3. 鼠李糖 ( rhamn ose); 4. 半乳糖醛酸 ( ga laduron ic acid ) ; 5. 半乳糖 ( galactose); 6. 葡萄糖 ( g lucose) ; 7. 阿拉伯糖 ( arabonose) 。
3 结果与讨论
3. 1 单糖对照品 PM P衍生物的 HPLC 分离为实现当归多糖各组成单糖的高效分离, 本实验对当归多糖可能包含的 G lc、A ra、M an、G al、Rha、
Xyl、G lcUA、GalUA 及内标 Fuc等 9种标准单糖 PMP 衍生物的高效液相色谱分离条件进行了优化。结果表明, 磷酸缓冲液 ( KH2 PO4-N aOH ) 的 pH 6. 9, 时间梯度为 0→ 10→ 30 m in 和相应浓度梯度为 0→ 8% → 20% 溶剂 B的梯度洗脱模式是分离此 9种单糖衍生物的较理想色谱分离条件。
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 ( PM P) 柱前衍生化 H PLC 测定单糖含量的方法经过了不断地发展和完善 [ 3~ 7] , 并成功地用于毛细管电泳分析。 PMP 是还原性糖的最好衍生化试剂之一, 如 PM P 衍生物不易裂解, 分析时不产生异构峰, 且在 250 nm 处有强烈的紫外吸收。本研究采用 PMP 衍生化方法, 用常规的紫外检测器和 C18烷基键合柱, 建立适于当归多糖单糖组成测定的 HPLC 新方法, 达到灵敏、快速、准确、方便和可在线大批量分析的目标。

植物多糖研究现状

植物多糖是普遍存在于自然植物界中的由许多相同或不同的单糖以α-或β-糖苷键所组成的化合物，由1O个以上的单糖分子通过聚合而成，其分子量较大，是一类大分子化合物。

多糖还是一类重要的信息分子，结合了蛋白质和脂类的多糖，在有机体中参与多种生命活动。

人们对多糖生物活性的研究可追溯到1936年Shear对多糖抗肿瘤作用的发现。

以后陆续发现一些真菌多糖和高等植物多糖具有明显的抑菌抗肿瘤等活性。

至今已有300多种多糖从自然界中得到分离与鉴定J。

研究发现多糖及糖复合物参与和介导了细胞各种生命现象的调节，具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗病毒、降血脂、抗凝血等生物活性 J。

因其来源广泛，没有毒副作用，而且药物质量通过化学手段容易控制等优点，成为当今新药及功能保健品和绿色食品添加剂发展的新方向。

本文主要对植物多糖的提取分离技术、分析检测方法及生物学活性等研究发展进行综述。

1.植物多糖的提取分离在植物多糖的研究中，如何建立最佳的提取工艺是多糖研究的基础．目前植物多糖提取方法甚多，每种方法都各有利弊，选择合适的植物多糖提取方法可满足不同的需要J，常用方法主要有水提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超声法、微波法等。

近些年多采用混合或辅助手段提高提取效率，降低溶剂用量。

J1.1 水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的方法。

多糖是极性大分子化合物，根据相似相容原理，应使用水、醇等极性较强的溶剂，利用多糖溶于水而不溶于醇的性质，可以采用热水浸煮或冷水浸提渗滤提取多糖，用乙醇将多糖从提取液中沉淀出来，即为水提醇沉法。

一般来说，醇含量在50％一60％可以去除淀粉，在75％时可除去蛋白质，在80％时基本可以除去全部蛋白质、多糖和无机盐。

影响水提醇沉法提取率的因素有：水的用量、提取温度、料液比、提取时间及提取次数。

传统采用正交试验法确定上述几个因素的最佳比例，如孙莹等J用水提醇沉法对大黄多糖的工艺优化进行研究，发现在料液比1：10，提取温度95oC 二，提取1h的情况下，大黄多糖得到最佳浓度为80％，得到影响提取率的主次因素依次为料液比、提取温度和提取时间。

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的：建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（ PMP）柱前衍生化-高效液相色谱法（ HPLC）对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。

白花蛇舌草多糖的分离纯化及PMP柱前衍生高效液相分析

［摘
要］经热水提取、醇沉、大孑树脂分离、三氯乙酸脱蛋白、Ｈ０脱色、透析、ＤＡＬ：：ＥＥ一２纤维素和５
ＳｐａｅＧ一０ｅｈｄｘ２０凝胶柱层析，建立了白花蛇舌草多糖的分离纯化方法。制备的Ｏ经紫外扫描及ＨＧＣ测试，ＤＩＰＰ
主要仪器ＤＯＥ６０高效液相色谱仪（ＩＮＸＰ８美国戴安公司），Ｕ一２０Ｖ１０紫外可见分光光度计（尼柯（海）仪器有限公司）Ｓ —ＧＬ尤上，ＴＫＥＧ５０Ｗ多糖专用凝胶柱（日本ＴＳＨ公司）２０ＰＯＯ，Ｗａｅｓｔｎｉｄ１ｔｌｔＣ８柱（国沃特世公司）ＥＥｒＡａｓ美，ＤＡ
柱前衍生高效液相色谱法分析了白花蛇舌草所含一种纯多糖的单糖组成。
１仪器与试剂
至１０Ｌ０ｍ，石油醚萃取至醚层无色。挥干有机试剂后加入等体积２％三氯乙酸（Ｃ０ＴＡ）溶液，静置
４，离心，上清液以氨水调ｐ值至８ｈＨ，滴加３％０
糖、Ｄ一阿拉伯糖（国药集团化学试剂有限公司），Ｄ一葡萄糖、Ｄ一木糖（ｉｍＳｇａ公司），三氟乙酸
（Ｆ）（ＴＡ上海医药集团），１一苯基一３甲基一５一
吡唑啉酮（ＭＰ（京化学试剂厂）乙腈为色Ｐ）北。
取白花蛇舌草１Ｏ０，分别加入１０ｇ０倍水提取

柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法

柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法李卫燕;李萍;曹蔚【摘要】首次建立柱前衍生化高效液相色谱法分析当归酸性多糖中糖醛酸、氨基糖和中性糖的方法.D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-岩藻糖等10种单糖经柱前衍生化法处理后作为标准品.色谱条件:Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm i.d.×250 mm,5μm),流动相由乙酸铵水溶液(100 nmol/L,pH =5.0)、乙腈和四氢呋喃以81:17:2的体积比组成,流动相流速1.0 mL/min,检测波长250 nm,柱温25℃.实验结果表明,当归酸性总多糖是由D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸和D-葡萄糖以1.5:14.1:1.7:1.6:2.0:2.3:1.0的摩尔比例组成.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2015(015)010【总页数】4页(P151-154)【关键词】当归;多糖;高效液相色谱;柱前衍生化;单糖【作者】李卫燕;李萍;曹蔚【作者单位】第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R284.2中药当归是伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.) Diels的干燥根，主产于甘肃岷县，为常用中药，具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效。

近十几年来，经过国内外学者的研究，发现多糖是当归的主要成分之一[1]。

药理学研究表明，当归多糖具有抗血栓及改善血液流变、保护心血管系统、抑菌、抗肿瘤、保护肺部组织细胞、利胆保肝、补血等生物活性[2]。

多糖的单糖组成分析是控制多糖质量和分析多糖结构的重要环节。

白花蛇舌草化学成分

白花蛇舌草化学成分
白花蛇舌草（学名：Hedyotis diffusa）是一种常见的中草药，被广泛应用于中医药领域。

它的主要化学成分包括：
蒽醌类化合物：白花蛇舌草中含有多种蒽醌类化合物，如赤芍酮、赤芍酮酸、丹参酮等。

这些成分具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。

黄酮类化合物：包括芍药苷、芦丁、异黄酮等。

黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗血栓等活性，对心血管健康和免疫调节具有重要作用。

多糖类化合物：白花蛇舌草中富含多种多糖类化合物，如阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖等。

这些多糖类化合物具有抗氧化、免疫调节和抗肿瘤等功效。

挥发油：白花蛇舌草中含有一些挥发油成分，如柠檬烯、萜烯等。

这些挥发油成分具有抗菌、抗炎和镇静作用。

此外，白花蛇舌草还含有其他成分，如氨基酸、生物碱、酚酸类化合物等，这些成分对其药理活性和药效发挥起重要作用。

需要注意的是，草药中的化学成分复杂多样，不同产地和生长环境下的白花蛇舌草成分可能会有所差异。

因此，在使用白花蛇舌草或其提取物时，应遵循医生或草药专家的指导，避免不当使用或滥用。

柱前衍生高效液相色谱法分析纸张中的单糖

７０ｏＣ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙａｎｄａｃｃｕｒａｃｙ，ａｎｄｐｏｖｒｉｄｅｄａｐｒａｃｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｅｓｔｉｎｇｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎ
第４３卷第１７期
２０１５年９月
广
州
化
工
Ｖｏ１．４３Ｎｏ．１７
Ｓｅｐ．２０１５
ＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ
柱前衍生高效液相色谱法分析纸张中的单糖木
ｅｔｈｙｈｃａｒｂａｚｏｌｅ，ｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅＴｈｅｒｍｏＣ１８ｃｏｌｕｍｎ，ｕｓｉｎｇａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄａｍｍｏｎｉｕｍａｃｅｔａｔｅａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎａｓ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｎｅｗｍｅｔｈｏｄｏｆａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｐａｐｅｒｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙＨＰＬＣｗｉｔｈｐｒｅ—ｃｏｌｕｍｎｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｕｓｉｎｇ３— －ａｍｉｎｏ— －９— －ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｚｏｌｅ．Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｐａｐｅｒｗｅｒｅｄｅｒｉｖａ Байду номын сангаас ｉｚｅｄｕｓｉｎｇ３— — ａｍｉｎｏ— －９— －

PMP柱前衍生化-HPLC法分析不同生长年限黄芪中6种单糖的含量

PMP柱前衍生化-HPLC法分析不同生长年限黄芪中6种单糖的含量作者：余亦婷皮文霞谢辉曹丽娟李西文李霞陆兔林严国俊来源：《中国药房》2021年第12期摘要目的：分析并比较不同生长年限黄芪中6种单糖的含量。

方法：取来自3个产地的2～4年生黄芪药材，经水提醇沉、Sevage除蛋白后制得黄芪多糖;将上述多糖经三氟乙酸水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后，采用高效液相色谱法测定其中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等6种单糖的含量。

以Symmetry C18为色谱柱，以磷酸盐缓冲液（pH 6.8）-乙腈（84 ∶ 16，V/V）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为245nm，柱温为35 ℃，进样量为20 µL。

结果：黄芪多糖中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的含量分别为0.50～0.94、0.76～1.60、3.35～7.86、87.33～275.77、1.95～8.96、2.35～14.04 mg/g，2、3、4年生黄芪中上述单糖的总含量分别为98.26～139.92、173.81～295.71、122.37～182.41 mg/g。

3年生黄芪中葡萄糖的含量与2、4年生黄芪有显著差异（162.71～275.77 mg/g vs. 87.33～107.70、111.54～167.26 mg/g，P关键词黄芪;多糖;单糖;柱前衍生化;高效液相色谱法ABSTRACT OBJECTIVE： To analyze and compare the contents of 6 kinds of monosaccharide in Astragalus membranaceus from different growth years. METHODS： 2-4 years old A. membranaceus from three areas were extracted with water extraction and alcohol precipitation，Sevage deproteinization to obtain A. membranaceus polysaccharide. The samples were firstly hydrolyzed with trifluoroacetic acid （TFA） and then derivatized by 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone（PMP）. HPLC analysis was adopted to determine the contents of 6 kinds of monosaccharide as mannose， rhamnose， galacturonic acid， glucose， galactose， arabinose. The determination was performed on Symmetry C18 column with phosphate buffer solution （pH 6.8）-acetonitrile （84 ∶ 16， V/V） as mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 245 nm， and column temperature was 35 ℃. The sample size was 20 µL. RESULTS： The contents of mannose， rhamnose， galacturonic acid， glucose， galactose and arabinose were 0.50-0.94， 0.76-1.60， 3.35-7.86， 87.33-275.77， 1.95-8.96， 2.35-14.04 mg/g，respectively. Total contents of monosaccharide from 2， 3， 4 years old A. membranaceus were 98.26-139.92， 173.81-295.71， 122.37-182.41 mg/g， respectively. There was significant difference in the contents of glucose between 3 old years A. membranaceus and 2， 4 old years A. membranaceus （162.71-275.77 mg/g vs. 87.33-107.70， 111.54-167.26 mg/g， PKEYWORDS Astragalus membranaceus;Polysaccharides;Monosaccharides;Pre-column derivatization;HPLC黃芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge. var. mongholicus（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根[1]，主产于我国山西、内蒙古等地[2]。

201011298银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较

银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较韩威1，姜瑞芝2，陈英红2，高阳3，高其品3*（1．延边大学，吉林延吉133002；2．吉林省中医药科学院，吉林长春130012；3．长春中医药大学，吉林长春130117）摘要：为选择一种准确快捷的方法测定银耳多糖的单糖组成，对薄层色谱法（TLC）、气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）三种色谱方法进行比较。

结果表明，前两种方法的测定结果均不理想，而HPLC法，操作简便，灵敏度高，分离效果好，信息完整。

测定结果为由葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、岩藻糖组成，其摩尔比为0.24：1.00：0.06：0.29：0.25。

HPLC法对酸性杂多糖组成糖分析是一种比较理想的选择。

关键词：银耳多糖；单糖组成；TCL；GC；HPLCComparison of three kinds of chromatographic methods for monosaccharide composition analysis of Tremella polysaccharideHan Wei1, Jiang Rui-zhi2, Chen Ying-hong2, Gao Yang3, G ao Qi-pin3*(1. Yanbian University, Yanji 133002, China; 2. Academy of Traditional Chinese Medicine and Material Medical of Jilin Province, Changchun 130012, China; 3. Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China)Abstract：To find an accurate and fast method to determine the monosaccharide composition of Tremella polysaccharide, thin layer chromatography (TLC), gas chromatography (GC) and high performance liquid chromatography (HPLC) was compared. The results of TLC and GC were not significant. However, HPLC was a simple method, showed high sensitivity, good resolution and integrity information. The result of HPLC analysis showed that the monosaccharide composition were Glc, Man, GlcA, Xyl and Fuc, with the mole percentage of 0.24:1.00:0.06:0.29:0.25. Consequently, HPLC is the most suitable method for monosaccharide composition analysis.Key words：Tremella polysaccharide; monosaccharide composition; TLC; GC; HPLC 银耳（Tremella fuciformis Berk）是真菌类银耳科银耳属植物，也叫白木耳，基金项目：十一五国家科技重大专项（No. 2009ZX09103-333）；国家自然科学基金（No. 30873370）*通讯作者Tel：（0431）86172070；E-Mail：gaoqipin@在我国有悠久的药食兼用历史，具有增强人体免疫力的作用。

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407
2008年 3月第 30卷第 3期
中成药 Chinese Traditional Patent M edicine
M arch 2008 Vol. 30 No. 3
阿拉伯糖含量的 RSD 分别为 1. 57% , 1. 38% , 1. 34% ,
1. 41% , 1. 56% ,表明本法重复性良好。
取白花蛇舌草多糖 (同上制备 ) 15 mg ( n = 5 ) ,
加入甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖混
合标准品溶液 (浓度分别为 0. 65、1. 1、6. 7、5. 5 和
准确称取 D 2葡萄糖、D 2甘露糖、D 2半乳糖、D 2鼠李糖、DL 2阿拉伯糖标准品各一定量溶于水中 ,制得浓度为 5 mmol/L 的单糖标准品贮备液 ,用水稀释得一系列浓度单糖标准溶液。 2. 3. 2 样品溶液的制备
分别称取不同产地白花蛇舌草提取的粗多糖
30. 0 mg,溶于 5 mL 水中。精密吸取 400 μL ,置于含有 400μL 2 mol/L 三氟乙酸的具塞试管中 , 110℃ 水解 2 h,加入 NaOH 溶液 ( 0. 3 mol/L ) 500 μL (使
关键词 :白花蛇舌草多糖 ; 柱前衍生化 ; 高效液相色谱法 ; 单糖摘要 :目的 :采用微波提取法提取不同产地白花蛇舌草水溶性多糖 ,并对多糖的含量及组成进行研究。方法 :以苯酚 2硫酸法测定总糖含量 ,柱前衍生化高效液相色谱法鉴别和测定其多糖的单糖组成。结果 :不同产地药材中多糖含量以广东最高 ,白花蛇舌草多糖是由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖及甘露糖组成的杂多糖。结论 :柱前衍生化高效液相色谱法分析白花蛇舌草多糖中单糖组成方法简便 ,快速 ,准确。中图分类号 : R284. 1 文献标识码 : A 文章编号 : 100121528 (2008) 0320406203
表 1 不同产地的白花蛇舌草中多糖的含量
产地湖北福建建瓯福建龙岩广东安徽阜阳广西柳州广西南宁平均
含量 / % 7. 20 9. 58 10. 00 12. 10 10. 96 9. 07 9. 83 9. 82
图 1 样品溶液色谱 1. 甘露糖 2. 鼠李糖 3. 葡萄糖 4. 半乳糖 5. 阿拉伯糖
白花蛇舌草样品来源于广东、广西、湖北、福建
等 7个产地 ,经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为白
收稿日期 : 2007202210 作者简介 :宝炉丹 (1981～) ,女 (蒙古族 ) ,硕士。 3 通讯作者 :郭兴杰 (1956～) ,女 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事体内药物分析工作 , Tel: 024223986285, E2mail: gxjhyz@ yahoo. com. cn。
取不同产地白花蛇舌草样品 ,经干燥粉碎取 2 g,精密称定 ,加入石油醚 100 mL 加热回流 1. 5 h脱脂 ,真空抽滤 ,滤渣加水 30 mL ,置于微波炉内低温加热 10 m in,取出后 80℃保温 30 m in,真空抽滤 ,滤渣再加水 100 mL ,重复加热和保温步骤后抽滤 ,合并 2 次滤液 ,浓缩至 20 mL。向浓缩滤液中加入无水乙醇至醇浓度为 80% , 4℃静置过夜后抽滤 ,将沉淀离心分离 ( 5 000 r/m in, 10 m in) ,依次用乙醇 ,丙酮各洗涤 2 次 , 50℃恒温干燥至恒重 ,得褐色粗多糖。 2. 2 多糖的含量测定 [ 7 ] 2. 2. 1 标准曲线的绘制
( S henyang Pha rm aceutica l U n iversity, Shenyang 110016, L iaon ing, China)
KEY W O RD S: Hedyotis d ifusa W illd po lysaccharide; p re2co lumn derivatization; high performance liquid chroma2 togaphy; monosaccharide ABSTRACT: A IM : The polysaccharides of Hedyotis d ifusa W illd of different sources were extracted and its con2 tent and composition of the polysaccharide was analyzed. M ETHOD S: The m icrowave was emp loyed for the aque2 ous extract of Hedyotis d ifusa W illd and the content of total sugar was determ ined by phenol2sulfur test, the mono2 saccharides composition was determ ined by HPLC w ith p re2column derivatization. RESUL TS: The polysaccharide obtained from the samp les of Guangdong Province had the highest content. The analytic data showed that the com2 position of monosaccharides in hydrolytic polysaccharides of Hedyotis d ifusa W illd were mannose, glucose, galac2 tose, arabinose and rham nose, the average content of polysaccharides was 9. 82%. CO NCL US IO N: The HPLC method w ith p re2column derivatization is app rop riate fo r the analysis of monosaccharide composition of Hedyotis d i2 fusa W illd polysaccharides and the method is simp le, quick and accurate.
空干燥箱中干燥。残渣用 2 mL 水溶解 ,再加入 2
mL 氯仿 ,充分振荡后除去有机相 ,重复萃取分离 3 次。水相溶液经 0. 45μm 滤膜过滤后 ,取 20 μL 注
入液相色谱仪 ,用标准曲线法计算单糖的浓度 ,典型
色谱图见图 1。各峰与其相邻峰间的分离度分别为
2. 01, 1. 93, 1. 89, 1. 53与 1. 89,分离度良好。
1. 1 仪器 Jasco高效液相色谱仪 (日本分光公司 ) : PU 2
2080型高压泵 , UV 22075 型紫外检测器 ; D iamonsil C18色谱柱 (200 mm ×4. 6 mm , 5μm ) 。
HB 23循环水真空泵 (上海亚荣生化仪器厂 ) ; RE252旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂 ) ; 7221 型紫外可见分光光度计 (北京第二光学仪器厂 ) 。 1. 2 试药
白花蛇舌草 ( Hedyotis d ifusa W illd)为茜草科耳草属植物 ,味甘淡、性凉 ,具清热解毒 ,活血消痈之功效 ,其多糖具有明显的增强机体免疫能力和抑制肿瘤的作用 [ 1, 2 ] 。曾有文献报道微波提取法在提取植物多糖方面效率高于传统水煎煮法 [ 3 - 6 ] ,且节能 ,环保 ,本文首次将此法用于提取不同产地白花蛇舌草中多糖 ,以苯酚 —硫酸法测定白花蛇舌草多糖含量 , 并采用高效液相色谱法通过柱前衍生鉴别和测定其多糖的单糖组成成分 ,方法准确 ,快速 ,重现性好。 1 仪器与试药
5种单糖经衍生化后标准曲线见表 2,其中 x为单糖浓度 , Y为峰面积 ,各标准单糖在浓度为 0. 025 ～5 mmol/L 范围内成良好的线性关系。浓度为 1 mmol/L 的 5种单糖混合物衍生化产物进样 6次 ,甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖峰面积的 RSB 分别为 : 1. 35% , 1. 26% , 1. 19% , 1. 22% , 1. 34% ,表明本法精密度良好。取用福建建瓯产白花蛇舌草制备的多糖 6份按衍生化方法衍生后进样 ,计算单糖含量 ,测得甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和
Ana lysis of polysacchar ide com position of H edyotis d ifusa W illd polysaccar ides by pre2column der iva tiza tion HPLC
BAO Lu2dan, XU Guo2fang, MA Zheng, GUO Na, GUO Xing2jie
分别称取各样品的粗多糖 30. 0 mg,置于 100 mL 量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 1. 0 mL溶液于试管中 ,加入 6%的苯酚溶液 1. 0 mL 及浓硫酸 5. 0 mL ,静置 10 m in,摇匀 ,室温放置 20 m in 后于 490 nm 测得吸光度值 ,以标准曲线法计算各样品多糖的含量 (以葡萄糖计算 ) ,结果见表 1。 2. 3 白花蛇舌草多糖的组成分析 2. 3. 1 单糖标准品溶液的配制
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2008年 3月第 30卷第 3期
中成药 Chinese Traditional Patent M edicine
M arch 2008 Vol. ifusa W illd。 D 2葡萄糖、D 2甘露糖、D 2半乳糖、D 2鼠李糖、DL 2
pH为 11. 0) ,即得。
2. 3. 3 衍生化方法 [ 8 ] 分别取标准品溶液和样品溶液各 150 μL 于试
管中 ,加入 PM P ( 0. 5 mol/L , 甲醇溶液 ) 100 μL 混