VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用
全自动微生物鉴定介绍
全自动微生物鉴定/药敏系统VITEK 2 COMPACT 301、设备的主要用途、功能及特点该系统为完整的全自动细菌鉴定和药敏分析系统,细菌鉴定采用生化反应数码鉴定原理。
可以以最少的实验人员及最短的准备和处理时间，提供最准确的测定结果。
数据库应涵盖革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、芽胞菌、酵母菌、奈瑟氏菌及嗜血杆菌、厌氧菌；必需有生物反恐菌的鉴定能力（鼠疫杆菌、霍乱弧菌、吐拉菌等）2、技术参数及指标①系统组成：电脑主机为国际知名品牌原装PC；另有比浊仪、充填系统、读数孵育系统、数据处理系统、废弃物收集系统、打印机等；②检测原理：采用生化反应数码鉴定原理，结合终点法、阈值法、特别是动态分析法的检测原理，24小时连续自动检测，并时时出报告；③充填处理量：每批可同时填充10个试剂卡。
④充填方式:：利用真空原理进行试剂卡的填充。
⑤菌液用量：3ml。
⑥试卡密封方式：自动热切割掉试剂卡上的菌液传送小管，进行密封。
⑦鉴定速度：每15分钟对同一卡片进行1次光学检测。
细菌5小时内鉴定率达95%，一般3-5小时，酵母菌≤18小时，芽孢菌≤14小时。
⑧鉴定准确率：90% 的试验将报告单一的鉴定结果。
⑨鉴定范围：鉴定细菌种类齐全，含概革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、酵母菌、芽孢菌、奈瑟氏菌嗜血菌弯曲菌、厌氧菌，要求≥550种菌。
⑩药敏功能：平均药敏检测时间7小时，专家规则同时符合美国CLSI、德国DIN、法国AFNOR标准。
⑪自动化程序：自动接种、全封闭实验板、自动培养及判读、打印结果、自动收集废弃物。
⑫试卡设计：试卡上有64微孔，内含有鉴定或药敏所用的生化或抗生素干燥底物；实验过程中除需要从厂家购买鉴定卡和药敏卡之外无其他专用附加试剂和耗材，可上机一次性完成鉴定和药敏工作，无需附加试验和补充实验。
⑬光学系统：应用至少三种波长系统和透光度光学系统进行试剂卡样本孔中细菌生长的分析。
透光度检测系统可装载3个透光单元，由电子发光二级管（660nm和568nm）和硅光电探测器组成，用于浊度检测。
vitek 2compact微生物自动鉴定药敏分析系统参数(1)
VITEK 2-compact微生物自动鉴定药敏分析系统参数一、配置微生物鉴定药敏分析仪主机、电子比浊仪、充填机、封口机、数据管理分析系统、专家系统、、联想扬天A6000K(E5800/3G/500G)、HP P2035打印机、山特UPS及其他附件等。
二、自动微生物鉴定和药敏分析系统技术参数1、进口知名品牌:法国梅里埃；*2、鉴定原理：动力光电比色法；*3、药敏原理：微型化肉汤稀释法，符合CLSI判断标准要求；*4、自动化程度高：可自动加样、上卡、卸卡、联机孵育、定时扫描、读数、分析、打印报告等；*5、检测速度快，平均鉴定时间≤4小时，药敏≤8小时*6、鉴定细菌数＞400种，能鉴定革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌、苛养菌、厌氧菌、棒状杆菌；进行细菌药敏试验，最低抑菌浓度测定；测试卡或测试板的抗生素组合种类多；7、通过FDA认证的抗生素大于80种；8、系统具有较大的细菌资料等；*9、仪器真空填充器利用试卡半透膜原理自动完成菌液填充，每次自动批量充填≥30个卡；*10、仪器封口器自动对试卡进行热切割封口，封闭式鉴定、药敏卡，防止生物性危害。
*11、鉴定/药敏卡，检测过程中无需额外加试剂；*12、可根据CLSI等指南报告多种未在卡片上完成的抗生素的S/I/R结果，药敏试验符合美国CLSI，法国CASFM两种检测标准；*13、基于MIL为判断标准的专家系统分析包括常见MRSA、ESBL、VRE 等耐药表型，总数≥200种。
*14、提供自动产生中文报告系统，并可双向传输数据；15、设有内部质控系统，保证仪器正常运转；*16、数据处理软件功能，可根据用户需要，自动对完成的鉴定样本及药敏试验做出统计和组成多种统计学报告；17、软件和测试卡（板）可升级更新，具有LTS系统连接接口；*18、仪器及相关试剂都已具备FDA和SFDA注册证书、提供售后服务承诺书；*19、有专业维修工程师，能提供及时的技术支持及售后服务；20、提供厂家或代理商授权书原件。
微生物自动化鉴定系统的工作原理
微生物自动化鉴定系统的工作原理微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。
数码分类技术集数学、计算机、信息及自动化分析为一体，采用商品化和标准化的配套鉴定和抗菌药物敏感试验卡或条板，可快速准确地对临床数百种常见分离菌进行自动分析鉴定和药敏试验。
目前自动化微生物鉴定和药敏分析系统已在世界范围内临床实验室中广泛应用。
一、微生物数码鉴定法早在七十年代中期，一些国外公司就研究出借助生物信息编码鉴定细菌的新方法。
这些技术的应用，为医学微生物检验工作提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序，大大提高了细菌鉴定的准确性。
目前，微生物编码鉴定技术已经得到普遍应用，并早已商品化和形成独特的不同细菌鉴定系统。
如API、Micro-ID、RapID、Enterotube和Minitek 等系统。
这种鉴定系统是自动化鉴定系统的基础。
(一)数码鉴定法基本原理数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式，给每种细菌的反应模式赋予一组数码，建立数据库或编成检索本。
通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字（编码），查阅检索本或数据库，得到细菌名称。
其基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。
随着电脑技术的进步，这一过程已变得非常容易。
1．简要介绍计算步骤：(1)出现频率（概率）的计算：将记录成阳性或阴性结果转换成出现频率：①对阳性特征，则除以100即得。
②对阴性特征，除以100的商被1减去即可。
③说明：对“0”和“100”，因这2个数太超量，为了使结果不出现过小或过大，而用相似值0.01或0.99值代替。
(2)在每一个分类单位中，将所有测定项目的出现频率相乘，得出总出现频率。
(3)在每个分类菌群中的所有菌的总出现频率相加，除以一个分类单位的总出现频率，乘100，即得鉴定%（%id）(4)在每个菌群中，再按%id值大小顺序重新排列。
将未知菌单次总发生频率除以最典型反应模式单次总发生频率，得到模式频率T值，代表个体与总体的近似值。
VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用
VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用近年来，微生物的检测鉴定技术已逐步由手工检测走向仪器化和电脑化，并力求简便、快速、准确。
由生物梅里埃公司出品的全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。
近年来，微生物的检测鉴定技术已逐步由手工检测走向仪器化和电脑化，并力求简便、快速、准确。
由生物梅里埃公司出品的全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。
VITEK已被许多国家定为细菌最终鉴定设备，并获美国药品食品管理局（FDA）认可。
该系统有高度的特异性、敏感性和重复性，还具有操作简便、检测速度快的特点，绝大多数细菌的鉴定在2～18 h内可得出结果。
现将该系统的工作原理、主要结构、功能并结合我们使用后的一些体会介绍如下。
1工作原理VITEK对细菌的鉴定是以每种细菌的微量生化反应为基础，不同种类的VITEK试卡（检测卡）含有多种的生化反应孔，可达30种。
将手工分离的待检菌的纯菌落制成符合一定浊度要求的菌悬液，经充填机将菌悬液注入试卡内，封口后放入读数器/恒温培养箱，根据试卡各生化反应孔中的生长变化情况，由读数器按光学扫描原理，定时测定各生化介质中指示剂的显色(或浊度反应，然后把读出信息输入电脑储存并进行分析，再和预定的阈值进行比较，判定反应，再通过数值编码技术与数据库中反应文件进行比较，最后鉴定报告将在显示器上自动显示)并在打印机上自动打印。
2VITEK系统的结构组成2.1检测卡目前VITEK系统的检测卡有14种，微生物常用的有7种，即：革兰氏阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰氏阴性菌卡（GNI+）、非发酵菌卡（NFC）、酵母菌卡（YBC）、厌氧菌卡（ANI）、芽胞杆菌卡（BAC）、奈瑟氏菌嗜血杆菌卡（NHI），以及药敏检测卡等。
每张检测卡对应接种1份标本，检测卡为一次性消耗品。
2.2充填机将待测菌的菌悬液注入试卡内。
细菌性食物中毒中Vitek-AMS的应用
常州疾控 杜强
细菌性食物中毒中 Vitek-AMS的应用
概述
近年来，随着计算机技术的不断发展， 对病原微生物的鉴定技术也朝着微量化、 系列化、自动化的方向深入发展，从而 开辟了微生物检测与鉴定的新领域。其 中最有代表性的就是Vitek-AMS（全自 动微生物分析系统）。
举例
VITEK全自动微生物分析系统的局限性 主要体现在①VITEK鉴定卡较为昂贵， 与传统方法相比不够经济，尤其在疾控 中心的日常检测工作中表现得更为明显。 ②前期的菌种分离转种仍然要依赖手工， 因此检验结果一定程度上依旧取决于检 验人员的技术水平高低。
食品卫生监督检测工作，尤其是细菌性食物中 毒检测，采用传统方法往往由于检测样本量大， 范围广导致准备工作繁琐，鉴定时间长等问题。 而VITEK全自动微生物分析系统作为一种全面， 快速，准确，简便的微生物检测技术，完全可 以解决这些困难。因此，在食品检测和卫生防 病监测工作中VITEK全自动微生物分析系统具 有十分重要的应用价值及良好的发展前景。
细节
结果如下： Vitek-AMS系统和手工方法的鉴定结果比较： 平均总符合率为91.5%(193/211), 革兰氏阴性菌符合率为93.5%(159/170)，其中， 肠 杆 菌 科 为 95.6%(109/114) ， 弧 菌 科 为 88.1%(32/36)，非发酵菌属为90%(18/20)， 革兰氏阳性菌符合率为83%(34/41)，其中，葡 萄球菌属为95.2%(20/21)， 链 球 ห้องสมุดไป่ตู้ 属 为 66.7%(12/18) ， 李 斯 特 氏 菌 为 100%(2/2)。
④制作菌悬液的盐水及工具最好每隔二 至三日杀菌一次 ⑤封口后，查看各个反应孔内是否有气 泡，如有，应尽力甩动测定卡，将气泡 排出。 ⑥检测过程中，因停电或仪器突然损坏， 应即停机。待查明原因后再使用新的测 定卡重复测量，，以确保检验质量。
vitek
VITEK自动化微生物分析仪由充填机/封口机、 VITEK自动化微生物分析仪由充填机/封口机、读 自动化微生物分析仪由充填机 取器/恒温器、电脑主机及打印机组成 充填机/ 组成， 取器/恒温器、电脑主机及打印机组成，充填机/ 封口机三分钟内把样本注入试验卡中及封口； 封口机三分钟内把样本注入试验卡中及封口；读 取器/恒温箱自动恒定培养温度并同时读取卡内 取器/ 生化反应变化（系统依据不同型号，容纳32至 生化反应变化（系统依据不同型号，容纳32至 32 480张卡不等），电脑主机负责分析资料的储存、 480张卡不等），电脑主机负责分析资料的储存、 张卡不等），电脑主机负责分析资料的储存 系统的操作及分析程式的运作。 系统的操作及分析程式的运作。
原理
仪器的原理其实就是我们进行细菌鉴定中使用的生 化反应。不过仪器把30 30个对细菌鉴定必需的生化反 化反应。不过仪器把30个对细菌鉴定必需的生化反 应培养基固定到卡片上，然后通过培养后仪器对显 应培养基固定到卡片上， 色反应进行判断，利用数值法进行判定。 色反应进行判断，利用数值法进行判定。根据需要 鉴定的微生物的种类的不同， 鉴定的微生物的种类的不同，设计了不同的鉴定卡 比如革兰氏阴性菌卡，革兰氏阳性菌卡， 片，比如革兰氏阴性菌卡，革兰氏阳性菌卡，酵母 菌卡等。 菌卡等。
VITEK全自动细菌 VITEK全自动细菌 鉴定仪
系列全自动 微生物分析系统是法 biosMerieumx(生 国biosMerieumx(生 物梅里埃） 物梅里埃）生产的 全自动微生物分析仪的一个系列，包括： 全自动微生物分析仪的一个系列，包括：VITEK 32、VITEK－60、VITEK－120、 －32、VITEK－60、VITEK－120、VITEK 2 COMPACT等 COMPACT等。
VITEK2—compact细菌分析系统在微生物鉴定应用上的探讨
VITEK2—compact细菌分析系统在微生物鉴定应用上的探讨随着现代科技日新月异高速的发展，自动化、电脑智能化技术先进的自动化仪器在临床实验室得到广泛的应用。
为提高检验医学领域的技术水平起到了很大的促进作用，而微生物学检验由于其自身的一些特殊性，自动化进程发展较生化学，免疫学进程慢，但其自动化智能化检测亦为大势所趋。
一些适合于微生物室使用的自动化仪器近年相续问世，目前，我省大部份医院临床实验室装备了半自动或全自动细菌分析仪系统，我院检验科于2013年购进梅里埃VITEK 2-compact细菌分析仪系统。
为了解该仪器在细菌鉴定上的效果，我们应用该仪器对中国生物制品检定所购进的多个标准菌株及区临床检验中心颁发的细菌学检验室间质评标本菌株进行鉴定，并对分析总结其对细菌种属鉴定的性能。
现将以2013～2014年省临床检验中心回报的正确结果多个标准菌株及中国生物制品检定所购进的多个标准菌株为参考标准，分析VITEK 2-compact系统将细菌鉴定到种的正确率。
共分析鉴定35例结果，资料分析回报如下：1 资料与方法1.1一般资料中国药品生物制品检定所购进的多个标准菌株及区临床检验中心发放的、适合上述系统鉴定的细菌学检验室间质评标本35例。
1.2仪器VITEK 2-compact细菌分析系统，*****EK比浊仪、二级生物安全柜、上海智城电热培养箱等微生物检验相关仪器。
1.3试剂生物梅里埃公司所生产的各种微生物商品培养基，和VITEK 2 GN革兰氏阴性菌鉴定卡、*****P革兰氏阳性鉴定卡、VITEK 2 NH奈瑟菌嗜血杆菌鉴定卡、VITEK 2YST酵母菌鉴定卡、及配套培养液等。
1.4方法采用第三版全国临床检验操作规程及室间质量评比操作手册的细菌检验相关步骤，接种梅里埃公司生产的羊血平板培养24或48h培养分离出细菌菌落后，根据VITEK 2-compact 系统SOP文件选取菌落形态特征明显、单个的细菌菌落，分别用VITEK 2-compact上机鉴定。
VITEK2全自动微生物分析仪标准操作规程
VITEK 2全自动微生物分析仪标准操作规程参见:VITEK 32全自动微生物分析仪操作规程。
第二节WalkAway系统操作手册基本原理WalkAway系统是通过检测MicroScan测试板小孔中的颜色变化、荧光变化或混浊程度（浊度）来检测抗微生物药物的最低抑制浓度（MIC）及细菌鉴定的。
MicroScan WalkAway 产品是一个完整的测试板孵育/解读系统。
用户通过初步的生物学筛选，预先选择并处理MicroScan测试板，然后在WalkAway系统内设定条形码标签，并由系统内专门的条形码打印后粘贴在测试板的两侧，将测试板装入系统，通过识别条形码来确认MicroScan测试板。
测试板上的其他信息由WalkAway系统在其测试板处理过程中进行计算，随后通过打印机或显示屏传达到用户；MicroScan数据管理系统（DMS）软件，在当前的DOS下运行，是用户与WalkAway 系统进行从计算机的键盘到监视器通信的工具。
本通信的输出端连接到一台报告打印机，用于打印报告，或者连接到显示器屏幕。
一、开机1.1将位于前部控制面板下部的ON/OFF开关置于ON位置，为WalkAway通电。
确认内部风扇开始运行（预热时间大约为两个小时，以使内部温度达到稳定），通电几分钟后，前部控制面板窗口显示时间和温度。
1.1.1确认报告打印机POWER和SEL指示灯亮起。
1.1.2确认条形码打印机通电及打印机已经连接好线路。
1.1.3为计算机通电。
为监视器通电。
1.2通电后，计算机屏幕会显示一系列数字，作为系统所执行的电源自检测（POST）。
在屏幕显示出日期和时间的验证提示时，即表明系统已经作好操作准备。
计算机会按照正常启动流程启动，显示出系统当前日期和时间。
日期和时间下，程序会提问：Is this correct （是否正确）? (Y/N) _如果所显示的日期和时间正确，则键入“Y”并按下<Return>。
如果日期和时间不正确，则键入“N”并按下<Return>。
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VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用
近年来，微生物的检测鉴定技术已逐步由手工检测走向仪器化和电脑化，并力求简便、快速、准确。
由生物梅里埃公司出品的全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。
近年来，微生物的检测鉴定技术已逐步由手工检测走向仪器化和电脑化，并力求简便、快速、准确。
由生物梅里埃公司出品的全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。
VITEK已被许多国家定为细菌最终鉴定设备，并获美国药品食品管理局（FDA）认可。
该系统有高度的特异性、敏感性和重复性，还具有操作简便、检测速度快的特点，绝大多数细菌的鉴定在2～18 h内可得出结果。
现将该系统的工作原理、主要结构、功能并结合我们使用后的一些体会介绍如下。
1工作原理
VITEK对细菌的鉴定是以每种细菌的微量生化反应为基础，不同种类的VITEK试卡（检测卡）含有多种的生化反应孔，可达30种。
将手工分离的待检菌的纯菌落制成符合一定浊度要求的菌悬液，经充填机将菌悬液注入试卡内，封口后放入读数器/恒温培养箱，根据试卡各生化反应孔中的生长变化情况，由读数器按光学扫描原理，定时测定各生化介质中指示剂的显色(或浊度反应，然后把读出信息输入电脑储存并进行分析，再和预定的阈值进行比较，判定反应，再通过数值编码技术与数据库中反应文件进行比较，最后鉴定报告将在显示器上自动显示)并在打印机上自动打印。
2VITEK系统的结构组成
2.1检测卡
目前VITEK系统的检测卡有14种，微生物常用的有7种，即：革兰氏阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰氏阴性菌卡（GNI+）、非发酵菌卡（NFC）、酵母菌卡（YBC）、厌氧菌卡（ANI）、芽胞杆菌卡（BAC）、奈瑟氏菌嗜血杆菌卡（NHI），以及药敏检测卡等。
每张检测卡对应接种1份标本，检测卡为一次性消耗品。
2.2充填机将待测菌的菌悬液注入试卡内。
2.3读数器/恒温箱可在培养过程中定时读出细菌在试卡内培养基中的生长变化值。
2.4电脑主机/显示器/键盘/打印机用于储存和分析资料、系统的操作和结果分析鉴定，实验结果的自动显示报告和打印。
2.5电源稳压器和UPS在外围断电的情况下提供电脑主机约10 min持续电源。
3VITEK系统的功能
3.1可鉴定405种细菌
其中：GPI卡可鉴定凝固酶阳性和阴性的葡萄球菌、肠球菌、草绿色和β溶血链球菌、棒状杆菌属以及李斯特氏菌属和丹毒丝菌等51种；GNI+卡可鉴定肠杆菌科、弧菌科和非发酵菌等116种；NFC卡可鉴定不动杆菌、气单胞菌、产碱杆菌、假单胞菌、弧菌等42种；YBC卡可鉴定假丝酵母（念珠菌）、隐球菌、地霉、丝孢酵母、红酵母等34种；ANI卡可鉴定放线菌、拟杆菌、梭杆菌、乳杆菌、真杆菌、梭菌、消化链球菌等94种；BAC卡可鉴定芽胞杆菌21种；NHI卡可鉴定奈瑟氏菌、嗜血杆菌、金氏菌、摩拉氏菌、布兰汉氏菌等47种。
3.2可对澄清液体中的微生物进行计数。
3.3检测细菌生长曲线。
3.4药敏试验有70多种药物约50多种药物组合的药敏卡。
4实际应用讨论
实验室自引进VITEK系统后，用已知的金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、李斯特氏菌、O157∶H7、沙门氏菌、志贺氏菌、绿脓杆菌、副溶血弧菌共8株标准菌株进行检测，结果与已知的完全相符。
而且鉴定沙门氏菌属只需4 h，志贺氏菌属6 h，缩短了肠道致病菌生化鉴定的时间，操作也简便。
如1999年7月13日晚某市一大厦中心餐厅发生食物中毒，发病49人。
将可疑菌株用VITEK仪器进行鉴定，仅用13 h就得出鉴定结果,而常规鉴定则需24 h。
又如1999年6月从一胖听的进口烤鳗酱油中分离出可疑酵母菌株，VITEK系统的YBC 卡鉴定为丛生丝孢酵母。
而常规法鉴定酵母菌需配制各种培养基，一般实验室试剂多不齐全，且鉴定者要有相当的工作经验。
然而在未知菌的鉴定中，VITEK系统有时会因种种因素不能顺利获得鉴定报告，或由一些特殊的报告信息代替了正常的鉴定结果。
最常见的有“unidentified organism”（不能鉴定的细菌）。
产生这一报告的原因有：①待检细菌不是单一菌株；②试卡生化小孔有气泡严重干扰比色；③菌龄太老；④所配制的待检菌菌悬液浊度过高或过低；⑤待检菌不能均匀悬浮于0.45%～0.5%盐水中；⑥罕见生物新种或不典型菌株,数据库缺乏资料。
在VITEK的最后鉴定报告上，有时也会出现一些限定信息，这些限定信息是与鉴定结果同时存在的，它阐述了合格鉴定的标准。
最常见的有“good confidence marginal separation”（好的可信性但难于区分），即生化反应结果同时相似于数据库中两个菌，且产生可接受的绝对相似值，使两种菌间难于区分，需加一些试验方可确定其最后鉴定。
例如：副溶血弧菌
与嗜水气单胞菌在NFC卡上的生化特征是相似的，当鉴定结果出现首选菌为副溶血弧菌、次选菌为嗜水气单胞菌时，鉴定结果同时还会提示参看技术资料，技术资料则阐明通过外加VP试验、0%NaCl生长试验、七叶苷试验来加以区别并鉴定到种。
副溶血弧菌阳性百分率均为0,嗜水气单胞菌分别为98％、100％和96％。
有些菌的最后鉴定仪器不能完成，需要血清学方法证实。
例如：当GNI+卡中最后鉴定报告首选菌是沙门氏菌属、志贺氏菌属、霍乱弧菌、O157∶H7等，应用相应特异性抗血清进行证实。
常规的微生物学诊断也要求对上述菌的最后鉴定作特异血清凝集试验。
目前VITEK系统在对李斯特氏菌的最终鉴定上只能达到属的水平，对李斯特氏菌种的分类可用生物梅里埃的API LISTERIA系列鉴定试剂条来完成。