实验二 细菌单染色及革兰氏染色法

实验要求
������ 法 学习并掌握水浸片法制备标本片的方 ���Leabharlann Baidu�� 按要求绘形态图
微生物学实验
冯 新
实验三
细菌单染色及革兰氏染色法
一、实验目的
• 学习细菌的革兰氏染色原理和方法 • 掌握细菌涂片的制备 • 掌握无菌操作技术
二、实验原理
• 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。 • 复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等。
革兰氏染色
• 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 • 细菌细胞壁的结构
实验步骤
操作步骤
无菌操作
涂片
干燥
染色
固定
水洗
干燥
镜检
革兰氏（Gram）染色法
1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸 铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：除去残水后，用稀碘液覆 盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒 精进行脱色约30－60秒，后立即 用流水冲洗。 5. 复染：滴加石碳酸复红染色液， 染30秒，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。
2）涂片为何要固定？如果你的涂片未经热固定， 将会出现什么问题？ 如果加热温度过高、时间过 长，又会怎样？要得到正确的革兰氏染色结果必 须注意哪些操作？哪一步是关键？Why?
3）为什么要等制片完全干燥后才能用油镜观察？
实验四
真菌染色技术
4操作步骤 水浸片观察 （1） 在载玻片上滴加一滴美兰染液，用接 种环或镊子以无菌操作方式挑取少许真菌， 在染液中充分混匀，盖上盖玻片。 （2） 镜检：先低倍镜观察，后换用高倍镜 观察细胞形态。 （3）绘出真菌形态特征图
Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.
Figure 2 - Gram stain of Gram –
E. coli cells
实验报告
1、细菌简单染色、革兰氏染色的原理、方法和步骤。 2、记录所观察到的染色结果，并绘图 思考题 1）制备细菌染色标本时应注意哪些环节？