实验4 细菌革兰氏染色法
实验4 细菌革兰氏染色法讲解学习
【方法步骤】
A. 初染 B. 水洗 C. 媒染 D. 水洗 E. 脱色 F. 水洗 G. 复染 H. 水洗 I. 吸干
图4-1 革兰氏染色程序
【方法步骤】
★获得本实验成功的关键： 1）选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染
成红色而造成假阴性。 2）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3）脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，
实验4 细菌革兰氏染色法
【基本原理】
1. 油镜提高分辨率
油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间是隔一层油质。
如香柏油的折射率n=1.52，与玻璃相同。
a)光线通过不减低视野的照明度；
b)更主要能增加数值孔径，提高显微镜的放大效能。
c)
分辨率=λ/2NA
λ=光波波
d) （物镜的数值孔径值）NA=n×sinα α=镜口角的半数
【基本原理】
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低， 肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩 而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。 而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且 脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先 滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为 无色，用复染剂（如番红）染色后又变为复染剂颜色（红）。
★可知n（介质折射率）对提高显微镜的分辩力起着关键性的作
用。
【基本原理】
2. 革兰氏染色 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性 （G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝 紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶 紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。 之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果 不同。
实验四细菌革兰氏染色与芽孢染色
实验四细菌的革兰氏染色与芽孢染色一、目的要求1.学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。
2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
二、实验材料1.菌种：金黄色葡萄球菌（StapHylococcus aureus）大肠杆菌（E.coli）2.试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。
三、实验原理革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的。
通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。
革兰氏染色的基本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。
经过此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革兰氏阴性菌。
大肠杆菌是标准的革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革兰氏阳性菌。
革兰氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。
经结晶紫初染以后，所有的细菌都被染成蓝紫色。
碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。
用蕃红复染时染上红色。
四、操作步骤1.细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养约24h。
2.制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。
3.初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。
4.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。
5.脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色时，立即水洗。
革兰氏染色法实验报告
革兰氏染色法实验报告实验目的，通过革兰氏染色法对细菌进行染色，观察细菌的形态特征，以及对细菌的分类和鉴定提供帮助。
实验材料和方法，取得所需的细菌培养物，革兰染色试剂，无菌玻璃片等实验器材。
首先在无菌工作台上取一滴细菌培养物涂抹在无菌玻璃片上，然后用火焰消毒的镊子取一根无菌玻璃棒，在细菌培养物上进行搅拌，使其均匀分布。
接着倒入革兰染色试剂，静置片刻后用水冲洗，再用吸水纸轻轻吸干，最后在显微镜下观察。
实验结果，经过革兰氏染色法染色后，我们观察到细菌在显微镜下呈现出两种不同的颜色，其中某些细菌呈紫色，而另一些细菌呈粉红色。
紫色细菌为革兰氏阳性菌，粉红色细菌为革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的壁多糖和较少的脂质，所以在染色后能够保留革兰氏染色试剂的紫色颜色；而革兰氏阴性菌的细胞壁则含有较多的脂质和较少的壁多糖，因此在染色后会失去紫色而呈现粉红色。
实验结论，通过本次实验，我们成功地利用革兰氏染色法对细菌进行了染色，并观察到了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的不同染色结果。
这为我们对细菌的分类和鉴定提供了重要的参考依据。
同时，本次实验也巩固了我们对革兰氏染色法的理论知识，并提高了我们的实验操作技能。
实验注意事项，在进行革兰氏染色法实验时，需要严格遵守无菌操作规范，以免细菌培养物受到外界的污染。
同时，在染色试剂的使用过程中，需要注意避免接触皮肤和呼吸道，以免引起不良反应。
总结，本次实验通过革兰氏染色法的操作，成功地观察到了细菌的染色结果，并对细菌的分类和鉴定提供了重要的参考依据。
在以后的实验中，我们将继续加强对细菌分类鉴定方法的学习和实践，提高我们的实验技能水平。
革兰氏染色法实验报告
革兰氏染色法实验报告实验目的，通过革兰氏染色法对细菌进行染色，观察细菌的形态特征，以及判断细菌的结构类型。
实验材料与方法：材料，大肠杆菌培养液、革兰氏染色试剂（紫晶染液、碘液、酒精、碳酸钠）、玻璃片、显微镜、移液管、灭菌架等。
方法：1. 取一块玻璃片，在玻璃片上滴上一滴大肠杆菌培养液。
2. 用火杀菌的移液管，取少许紫晶染液滴在大肠杆菌液上，静置1分钟。
3. 用移液管滴上碘液，静置1分钟。
4. 用移液管滴上酒精，以使玻璃片上的颜色变浅，然后用水冲洗。
5. 用移液管滴上碳酸钠，静置1分钟，然后用水冲洗。
6. 用吸水纸吸干水分，放在灭菌架上晾干。
7. 取一块盖玻片，将其放在玻璃片上，用手指轻轻按压，使两者紧密结合。
实验结果与分析：观察革兰氏染色后的大肠杆菌，发现其为革兰氏阴性菌，因为在显微镜下观察到的细菌呈现红色。
革兰氏阴性菌的特点是细胞壁含有脂多糖，不易被革兰染色的染料染色，因此在染色后呈现红色。
实验结论：通过本次实验，我们成功地利用革兰氏染色法对大肠杆菌进行了染色，并观察到了细菌的形态特征。
同时，根据染色结果，我们判断出大肠杆菌为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法是一种简单而有效的细菌染色方法，通过本次实验的实践操作，我们对革兰氏染色法有了更深入的理解，为今后的实验操作提供了宝贵的经验。
实验注意事项：1. 实验操作过程中要注意使用消毒的器具，避免细菌污染。
2. 在染色过程中，要严格按照步骤进行操作，避免染色失败。
3. 在观察细菌形态特征时，要调节显微镜，以获得清晰的观察效果。
总结：本次实验通过革兰氏染色法对大肠杆菌进行了染色，成功观察到了细菌的形态特征，并判断出了细菌的结构类型。
革兰氏染色法是一种常用的细菌染色方法，通过本次实验的实践操作，我们对其有了更深入的理解，为今后的实验操作提供了宝贵的经验。
希望通过本次实验，能够增进对细菌染色方法的理解，为今后的学习和研究工作打下良好的基础。
细菌革兰氏染色的实验报告
细菌革兰氏染色的实验报告细菌革兰氏染色的实验报告一、引言细菌革兰氏染色是一种常用的实验方法，用于区分细菌的结构和特性。
通过革兰氏染色，可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，从而在临床诊断和疾病治疗中起到重要的作用。
本次实验旨在探究细菌革兰氏染色的原理和操作方法，并通过观察染色结果，进一步了解细菌的特性。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 细菌培养物：选择两种细菌菌株，一种为革兰氏阳性细菌，另一种为革兰氏阴性细菌。
- 革兰氏染色试剂：包括紫晶染液、碘液、脱色剂和红色染色液。
- 玻璃片和显微镜片：用于制作细菌涂片和观察染色结果。
2. 实验方法：- 步骤一：取两种不同的细菌培养物，分别在玻璃片上制作细菌涂片。
- 步骤二：将制作好的细菌涂片分别加入紫晶染液，静置5分钟。
- 步骤三：用蒸馏水冲洗玻璃片，使其清洁。
- 步骤四：加入碘液，静置1分钟。
- 步骤五：用脱色剂冲洗玻璃片，直到无色流出。
- 步骤六：加入红色染色液，静置1分钟。
- 步骤七：用蒸馏水冲洗玻璃片，使其清洁。
- 步骤八：将玻璃片放在显微镜片上，用显微镜观察细菌染色结果。
三、实验结果与讨论通过观察细菌染色结果，可以清晰地看到两种细菌的差异。
革兰氏阳性细菌在染色后呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌则呈红色。
这是因为细菌细胞壁的结构不同导致的。
革兰氏阳性细菌具有较厚的层状细胞壁，由多层的胞外多糖和蛋白质组成。
在染色过程中，细菌细胞壁的多糖会与紫晶染液结合，形成复合物。
而碘液的加入会使复合物更加稳定，不易被脱色剂去除。
因此，革兰氏阳性细菌在染色后仍保持紫色或蓝色。
相反，革兰氏阴性细菌细胞壁较薄，主要由一个薄层的胞外脂多糖组成。
在染色过程中，细菌细胞壁的脂多糖无法与紫晶染液结合，因此无法形成复合物。
碘液的加入也无法稳定脂多糖，使其被脱色剂去除。
因此，革兰氏阴性细菌在染色后会被红色染色液覆盖，呈现红色。
细菌革兰氏染色的结果可以帮助我们快速区分细菌的类型，从而指导临床的诊断和治疗。
细菌革兰氏染色实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌革兰氏染色的原理和方法。
2. 学会使用油镜观察细菌的形态。
3. 了解革兰氏染色在细菌分类鉴定中的重要性。
二、实验原理革兰氏染色是细菌学中一种重要的染色方法，主要用于区分细菌的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在细胞壁结构上存在显著差异，导致它们在革兰氏染色过程中表现出不同的染色特性。
革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖含量高，交联度大，乙醇脱色处理后，细胞壁收缩，但结晶紫-碘复合物仍然被留在细胞内，使细菌呈紫色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，肽聚糖层薄且交联度差，乙醇脱色处理后，细胞壁溶解，结晶紫-碘复合物被脱出，再经碱性品红染液复染，使细菌呈红色。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、革兰氏染色液（草酸铵结晶紫、碘液、95%乙醇、碱性品红染液）、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、酒精灯等。
2. 仪器：显微镜、油镜、移液器、移液吸头等。
四、实验步骤1. 涂片：取一环蒸馏水于载玻片中央，用接种环挑取少量枯草芽孢杆菌与玻片上的水滴均匀混合，并涂成约1cm²的薄菌膜。
2. 固定：将涂片在空气中干燥，手持玻片一端，有菌膜的一面朝上，玻片在微火上快速通过3次，以让菌膜更加牢固地贴在玻片上，待冷却后滴加染料。
3. 初染：手持玻片一端，滴加草酸铵结晶紫染液染色2min后，倾去染液。
4. 媒染：向涂片滴加碘液，媒染1min后，倾去碘液。
5. 脱色：向涂片滴加95%乙醇，脱色30s，观察菌体颜色变化，直至出现红色。
6. 复染：向涂片滴加碱性品红染液，复染1min后，倾去染液。
7. 洗涤：用蒸馏水冲洗涂片。
8. 染色观察：用油镜观察菌体形态和染色特性。
五、实验结果与分析1. 枯草芽孢杆菌：呈革兰氏阳性菌，细胞壁厚，呈紫色。
2. 金黄色葡萄球菌：呈革兰氏阳性菌，细胞壁厚，呈紫色。
六、实验讨论革兰氏染色是一种简单、快速、有效的细菌分类方法。
细菌革兰氏染色的实验报告
细菌革兰氏染色的实验报告
《细菌革兰氏染色的实验报告》
实验目的：
通过革兰氏染色技术对细菌进行染色，观察细菌的形态特征，以便对细菌进行初步分类。
实验材料：
1. 革兰氏染色试剂盒
2. 玻璃载玻片
3. 蒸馏水
4. 火焰灼烧器
5. 染色盘
6. 无菌吸管
7. 细菌培养物
实验步骤：
1. 取一块玻璃载玻片，用火焰灼烧器消毒，待其冷却后放置在染色盘中。
2. 用无菌吸管取少量细菌培养物，滴在玻璃载玻片上。
3. 将玻璃载玻片放置在染色盘中，加入革兰氏染色试剂，按照说明书上的步骤进行染色处理。
4. 将染色好的载玻片在蒸馏水中冲洗干净，待其干燥后即可进行观察。
实验结果：
经过革兰氏染色处理后，观察到细菌在载玻片上呈现出不同的颜色。
革兰氏阳性细菌呈紫色或蓝紫色，而革兰氏阴性细菌呈粉红色。
实验结论：
通过革兰氏染色技术，我们成功地对细菌进行了染色处理，并观察到了细菌的形态特征。
这为我们对细菌的初步分类提供了重要的依据，也为后续的实验研究奠定了基础。
实验总结：
革兰氏染色是一种简单而有效的细菌染色技朋，通过这种技术，我们可以快速地对细菌进行初步分类和鉴定。
在今后的实验研究中，我们将继续运用这一技术，深入研究细菌的形态、生长特性及代谢功能，为人类的健康和环境保护做出更大的贡献。
细菌的革兰氏染色法实验报告
细菌的革兰氏染色法实验报告摘要：革兰氏染色法是一种常用的细菌分类和鉴定方法。
通过本实验，我们成功地利用革兰氏染色法对不同类型的细菌进行了染色，并观察到了细菌在显微镜下的形态特征。
实验结果表明，革兰氏染色法能够有效地将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，为细菌的鉴定提供了重要的依据。
引言：细菌是一类微生物，广泛存在于我们周围的环境中。
了解细菌的分类和鉴定对于研究细菌的生理特性、病原性以及药物敏感性具有重要意义。
革兰氏染色法是一种常用的细菌分类和鉴定方法，通过染色后细菌在显微镜下的形态特征，可以将其分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
材料与方法：1. 细菌培养物：本实验选择了两种细菌培养物，分别是革兰氏阳性菌A和革兰氏阴性菌B。
2. 革兰氏染色试剂：结晶紫、碘液、酒精、脱色剂、苏木精。
3. 显微镜：用于观察染色后的细菌样品。
实验步骤：1. 取两株细菌培养物，分别进行涂片制备。
2. 将制备好的涂片用结晶紫染色液浸泡5分钟，然后用蒸馏水冲洗。
3. 加入碘液浸泡1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
4. 用酒精滴加在涂片上，使其脱色，然后用蒸馏水冲洗。
5. 加入脱色剂浸泡30秒至1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
6. 将涂片用苏木精染色液浸泡1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
7. 涂片晾干后，放入显微镜下观察。
结果与讨论：经过革兰氏染色法染色后，我们观察到了明显的差异。
革兰氏阳性菌A呈紫色，而革兰氏阴性菌B呈红色。
根据革兰氏染色法的原理，我们可以解释这种差异。
革兰氏染色法中，结晶紫染色液首先染色细菌细胞的细胞壁。
革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胞外多糖和胞外蛋白质，能够吸附结晶紫，形成紫色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，胞外多糖和胞外蛋白质含量较少，无法吸附结晶紫，因此在后续的染色步骤中无法保留紫色，最终呈现红色。
革兰氏染色法的原理是通过染色后细菌在显微镜下的形态特征来进行分类和鉴定。
革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，呈紫色，在显微镜下观察到细胞形态较大、圆润。
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Centra物 学 实 验 教 学 中 心
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【实验报告 实验报告】 实验报告
1. 结果 1)绘出油镜下观察的混合区菌体图像. 绘出油镜下观察的混合区菌体图像. 2)填表 表4-1 结果记录表 菌名 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 菌体颜色 细菌形态 结果( 结果(G+,G-)
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微生物学实验
实验四 油镜的使用及细菌革兰氏染色法
课前提问与目的要求 【课前提问 课前提问】 课前提问
1.油镜的特点及使用范围是什么? 1.油镜的特点及使用范围是什么? 油镜的特点及使用范围是什么 2.革兰氏染色的原理是什么? 2.革兰氏染色的原理是什么? 革兰氏染色的原理是什么
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【基本原理 基本原理】 基本原理
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高,壁厚且脂质含量低, 革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高,壁厚且脂质含量低, 肽聚糖本身并不结合染料,但其所具有的网孔结构可以滞留碘肽聚糖本身并不结合染料,但其所具有的网孔结构可以滞留碘结晶紫复合物, 结晶紫复合物,现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩 而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁,菌体保持原有的蓝紫色. 而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁,菌体保持原有的蓝紫色. 而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低,交联度低, 而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低,交联度低,壁薄且 脂质含量高,乙醇处理时脂质溶解,细胞壁通透性增加, 脂质含量高,乙醇处理时脂质溶解,细胞壁通透性增加,原先 滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来, 滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来,菌体变为 无色,用复染剂(如番红)染色后又变为复染剂颜色( 无色,用复染剂(如番红)染色后又变为复染剂颜色(红).
★可知n(介质折射率)对提高显微镜的分辩力起着关键性的作 可知n 介质折射率) 可知
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【基本原理 基本原理】 基本原理
2. 革兰氏染色 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性(G+) 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性(G+)和革兰氏阴性 (G-)两种类型,细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 两种类型, 细胞壁的成分和结构不同而造成的. 细胞壁的成分和结构不同而造成的. 首先利用草酸铵结晶紫初染, 首先利用草酸铵结晶紫初染,所有细菌都会着上结晶紫的蓝 紫色.然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理, 紫色.然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理,由于碘与结晶 紫形成碘-结晶紫复合物,增强了染料在菌体中的滞留能力. 紫形成碘-结晶紫复合物,增强了染料在菌体中的滞留能力. 之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时, 之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时,两种细菌的脱色效果 95%乙醇作为脱色剂进行处理时 不同. 不同.
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【方法步骤 方法步骤】 方法步骤
4)复染:将玻片上残留水用吸水纸吸去,用番红复染液染色 复染:将玻片上残留水用吸水纸吸去, 2min,水洗,吸去残水晾干( 2min,水洗,吸去残水晾干(图4-1). 3.镜检:干燥后,油镜观察.以分散开的细菌颜色为准, 3.镜检:干燥后,油镜观察.以分散开的细菌颜色为准,革兰 镜检 氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色. 氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色. 4.混合制片观察:一载玻片上两种菌混合制片,对比观察. 4.混合制片观察:一载玻片上两种菌混合制片,对比观察.菌 混合制片观察 龄和脱色程度对染色结果影响较大. 龄和脱色程度对染色结果影响较大.
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【基本原理 基本原理】 基本原理
1. 油镜提高分辨率 油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间是隔一层油质. 油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间是隔一层油质. 如香柏油的折射率n=1.52,与玻璃相同. 如香柏油的折射率n=1.52,与玻璃相同. n=1.52 a)光线通过不减低视野的照明度; a)光线通过不减低视野的照明度; 光线通过不减低视野的照明度 b)更主要能增加数值孔径,提高显微镜的放大效能. b)更主要能增加数值孔径,提高显微镜的放大效能. 更主要能增加数值孔径 分辨率=λ/2NA 分辨率=λ/2NA λ=光波波 λ=光波波 α=镜口角的半数 α=镜口角的半数 (物镜的数值孔径值)NA=n×sinα 物镜的数值孔径值)NA=n× 用.
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【实验报告 实验报告】 实验报告
2. 思考题 1)革兰氏染色是否成功,有哪些问题需要注意,为什么? 革兰氏染色是否成功,有哪些问题需要注意,为什么? 2)现有一株未知杆菌,个体明显大于大肠杆菌,请你鉴定该 现有一株未知杆菌,个体明显大于大肠杆菌, 菌是革兰氏阳性还是革兰氏阴性, 菌是革兰氏阳性还是革兰氏阴性,如何确定你染色结果的正确 性? 3)为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性? 为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性? 4)你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略?在何种情况下 你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略? 可以省略? 可以省略?
【实验用品 实验用品】 实验用品
菌种:大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物, 16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物 1. 菌种:大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,金黄色 葡萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物. 葡萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物. 16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物 试剂:革兰氏染液,草酸铵结晶紫染液,卢戈氏(Lugol) 2. 试剂:革兰氏染液,草酸铵结晶紫染液,卢戈氏(Lugol) 碘液,95%乙醇,番红复染液等. 碘液,95%乙醇,番红复染液等. 乙醇 仪器和其他用品:酒精灯,载玻片,显微镜,双层瓶( 3. 仪器和其他用品:酒精灯,载玻片,显微镜,双层瓶(内装 香柏油和二甲苯),擦镜纸,接种环,试管架,镊子, 香柏油和二甲苯),擦镜纸,接种环,试管架,镊子,载玻 ),擦镜纸 片夹子,载玻片支架,滤纸,滴管和无菌生理盐水等. 片夹子,载玻片支架,滤纸,滴管和无菌生理盐水等.
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【注意事项 注意事项】 注意事项
★涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;火焰固定不宜 涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性; 涂片不宜过厚 过热(以玻片不烫手为宜). 过热(以玻片不烫手为宜). ★加热时使用载玻片夹子及试管夹,以免烫伤. 加热时使用载玻片夹子及试管夹,以免烫伤. 加热时使用载玻片夹子及试管夹 ★使用染料时注意避免沾到衣物上. 使用染料时注意避免沾到衣物上. 使用染料时注意避免沾到衣物上 ★使用乙醇脱色时勿靠近火焰. 使用乙醇脱色时勿靠近火焰. 使用乙醇脱色时勿靠近火焰 ★实验后洗手. 实验后洗手. 实验后洗手
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【方法步骤 方法步骤】 方法步骤
涂片:将大肠杆菌(16h)和金黄色葡萄球菌(16h) 1. 涂片:将大肠杆菌(16h)和金黄色葡萄球菌(16h)分别 涂片,干燥,固定. 涂片,干燥,固定. 染色: 2. 染色: 1)初染:加草酸铵结晶紫一滴(以刚好将菌膜覆盖为宜), 初染:加草酸铵结晶紫一滴(以刚好将菌膜覆盖为宜), 染色1 2min后倾去染液 水洗至流出水无色; 后倾去染液, 染色1～2min后倾去染液,水洗至流出水无色; 2)媒染:先用卢戈氏碘液冲去残留水迹,再用碘液覆盖1min, 媒染:先用卢戈氏碘液冲去残留水迹,再用碘液覆盖1min, 1min 倾去碘液,水洗至流出水无色. 倾去碘液,水洗至流出水无色. 3)脱色:用滤纸吸去玻片上的残水(从边缘吸,以防擦去菌 脱色:用滤纸吸去玻片上的残水(从边缘吸, 体),将玻片倾斜,并衬以白背景,用95%乙醇滴洗至刚刚无紫 ),将玻片倾斜,并衬以白背景, 95%乙醇滴洗至刚刚无紫 将玻片倾斜 色为止, 30秒 立即用水冲去乙醇; 色为止,约20～30秒,立即用水冲去乙醇;
【目的要求 目的要求】 目的要求
学习并掌握油镜的原理和使用方法; 1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法; 了解革兰氏染色原理; 2. 了解革兰氏染色原理; 学习并掌握革兰氏染色的方法. 3. 学习并掌握革兰氏染色的方法.
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图4-1 革兰氏阳性菌和阴性菌细胞壁比较
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