实验二 革兰氏染色法

实验二革兰氏染色法

【实验目的】

1.学习并初步掌握革兰氏染色法。

2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。

3.巩固显微镜油镜的使用方法。

【实验仪器、材料】

1.菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌菌液。

2.染色剂：革兰氏染色试剂盒（结晶紫染色液、碘液、脱色液（95%乙醇）、复红染液）。

3.仪器及其他物品：

显微镜、香柏油、无水乙醇、载玻片、擦镜纸、滤纸、酒精灯、试管架、废液缸、记号笔、接种环、镊子、打火机等。

【实验内容】

革兰氏染色法

一、染色标本制备

1.涂片取一张洁净的载玻片，滴加少许生理盐水，用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，与生理盐水研磨均匀，做一薄而均匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。（事先在载玻片的反面滴加菌液的相应位置做好标记）

2.干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥。(温度不宜过高)

3.固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常

用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。

二、染色

l.初染滴加结晶紫覆盖菌膜，染lmin，自来水缓缓冲洗，甩去积水。

2.媒染滴加卢氏碘液，染lmin，水洗，甩去积水。

3.脱色滴加95%乙醇数滴，20s~30s，见紫色脱下立即用水冲洗，甩去积水。

4.复染滴加石炭酸复红液，染lmin，水洗，甩去积水，标本片用滤纸吸干。

三、镜检

待染色片充分干燥后，用油镜观察。

【实验结果】

葡萄球菌呈葡萄状排列，呈紫色，为革兰氏阳性菌；

大肠杆菌为散在的短小杆菌，呈红色，为革兰氏阴性菌。

注：绘图展示染色结果

【结果分析、讨论（结论与评价）】

注：分析你的染色结果是否正确？如果不正确，请分析原因。