生物安全管理体系文件
实验室生物安全体系文件模板
实验室生物安全体系文件模板引言实验室生物安全是确保实验室内生物物质安全，并最大限度减少对人员、环境和社会的潜在风险的重要系统。
为了建立和维护实验室生物安全，制定一套完备的生物安全体系文件至关重要。
本文档提供了一个实验室生物安全体系文件模板，旨在帮助实验室建立符合生物安全要求的管理体系。
责任和授权•实验室负责人应在实验室存放并定期更新生物安全体系文件。
•实验室负责人应确保生物安全政策和流程的落实。
•实验室负责人应授权适当的人员参与实验室生物安全体系的规划、实施和维护。
定义和缩略词•生物安全：保护生物物质、人员、环境和社会免于生物学危害的措施和实践。
•实验室：用于进行生物学实验和研究的场所。
•生物物质：包括但不限于细菌、病毒、寄生虫、真菌、细胞系、动植物等生物样品。
生物安全政策本实验室生物安全体系的目标是确保实验室内生物物质的安全，并最大限度减少对人员、环境和社会的潜在风险。
我们承诺遵守国家和地区的相关生物安全法规、标准和指南，并不断提升生物安全管理水平。
生物安全管理体系文件以下文件构成本实验室的生物安全管理体系： 1. 生物安全管理手册 2. 生物安全风险评估和控制程序 3. 生物安全培训计划和记录 4. 生物安全事故应急预案 5. 生物安全设施和设备的维护和验证程序 6. 生物安全监测和报告程序 7. 生物安全审核和持续改进程序生物安全管理手册生物安全管理手册是本实验室生物安全体系的核心文件。
它应包含以下内容：- 生物安全管理体系的范围和目标 - 实验室生物安全组织架构 - 生物安全职责和授权备忘录 - 生物安全风险评估和控制程序的概述 - 生物安全培训计划和记录的要求- 生物安全事故应急预案的概述 - 生物安全设施和设备的维护和验证程序的概述 -生物安全监测和报告程序的概述 - 生物安全审核和持续改进程序的概述生物安全风险评估和控制程序生物安全风险评估和控制程序用于评估实验室内生物物质的风险，并制定相应的控制措施。
生物安全实验室管理体系文件
生物安全实验室管理体系文件一、引言生物安全实验室是进行生物实验研究与开发的重要场所，对于保障实验室工作人员和环境安全具有重要意义。
为了确保生物实验室能够高效、安全地运行，制定一套科学的管理体系文件是必不可少的。
本文档旨在规范生物安全实验室的管理体系，确保实验室的运作符合国家规定和最佳实践标准。
二、管理体系和目标2.1 管理体系生物安全实验室管理体系是指通过制定、实施和维护一系列符合法律法规和规范要求的管理制度，保障生物实验室的正常运行并提高管理水平。
生物安全实验室管理体系包括以下几个方面：•安全管理制度：确定安全管理的原则和责任，建立安全管理组织结构，制定安全管理制度和操作规程。
•实验室环境管理：确保生物实验室环境的洁净度、安全性和卫生状况。
•生物安全管理：制定生物安全评估和防控措施，在实验室内严格执行生物安全措施，管理实验室内的生物材料。
•应急管理：建立应急预案和管理制度，提高应急管理能力，保障实验室发生突发事件时能够进行及时处置。
•培训与教育：培训实验室工作人员，提高他们的安全意识和技能水平。
2.2 目标生物安全实验室管理体系的目标如下：1.降低生物实验室事故和事故后果，确保实验室工作人员的生命安全和身体健康。
2.保护实验室内外的环境，防止生物材料泄漏对环境造成污染和危害。
3.提供一个安全和健康的工作环境，保障实验室工作人员的心理健康。
4.提高生物实验室管理水平，提升实验室科研开发工作的质量和效率。
三、管理要求3.1 安全管理制度为了建立科学的安全管理制度，生物安全实验室应遵循以下要求：•明确安全管理的原则和责任，并建立安全管理指导委员会。
•制定安全管理制度、操作规程和相关的应急预案。
•确保安全管理制度的有效实施，并定期进行评审和修订。
3.2 实验室环境管理为了确保实验室环境的洁净度、安全性和卫生状况，生物安全实验室应遵循以下要求：•确保实验室的设计、建设和改造符合相关标准要求。
•建立实验室环境监测和检测体系，定期对实验室环境进行检测和评估。
制药企业(公司)生物安全管理体系
制药企业（公司）生物安全管理体系一、体系要素为了确保生物风险可控，涉及到感染性物质作业的相关企事业单位（包括研究机构、生产性企业、疾控医院检验、储存运输等），必须建立对应的生物安全管理体系。
生物安全管理主要参照《生物安全法》、《实验室生物安全通用要求》（GB19489）、《WHO 生物安全手册》、《疫苗生产车间生物安全通用要求》国卫办科教函[2020]483 号、《兽用疫苗生产企业生物安全三级防护检查验收评定标准》、跨国公司最佳实践等内容建设，必要时，可局部参照欧盟、美国、加拿大等国家最新公布的研究成果进行补充完善。
公共卫生流行病管理，按照国家传染病相关要求执行。
生物安全管理体系可作为EHS 体系的分支进行管理，生物安全体系通用要素（如承诺、职责、方针政策、目标、CAPA、检查与内审，持续提升等）纳入EHS 体系遵照 PDCA 的原则进行管理。
下面列出具有生物安全典型特征的体系要素：（1）组织与人员方面：生物安全委员会，生物安全官与生物安全专家团队（SMEs），人员资质，实验室资质，生物安全培训等；（2）风险与设施方面：生物安全风险评估，不同等级生物安全区域的通用要求（BSL-1~BSL-4），不同等级实验动物设施的生物安全要求，典型生物安全设备要求（生物安全柜、安全设施等），空调系统与公用工程系统，生物安全安保要求等；（3）流程与制度：微生物学操作规范（SOPs)，消毒、去污与灭菌，重组 DNA/ 基因修饰技术要求，废弃物管理（含废水、废气），健康监护与免疫接种，生物安全事故与应急，个人防护，感染性物质的运输（厂内、厂外），菌毒种管理等，生物安全信息告知与维护；（4）其他要求：化学品操作危害防控，火灾和电气风险防控等。
二、生物安全概念的实验室及厂房主要考量点生物安全实验室通常分为四个等级：（1）基础实验室：一级生物安全水平；（2）基础实验室：二级生物安全水平；（3）防护实验室：三级生物安全水平；（4）最高防护实验室：四级生物安全水平。
实验室生物安全管理体系文件2024
实验室负责人应及时将异常情况上报给上级主管部门和生物安全委员会，同时 配合相关部门进行调查和处理。在处理过程中，应保持信息透明，及时公布处 理进展和结果。
07
总结与展望
本次文件修订内容回顾
01
更新实验室生物安全 标准和操作规范
本次修订对实验室生物安全标准和操 作规范进行了全面更新，引入了新的 技术和方法，提高了实验室生物安全 管理的科学性和有效性。
未来实验室生物安全管理将更加注重智能化技术的应用，如人工智能、大数据等，提高实验室生物安全管理的效率和 准确性。
实验室生物安全国际合作与交流加强
随着全球化进程的加速，实验室生物安全的国际合作与交流将更加频繁和紧密，共同应对全球性的生物安全风险。
实验室生物安全法规与标准不断完善
未来实验室生物安全法规与标准将不断完善，以适应生物技术的快速发展和实验室生物安全的新挑战。
应急响应
在发生突发事件时，立即启动应急预 案，组织实验人员进行紧急疏散和现 场处置，同时向上级主管部门报告情 况并请求支援。
实验室生物安全操作规范与
04
流程
实验人员培训与考核
01 实验人员资格要求
所有实验人员必须持有相关专业的学历证明，并 经过实验室生物安全培训，获得合格证书后方可 上岗。
02 培训内容
05
管理
设施布局及功能区域划分
实验室整体布局
标识标牌设置
合理规划实验室空间，确保各功能区 域互不干扰，降低交叉污染风险。
在各功能区域显著位置设置标识标牌 ，标明区域名称、功能及注意事项， 方便人员识别和管理。
功能区域划分
明确划分清洁区、半污染区和污染区 ，设立独立的样品处理、实验操作、 菌（毒）种保藏、洗消等区域。
生物安全实验室管理体系文件有哪些
生物安全实验室管理体系文件有哪些生物安全实验室是进行生物研究和实验的特殊场所，为了确保实验过程的安全性和有效性，需要建立完善的管理体系文件。
下面将介绍生物安全实验室管理体系中常见的文件，包括安全手册、操作规程、应急预案和培训材料。
1. 安全手册安全手册是生物安全实验室的管理指南，它包含了实验室的安全政策、管理原则、安全操作规范和应急措施等内容。
安全手册的目的是为了确保实验室人员了解并遵守实验室的安全规定，从而降低实验操作引发事故的风险。
在安全手册中，应包括实验室区域划分、实验操作规范、生物安全实验室级别说明以及设备使用和维护等方面的内容。
2. 操作规程操作规程是对于特定实验操作的详细步骤和要求的描述。
在生物安全实验室中，操作规程是指导实验人员进行实验操作的重要文件。
操作规程应包括实验操作的目的、预期结果、所需试剂和设备、操作步骤、安全注意事项，以及实验后处理等内容。
通过制定和执行操作规程，可以确保实验操作的一致性、准确性和安全性。
3. 应急预案应急预案是针对突发事件和事故的应急处理方案。
在生物安全实验室管理体系中，应急预案是保障实验操作中发生意外或事故时能够及时、有序地进行处理的重要文件。
应急预案应包括各类突发事件和事故的处理程序、联系人和电话、应急设备和药品的储备，以及应急演练的计划和记录等内容。
通过定期演练和更新应急预案，可以提高实验操作过程中应对突发事件的效率和准确性。
4. 培训材料培训材料是用于对实验室人员进行安全培训的教材或幻灯片。
在生物安全实验室管理体系中，培训材料是确保实验室人员具备相关安全知识和技能的重要工具。
培训材料应包括实验室安全规定、操作规程、应急预案以及相关法规法规等内容。
通过培训材料的使用，实验室管理者可以向实验人员传授安全操作技能和紧急情况处理方法，提高实验室人员的安全意识和应对能力。
结论生物安全实验室管理体系文件的设计和实施对于实验室的安全和顺利运行至关重要。
安全手册、操作规程、应急预案和培训材料是生物安全实验室常见的管理文件，通过制定和执行这些文件，可以确保实验操作的安全性和有效性。
生物安全实验室管理体系文件是什么
生物安全实验室管理体系文件是什么引言生物安全实验室是进行高风险生物实验的特定场所，为了确保实验室内安全可控，管理者需要建立生物安全实验室管理体系，并编写相应的管理文件。
生物安全实验室管理体系文件是对实验室管理、操作和安全控制的规范性文件，旨在确保实验室内的工作符合安全性和合规性要求。
生物安全实验室管理体系文件的目的生物安全实验室管理体系文件的主要目的是以下几方面：1.确保实验室操作的安全性：生物安全实验室涉及对生物材料的处理和实验操作，管理体系文件旨在制定一系列安全控制措施，以最大程度地减少人员接触生物危害物质的风险，保护实验人员和环境的安全。
2.规范实验室管理流程：生物安全实验室管理体系文件包含了实验室的管理规定、工作流程和责任分工等内容，旨在确保实验室工作有序进行，各项操作符合法规要求，同时便于管理者对实验室运行情况进行监督和评估。
3.促进实验室合规性：生物安全实验室管理体系文件是基于相关法规标准的要求而建立的，对实验室的运营和管理进行规范。
严格遵守这些管理文件有助于实验室符合监管机构和国际组织的相关要求，确保实验室持续合规。
生物安全实验室管理体系文件的内容生物安全实验室管理体系文件可以包括以下内容：1.实验室安全政策和目标：规定实验室安全管理的基本原则和目标，明确实验室的安全政策，为实验室管理和操作提供整体指导。
2.实验室管理体系组成和职责：明确实验室管理体系的组织结构和各个成员的职责，包括实验室主任、安全责任人、实验室技术人员等，确保实验室管理层级清晰、责任明确。
3.实验室操作规范：制定实验室内各项操作的规范，包括生物材料的接收、储存、处理、实验操作等，要求操作人员按照规范进行操作，确保实验室操作的安全性。
4.实验室设施和设备管理：明确实验室设施和设备的管理要求，包括设备的日常维护保养、校准、验证，确保设备的正常运行和操作的可靠性。
5.安全培训和教育：制定实验室人员的安全培训和教育计划，包括必要的生物安全知识、操作技能培训，确保实验室人员具备必要的安全意识和操作技能。
BSL-2实验室生物安全管理体系文件
a）紧急电话、联系人；
h）电气安全；
b）实验室平面图、紧急出口、撤离路 i）低温、高热；
线；
j）消防；
c）实验室标识系统；
k）个体防护；
d）生物危险；
l）危险废物的处理和处置；
黄培堂
我国生物安全法规汇编（2007）
第一部分 我国生物安全基本法规
➢ 中华人民共和国传染病防治法2004.12 ➢ 中华人民共和国环境影响评价法2003.09 ➢ 中华人民共和国固体废物污染环境防治法
2005.04
➢ 中华人民共和国进出境动植物检疫法 1991.10
➢ 突发公共卫生事件应急条例2003.05 ➢ 重大动物疫情应急条例2005 ➢ 病原微生物实验室生物安全管理条例
实验室安全管理的方针和目标 安全管理手册（目标和原则） 程序文件（过程） 说明及操作规程（方法） 安全手册 记录（证据） 标识系统
7.4.1 实验室安全管理的方针和目标
7.4.1.1 在安全管理手册中应明确实验室安全管理的方针和目标。安全管理的方针应简明扼 要，至少包括以下内容：
a）实验室遵守国家以及地方相关法规和标准的承诺； b）实验室遵守良好职业规范、安全管理体系的承诺； c）实验室安全管理的宗旨。 7.4.1.2 实验室安全管理的目标应包括实验室的工作范围、对管理活动和技术活动制定的安
生物安全防护水平分级 实验室设计原则及基本要求 实验室设施设备要求
生物安全管理手册实例
第0章 目录 修订页 编制说明 定义和术语 实验室生物安全防护水平分级
第1章 概述 第2章 安全管理体系 第3章 生物安全管理方针、目标和承诺 第4章 生物安全手册的管理 第5章 文件控制 第6章 组织和管理 第7章 管理责任 第8章 个人责任 第9章 安全计划 第10章 安全检查 第11章 不符合项的识别和控制 第12章 纠正措施 第13章 预防措施
实验室生物安全管理体系文件编写及运行范例
实验室生物安全管理体系文件编写及运行范例1. 引言实验室生物安全管理是保障实验室安全、确保实验数据的可靠性和保护研究人员健康的重要措施。
本文档旨在为实验室生物安全管理提供指导，包括编写生物安全管理体系文件和运行范例。
2. 生物安全管理体系文件编写2.1 目的与范围生物安全管理体系文件的目的是规范实验室内生物安全管理的各项措施，确保生物实验的安全和有效进行。
范围包括实验室基础设施、实验材料、操作规范、紧急处理等方面。
2.2 主要内容生物安全管理体系文件应包括以下主要内容：2.2.1 实验室基础设施描述实验室的基础设施情况，包括生物安全柜、通风系统、紧急设备等，并规定其维护保养要求。
2.2.2 实验材料管理明确实验所需的生物材料种类、来源、储存条件和管理要求，包括细菌培养物、病毒样品、转基因生物等，以及其相关的标识、记录和处置要求。
2.2.3 操作规范规定实验操作流程，包括实验前准备、样品采集、处理方法、操作注意事项等。
同时，针对不同级别的生物危害性实验，制定相应的防护要求和操作限制。
2.2.4 废弃物管理详细规定实验室废弃物的分类、收集、存储和处置要求，确保废弃物的安全处理，防止对环境造成污染和传播生物危害物质。
2.2.5 紧急处理制定各类事故和紧急情况的处理流程和措施，包括生物泄漏、事故伤害、火灾等，以保障研究人员和实验环境的安全。
3. 生物安全管理体系运行范例为了明确生物安全管理体系的运行方式，以下是一个运行范例：3.1 生物安全管理责任制度制定实验室内的生物安全管理责任制度，明确相关人员的职责和权限，包括实验室负责人、技术人员和安全管理人员等。
3.2 生物安全教育和培训定期组织生物安全培训，培养研究人员的安全意识和相关技能。
培训内容包括危险性评估、实验操作规范、紧急处理等，同时加强安全知识的宣传和普及。
3.3 实验室内部巡查和评估定期进行实验室安全巡查和评估，发现问题及时整改。
检查内容包括实验室基础设施的完好性、生物材料的储存条件、废弃物处理情况等。
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实验室生物安全管理制度目的：确保实验人员生物安全，环境不受污染，样品质量不受影响特制定该管理制度。
一、人员准入条件1、实验室人员、辅助人员和外来人员必须具备相应的专业技能、受过相关的实验室生物安全培训、了解实验室潜在的生物危害和特殊要求，经负责人审批后方可进入相应的实验室工作。
2、未成年人、孕妇和有免疫缺陷的人员不得进入实验室，处于易受感染状态或感染后果严重的额人员也不得进入实验室。
3、实验室人员必须在身体状况良好、穿戴好防护服（白大衣）的情况下，方能进入实验室的污染区域工作。
但当身体出现较大的开放性损伤、处于较重的疾病感染状态或呈重度疲劳状态时不得进入。
4、外来参观人员需经科室负责人同意并在相关人员陪同下方可进入实验室。
二、生物安全日常管理：(一)生物安全行为规范1．进入实验室前要摘除首饰，修剪指甲，以免刺破手套。
长发应束在脑后，禁止在实验室内穿露脚趾的鞋。
不得佩戴有可能被卷入机器或可随人传染性物质的饰物。
2．在实验室里工作时，要始终穿着实验服，实验室外禁止穿防护服（白大衣）。
大白衣应定期清洗、更换，清洗时应使用具有杀菌消毒的洗液或其他相应方法。
3、操作感染性物质、腐蚀性或毒性物质时须在通风橱中进行，并佩戴相关的安全防护用品，如安全镜、面罩或护目镜。
皮肤受损时应以防水敷料覆盖。
4、当有必要保护眼睛和面部以防实验对象喷溅、或紫外线辐射时，必须要配戴护目镜，面罩（带护目镜的面罩）或其它防护用品。
5、实验室工作区不允许吃、喝、化妆和操作隐形眼镜，禁止在实验室工作区内的任何地方贮存人用食品及饮料。
6、实验室防护服不应和日常服饰放在同一柜子。
个人物品、服装和化妆品不应放在有规定禁放的和可能发生污染的区域。
7、不得涉及呼吸道传播疾病样品室，要佩戴符合要求的防护口罩。
(二)操作准则1、所有样本、培养物均可能有传染性，操作时均应带手套。
在认为手套已被污染时应脱掉手套，马上洗净双手，再换一双新手套。
2、当实验过程可能涉及到直接或意外接触到血液、有传染性的材料或被感染的动物时，必须要戴上合适的手套，脱手套后必须洗手。
在实际或可能接触了血液、体液或其他污染材料后，即使戴有手套也应立即洗手。
3、不得用戴手套的手触摸自己的眼、鼻子或其他暴露的黏膜或皮肤。
不得带手套离开实验室或在实验室来回走动。
4、严格禁止用嘴操作实验器材，包括吸液、吹酒精灯等。
实验材料禁止放入嘴里。
禁止舔标签。
5、尽量用塑料制品代替玻璃制品，不使用破裂或有缺口的玻璃器具。
破损的玻璃不能直接用手直接操作，必须用机械方法清除，如刷子、夹子、镊子等。
破裂的玻璃器具和比例碎片应丢弃在有专门标记的、单独的，不易刺破的容器里。
6、所有的实验步骤都应尽可能使气溶胶或气雾的形成控制在最小程度。
任何使形成气溶胶的危险性上升的操作都必须在生物安全柜里进行。
有害气溶胶不得直接排放。
7、应尽可能减少使用利器和尽量使用替代品。
包括针头、玻璃、一次性手术刀在内的利器，应在使用后立即放在耐扎容器中。
尖利物容器应在内容物达到三分之二前置换。
8、所有溅出事件、意外事故和明显或潜在的暴露于感染性材料，都必须向实验室负责人报告。
此类事故的书面材料应存档。
9、所有弃置的实验室生物样本、培养物和被污染的废弃物应被假定有传染性，在从实验室中取走之前，应以安全方式处理和处置，使其达到生物学安全。
10、实验室应保持整洁、干净，当潜在的危险物溅出或一天的工作结束后，所有操作台面、离心机、加样枪、试管架必须擦拭、消毒。
11、每日工作完毕，最后一个离开实验室的人员需关好水、电、门、窗。
(三)监督与检查1、涉及病原体的科室负责人要经常对各项实验的生物安全性进行检查和监督。
2、各实验项目主管人员要定期对所开展的实验工作进行监督与检查，及时发现并报告安全隐患事件。
三、常见实验室废弃品处理实验室废弃品按物理类型而言可分为固体废弃品、液体废弃品及气体废弃品，就危害类型而验分为化学毒性废品和病原性废品，由于废弃物品具有潜在的致病性、伤害性，如不妥善处理会造成很大的人身危害、环境污染和社会危害。
根据《国家危险废物品名录》、《医疗废物管理条例》、卫生部和国家环境保护总局制定的《医疗废物分类目录》有关规定的要求，对实验室废弃物进行分类，主要包括感染性废弃物、病理性废弃物、损伤性废弃物、化学性和放射性废弃物等。
四、支持文件1.《中华人民共和国传染病防治法》2.《病原微生物实验室生物安全管理条例》3.《实验室生物安全通用要求》(改变9489-2004)4.《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》（WS233-2003）5.《实验室生物安全守则》（WHO,第三版，2004年）6.《病原微生物实验室生物安全》（生物安全培训卫生部规划教材，第2版）7.《医疗废弃物管理条例》8.《实验室生物安全》病毒制备质量管理体系目录原始病毒的扩增大量病毒制备的灭菌操作病毒制备程序痘苗病毒的收获和纯化腺病毒的收获和纯化病毒滴度测定病毒质控细菌污染及检测支原体污染及检测基因检测病毒活性检测体外细胞杀伤复制能力检测原始病毒的扩增---病毒种子制备一般原始病毒的扩增用优质（无污染-须通过细菌和支原体检测）CV1 / JH293细胞，每种原始病毒的扩增需要在一个细胞融合度≧80%（细胞处于对数生长期，活性好，感染效率高）的T175培养瓶中进行：1.细胞计数：①培养箱中取出细胞，镜下观察，将状态良好，融合度≧80%的细胞移至超净工作台。
②去除细胞培养瓶中的旧培养基。
③PBS冲洗：从无细胞一侧加入适量（约10ml）PBS冲洗细胞后弃上清，酌情反复1~2次，以达到彻底洗掉培养基中的血清成份。
④消化细胞：加入1ml 0.25%胰酶消化液，使之铺满细胞表面，放入培养箱（37℃）作用数分钟后，把培养瓶放置显微镜下观察，发现细胞回缩变圆，细胞间隙增大；或肉眼观察，见到瓶底出现细针孔间隙倾斜瓶子出现流沙样现象即可终止消化。
⑤终止消化：轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，从无细胞面侧加入适量完全培养基（含血清的DMEM）终止消化，并用移液管吸吹数次以打散细胞团块，混合均匀，使之成为单细胞混合液。
⑥计数板准备：用酒精清洁计数板及专用盖玻片，然后用绸布轻轻拭干。
⑦加样：用移液管轻轻吹打细胞悬液，取少许细胞悬液（可酌情稀释），在计数板上盖玻片一侧靠虹吸现象加入微量（约10ul）细胞悬液，使之充满玻璃槽，不可产生气泡，不可溢出外侧亦不可溢入对侧玻璃槽。
如产生上述情况需对计数板冲洗拭干重新加样。
⑧计数：静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移，将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
由于活细胞的遮光率和液体的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
⑨计数时计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格的细胞数，为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定计数原则：计上不计下，计左不计右！如细胞位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。
按下式计算：细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10 000 ×稀释倍数2.感染种子：取平行对照培养优质融合度≧80%的细胞，弃旧培养基并加入含病毒种子的30mL 感染培养基（DMEM+10% FBS+1pfu/cell），轻轻晃动培养瓶，使病毒在培养基中充分混匀。
3. 收集种子：标记病毒种类和培养日期，在37o C，5% CO2条件下培养。
定时（24h/48h/60h/72h)检查CPE(细胞变圆变亮脱壁，漂浮)，待≧80%细胞出现CPE，即可收集。
将含病毒细胞悬液加入50mL离心管中，标记病毒种类和日期，冻存于-80℃备用，并测定病毒滴度，以备感染病毒使用。
大量病毒制备的灭菌准备工作1.用过的500mL离心瓶泡入酸液中，过夜，冲洗干净，烤干，高温灭菌。
2.准备足量T175培养瓶必须泡入酸液中，过夜，用水充分冲洗，干燥，灭菌包布包被灭菌。
3.培养细胞所用的移液管，离心管必须泡入酸液中，过夜，用冲洗干净，干燥，灭菌包布包被灭菌。
4.离心管泡入酸液中，过夜后再处理，针头直接灭菌，在移除针头钱，确保离心管实在一个大烧杯上，这样漏液不会污染操作台。
5.研磨器泡入酸液中，过夜，用水充分冲洗，干燥，灭菌包布包被灭菌。
6.Beckman 超高速离心机及特制转子和离心管准备。
7.V型槽，96孔板，排枪准备。
病毒制备程序一．细胞准备：1.建立细胞种子库：复苏细胞（CV1用于痘苗病毒病毒；JH293用于腺病毒病毒）分别于与第3/5/7/14天取上清两份，一份用于支原体检测，另一份加至培养基中放于培养箱中定时镜下观测，用于细菌检测，保证细胞质量。
待细胞生长细胞融合度≧80%消化传代扩增并冻存足量细胞种子于液氮中，冻存管上须准确标记所冻细胞名字，代数，冻存人以及冻存日期等相关信息。
（慢冻速溶）2.细胞扩增培养：①当1瓶T175培养瓶中细胞生长融合度≧80%时，将培养瓶中培养基吸出，各加入1ml胰酶消化，37℃，2-3分钟；加入适量（5ml）完全培养基终止消化，全部转移至50ML离心管中，总量为6ml。
分别抽取2ml此混合液加入含18ml完全培养基（含10%血清）的T175培养瓶中共三瓶继续培养（1传3），原瓶继续培养待下一次传代。
②继而同上方法扩增至12瓶T175培养瓶培养（1传4）细胞生长融合度≧80%时同上方法扩增至36瓶为一批（1传3），其中1瓶T175培养瓶中细胞作为平行对照，放入37℃ CO2孵育箱中培养48-72小时。
平行对照培养瓶同时放入孵育箱，直至融合度≧80%。
二．病毒感染：①观察平行对照培养瓶中细胞生长率≧80%时，准备进行病毒感染；同时也观察其它所有细胞，对比细胞增殖速度是否一致。
②取平行对照瓶细胞计数，并计算需要感染病毒量（1pfu/cell)。
③-80℃冰箱中取出测定过病毒滴度的病毒种子，按计算好的病毒量配制1080ml（30ml /瓶×36瓶）含2%血清的DMEM培养基。
放入37℃二氧化碳孵育箱中培养48-72小时，或直到≥90%细胞都出现CPE。
痘苗病毒的收获和纯化三．病毒收获：1)从37℃二氧化碳孵育箱中取出达到收获标准的36瓶T175培养瓶，轻轻晃动培养瓶，少量贴壁细胞即刻脱落。
而后移至超净工作台用移液管轻轻吹打未脱落细胞，并将含病毒混合液分装（收集）到灭菌的500ml离心瓶中。
2)移至高速离心机中配平，3500rpm，15min，4℃离心。
3)弃上清，移液管取10ml冷PBS加至离心瓶中重悬混匀，将液体转入50ml 离心管中。