微生物生长曲线测定
微生物实验报告：测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
微生物的典型生长曲线
典型的微生物生长曲线包括四个时期： 调整期、对数期、稳定期、衰亡期。
1、调整期 特点：生长速率常数为零、菌体粗大、RNA含量增加、代 谢活力强、对不良环境的抵抗能力下降。 2、对数期 特点：生长速率最快、代谢旺盛、酶系活跃、活细菌数和 总细菌数大致接近、细胞的化学组成形态理化性质基本一致。 3、稳定期 特点：活细菌数保持相对稳定、总细菌数达到最高水平、 细胞代谢产物积累达到最高峰、是生产的收获期、芽孢杆菌开 始形成芽孢。 4、衰亡期 特点:细菌死亡速度大于新生成的速度、整个群体出现负增 长、细胞开始畸形、细胞死亡出现自溶现象。
典型生长曲线
环科1201 林国俊
微生物生长曲线定量研究液体培养基中 微生物群体生长规律的实验曲线叫做微 生物生长曲线。 典型生长曲线将少量纯种微生物细胞接 种到容积恒定的液体培养基上，在合适 的环境下，细胞就会由小变大，发生有 规律的生长。若以细胞数的对数为纵坐 标，培养时间为横坐标，就可以绘出一 单细胞微生物的典型生
4.3 微生物典型生长曲线
《微生物学》微生物典型生长曲线典型生长曲线:生长曲线的制作生长曲线的制作：接种适温培养定时取样测定生长量将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，每隔一定时间取样，测菌细胞数目。
以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。
典型生长曲线:时期的划分：按照生长速率常数（growth race constant）不同典型生长曲线:1.延滞期、缓慢期其它名称：停滞期、调整期、适应期。
1.现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。
2.特点：生长速率常数= 0细胞形态变大或增长；细胞内RNA特别是rRNA含量增高，原生质嗜碱性增强；合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快），易产生诱导酶；对外界不良条件敏感，（如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物）。
3.原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物。
典型生长曲线:★影响延迟期长短的因素◆菌种：繁殖速度较快的菌种的延迟期一般较短；◆接种物菌龄：用对数生长期的菌种接种时，其延迟期较短，甚至检查不到延迟期；◆接种量：一般来说，接种量增大可缩短甚至消除延迟期（发酵工业上一般采用1/10的接种量）；◆培养基成分：◇在营养成分丰富的天然培养基上生长的延滞期比在合成培养基上生长时短；◇接种后培养基成分有较大变化时，会使延滞期加长，所以发酵工业上尽量使发酵培养基的成分与种子培养基接近。
典型生长曲线:★认识延迟期的特点及形成原因对实践的指导意义◆在发酵工业上需设法尽量缩短延迟期采取的缩短lag phase的措施有：①增加接种量；（群体优势----适应性增强）②采用对数生长期的健壮菌种；③调整培养基的成分，在种子基中加入发酵培养基的某些成分。
④选用繁殖快的菌种◆在食品工业上，尽量在此期进行消毒或灭菌典型生长曲线:2、对数期其他名称：指数期现象：细胞数目以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系；特点：生长速率常数最大，即代时最短。
微生物生长曲线
微生物生长曲线
微生物生长曲线是生物学家用来研究微生物生长行为的一种方法。
微生物在不同温度、饱和度、pH值、营养成分和抗性等参数的影响下，会产生不同的生长率和生长规律。
据此，科学家可以根据实验结果，描述出微生物生长曲线，以此来推断和研究微生物的特性及其适宜生长的环境条件。
一般来说，微生物生长曲线由三个阶段组成，即初始阶段、稳定阶段和衰减阶段。
在初始阶段，微生物的数量会增加，但增长速度较慢，因为细菌种子在营养物质较少的环境中发育比较缓慢，需要较长的时间才能达到一定的数量。
当所需营养物质较多时，微生物的增长速度会加快，进入稳定阶段，细菌数量保持恒定。
而当营养物质衰减，微生物不断死亡，被淘汰，将进入衰减阶段，细菌数量会逐渐减少，趋向于稳定。
微生物的生长曲线也可以由拟合所得的函数来表示，比如指数和Logistic函数。
指数和Logistic函数非常有用，可以用来预测微生物数量随时间取值的变化情况，而且用它们来表示不同温度、饱和度、pH值、营养物质和抗性等参数对微生物增长的影响。
微生物生长曲线不仅可以用于研究微生物的特性，还可以用来监测水质。
微生物可以在水体中繁殖，如果某一地区的水质不佳，微生物的数量会飞快地增长。
反之，如果水质良好，营养物质不足，微生物的数量会相对减少，水质状况也会有所改善。
所以，通过观测微生物生长曲线，可以实时跟踪水体质量，从而调整污染排放量，维持水
质安全。
综上所述，微生物生长曲线是生物学家研究微生物增长行为的主要方法，可以描述和分析微生物的特性，而且还可以用于监测水体质量。
通过跟踪微生物的数量变化，从而调整污染排放量，进而实现水质安全，改善人们的生活环境。
实验三 微生物生长曲线的测定
实验三微生物生长曲线的测定一、实验目的目的1、了解细菌生长曲线特点及测定原理2、学习用比浊法测定细菌的生长曲线二、实验原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。
这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。
因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。
三、实验材料1、菌种2、培养基：肉膏蛋白胨培养基3、仪器和器具721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。
4、流程种子液→标记→接种→培养→测定四、实验步骤1、种子液制备取细菌菌种1支，以无菌操作挑取1环菌液，接入肉膏蛋白胨培养液中，培养18h作种子培养液。
2、标记编号取盛有30mL无菌肉膏蛋白胨培养液的三角瓶6个，分别编号为0、4、8、12、16、2 0。
3、接种培养用2mL无菌吸管分别准确吸取1mL种子液加入已编号的6个三角瓶中，于37℃下振荡培养。
然后分别按对应时间将三角瓶取出测定OD值。
4、生长量测定将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。
微生物的生长曲线图及在实践中的意义
微生物的生长曲线图及在实践中的意义微生物生长曲线是以微生物数量（活细菌个数或细菌重量）为纵坐标，培养时间为横坐标画得的曲线。
一般说，微生物（细菌）重量的变化比个数的变化更能在本质上反应出生长的过程。
曲线可分为三个阶段即生长率上升阶段（对数生长阶段）、生长率下降阶段及内源呼吸阶段。
典型的微生物生长曲线包括四个时期：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期。
1、迟缓期该期菌体增大，代谢活跃，为细菌的分裂繁殖合成并积累充足的酶、辅酶和中间代谢产物；迟缓期长短不一，按菌种本身的遗传特性、菌龄和菌量，以及营养物等不同而异，一般为1～ 4小时。
2、对数期生长速率常数r最大，细胞每分裂一次所需要的时间——代时（generation time，g，又称增代时间）最短；细胞进行平衡生长（balanced growth），菌体各部分的成分均匀；酶系活跃，代谢旺盛；细胞群体的形态与生理特性最一致；微生物细胞抗不良环境的能力最强。
3、稳定期生长速率常数等于0，即新增细胞数和死亡细胞数几乎相等，二者处于动态平衡，活菌数保持相对稳定并达到最高水平，菌体产量也达到最高点；细菌分裂速度降低，代时逐渐延长，细胞代谢活力逐渐减退，开始出现形态和生理特征的改变；细胞内已经开始累积储藏物质，例如肝糖粒、异染颗粒、脂肪粒等；多数芽孢细菌在此期构成芽孢；许多关键的蒸煮产物主要在此期间大量累积并达至最高峰。
4、衰亡期细胞形态发生变化（整体表现为多形态，例如管状或圆形的发育形态），甚至畸形；细胞新陈代谢活力明显降低，有的微生物因蛋白水解酶活力的进一步增强引致菌体丧生并充斥着菌体自溶，释放出来新陈代谢产物；有些革兰氏阳性菌染色反应反应变成阳性；有的微生物在此期间进一步合成或释放对人体有益的抗生素等次级代谢产物，而芽孢杆菌在此期间释放芽孢。
微生物的典型生长曲线
（3）实践意义
• 对以生产菌体或与菌体生长相平行的代谢产物 （乳酸等）为目的的某些发酵生产来说，稳定期 是最佳的收获期；对维生素、碱基、氨基酸等物
质进行生物测定来说，稳定期是最佳测定时期。
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4、衰亡期
衰亡期
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4、衰亡期ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
定义：营养物质耗尽和有毒代谢产物的大量积累， 细菌死亡速率超过新生速率，整个群体呈现出 负增长。
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（2）应对办法
1
通 过 遗 传 学方法改变 种的遗传特 性使延滞期 缩短。
2
利 用 对 数 生长期的细 胞作为“种 子”
3
尽 量 使 接种前后 所使用的 培养基组 成不要相 差太大。
4
适当扩大 接种量等方 式缩短延滞 期
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2、指数生长期
指数期
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2、指数生长期
定义：又称对数生长期，微生物以最大的速率生长和分裂 ，细菌数量呈指数增。
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（1）特点
➢生 长 速 率 常 数 等 于 零。 ➢细 胞 形 态 变 大 或 增 长。 ➢细 胞 内 RNA 尤 其 是 rRNA含量增加，原生 质呈嗜碱性。
➢合 成 代 谢 活 跃 ， 核 糖 体 、 酶 类 和 ATP 的 合成加快，易产生诱 导酶。 ➢对 外 界 不 良 条 件 如 氯化钠溶液浓度、温 度和抗生素等理化因 素反应敏感。
微生物的典型生长曲线
1
1、定义及绘制方法
定义：定量描述液体培养基中微生物群体生 长规律的实验曲线，称为生长曲线。
绘制方法：微生物接种到定量的液体培养基 中，定时取样测定细胞数量，以培养时间 为横座标，以菌数的对数为纵座标作图， 得到的一条反映微生物在整个培养期间菌 数变化规律的曲线。
细菌生长特点及生长曲线的测定
实验原理（分光光度计与比浊法）
朗伯-比尔定律 A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
比浊法虽只能测相对数量，但便捷。某些情况 下，我们重在数量的变化而不在数量本身
三、实验内容
1、分光光度计的使用
2、大肠杆菌生长曲线的测定与绘制
四、实验材料
1. 试剂
蛋白胨、氯化钠、酵母浸粉等。 2. 仪器 托盘天平、高压蒸汽灭菌锅、分光光度计、恒温箱、恒温振荡 器。 3. 玻璃器皿 试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、移液管等。 4. 其它物品
药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、耐高温皮筋、 报纸等。
恒温振荡器（摇床）
五、实验流程
接种→培养→取样→比浊
★实验安排（4人一组） 第一组：LB 培养基，1:100
第二组： LB 培养基，1:50
第三组： LB 培养基，1:20 第四组： LB 培养基，1:100 第五组： LB 培养基，1:10 第六组： LB 培养基，1:5
二、实验原理
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4
数 量
n y=2
0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4 0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
八、讨论
1.接种龄如何影响大肠杆菌生长？
2.培养基营养成分/浓度如何影响大肠杆菌生长？ 3.实验为何观察不到稳定期和衰退期？ （请3选1，作答在实验报告上）
★实验安排（4人一组） 第一组：LB 培养基，1:100
第二组： LB 培养基，1:20
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实验七 测定细菌生长曲线一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
开始培养后，每小时吸取测定一次OD值。
五、实验结果及分析1.实验数据：表一三个小组时间-OD数据开始取样时间10:55 12:01 12:39 13:17 13:53 结束取样时间9:55 11:01 12:09 12:47 13:23 13:59 发酵时间0 1 2 2.5 3 3.5ODt 大肠杆菌单菌落0.004 0.024 0.027 0.027 0.025 0.036 37℃110rpm -0.010 0.049 0.164 0.255 0.312 0.327 30℃200rpm -0.010 0.043 0.088 0.158 0.242 0.3611.0mL 0.010 0.070 0.158 0.266 0.372 0.4363.0mL 0.039 0.096 0.257 0.373 0.420 0.4515.0mL 0.067 0.134 0.302 0.361 0.334 0.456 枯草杆菌37℃200rpm 0.008 0.023 0.076 0.132 0.184 0.254 30℃200rpm 0.013 0.032 0.052 0.088 0.091 0.125 37℃110rpm 0.007 0.017 0.098 0.130 0.230 0.253OD=ODt-OD0 大肠杆菌单菌落0.004 0.020 0.023 0.023 0.021 0.032 37℃110rpm -0.010 0.059 0.174 0.265 0.322 0.337 30℃200rpm -0.010 0.053 0.098 0.168 0.252 0.3711.0mL 0.010 0.060 0.148 0.256 0.362 0.4263.0mL 0.039 0.057 0.218 0.334 0.381 0.4125.0mL 0.067 0.067 0.235 0.294 0.267 0.389开始取样时间 14:29 15:35 16:43 17:50 18:57 19:07 20:12结束取样时间 14:35 15:43 16:50 17:57 19:09 20:07 21:12 发酵时间 45 6 7 8 9 10 ODt 大肠杆菌 单菌落0.065 0.267 0.395 0.454 0.45737℃110rpm 0.3330.340 0.342 0.360 0.36230℃200rpm 0.4390.566 0.570 0.588 0.5861.0mL0.464 0.446 0.446 0.458 0.4403.0mL0.487 0.470 0.457 0.483 0.4585.0mL0.469 0.457 0.464 0.482 0.478枯草杆菌37℃200rpm 0.3370.428 0.517 0.590 0.686 0.711 0.711 30℃200rpm 0.1710.261 0.370 0.540 0.628 0.606 0.652 37℃110rpm 0.2950.302 0.305 0.305 0.352 0.352 0.378 OD=ODt-OD大肠杆菌 单菌落0.061 0.263 0.391 0.450 0.45337℃110rpm 0.3430.350 0.352 0.370 0.37230℃200rpm 0.4490.576 0.580 0.598 0.5961.0mL0.454 0.436 0.436 0.448 0.4303.0mL0.448 0.431 0.418 0.444 0.4195.0mL0.402 0.390 0.397 0.415 0.411枯草杆菌37℃200rpm 0.3290.420 0.509 0.582 0.678 0.703 0.703 30℃200rpm 0.1580.248 0.357 0.527 0.615 0.593 0.639 37℃110rpm 0.2880.295 0.298 0.298 0.345 0.345 0.3712. 作图、简要分析及代时计算：1） 取一个大肠杆菌菌落接种到100ml 培养基， 37 ℃ 200rpm图一 单菌落大肠杆菌生长曲线这条曲线属于比较标准的“S ”形曲线，很容易看出调整期和对数期，由于单菌落菌较少，而且从固体培养基转移至液体培养基环境变化较大，所以出现了长达4小时的调整期，但可以看出，调整期之后这瓶菌都生长良好。
枯草杆菌37℃200rpm 0.0080.015 0.068 0.124 0.176 0.246 30℃200rpm 0.0130.019 0.039 0.075 0.078 0.112 37℃110rpm 0.0070.0100.0910.1230.2230.246计算代时：取培养4小时到5小时之间的数据（对数生长期）来计算代时。
由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.061 W 2=0.263 代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h474.02lg /)061.0lg 263.0(lg 1=-=2） 取1.0ml 大肠杆菌菌液接种到100ml 培养基，37 ℃ 110rpm图二 大肠杆菌菌生长曲线（取1.0ml 大肠杆菌接种到100ml 培养基，37 ℃ 110rpm ）接种后几乎没有调整期出现，大肠杆菌很快适应了新的环境并开始呈指数增长，估计是新的培养环境和原有环境较一致，而且在培养最初的时候溶氧和酸碱度都较为适宜，但是这瓶菌是稳定期OD 最小的，估计是培养基最初分装不均产生的。
计算代时：取培养2小时到2.5小时之间的数据（对数生长期）来计算代时。
由代时计算公式，t 2－t 1=0.5h W 1=0.174 W 2=0.265 代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h824.02lg /)174.0lg 265.0(lg 5.0=-=3） 取1.0ml 大肠杆菌菌液接种到100ml 培养基，30 ℃ 200rpm图三 大肠杆菌生长曲线（取1.0ml 大肠杆菌接种到100ml 培养基，30 ℃ 200rpm ） 可以看出温度对大肠杆菌适应环境产生了一定的影响，使它在调整期滞留了较长的时间，且在对数期增长较慢，应该是酶活性对细胞复制的影响所致。
计算代时：取培养2.5小时到3.5小时之间的数据（对数生长期）来计算代时。
由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.168 W 2=0.371 代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h875.02lg /)168.0lg 371.0(lg 1=-=4） 取1.0ml 大肠杆菌菌液接种到100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm图四 大肠杆菌生长曲线（取1.0ml 大肠杆菌接种到100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm ） 这是大肠杆菌培养的最适调节，可以看出其生长良好，调整期较短，对数期较长。
计算代时：取培养2小时到3小时之间的数据（对数生长期）来计算代时。
由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.148 W 2=0.362代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h775.02lg /)148.0lg 362.0(lg 1=-=5） 取3.0ml 大肠杆菌菌液接种到100ml 培养基，37 ℃ 200rpm图五 大肠杆菌生长曲线（取3.0ml 大肠杆菌接种到100ml 培养基，37 ℃ 200rpm ） 接种量的增加没有产生太大的影响，生长曲线没有太大变化。