细胞生长曲线实验步骤
细胞生长曲线的绘制实验报告
细胞生长曲线的绘制实验报告篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制一、实验目的学习了解微生物生长量测定的方法学习了解细菌生长曲线的绘制方法学习掌握血细胞计数板的使用方法微生物生长量的测定计数法重量法生理指标法1、显微镜直接计数法利用血细胞计数板计数涂片计数2、活菌菌落计数法3、滤膜法细菌生长曲线将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线篇二：细胞生长曲线的测定细胞生长曲线的测定一、实验目的掌握测定细胞生长曲线的方法。
二、实验器具24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。
三、实验方法1. 培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。
2. 计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。
为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。
3. 绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。
篇三：MTT法绘制生长曲线实验材料：1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液实验步骤：1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。
接种到96孔板，每孔接种200μl 细胞悬液进行培养。
2，培养16-48后，每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液20μl，37℃继续孵育。
细胞培养生长曲线
细胞培养生长曲线细胞培养生长曲线是描述细胞数量随时间变化的关系曲线，是研究细胞生长规律和评估细胞活力的重要手段。
通过生长曲线，我们可以了解细胞的生长速率、倍增时间、细胞周期等相关参数，进而揭示细胞的生长规律。
一、细胞培养生长曲线的绘制绘制细胞培养生长曲线需要记录不同时间点细胞数量的变化。
通常采用以下步骤：细胞种板：将一定数量的细胞接种到培养板中，确保细胞密度适宜，能够满足后续实验需求。
细胞培养：按照设定的时间间隔（如24小时、48小时、72小时等）对细胞进行计数，记录每个时间点的细胞数量。
细胞计数：采用细胞计数器或显微镜对细胞进行计数，注意选择合适的计数方法，避免误差。
数据记录：将每个时间点的细胞数量记录在表格中，并绘制成细胞培养生长曲线。
二、细胞培养生长曲线的解析根据绘制的生长曲线，我们可以从以下几个方面解析细胞的生长规律：细胞增殖速率：通过观察生长曲线，可以了解细胞的增殖速率。
在生长曲线上，会出现一个明显的指数增长期，这个时期的细胞增殖速率较快，通常出现在细胞接种后的初期。
随着时间的推移，增殖速率会逐渐降低，这是由于营养物质和空间限制等因素的影响。
倍增时间：倍增时间是细胞培养过程中一个重要的指标，它表示细胞数量需要经过多少时间才能增加一倍。
通过生长曲线，可以计算每个时间点的倍增时间，从而了解细胞的生长速度。
细胞周期：细胞周期是指一个细胞从分裂开始到下一次分裂结束所经历的时间。
在生长曲线上，可以观察到细胞的周期性增殖现象，通过计算不同时间点的细胞数量和倍增时间，可以估算细胞的周期长度。
细胞死亡率：在细胞培养过程中，可能会出现细胞死亡的情况。
在生长曲线上，可以观察到细胞的死亡率变化情况。
如果死亡率较高，可能意味着培养条件不适宜或者细胞质量存在问题。
三、细胞培养生长曲线的影响因素细胞培养生长曲线受到多种因素的影响，包括以下几个方面：培养条件：培养条件对细胞的生长具有重要影响。
例如，培养液的成分、pH值、氧气浓度、温度等条件都会影响细胞的生长。
细胞生长曲线实验
细胞生长曲线实验细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。
以存活细胞数(万/mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。
实验方法原理细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。
细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。
实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验步骤1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液。
分。
细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。
实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验步骤1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液。
细胞生长曲线绘制
细胞生长曲线绘制
细胞生长曲线是描述细胞增殖数随时间变化的曲线，也是细胞生长动力学研究的基础。
细胞生长曲线可以帮助我们更好地了解细胞生长的规律，同时也可以为细胞培养和生长调
控提供重要参考。
本文将简单介绍细胞生长曲线的绘制方法。
细胞生长曲线的绘制方法可以分为以下几个步骤：
1. 细胞培养
绘制细胞生长曲线前，首先需要进行细胞培养。
细胞培养条件包括培养基、温度、湿度、二氧化碳浓度等。
需要注意的是，不同的细胞会对培养条件有不同的要求，因此需要
根据不同类型的细胞选择不同的培养条件。
2. 细胞计数
在培养细胞的过程中，需要定期检测细胞数。
可以使用显微镜进行手动计数，也可以
利用细胞计数器进行自动计数。
手动计数的精度较低，而自动计数器则能更加准确地确定
细胞数。
在细胞计数完成后，将得到一系列不同时间点的细胞数数据。
然后可以将这些数据用
图表的形式展示出来，绘制成细胞生长曲线图。
这个过程可以使用计算机软件进行，如Excel等。
在绘制细胞生长曲线时，可以用细胞数目作为Y轴，时间作为X轴。
根据细胞生长曲
线的特点，可以将其分为四个阶段：潜伏期、指数增长期、平稳期和衰亡期。
其中，指数
增长期是细胞生长最快的阶段，而平稳期则是指细胞数增长缓慢、趋于稳定的阶段。
细胞生长曲线的形态会受到多种因素的影响，如细胞类型、培养条件等。
因此，绘制
细胞生长曲线时需要对细胞类型和培养条件进行详细的记录和分析，以更好地了解细胞生
长的规律。
MTT比色法测定细胞生长曲线_郝新保
MTT比色法测定细胞生长曲线郝新保 张利朝 殷 缨 韩秀珍 陶秦渝 郝晓柯 张盈华(第四军医大学唐都医院中心实验室 西安710038)关键词 细胞生长曲线 M T T比色法中图号 Q28 在有关肿瘤细胞生物学的研究中,我们常常要测定细胞的生长状态,制作细胞生长曲线,以往的方法是取少量细胞在镜下或计数仪中计数,然后标注在坐标纸上,制作出细胞生长曲线.这种方法对同一样品要求计数几次取平均值,不但操作繁琐、费时,更主要的是误差较大,可达到20%～30%[1],包括取样误差、计数误差等.为了能简便、准确地测定细胞数,我们建立了基于M T T比色法的细胞生长曲线制作方法.1 材料和方法1.1 试剂 R PM I1640培养基为GIBCO公司产品,小牛血清为杭州四季青产品,M T T为SERV E产品,其它试剂均为国产.1.2 仪器 HL-2029P型酶标自动分析仪为国营二六二厂产品,Pr ofileⅡ,Elite型流式细胞仪为美国CO U L T ER 公司产品.1.3 细胞培养 选用人乳腺癌细胞系SK-BR-3.细胞培养在含10%小牛血清的RPM I1640培养基中,37℃,5% CO2.1.4 镜下计数测定细胞数 细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,用计数板按常规方法在倒置显微镜下计数,每个样品测三次,取平均值.1.5 流式细胞仪计数 细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,取0.2ml细胞过滤后用流式细胞仪自动计数.1.6 M T T比色法计数 M T T比色法计数为间接计数,先要做出细胞的标准曲线,然后根据欲测样品的A值计算出相应的细胞数.1.6.1 制作标准曲线 准备细胞悬液,从1×107细胞/200μl/孔开始在96孔板中倍比稀释至1×102细胞/孔,每个稀释度三孔细胞,培养板置37℃培养4h后细胞贴壁,每孔中加入20μg M T T继续培养4h,然后吸出150μl培养液,加入等量DM SO,37℃20min,570nm处测定吸光度[2],用二六二厂酶标自动分析仪程序绘出细胞标准浓度曲线.1.6.2 制作生长曲线 调整细胞的浓度,按2×103/孔接种在96孔板中,置37℃培养,每天用M T T比色法测定3孔细胞的A值,在标准曲线上计算出相应的细胞数,即可绘出细胞的生长曲线.郝新保,男,32岁,讲师,主治医师2 结果2.1 细胞数与A值的标准曲线 根据各稀释度的A值制作细胞浓度的标准曲线,如图1.图1 SK-BR-3细胞浓度的标准曲线2.2 肿瘤细胞的M T T比色法生长曲线 根据每天测定的三孔细胞的A值在标准曲线上求得其对应的细胞数,7～10d后即可绘制细胞生长曲线,如图2.图2 SK-BR-3细胞的生长曲线2×;--0.2×;…20×.2.3 细胞接种密度对生长曲线的影响 当细胞接种密度较低(2×102/孔)和较高(2×104/孔)时,对细胞生长曲线的形状有一定的影响,如图2.2.4 M T T比色法与镜下计数法及流式细胞仪计数法的比较 为了比较M T T比色法和镜下计数法制作的细胞生长曲线,用流式细胞仪的计数结果作为参照,结果表明M T T 比色法与流式细胞仪计数结果更接近,明显优于镜下计数法的结果.3 讨论 从结果可以看出,用M T T比色法制作细胞生长曲线完全可行.因其减少了取样和计数误差,免除了贴壁细胞的消化等,使其具有简便、快速的特点.对几种不同方法制作的生长曲线进行比较发现,M T T比色法在客观性上也比镜下计数法有了很大的提高.要掌握好这个方法首要的一点是标准曲线的制作,稀释一定要准确,在保证标准曲线如实反映细胞数的基础上,才能制作出好的生长曲线.在测定时,接种细胞的密度对生长曲线的影响较大.从图2可以看出,接种密度过高或过低都不利于生长曲线的制作,这与细胞的生长能力有关,可进行简单的预实验确定,一般在(1～5)×103细胞/孔为好.尽管M T T比色法测定细胞生长曲线具有很多优点,但因其需要使用自动酶标仪而受到了一定的限制,如果能开发出细胞生长曲线专用软件,就能摆脱自动酶标仪的限制,利用普通酶标仪就可以开展工作了.参考文献1鄂 征.组织培养技术.第2版.北京:人民卫生出版社,1993: 1542候 健,孔宪涛.四甲基偶氮唑蓝比色法检测人血清白细胞介素6.中华医学检验杂志,1993;16(4):208～210(收稿1996-09-17 修回1997-02-04)编辑 王小仲化云宁滴眼液的质控标准王 颖 雷其云 蒋永培 樊亚萱 (第四军医大学西京医院药局 西安710033)关键词 化云宁 钾离子 耐缺氧 质量控制 刺激性中图号 R289 我院研制的新药化云宁滴眼液为一复方中药制剂,具有活血化瘀、退翳明目的功效,是治疗角膜瘢痕(角膜云翳,角膜斑翳)的理想药物.在化云宁研制和生产的质量控制上,我们采用了钾离子(K+)含量测定、刺激性实验及生物检定方法作为质控标准,保证了化云宁滴眼液在临床上安全和有效地使用.1 材料和方法1.1 药物与试剂 化云宁滴眼液由丹参、黄芩和金银花等生药的提取液按眼药常规要求制备而成;心得安注射液(1mg/ml,批号830706,北京制药厂);丹参素注射液(10 mg/ml,批号820401,上海医科大学附属中山医院制);生理盐水(2ml/支,批号8303023,自制).1.2 实验动物 BA L B/c小鼠,雄性,6～8周龄,体重18～21g;新西兰白兔2只,雄性,编号分别为543,554,体重分别为2.05kg和2.45kg(以上动物均由本校实验动物研究中心提供).1.3 K+含量测定[1] 用System E4A型火焰光度计(美国BECKM AN公司制造)分别测定化云宁滴眼液成品及其组方中各味药的提取液(丹参,黄芩,金银花等)中K+浓度.样品在测定前均用N aO H调p H值至6.8～7.0.1.4 刺激性实验 采用家兔滴眼法.选取健康新西兰白兔2只,编号分别为543,554,用药前,检察兔眼结膜血管、角膜透明度等均属正常,如①结膜无血丝及发红;②王 颖,女,42岁,主管药师角膜不浑浊,呈透明状;③眼角无分泌物.左眼点化云宁滴眼液2滴(批号850619),右眼点生理盐水2滴作为对照,用药后开始记录时间,并观察眼部反应情况.结果判定以上述用药前检察的①～③项指标无异常为无刺激症状表现(-),否则为被检眼药有刺激性(+).1.5 常压耐缺氧实验 按表2中的剂量,小鼠腹腔(注射)给药(批号830509,自制)后30min,放入容量为250ml的磨口玻璃瓶中,瓶内放钠石灰5g,每瓶放小鼠一只,放入后用凡士林密封盖紧,并开始记录其存活时间[2].以生理盐水组为对照,比较各组间统计学上的差异,统计学处理采用t检验.2 结果2.1 药液中K+浓度的测定 在中药滴眼液与中药注射液中常含有来源于植物药材本身的K+,其浓度过高可引起局部疼痛.我们采用中草药注射液的K+浓度限定范围[40%～60%(mg/ml)以下][3]做为化云宁滴眼液的质控标准之一.六个批号的化云宁滴眼液中K+浓度测定的结果见表1,均符合限定标准.此外,对化云宁滴眼液中丹参,黄芩和金银花三种主药提取液的K+浓度也分别进行了检测,结果(三次测定的平均值)分别为47.6%,0.8%和1.2%(mg/ml),由此可见,该滴眼液中的K+主要来源于丹参.2.2 刺激性实验 经2只新西兰白兔左、右眼对照实验观察,除1只兔左眼在用药液后15min时观察有轻度流泪外,其余均无任何刺激性反应.因此,该眼药符合有关规定.。
简述mtt法能绘制细胞生长曲线的原理
简述mtt法能绘制细胞生长曲线的原理
MTT法（即3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）是一种常用的细胞代谢活性检测方法，常用于测定细胞增殖与毒性的活性。
MTT法的原理是通过将MTT激发后生成的水溶性产物还原成紫色的颗粒沉淀，进而通过溶解颗粒沉淀来评估细胞数量和代谢活性。
主要步骤如下：
1. 细胞接种：将待测细胞接种在含有MTT试剂的培养皿中。
2. 细胞培养：细胞在MTT试剂中进行培养，培养期间细胞会代谢活跃并增殖。
3. 溶解颗粒沉淀：经过一定时间的培养后，MTT试剂会被还原成紫色的颗粒沉淀。
将培养皿中的培养液倒掉，然后加入溶解剂（如酒精或二甲基亚硫酸钠溶液）溶解颗粒沉淀。
4. 颜色测定：溶解颗粒沉淀溶解后的溶液会变成紫色，利用酶标仪或多孔板读取器测定溶液的光密度。
MTT法通过测定光密度来间接评估细胞的增殖与活性。
细胞越多，MTT试剂被还原成颗粒沉淀就越多，溶解后的溶液光密度就越高，说明细胞数目越多，代谢活性越高。
因此，通过测定光密度的变化可以绘制细胞生长曲线，反映细胞增殖与活性的变化情况。
MTT法测定细胞生长曲线
MTT法测定细胞生长曲线
1、取生长状况良好的细胞，常规消化制成单细胞悬液并计数，调整细胞成六个浓度梯度，依次为：5x103、1x104、2x104、3x104、4x104、5x104/ml，均匀接种细胞于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬。
液200ul，每个浓度组设6个复孔,共接种7块培养板，37℃、5%C02浓度，饱和湿度培养箱中连续孵育24/48/72/96/120/148/172小时后。
2、每孔加入20ulMTT溶液(smg/m1用PBS<ph=7.4>配)，继续孵育4h后终止培养。
3、快速翻转培养板,弃去上清液,每孔加入150ulDMSO,振荡10min，使MTT蓝紫色结晶完全溶解。
4、用酶联免疫检测仪于490nm处检测各孔的吸光值(OD值)，并以未接种细胞只加培养基孔的吸光值为空白对照调零，取6孔平均值。
5、实验重复3次，以培养“时间”为横轴，“吸光值”为纵轴绘制细胞生长曲线。
生长曲线和细胞生长周期的测定
生长曲线和细胞生长周期的测定MTT比色法绘制生长曲线生长曲线测定一般可用细胞计数法进行，但数值不够精确，可有20%-30%的误差，需结合其他指标进行分析。
原理：MTT，商品名噻唑蓝，是一种能接受氢原子的染料的四唑盐。
活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜能溶解细胞中的蓝紫色复合物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。
步骤;1.接种：用含%10胎小牛血清的培养液配成细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2细胞培养：同一培养条件，培养3-5天3呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，ph=7.4）20ul.继续孵育4h。
终止培养，小心吸弃孔内培养基上清液，对于悬浮细胞需要分离后再吸弃孔内上清液。
每孔加150ul DMSO，脱色摇床震荡10min，使结晶充分溶解。
4.比色；选择490nm(570nm)波长，在没脸免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录时间，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
流式细胞仪测细胞生长周期：流式测细胞周期，只需在实验结束后收集细胞（细胞数量须达到2-5x105）,离心，用PBS洗三次，再转移到1.5ml的EP管内，用预冷的70百分之的酒精固定1小时，就可以送到流式细胞仪检测。
流式细胞仪细胞周期检测流程1，做前提前换液，调整细胞状态，小皿或大皿（保证细胞达到10--100万个）。
2，遇冷PBS 清洗两次3，加入胰酶（Tripsin），静止2-3分钟（消化时间不要过长，以免损伤细胞），加入2-3mlDMEM慢慢吹打细胞成单细胞悬液。
4，1000rpm 离心3min5，去上清，加入遇冷PBS 1000rpm 离心3min6，去上清，加入0.5ml PBS（预冷）悬浮细胞7，加入1.5ml无水乙醇在漩涡器上涡旋（逐滴加入）8，-20℃固定过夜（overnight）9，拿出已固定细胞，1000rpm 离心3min 去上清10，加入预冷PBS 100rpm 离心3mim11，去上清加入500ul---1000ul 预冷PBS 悬浮细胞12，加入5-10ul RNA酶37℃水浴消化30min13，过400目细胞筛注入EP管,封口膜封口。
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细胞生长曲线实验步骤
一、准备细胞与培养基
1.选择适宜于实验的细胞系，并确保细胞状态良好，无污染。
2.准备所需的培养基，按照说明书进行配制，并在使用前进行无菌过滤处理。
3.准备所需的无菌器械、吸管、离心管等。
二、接种细胞至培养板
1.在无菌操作台上，用无菌吸管吸取适量的细胞悬液。
2.将细胞悬液均匀接种至培养板中，每个孔内的细胞数量应保持一致。
3.将接种好的培养板放入培养箱中，设置适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。
三、定时观察与计数
1.在接种后的不同时间点（如每天或每24小时）观察细胞的生长情况。
2.使用倒置显微镜观察细胞的贴壁生长和形态变化，以及细胞数量的变化。
3.在特定时间点，使用血细胞计数板或自动细胞计数器对细胞进行计数。
四、记录数据
1.将每次观察和计数的结果详细记录下来，包括细胞数量、形态变化等。
2.记录实验过程中的温度、湿度、二氧化碳浓度等环境参数。
五、绘制生长曲线
1.根据记录的数据，以时间为横轴，细胞数量为纵轴，绘制细胞生长曲线图。
2.生长曲线应反映出细胞数量随时间的变化趋势。
六、数据分析
1.分析生长曲线，计算细胞的倍增时间、生长速率等参数。
2.比较不同条件下的细胞生长情况，分析影响细胞生长的因素。
七、清洗与消毒
1.实验结束后，将使用过的器械、培养板等进行清洗和消毒处理。
2.清洗可使用去离子水或清洗剂，消毒可使用75%酒精或紫外线照射等方法。
八、实验总结
1.总结实验过程中的经验教训，分析可能存在的误差来源。
2.根据实验结果，提出改进实验方法的建议或对未来研究方向的展望。
请注意，以上步骤仅为一般性的细胞生长曲线实验步骤，具体实验过程可能因细胞类型、实验条件等因素而有所不同。
在实际操作中，请遵循实验室的安全规定和操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。