葡聚糖凝胶离子交换剂
sephadex知识剖析
【操作步骤】
（1）A-50经酸碱处理，平衡至中性后，浸泡于0.1mol/L， pH7.4 PB中，置4℃冰箱储存备用。 （2）装柱：同DE52。 （3）平衡：松开出水口螺旋夹，以PB平衡，控制流速为 15滴/min，• 待洗脱液与流出液之pH值达到一致时，停止 平衡。 （4）加样、洗脱、收集与浓缩：基本上同DE52，以 0.1mol/L PB洗脱。 用过的DEAE-Sephadex A-50可用0.5mol/L Na2HPO4洗 脱回收。洗至流出液中无蛋白（OD280nm<0.04）后再用 蒸馏水洗至中性，加入0.02％叠氮钠于4℃保存备用。
Sephadex系统知识
葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶系列是当今生物大 分子分离、提取、纯化的重要分离材料， 按性能分包括 凝胶过滤、 离子交换、 疏水层析、 亲和层析，
主要用于蛋白质、核酸、多肽、多糖、酶的脱盐 与分离纯化中。 葡聚糖凝胶为葡聚糖和环氧氯丙烷交联而成的 珠状产品，化学性能稳定，在潮湿、中型ph、高 压120度，灭菌30min情况下，不影响色谱性能， 适用于柱色谱操作。用于蛋白质脱盐及不同分子 量蛋白在凝胶分离范围内的分离纯化，可在酶、 多糖、核酸和其它生物大分子的纯化中广泛应用。
葡聚糖凝胶LH
用途：分离水不溶物质。 葡聚糖凝胶LH-20/Sephadex LH-20 分离中 等大小生物分子，球蛋白分离范围100～ 4000 葡聚糖凝胶LH-60/Sephadex LH-60 分离 100～20000
葡聚糖凝胶C阳离子交换剂，吸附碱 性蛋白：
羧甲基葡聚糖凝胶C-25/CM葡聚糖凝胶C-25/CM Sephades C-25 应用：MW＞20000；载量4-5mmol/g 羧甲基葡聚凝胶C-50/CM葡聚糖凝胶C-50/CM Sephades C-50 应用：中等大小生物分子（30－200KD）；载量45mmol/g SP葡聚糖凝胶C-25/SP Sephades C-25 应用：MW>200 KD；载量：2.0-2.6mmol/g SP葡聚糖凝胶C-50/SP Sephades C-50 应用：中等大小 生物分子（30－200KD）；载量：2.0-2.6mmol/g
凝胶过滤及离子交换层析介质详解
温度对分离效果也有一 定影响，可以通过控制 实验温度来优化分离效 果。
案例分享：成功应用案例剖析
案例一
使用琼脂糖凝胶成功分离大分子蛋白质混合物，通过优化流动相和洗脱条件，实现了高 纯度蛋白质的获取。
案例二
应用离子交换层析技术成功分离了复杂样品中的痕量金属离子，通过选择合适的离子交 换树脂和优化实验条件，提高了分离效果和检测灵敏度。
现状
目前，凝胶过滤层析介质已经广泛应用于生物大分子的分离纯化，如蛋白质、酶、多糖等。同时，随着技术的不 断进步，新型凝胶过滤层析介质不断涌现，为生物分离领域提供了更多的选择。
应用领域与前景
要点一
应用领域
凝胶过滤层析介质在生物医药、生物工程、食品科学等领 域具有广泛的应用。例如，在生物医药领域，可用于药物 的分离纯化、蛋白质组学研究、抗体药物研发等；在生物 工程领域，可用于基因工程产物的分离纯化、酶工程产物 的分离纯化等；在食品科学领域，可用于食品添加剂的分 离纯化、功能性食品的研发等。
对未来发展趋势进行预测
层析技术的创新与应用拓展
随着科学技术的不断发展，层析技术将继续创新并拓展应用领域。例如，开发新型高效层析介质、优化层析条件、提 高分离效率等。
与其他技术的联合应用
层析技术可以与多种其他技术联合应用，如质谱、光谱等，实现复杂样品的高效分离和检测。这种联合应用将在未来 得到更广泛的关注和应用。
在生物医药等领域的应用前景
生物医药等领域对高纯度、高活性物质的需求不断增加，层析技术作为一种重要的分离纯化方法，将在 这些领域发挥越来越重要的作用。
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03
离子交换层析介质
根据目标离子的电荷性质和大小，选择合适的离子交换树脂，如阳离子
离子交换层析柱子的选择
离子交换层析技术离子交换层析技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相，以蛋白质等样品为移动相，分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素和多糖等的一项技术。
（一）原理在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团，当结合阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。
如二乙氨乙基（Dicthylaminoethyl，DEAE）纤维素。
在纤维素上结合了DEAE，含有带正电荷的阳离子纤维素—O—C6 H14N+H，它的反离子为阴离子（如Cl-等），可与带负电荷的蛋白质阴离子进行交换。
当结合阴离子基团时，可置换阳离子，称为阳离子交换剂，如羧甲基（Carboxymethy，CM）纤维素。
纤维素分子上带有负电荷的阴离子（纤维素－O－CH2－COO一），其反离子为阳离子（如Na+等）,可与带正电荷蛋白质阳离子进行交换。
溶液的pH值与蛋白质等电点相同时，静电荷为0，当溶液pH值大于蛋白质等电点时，则羧基游离，蛋白质带负电荷。
反之，溶液的pH值小于蛋白质等电点时，则氨基电离，蛋白质带正电荷。
溶液的pH值距蛋白质等电点越远，蛋白质的电荷越多。
反之则越少。
血清蛋白质均带负电荷，但各种蛋白质带负电荷的程度有所差异，以白蛋白为最多，依次为球蛋白，球蛋白和球蛋白。
在适当的盐浓度下，溶液的pH值高于等电点时，蛋白质被阴离子交换剂所吸附；当溶液的pH值低于等电点时，蛋白质被阳离子交换剂所吸附。
由于各种蛋白质所带的电荷不同。
它们与交换剂的结合程度也不同，只要溶液pH值发生改变，就会直接影响到蛋白质与交换剂的吸附，从而可能把不同的蛋白质逐个分离开来。
交换剂对胶体离子（如蛋白质）和无机盐离子（如NaCl）都具有交换吸附的能力，当两者同时存在于一个层析过程中，则产生竞争性的交换吸附。
当Cl一的浓度大时，蛋白质不容易被吸附，吸附后也易于被洗脱，当Cl一浓度小时，蛋白质易被吸附，吸附后也不容易被洗脱。
因此，在离子交换层析中，一般采用两种方法达到分离蛋白质的目的。
执业药师考试综合辅导：离子交换层析法(2)
(2)亲水性离子交换剂亲水性离子交换剂中的基质为一类天然的或人工合成的化合物，与水亲和性较大，常用的有纤维素、交联葡聚糖及交联琼脂糖等。
①纤维素离子交换剂纤维素离子交换剂或称离子交换纤维素，是以微晶纤维素为基质，再引入电荷基团构成的。
根据引入电荷基团的性质，也可分强酸性、弱酸性、强碱性及弱碱性离子交换剂。
纤维素离子交换剂中，最为广泛使用的是二乙胺基乙基(deae一)纤维素和羧甲基(cm一)纤维素。
近年来pharmacia公司用微晶纤维素经交联作用，制成了类似凝胶的珠状弱碱性离子交换剂(deae —sephacel)，结构与deae一纤维素相同，对蛋白质、核酸、激素及其他生物聚合物都有同等的分辨率。
目前常用的纤维素交换剂如表6–1所示。
离子交换纤维素适用于分离大分子多价电解质。
它具有疏松的微结构，对生物高分子物质(如蛋白质和核酸分子)有较大的穿透性；表面积大，因而有较大的吸附容量。
基质是亲水性的，避免了疏水性反应对蛋白质分离的干扰；电荷密度较低，与蛋白质分子结合不牢固，在温和洗脱条件下即可达到分离的目的，不会引起蛋白质的变性。
但纤维素分子中只有一小部分羟基被取代，结合在其分子上的解离基团数量不多，故交换容量小，仅为交换树脂的1／10左右。
表6–1离子交换纤维素交换剂（简写）类型功能基团交换容量（毫克当量 /g ）时宜工作 ph 磷酸纤维素（ p-c ）中强酸型阳离子交换剂— po 3 2- 0.7~7.4 ph<4 磺酸乙级纤维素（ se-c ）强酸型阳离子交换剂— (ch 2 ) 2 so 3 - 0.2~0.3 极低羟甲基纤维素（ cm-c ）弱酸型阳离子交换剂— ch 2 coo - 0.5~1.0 ph>4 三乙基氨基乙基纤维素（ teae-c ）强碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + (c 2 h 5 ) 3 0.5~1.0 ph>8.6 二乙氨基乙基纤维素（ deae-c ）弱碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + h (c 2 h 5 ) 2 0.1~1.0 ph<8.6 氨基乙基纤维素（ ae-c ）中等碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + h 2 0.3~1.0 ecteda 纤维素（ ecte-c ）中等碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + (c 2 h 4 oh) 3 0.3~0.5 ②交联葡聚糖离子交换剂交联葡聚糖离子交换剂是以交联葡聚糖g–25和g–50为基质，通过化学方法引入电荷基团而制成的。
生物制药：凝胶层析法
像Sephadex一样，商品聚丙烯酰胺为颗粒状的干 粉，它有十分明显形成块状并粘附在一起的倾向，在 溶剂中能自动溶胀成胶。
根据聚丙烯酰胺凝胶的溶胀性质和分离范围的不 同，可分成10种类型。各种类型均以英文字母P和阿 拉伯数字表示，从Bio-Gel P-2至Bio-Ge1 P-300。P 后面的阿拉伯数字乘以1000即相当于排阻限度（按球 蛋白或肽计算）。目前，美国Bio-Rad Laboratories 生产并出售多种规格的Bio-Gel P。
葡聚糖凝胶（G类）的规格
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葡聚糖凝胶（G类）特点
1、孔径。 2、稳定性。 3、吸附作用。 4、芳香族化合物和杂环化合物。
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性质与特点
1、Sephadex在水、盐、碱、弱酸以及有机溶 液中都比较稳定，可以多次重复使用。
2、稳定工作pH为2－10，强酸溶液和氧化剂 会使交联的糖苷键水解断裂。
3、在高温下稳定，可煮沸消毒，在100 °C下 40 min对凝胶的结构和性能都没有明显的影响。
如引入磺乙基（SE-Sephadex）、羧甲基（CM-Sephadex） 及二乙胺基乙基（DEAE-Sephadex A）等。葡聚糖凝胶离子交 换剂具有离子交换和分子筛双重作用。其结构多孔、疏松、非 特异性吸附很少，层析时流速易控制，特别适用于蛋白质、酶、 激素、多核苷酸等的分离纯化，以及生化制剂的除热原。
最后流出物质C，它分子量最小，其分子可 以自由进出凝胶颗粒， “全渗入”。流经 体积是外水体积与内水体积之和V0+Vi。
物质B分子量介于渗入限与排阻限之间，其
分子能够部分地进入凝胶颗粒中。 “部分
排阻”或“部分渗入”。流径体积Ve是全部 外水体积加上内水体积的一部分，即
Ve=V0+KdVi
实验五葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质讲课讲稿
琼脂糖凝胶特点
❖室温下其稳定性胶葡聚糖凝胶和聚丙烯酰 胺凝胶，对样品的吸附性很小。
❖洗脱速度较快
❖排阻极限大，分离范围广，适合分离大分 子物质。
小结
❖ 凝胶层析的原理：分子筛效应 ❖ 凝胶层析有效分配系数（Kav）：被分
离的化合物被凝胶排阻的程度。 ❖ 层析实验操作过程中的注意事项。 ❖ 实验结果：观察到蓝色蛋白洗脱快，黄
溶质在固定相中的浓度（Cs）
K=
溶质在流动相中的浓度（Cm）
☻K值大：被固定相吸附的牢固，随流动相的移 动速度较慢。
☻若混合物中各组分K值相差较大, 则能较易地分 离，反之，K值相差较小，分离效果差。
离子交换层析(ion exchange chromatography)
用离子交换剂（在惰性载体上引入带有电荷的活性 基团）作固定相，与流动相中离子发生可逆性离子 交换反应而进行分离的方法。
重点1
凝胶层析的原理
分子筛效应
❖ 比孔径大的分子不能扩散到孔穴内部， 完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外 的空间随流动相向下流动，它们经历的 流程短，流动速度快，首先流出。
❖ 较小的分子则可以渗透进入凝胶颗粒内 部，然后再扩散出来，经历的流程长， 流动速度慢，后流出。
凝胶层析的数理关系
外水体积Vo 凝胶体积Vg
❖分离原理 在固定相载体表面偶联具有特殊亲和作用的
配基，这些配基可以与流动相中溶质分子发 生可逆的特异性结合而进行分离纯化。
1. Incubate crude
2. Wash away non bound
sample with the
sample components from
葡聚糖凝胶 LH-20使用说明书
葡聚糖凝胶LH-20使用说明书货号：S8111规格：25g/50g/100g保存：室温存储产品简介：适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，天然产物在有机溶剂中的纯化。
可以非常经济的大规模制备各种天然产物，尤其在中药有效成分提取中作为大孔吸附树脂解析物的纯化。
结合凝胶过滤﹑分配色谱及吸附层析于一身，能分离结构相近的分子，因此使用中要考略几种色谱的作用机制。
最高载量可达250mg样品/ml凝胶﹑极少需要再生﹑使用得当，重复使用分离效果可保持不变。
上样量视被分离物的结构性能的差异而定：差异大，则大；差异小，则小。
凝胶过滤的上样量一般为5-7％的床体积，我们建议初次上样量控制在1-2％的床体积，视分离情况可以逐步增加；柱高的选择也与分离要求相关——难分物质要有一定柱高和流速控制；流动相可参考TLC的条件，正确的流动相可以提高分离度并缩短分离时间。
流动相的常用溶剂为：水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。
这些溶剂的极性依次降低，对极性的被分离物而言，保留值和分离度依次递增；同理选用的凝胶柱高可依次降低，流速可以增大（或上样量可以增加，树脂体积在低极性溶剂中明显收缩）。
溶剂的溶解性，极性，沸点，毒性都是要考虑到的，二氯甲烷通常在被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。
甲醇通常对带环状(包括苯环)物质分离适用，葡聚糖凝胶对环状物质有强烈吸附。
LH-20同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。
使用说明：1葡聚糖凝胶LH-20的原理葡聚糖凝胶LH-20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，葡聚糖凝胶LH-20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，主要靠凝胶过滤作用来分离。
葡聚糖凝胶Sephadex G–25柱层析法脱盐分离蛋白质实验技术总结
装柱是凝胶层析中一个关键的操作步 骤。灌注凝胶时要求将均匀的凝胶一直加 到所需柱床高度，不能时断时续，否则将 出现分层或“纹路”等毛病。 若在灌好胶 后才发现“纹路”、分层等现象时，要重 新装柱，以免影响层析效果。 在做大型的凝胶柱时，灌注的凝胶是 否均匀往往从表面上看不出来。所以使用 前应该用一些带色的大分子物质如细胞
在凝胶层析中，不仅要保持静水压的 恒定，还要保持适当的静水压。这是因为 G–75以上的软胶胶体柔软易变形， 最初 流速会很快，其后随着静水压力过大将使 软胶变形压紧，流速逐渐降低，最后甚至 流不出。 保持恒定正确的静水压是凝胶层 析时获得满意结果的必要条件。 脱盐一般使用的是G–25属于硬胶，硬 胶不易变形，受静水压的影响较小。
凡盐析所获得的粗制蛋白质（如盐析 得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，将 影响以后的纯化，所以纯化前均应除去， 此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱 盐常用透析法和凝胶过滤法。
大分子保持天然构象状态 （功能有关），有高度的生物活 性。
常用的柱层析方法有葡聚糖凝胶 柱层析（分子筛层析）、离子交换 层析、吸附层析、亲和层析等。
5. 洗脱
用规定的溶液流过样品，使分子 量不同的样品逐步分开并先后由柱床 流出的过程称为洗脱。 洗脱液放在贮 液瓶（洗脱瓶）中并与层析柱相通 。 打开层析柱下口开关，洗脱液即可流 出。
洗脱过程要保持适当的恒定流速 ，流速过 快有些分子来不及在分子筛中分配而流出；过慢 时已分离的分子会因扩散而混合。 洗脱液的流速取决于它的静水压。静水压是 指洗脱瓶中洗脱液的液面高出于层析柱出口产生 的液体压力（或接触空气的两个液面间的高差）， 这个高度差越大，静水压越大，洗脱液的流速就 越快。这个压力差可以调动，如提高洗脱瓶的位 置或瓶中液面的增减 ，因此静水压又称操作压。
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凝胶层析的定义：
凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛。 利用这种凝胶分子筛对大小、形状不同的分 子进行层析分离，称凝胶层析 。
凝胶层析的应用范围：
凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、 多肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小 彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶床就可 以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性， 可对这些物质的溶液进行脱盐、浓缩、去热源 和脱色。 凝胶层析的优点 凝胶层析具有设备简单、操作方便、分离 迅速及不影响分子生物学活性等优点。目前已 被广泛应用于各种生化产品的分离和纯化。
凝胶层析法
思考题（课前设疑）
1.层析分离技术包括哪些技术？分别叙 述凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、 高压液相层析、疏水层析、聚焦层析的 分离纯化原理。 2.一般在粗品制备阶段和精品纯化阶段 分别应采用哪些层析分离技术？
3.膜分离技术的原理是什么？它同一般
的透析方法相比有何特点？
4.凝胶层析的应用范围有那几方面？
式中Ve为脱体积，它包括自加入样品时算 起，到组分最大浓度出现时所流出的体积。 Kd为每个溶质分子在流动相和固定相之间的 一个特定的分配系数，它只与被分离物质分 子大小和凝胶颗粒内孔隙大小分布有关。Kd 可通过实验由Ve、Vo和Vi求得。
Ve＝Vo＋Kd.Vi
可改写为：
（Ve-Vo） Kd=－－－－ Vi
Vi 简称内水体积，可由 g· Wr 求得（g 为干 凝胶质量，单位为g，Wr为凝胶吸水量，以mL ／g表示）。Vi也可以从洗脱一种完全不受凝 胶微孔排阻的小分子溶质（如重铬酸钾）的 洗脱体积Ve计算，即
Ve＝Vo＋Vi
对某物质在凝胶柱内洗脱体积Ve、Vo和 Vi之间的关系可用下式表示： Ve＝Vo＋Kd.Vi
不同型号葡聚糖凝胶柱床参数 型号 G-10
G-15 G-25 G-50 G-75 G-100 G-200
Vt 2
3 5 10 13 17 30
V0 0.8
1.1 2 4 5 6 9
Vi 1
1.5 2.5 5 7 10 20
二、凝胶层析的特点
1．凝胶层析操作简便，所需设备简单。 有时只要有一根层析柱便可进行工作。 分离介质—凝胶完全不需要像离子交换 剂那样复杂的再生过程便可重复使用。 2．分离效果较好，重复性高。最突出 的是样品回收率高，接近100％。
5．分辨率不高，分离操作较慢。由于凝 胶层析是以物质分子量的不同作为分离 依据的，分子量的差异仅表现在流速的 差异上，所以分离时流速必须严格把握。 因而分离操作一般较慢。而且对于分子 量相差不多的物质难以达到很好的分离。 此外，凝胶层析要求样品粘度不宜太高。 凝胶颗粒有时还有非特异吸附现象 。
三、常用凝胶的结构和性质 凝胶层析法常用的凝胶有天然凝胶 （如琼脂粉凝胶）和人工合成凝胶（如 葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶）。
1．葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶（Sephadex）具有良好的 化学稳定性，是目前生化产品制备中最 常用的凝胶。
G类葡聚糖凝胶（Sephadex-G）的最基本骨架是 葡聚糖，它是一种以右旋葡萄糖为残基的多糖， 分子间主要是α-1,6- 糖苷键（约占 95% ），分 枝为l，3-糖苷键（约占5%），以1-氯-2，3-环 氧丙烷（见右式）Cl－CH2－CH－CH2为交联剂将
－、凝胶层析的基本原理
凝胶层析的原理
l 分子大小不同混合物上柱； 2 洗脱开始，小分子扩散进人凝胶 颗粒内，大分子被排阻于颗粒之外；3 大小分子分开： 4大分子行程 较短，已洗脱出层析柱，小分子尚在进行中
凝胶是一类多孔性高分子聚合物，每 个颗粒犹如一个筛子。当样品溶液通过 凝胶柱时，相对分子质量较大的物质由 于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗 粒间的孔隙，随着溶剂流动，因此流程 较短，向前移动速度快而首先流出层析 柱；反之，相对分子质量较小的物质由 于直径小于凝胶网孔，可自由地进出凝 胶颗粒的网孔，在向下移动过程中，它 们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另
当Kd＝0时，Ve=Vo，说明这种溶质相对分子 质量大，完全不能进入凝胶颗粒微孔内，被 排阻于凝胶颗粒之外而最先洗脱下来；
当Kd＝1时，即Ve小分子 ＝Vo＋KdVi，说明这 种溶质的相对分子质量小，完全向凝胶颗粒 内扩散，在洗脱过程中将最后流出柱外。
但实际上，约有1/5的内水因溶剂化作用 而呈水合状态，妨碍小分子的自由扩散。故 实际上Ve小分子 ＝Vo＋0.8Vi；当0＜Kd＜l时， 意味着溶质分子只有部分向凝胶颗粒内扩散， Kd愈大，进入凝胶颗粒内的程度愈大；Kd＝ 0.5时，其洗脱体积Ve＝Vo十0.5Vi。
3 ．分离条件缓和。凝胶骨架亲水，分 离过程又不涉及化学键的变化，所以对 分离物的活性没有不良影响。 4 ．应用广泛。适用于各种生化物质，如 肽类、激素、蛋白质、多糖、核酸的分离 纯化、脱盐、浓缩以及分析测定等。分离 的分子量范围也很宽，如Sephadex G类为 102～105d；Sepharose类为105～108d。
5.凝胶层析有何优缺点？
6.常用凝胶分那几类？分别叙述它们各 自的应用范围及特点。 7.在实验中应如何选择凝胶与预处理？
8.细粒凝胶柱流速慢，洗脱峰越窄，分辨 率高，适用于什么产品多分离或分析？粗 粒凝胶柱流速高，但洗脱峰平坦，分辨率 低，适用于产品制备那个阶段的分离？
9.什么是“类分离”和“分级分离 ”？
一凝胶颗粒，如此不断地进入与逸出，使 流量增长，移动速率慢而最后流出层析柱。 而中等大小的分子，它们也能在凝胶颗粒 内外分布，部分进入颗粒，从而在大分子 物质与小分子物质之间被洗脱。这样，经 过层析柱，使混合物中的各物质按其分子 大小不同而被分离。
Vt=Vo+Vi+Vg
Vt=π R2h
V。简称为外水体积，Vo等于被完全排阻 的大分子的洗脱体积。可以用一个已知相对 分子质量远超过凝胶排阻极限的有色分子， 如常用的蓝色葡聚糖 -2000 溶液通过柱床， 即可测出柱床的外水体积Vo。
10.在凝胶层析中要想得到好的层析结果 应注意那些问题和采取那些措施？ 11.凝胶用过后，有那几种保存方法？ 12.葡聚糖凝胶离子交换剂，葡聚糖凝胶 和离子交换剂有何异同及特点？
凝胶层析（gel chromatography）常出 现多种名称 ：
如凝胶过滤、分子筛层析、排阻层析、凝ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胶渗透层析等。