植物烟草实验
烟草遗传转化实验报告
烟草遗传转化实验报告实验目的烟草是遗传转化的模式植物,已经建立了一套完善的转化再生体系｡本实验以烟草为实验材料,了解根癌农杆菌介导法的基本原理和一般步骤, 掌握遗传转化的基本操作技术｡实验要求:掌握根癌农杆菌侵染植物获取转基因材料的方法;理解农杆菌介导途径进行基因转化的机理:了解转基因植物筛选的方法｡实验原理:根癌农杆菌是一种能诱发植物产生肿瘤的细菌,根癌农杆菌中诱导植物产生肿瘤的质粒,简称为Ti质粒｡野生型农杆菌的Ti质粒,含有两个与致瘤有关的区域: 一个是T-DNA区,含致瘤基因;另一个是毒性区,在T-DNA的切割､转移与整合过程中起作用｡用于植物基因转化的农杆菌Ti质粒载体系统的构建,是将野生Ti质粒中的致瘤基因删除,并在T-DNA区域内插入适当的选择标记和多克隆位点｡p BI121载体是常用的植物表达载体,载体的骨架是pUC18,以CaMV3SS启动子驱动的新霉素磷酸转移酶基因NPTII为卡那霉素(kan) 抗性选择标记基因,含有卡那霉素抗性基因作为筛选基因｡β一葡萄糖苷酶gus基因作为报告基因,转化的获得的转基因细胞､组织或植株,具有抗卡那霉素的特性,经组织化学染色呈蓝色｡实验器材摇床､超净工作台､小型离心机､冰箱､移液抢､镊子､手术刀､酒精灯､棉球､培养皿､三角瓶､滤纸､牛皮纸､牙签｡实验材料植物材料:烟草无菌苗农杆菌与载体:农杆菌LBA4404 p BI121 YEB培养基:牛肉膏(5 g/L)､蛋白胨(5 g/L)､酵母提取物(1 g/L)､蔗糖(5 g/L)､MgSO4(0.5g/L)､pH 7.0烟草分化培养基: MS + 2mg/L 6-BA + 0.5mg/L IAA烟草生根培养基: MS + 0.5mg/L IAA卡那霉素(Kan) 母液: 50mg/ml, 过滤除菌,分装,-20°C保存｡头孢霉素(cef) 母液: 300mg/ml, 过滤除菌,分装,-20"C 保存｡利福平(rif): 50mg/ml,过滤除菌,分装,-20"C保存｡。
烟草组织培养实验方案
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
叶盘法转基因烟草技术
叶盘法转基因烟草技术实验目的：学习并了解叶盘法转基因烟草的技术流程。
二. 实验原理：土壤中的农杆菌是一种革兰氏阴性菌，能够感染植物的受伤部位。
农杆菌中有一种环形的Ti质粒，Ti质粒最重要的两个区域为T-DNA区和毒性区，T-DNA是Ti质粒上唯一能够整合到植物染色体上的序列，而毒性区上一系列则帮助T-DNA区整合到植物的染色体上。
土壤农杆菌转化植物的常用方法是叶盘法。
这种转基因方法十分简单，一般是将植物的叶片切成小圆片，用农杆菌感染后共培养2-4天，而后转移到加有选择压的分化培养基上分化出芽，在MS培养基上生根后，再生出完整的植株。
三. 试剂及设备1.试剂：MS培养基：配方见“植物的组织培养技术”实验指导Kan：卡那霉素Cb：羧苄青霉素NAA：萘乙酸6-BA：细胞分裂素T1培养基：MS培养基T2培养基：MS培养基+6-BA2.0mg/L+NAA0.5 mg/L+Kan100 mg/L+Cb500 mg/LT3培养基：MS培养基+ Kan100 mg/L+Cb500 mg/L（T2：生长培养基；T3：生根培养基）2.仪器：光照培养箱，恒温摇床，超净工作台，接种器械等四.实验步骤：1 农杆菌培养1）从平板上挑取含有目的基因的单菌落，接种到3 ml YEB 液体培养基中（Str 25 μg/ml、Rif 50 μg/ml、Kan 80 μg/ml）于恒温摇床上27℃，180 rpm 摇培过夜至OD 600 为0.6-0.8。
2）摇培过夜的菌液按1%-2%的比例，转入新配置的无抗生素的YEB 培养基中，在与上述相同的条件下培养6 h左右，OD600 为0.2-0.5 时即可用于转化。
或：将按上述方法培养的OD 600 为0.6-0.8 的菌液，转入无菌离心管中，于室温条件下，5000 rpm 离心10 min，去掉上清液，菌体用1/2 MS液体（pH 5.4-5.8）培养基重悬，稀释至OD600 为0.2 左右，用于转化。
2 烟草愈伤组织诱导实验
烟草叶片愈伤组织诱导分化实验1. 实验目的（1）通过诱导植物（烟草叶片、水稻种子）愈伤组织和器官发生，分析生长素和细胞分裂素对烟草叶片离体培养的作用。
（2）了解植物组织在离体培养条件下脱分化和再分化的特点。
2. 实验原理外植体形成愈伤组织大致要经历三个时期：启动期、分裂期和形成期。
启动期主要通过激素以及环境因素的诱导使外植体细胞代谢增强，大量蛋白质与核酸形成为细胞分裂做准备；分裂期时外植体细胞在激素诱导下脱分化并不断增殖，形成结构疏松的组织块；形成期时，由于不同植物生长激素的诱导使愈伤组织形成根、芽等形态分化。
烟草为常见模式植物之一，常用于植物组织培养，是研究细胞脱分化和再分化的理想材料。
在愈伤组织诱导及分化过程中，光照条件起到的作用是促使愈伤组织进行光合作用生成糖类，促使代谢活动进行。
6-BA、NAA均为植物生长调节剂，6-BA属于细胞分裂素，可诱导愈伤组织发生并促进牙的形成；NAA属于细胞分裂素，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
根据Skoog和Miller提出的生长素和细胞分裂素相对浓度调节器管分化的概念，相对高的生长素有利于细胞增殖和不定根的分化，而相对高的细胞分裂素浓度有利于不定芽的分化。
通过改变激素的种类和浓度，有效地调节培养组织的器官分化，已经在许多植物的组织培养中得到证实，甚至在一些低等植物中也得到了证实。
3. 实验材料与操作方法3.1 实验材料3.1.1 材料选择：烟草By-2，滤纸片，枪头3.1.2 实验试剂：（1）植物生长调节剂（超净台过滤灭菌，1.5 mLEP管分装后-20℃贮存）6-BA 0.5mg/mL（1mol/L NaOH溶解再用蒸馏水定容）NAA 0.5mg/mL（1 mol/L NaOH溶解再用蒸馏水定容）（2）抗生素（超净台过滤灭菌，1.5 mLEP管分装后-20℃贮存）卡那霉素50 mg/mL（蒸馏水定容）利福平15 mg/mL（无水乙醇溶解再用蒸馏水定容）链霉素30 mg/mL（蒸馏水定容）羧苄青霉素100 mg/mL（蒸馏水定容）（3）实验用培养基MS大量元素储存母液（50×，蒸馏水定容）：1650mg/L NH4NO3+1900mg/L KNO3+370mg/L MgSO4·7H2O+170mg/L KH2PO4+440mg/LCaCl2·2H2O（CaCl2·2H2O在配制过程中不易溶解，可单独配成储液存放）MS微量元素储存母液（100×，蒸馏水定容）：0.83mg/L KI+6.2mg/L H3BO3+22.3mg/L MnSO4·4H2O+8.6mg/L ZnSO4·7H2O+ 0.25mg/L Na2MoO4·2H2O+0.025mg/L CuSO4·5H2O+0.025mg/L CoCl2·6H2O +27.8mg/LFeSO4·7H2O +37.3 mg/L Na2-EDTA·2H2O（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA·2H2O两个试剂配制成100×溶液4℃冰箱避光储存）MS有机成分储存母液（100×，蒸馏水定容）：3mg/L甘氨酸+0.5mg/L烟酸（维生素B5）+0.5mg/L盐酸吡哆醇（维生素B6）+0.1mg/L盐酸硫胺素（维生素B1）+100mg/L肌醇（肌醇难溶解，一般独自配成浓缩液储存）MS培养基（NaOH调节至pH 5.8，蒸馏水定容）：1×大量元素+1×微量元素+1×有机成分+30g/L蔗糖+0.8%琼脂+不同比例生长素（6-BA+IAA）3.1.3 实验仪器：超净工作台，烧杯，锥形瓶，培养皿，枪形镊子，眼科剪，移液枪，酒精灯，光照培养室，3.2 操作方法取幼嫩烟草叶片约5片（选择幼年的外植体较好，如分生组织、维管束、形成层组织、静止的薄壁组织），用自来水清洗晾干。
叶盘法转化烟草的原理
叶盘法转化烟草的原理叶盘法是一种生物工程技术，用于转化或改造植物基因组以生产特定物质。
在烟草中应用叶盘法可以用于合成表达外源蛋白、开发抗病毒烟草品种以及烟草遗传改良等领域。
叶盘法的基本原理是利用植物的组织再生能力，通过培养植物的叶片组织培养而成的小体，在适当的培养基组合下，通过添加适当的物质和条件，将目标基因组转化至植物细胞中。
叶盘法的实验流程一般可以分为以下几个步骤：1.植物材料的准备：从健康的烟草植株中采集叶片，并将其洗净，并进行无菌处理以确保实验的纯度。
2.建立愈伤组织：将洗净的叶片剪成小碎片，并将其转移到含有激素和培养基中，利用试管内的适宜条件培养愈伤组织。
这一步是为了为后续基因转化做好基础，并培养植物细胞的再生能力。
3.转化基因：将目标基因或转入质粒经过适当的处理和筛选，将其引入培养的烟草细胞中。
目标基因可以是外源蛋白的编码序列，用于生产特定蛋白质。
转入基因的方法包括生物颗粒轰击、体外基因传递和通过细菌介导的转化等多种方法。
4.培养变性细胞：转入基因的组织在适宜的培养条件下进行培养和筛选，以确保它们能够在细胞内稳定表达目标基因。
同时，还可以使用适当的抗生素来抑制未转化细胞的生长。
5.稳定转化的筛选：利用特定的筛选方法，筛选出稳定表达目标基因的转化细胞。
常用的筛选方法是利用抗生素抗性基因或镰刀形细菌素酶基因，通过添加抗生素或镰刀形细菌素酶底物来诱导或检测转过的细胞。
6.进一步培育和鉴定：将经过筛选的转化细胞进行进一步培养，培育出大量具有目标基因的烟草植株。
同时，对植株进行鉴定和检测，确认目标基因的稳定性和表达水平。
通过以上步骤，叶盘法能够有效地将外源基因导入到烟草植株的基因组中，并使其稳定表达。
通过优化培养条件和基因的筛选方法，可以进一步提高转化效率和稳定性。
叶盘法的优点在于操作简单、转化效率高、转基因植株易于培养和大规模扩繁等。
然而，叶盘法也存在一些局限性，如转化效率和稳定性的波动性、可能引发的遗传不稳定性等问题，需要进一步的优化和改进。
烟草实验情况汇报
烟草实验情况汇报
本次烟草实验旨在探究不同环境条件对烟草生长的影响，以及对烟草质量和产
量的影响。
我们选择了室内和室外两种不同的环境条件进行实验，以期获得更全面的数据和结论。
首先，我们在室内设置了温度恒定、湿度适宜的环境条件，对烟草进行种植和
观察。
在这种条件下，我们发现烟草生长速度较快，叶片颜色较为鲜绿，但是烟草的高度和叶片数量相对较少。
同时，室内环境下的烟草产量也较低，质量略有下降。
其次，我们在室外选择了阳光充足、气候适宜的环境条件进行烟草种植实验。
在这种条件下，烟草生长速度较慢，但是烟草的高度和叶片数量明显增加，叶片颜色也更加饱满。
与室内环境相比，室外环境下的烟草产量明显提高，质量也有所增加。
综合实验结果，我们可以得出以下结论，不同环境条件对烟草生长和产量有着
明显的影响。
温度恒定、湿度适宜的室内环境有利于烟草的生长，但产量和质量相对较低；而阳光充足、气候适宜的室外环境则能够提高烟草的产量和质量，但生长速度较慢。
在今后的研究中，我们将进一步探究不同养分供给、灌溉条件对烟草生长的影响，以及烟草在不同环境条件下的适应性和生长规律。
希望通过这些研究，能够为烟草种植提供更科学、更有效的栽培技术和管理方法，为烟草产业的发展做出贡献。
总的来说，本次实验取得了一定的成果，但是也存在一些不足之处，需要在今
后的研究中加以改进和完善。
我们将继续努力，不断深化研究，为烟草生产和种植提供更多有益的信息和数据。
感谢各位的支持和关注，期待在未来能够取得更加丰硕的成果。
烟草原生质体的分离纯化
烟草原生质体的分离纯化烟草原生质体（Nicotine Protoplast）是指烟草（Nicotiana tabacum L.）细胞中存储和合成尼古丁的部位。
作为一种重要的生物资源，烟草原生质体在药物开发、化妆品生产、食品添加剂等领域具有广泛的应用前景。
为了更好地利用烟草原生质体，需要对其进行了分离纯化。
本文将详细介绍烟草原生质体的分离纯化方法及其应用前景。
材料和方法实验材料：烟草植株：Nicotiana tabacum L.实验设备：高速离心机恒温摇床无菌操作台旋转蒸发器微量进样器实验试剂：缓冲液（pH 4）葡萄糖聚乙二醇（PEG）十二烷基硫酸钠（SDS）乙酸乙酯氯仿酚红指示剂尼古丁标准品实验步骤：萃取：将烟草植株剪成碎片，加入缓冲液，用高速粉碎机粉碎。
然后，用缓冲液冲洗粉碎后的材料，收集冲洗液。
分级沉淀：将冲洗液加入无菌操作台中，加入甘露醇和葡萄糖，用高速离心机进行分级沉淀，收集沉淀物。
透析：将沉淀物移入透析袋中，用缓冲液进行透析，去除小分子杂质。
超速离心：将透析液加入高速离心机中，用氯仿和甲醇进行超速离心，收集有机相。
萃取：将有机相加入无菌操作台中，加入缓冲液和尼古丁标准品，用高速震荡器震荡，收集震荡液。
透析：将震荡液移入透析袋中，用缓冲液进行透析，去除小分子杂质。
冻干：将透析液进行冻干处理，得到烟草原生质体粉末。
结果与数据分析通过对比不同实验步骤的实验数据，我们可以得出以下萃取和分级沉淀可以有效去除杂质，提高烟草原生质体的纯度；透析可以进一步去除小分子杂质，提高烟草原生质体的纯度；超速离心可以有效地将有机相和无机相分开，收集到有机相中的尼古丁；萃取和透析可以进一步去除杂质，得到高纯度的烟草原生质体粉末。
应用前景作为一种重要的生物资源，烟草原生质体在未来的应用前景广阔。
烟草原生质体可以作为药物开发的重要原料，用于制备尼古丁药物。
烟草原生质体中的尼古丁是一种天然的杀虫剂，可以用于生产绿色、无残留的化妆品和食品添加剂。
烟草实验实训目的和要求
烟草实验实训目的和要求
烟草是遗传转化的模式植物，已经建立了一套完善的转化再生体系。
本实验以烟草为实验材料，使同学们了解根癌农杆菌介导法的基本原理和一般步骤，掌握遗传转化的基本操作技术。
烟草叶片，LBA4404质粒载体，摇床，培养皿（带滤纸），移液枪，镊子，手术刀，无菌水。
根癌农杆菌介导转化的方法已经比较成熟，易于在植物细胞和组织培养实验室进行。
具体操作程序如下：
（1）根癌农杆菌质粒的保存：构建好的根癌农杆菌质粒接种在YEP固体培养基上，YEP固体培养基的成分为每100mL含NaCl 0.5g，酵母1 g，水解酪蛋白1g，琼脂1.5g，pH值7.0，在冰箱中冷藏，一个月换一次培养基，保证菌种正常生长。
（2）配制YEP液体培养基：成分同上，只是不添加琼脂，分装于试管中，每试管加入5mL左右的液体培养基，包好后高压灭菌，放置于冰箱中待用。
（3）摇菌：用灭菌后的牙签或者火柴棍等挑出一些菌液，一起放入上述YEP液体培养基中，然后置于振荡器上摇菌16—17h（180r ／min），直至溶液变浑浊，即有大量菌丝长出。
（4）用消毒后的0.5mm打孔器从叶片上切出叶盘，然后将叶盘投入农杆菌悬液中培养5min。
（5）用滤纸吸干多余的菌液，叶片放在MS+6—BA 1.0 mg/L 十IAA 0.1 mg/L培养基上共培养2d，随后转至附加卡那霉素
100mg/L，羧苄青霉素500 mg/L的培养基上筛选培养，（25±1）℃，16h光周期。
（6）2周后分化出卡那霉素抗性芽（应为绿色），从基部将芽切下，转至含100mg/L卡那霉素和500 mg/L羧苄青霉素的MS+0.1 mg/LIAA上生根培养，生根后的植株移入温室内栽培。
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烟草叶片愈伤组织诱导
摘要用不同成分培养基，附加0.8%琼脂，3%蔗糖，调pH5.8—6.0，取烟草叶片
作为外植体进行愈伤组织诱导培养，计算污染率、诱导率以及诱导情况，观察愈伤
组织的发生情况。
实验表明，养分较高的培养基，外植体生长情况较好。
当细胞分
裂素高于生长素的浓度时，有利于分化出芽；细胞分裂素低于生长素的浓度时，有
利于分化出根；当细胞分裂素及生长素的浓度适合时，愈伤组织不分化，但是生长
旺盛。
关键词：烟草叶片愈伤组织诱导
前言
烟草（Nicotiana tabacum）又名草烟，属茄科烟草属的一年生草本植物，本属约有60种，原产于美洲和大洋洲[1]。
烟草是重要的经济作物和工业原料作物，其体内所含的烟碱等生物碱是非常宝贵的医药及化工原料[2]。
有报道烟草细胞悬浮培养物获得细胞分裂素类物质，因此很有必要对烟草的组培快繁进行研究，以获得更有效的方法提高产率和产量。
柯善强综述植物细胞的遗传全能性与组织培养形态发生控制[3]，戴冕进行了烟草叶肉原生质体再生植株的研究[4] ,徐瑞娟等通过烟草花序苞叶的离体培养分化出花芽[5],战淑敏用烟草叶组织培养直接获得再生植株[6]。
本实验以烟草叶片组织为外植体进行组织培养，诱导愈伤组织，观察愈伤组织诱导情况。
1.材料与方法
1.1 配置培养基母液，每2人为一个小组，配置以下培养基，并分装，灭菌，然后室温下放置一周。
1.2 取烟草叶片取烟草的嫩叶片作外植体。
先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水洗2次后，置于超净台上，于无菌条件下先用75%的酒精浸泡30秒，然后置于无菌瓶中用10%次氯酸钠溶
液浸泡20分钟至30分钟，再用无菌水冲洗4次，最后在无菌培养皿中将嫩叶片切成1cm见方小块，接种在培养基中。
1.3.1 观察污染情况：观察是否有细菌性污染（菌斑呈粘液状,接种后1-2天出现）和真菌性污染（出现不同颜色霉菌,接种后3-10天出现），并计数。
计算污染率。
污染率(%)=污染的材料数/总接种材料数×100%[7]
1.3.2 观察各培养基中的外植体产生愈伤组织的情况，愈伤组织出现时间和愈伤组织形态特征（颜色和质地等），计数形成愈伤组织的材料数，并计算诱导率。
诱导率(%)=形成愈伤组织的材料数/总接种材料数×100%[7]
2.结果及分析
2.1愈伤组织诱导情况
三天后发现部分组有细菌性污染（如图1），7天后发现部分有真菌性污染。
计算出污染率和如表1所示：
表1. 愈伤组织诱导的污染情况
造成污染的可能原因有：叶片消毒灭菌不彻底，接种室超净工作台消毒不彻底，接种操作时操作不规范等等。
叶片在第4天后边缘慢慢上卷，外植体开始膨胀，于接种后第7 天膨大成圆拱型，愈伤首先发生在叶片边缘, 为黄绿色颗粒状，有些呈现半透明。
随着进一步培养, 10天愈伤组织不断加大。
排除褐变及感染的外植体后，诱导情况如表2所示：
表2.愈伤组织诱导情况
MS+NAA0.5培养基MS+6-BA2.0+2,4-D0.5培养基
1/2MS+NAA0.5+0.2%AC培养基MS+6-BA2.0+NAA0.2培养基
MS+6-BA1.0+2,4- D0.5培养基MS+6-BA1.0+NAA0.5培养基外植体从切口边缘开始膨胀。
有研究表明，外植体边缘开始膨胀时，叶肉细胞已经明显增大，在切口附近的叶肉细胞，一些靠近小的维管束的栅栏组织细胞以及这些维管组织的薄壁细胞开始细胞分裂；当形成少量的愈伤组织时，由于激素的诱导作用，在切口处已形成一团活跃分裂的细胞，细胞体积明显减小，这种细胞分裂活动这时已扩展到其它部分的叶肉组织；在叶组织中形成了大量的分散的分生细胞团，细胞体积进一步减小，在这些活跃分裂的部位通常已无法辨认原来的叶肉细胞[8]。
在本组的培养基中愈伤组织生长旺盛，未见分化，原因是本组的培养基中，细胞分裂素6-BA及生长素NAA的浓度合适，比较有利于愈伤组织的诱导，而不太利于根和芽的分化[6]。
而在他组的高细胞分裂素，低生长素的培养基中，添加了活性炭，有根的分化。
原因可能是活性炭能吸附有害物质，减少负面影响，而且会使培养基变黑，创造暗环境，故相比其它培养基更有利于植物生根[9]。
3.讨论
不同的培养基会造成外植体不同的生长情况，其中，养分较高的培养基，外植体生长情况较好。
而不同的生长调节剂对于外植体的愈伤组织诱导及分化有着重要的影响，当细胞分裂素6-BA高于生长素NAA的浓度时，有利于分化出芽；细胞分裂素6-BA低于生长素NAA的浓度时，有利于分化出根；当细胞分裂素6-BA及生长素NAA的浓度适合时，愈伤组织不分化，但是生长旺盛。
在组织培养中，形成的愈伤组织有疏松型和致密型两种，疏松型的愈伤组织易于分化，将其进行继代培养效果更好。
在李大卫等对大丽花的研究中[10]也说明了这个问题。
再分化培养时，愈伤组织的初始状态不同, 再分化的能力相差很大,疏松型愈伤组织是外植体在脱分化过程中, 最早、最快分化出来的愈伤组织块；而致密型愈伤组织, 则是在脱分化过程中, 生长较慢的组织块, 以后又继续用脱分化培养基, 连续培养出来的。
所以，再分化培养时，应选取疏松型愈伤组织, 以利于大量出苗。
而继代培养在初转接时，继代增殖倍数较低,增殖率也较低；随着继代次数的增加,其增殖倍数逐渐提高。
原因是在嫩芽中逐步积累了较多的细胞分裂素,并逐渐适应了培养条件,通常将这一过程叫做驯化阶段；植物组织对细胞分裂素和生长素的要求也会有所降低；当继代增殖培养到达一定代数后,增殖倍数到达最高点,随后慢慢下降,同时,芽苗逐渐变得肥大、结构疏松、颜色变白或逐渐变得圆短[11]。
因此用诱导出的大块愈伤组织虽然可以获得大量的小植株，但是继代培养多代后，效率就会明显降低。
参考文献
[1] 周仕顺, 掏志章. 烟草的组织培养[J]. 云南农业科技, 2005,(01)：22
[2] 施和平, 黄群声. 烟草叶片组织培养及植株再生(简报)[J].亚热带植物科学, 2003,(04):63
[3] 柯善强. 植物细胞的遗传全能性与组织培养形态发生控制[J].武汉植物学研究, 1987,(03):303～312
[4] 戴冕, 崔植琳. 烟草叶肉原生质体再生植株的研究. 广东农业科学,1992,(3):21～22
[5] 徐瑞娟, 李文安. 烟草花序苞叶的离体花芽分化[J].云南植物研究, 1992,(01):67～72
[6] 战淑敏. 烟草叶组织培养直接获得再生植株.莱阳农学院学报,1993,(2):131—132
[7] 潘瑞炽, 施和平, 王小菁, 李玲.植物细胞工程. 广州：广东高等教育出版社：159
[8] 许智宏, 刘桂云. 烟草叶组织培养中愈伤组织和芽形成的细胞学观察[J].Journal of Integrative Plant Biology,1980,(01)：1—5
[9] 潘瑞炽, 施和平, 王小菁, 李玲.植物细胞工程. 广州：广东高等教育出版社：21
[10] 李大卫，刘志强, 刁晓歌. 大丽花(Dahlia pinnata CaV.)的组织培养与继代培养[J]. 河南师范大学学报(自然科学版), 1986,(03):124—129
[11] 廖劲松, 郭勇. 微甘菊愈伤组织培养的研究Ⅱ.愈伤组织继代培养[J]. 郑州工程学院学报, 2004,(03)：52—54
[12]李万德, 杜桂, 张剑. 植物组织培养实验中存在的问题及其解决办法[J].湖北生态工程职业技术学院学报，2006(02)：11—12。