烟草组培苗实验步骤
烟草组织培养实验方案
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
普生实验报告烟草幼苗培养
普生实验报告
实验名称烟草幼苗的组织培养
实验目的：
1.掌握植物组织培养中无菌操作技术。
2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。
记录一：周次：14
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
记录二：周次：15
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
记录三：周次：16
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
作用：6-BA ：促进芽的形成,诱导愈伤组织发生。
NAA ：促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
差异：培养基中生长素、细胞分裂素浓度不同，可以诱导烟草幼片生根或生芽。
细胞的全能性：植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化的细胞发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。
烟草的组织培养技术
烟草的组织培养技术一、目的与要求1.验证“植物细胞全能性”理论。
2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。
二、实验原理植物组织培养是指在无菌条件下，分离、并在培养基中培养离体植物组织（器官或细胞）的技术。
植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适当条件下具有繁殖出完整植株的能力。
植物组织当中原本已经分化的细胞，组织、器官一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出细胞的全能性，从已经分化的细胞通过脱分化，成为重新具有分裂能力的胚性细胞，并能再分化重新生长发育成完整的植株。
愈伤组织：是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的细胞团。
脱分化：已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性细胞的过程。
再分化：经过脱分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细胞、组织、器官或完整植物体。
三、材料和用具1.材料：无菌烟草叶盘（已经诱导成芽），拟南芥。
2.用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术解剖刀、大、小镊子、30ml烧杯、500ml烧杯、药勺、玻璃棒、培养瓶、平皿、试纸（PH5.4-7），报纸等。
3.试剂：MS培养基、0.5mol/LNaOH、1mol/L HCl。
四、操作步骤（一）诱导培养基配制（见表1）1.加MS储液（储液配置见附表）大量元素和微量元素的母液都是高浓度的，为防止混合后发生沉淀，建议加完大量元素后先加水（约总体积3/4），再加各微量元素和有机成分。
铁盐也是微量元素，因为易发生沉淀，所以与其它微量元素分开配。
储液中的铁盐存于棕色瓶中。
配好的储液应当4℃保存。
表1是4瓶培养基（1组）的配置方案。
表1 诱导培养基配制表成分实际称取量蒸馏水120 mlMS母液15 mL蔗糖 4.5 g用蒸馏水粗略定容至100mlpH值 5.8琼脂 1.2 g2.加蔗糖（3%）（m/v）。
实训三 烟草苗情观察
实训三烟草苗情观察
一、实训目的
通过观察烟草幼苗长势长相，了解其生长规律，分辨苗期各个生育期，为今后到工作烟草站育苗打下基础。
二、实训场地
教室。
三、实训形式
以个人为单位进行观察。
四、实训材料用具
腐叶土、营养钵、云烟87种子、水、铅笔、记载表等。
五、实训内容
营养钵装一半腐叶土，并播2-3粒云烟87种子，盖土不见种子，浇足水，每天观察1次，并填写观察记载表。
六、作业
1、管理好营养钵培育烟苗
2、烟苗观察记载
①烟苗观察记载表
②烟苗生育期观察记载表。
实验室本氏烟草种植技术：从基础到实践
标题：实验室本氏烟草种植技术：从基础到实践
导言
烟草是一种重要的经济作物，其种植技术的不断革新对于提高产量、改善品质至关重要。
实验室本氏烟草种植技术作为一种现代化的种植方式，受到了广泛的关注。
本文将探讨实验室本氏烟草种植的方法及其实践意义。
实验室本氏烟草种植方法
1.种子选择与预处理：选择具有良好遗传性状的烟草种子，并进行适当的
预处理，如浸种、消毒等，以增强种子的萌发率和抗病能力。
2.基质培育：选择适宜的基质（土壤或无土培养基），在控制温湿度的条
件下进行培育，为幼苗的生长提供良好的环境。
3.灌溉与营养管理：确保灌溉水量和营养液的配比适宜，满足烟草生长的
水分和营养需求，避免水肥过剩或不足。
4.光照与温度控制：维持适宜的光照和温度条件，利用人工光源和温控设
备，模拟自然环境，促进烟草幼苗的生长和发育。
5.病虫害防治：定期检查烟草植株，及时发现并采取措施防治病虫害，如
使用生物农药或化学农药进行喷雾处理。
实践意义与应用前景
1.提高烟草品质：实验室本氏种植技术可以精确控制环境条件，优化烟草
生长过程，提高烟叶的品质和产量。
2.减少种植成本：相比传统的露地种植方式，实验室本氏种植技术可以减
少对土地、水资源的需求，降低种植成本。
3.科研与创新：实验室本氏种植技术为烟草育种、病虫害防治等研究提供
了良好的平台，推动烟草产业的科技创新。
结语
实验室本氏烟草种植技术在现代农业中具有重要的应用前景和实践意义。
通过不断的科研探索和实践验证，我们有信心可以进一步完善这一种植技术，为烟草产业的可持续发展做出更大的贡献。
一种烤烟育苗方法
一种烤烟育苗方法
烟育苗是指将烟草种子在特定的环境中培育成苗。
以下是一种常见的烤烟育苗方法：
1. 选种：选择适合自己地区气候和土壤条件的优质烟草种子。
2. 浸种：将烟草种子放入温水中浸泡12-24小时，使种子吸水膨胀。
3. 播种：在育苗盘或培育箱中均匀撒播种子，不要密植。
4. 培育基质：使用透气、保水性好的培育基质，如腐叶土和沙土混合。
在育苗盘或培育箱底部放一层混合基质。
5. 覆土：将一层培育基质轻轻覆盖在种子上，约厚度为种子的两倍左右。
6. 浇水：用喷雾器或水龙头小水流轻轻浇水，保持培育基质湿润但不过湿。
7. 光照：烤烟喜欢充足的阳光，将育苗盘或培育箱放置在明亮的位置，每天保证至少6-8小时的日照。
8. 温度控制：种子萌发需要适宜的温度，一般为20-25摄氏度。
可使用温度控制设备，如加热垫等，保持适宜的温度。
9. 管理：定期检查湿度和温度，保持适宜的条件。
防止病虫害的发生，如蚜虫、介壳虫等，可以使用安全的农药进行防治。
10. 移植：苗长到3-4片真叶时，可以进行移植到室外苗床或温室中继续生长。
以上是一种常见的烤烟育苗方法，具体的方法可能会因地区和个人需求有所不同，可以根据实际情况适当调整。
同时，也可以参考相关的育苗技术书籍和专业人士的建议。
烟草叶片组织培养及植株再生
1、选取的叶片应尽可能健康， 无病虫害。
2、消毒过程中要避免过度浸泡， 以免对叶片造成损伤。
3、培养基的成分和浓度是诱导愈伤组织的关键因素，需要根据实验目的进 行调整。
4、培养过程中的温度和光照也是影响愈伤组织生长的重要环境因素，需要 保持恒定。
步骤2：红花烟草叶片愈伤组织诱导后的处理措施以及后续的筛选和优化 在红花烟草叶片愈伤组织诱导成功后，需要进行以下处理措施：
谢谢观看
通过对红花烟草叶片愈伤组织的诱导与植株再生研究，可以为提高烟草的产 量和品质以及植物生物技术的进一步发展提供有力的支持。
步骤1：红花烟草叶片愈伤组织 诱导的基本步骤和注意事项
红花烟草叶片愈伤组织的诱导主要分为以下几个步骤：
1、选取健康的红花烟草叶片， 将其用自来水冲洗干净。
2、将洗净的叶片置于消毒液中浸泡一定时间，以杀死叶片表面的微生物。 常用的消毒液有70%酒精和0.1%升汞等。
烟草叶片组织培养及植株再生
01 一、引言
目录Leabharlann 02二、烟草叶片组织培 养
03 三、烟草植株再生
04 四、分析比较叶片组 织培养和植株再生
05 五、总结
06 参考内容
一、引言
随着生物技术的迅速发展，植物组织培养技术已成为一种重要的研究手段， 广泛应用于农业、林业、医药等领域。在烟草行业，叶片组织培养和植株再生技 术的运用对于提高烟草产量、品质以及抗病抗逆性等方面具有重要意义。本次演 示将详细介绍烟草叶片组织培养和植株再生的基本原理、方法及应用，并对其优 缺点进行分析和比较。
（1）方法：烟草叶片组织培养的主要流程包括选取叶片、消毒、接种、培 养、增殖和移栽等步骤。
（2）设备：实验室进行烟草叶片组织培养需要的基本设备包括超净工作台、 酒精灯、解剖刀、镊子、培养皿、三角瓶、摇床等。
烟草幼苗的组织培养实验报告
烟草幼苗的组织培养实验报告一，实验名称：烟草幼苗的组织培养二，实验原理：植物组织培养是指在无菌条件下，分离并在培养基中培养立体植物组织（器官和细胞）的技术。
植物组织培养的理论基础是植物细胞具有全能型。
植物组织当中原本已经分化的细胞，在脱离原有机体环境成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化的细胞发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞（本实验中用到的是愈伤组织，是由植物的一个离体的细胞，一块组织或一个器官的细胞脱分化形成的），并重新生长发育成完整的植株。
生长素，细胞分裂素浓度之间的平衡可以决定烟草组织幼苗的叶片或茎髓将产生根，茎或仅仅是愈伤组织。
三，实验材料和用具：1、材料：烟草幼茎2、用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术器械、20ml量筒、PH试纸、烧杯、玻璃棒、三角烧瓶、封口膜、高压橡皮筋。
3、试剂：MS培养基、NAA、6-BA四，实验步骤：1、培养基的配置成分实际称取量大量元素（10×）40 ml蒸馏水300 ml微量元素（100×） 4 ml有机成分（100×） 4 ml铁盐（100×） 4 ml蔗糖12 g定容至400 ml激素（1 mg/ml）每130 ml MS加：生根6-BA=13 μl NAA=65 μl生芽6-BA=65 μl NAA=13 μl对照组（不加激素）pH值 5.8分瓶30 ml/瓶琼脂0.24 g2、培养基、剪子、镊子、枪头需在高压灭菌锅120摄氏度灭菌20分钟。
3、接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30分钟4、肥皂洗手和手腕，关闭无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，并关掉超净工作台上的紫外灯。
再用百分之七十的酒精喷手。
5、点燃酒精灯6、将橡皮筋解开（不掀开封口膜），放到无菌风道侧面。
将镊子见到放到酒精灯外焰灼烧，冷却后剪取外肢体。
迅速用另一手持三角瓶，去下封口膜，瓶口略倾斜，在酒精灯外焰上灼烧数秒。
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烟草叶片的组织培养一、实验原理与实验步骤在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
植物材料：烟草植株药品：（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1mol/L NaOH、1mol/L HCL 蒸馏水、70%酒精0.01%升汞仪器：玻璃杯、玻璃棒、pH试纸(5.5-9.0)、1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子二、实验方法与步骤注意：1、大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2、微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签3、铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4、有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
（1）制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
（2）称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。
称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。
三、培养基配制和灭菌本次实验使用（1）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0mg/L；（2）幼芽增殖培养基：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L；（3）生根培养基：MS+NAA0.2mg/L。
注意事项：上述培养基均在MS固体培养基溶化后降低到50左右后，加入相应激素所得，MS固体培养基的配置过程在此不作过多赘述上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强2000lx。
母液吸取量的计算配制培养基的升数公式1：母液吸取量=母液体积（CC）×（配制培养基的升数/母液浓缩倍数）公式2：母液吸取量=（培养基要求的含量/ 母液每CC的含量）（各种生长调节剂）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg，NAA用少量95%酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
配制培养基（1000ml）1.琼脂:称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止.2.蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸馏水中。
3、各种母液的吸取（培养基1L）（1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml （2）分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml （3）用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml（4）移取激素将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求 5.8~6.0，过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。
分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占试管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。
包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进行灭菌。
用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
四、培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（高压蒸汽灭菌锅的使用方法）具体操作步骤：1.高压锅放水至平把架；2.把包扎好的培养基装入高压锅;3.盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀.4.然后接通电源.5.压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。
6.排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针下降至0.11MPa 时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。
7.灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。
8.经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存4天，如果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。
灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格，无论哪种型号，操作的步骤都很相近。
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀→0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。
五、植物材料表面灭菌——消毒剂灭菌外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。
这些污染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。
因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接种。
1、接种步骤：第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗→→自来水冲洗第二步：对材料的表面浸润灭菌：70%酒精浸10-30秒→→无菌水第三步：灭菌剂处理→→0.1-1%升汞5-8min（或其他灭菌剂）第四步：无菌水进行冲洗注意事项：1.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存。
2.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗3-4次，升汞一般5-8次，每次不少于3min。
3.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底。
4.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。
5.灭菌液要充分浸没材料。
2、无菌操作可按以下步骤进行：（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外线灯进行杀菌；（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯；（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。
然后搽拭工作台面；（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。
（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。
微茎尖要剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
六、烟草叶片愈伤组织的诱导和不定芽的分化（1）于超净台中彻底冲洗外植体；70%酒精消毒3min；无菌水冲洗3遍，每遍3min；将烟草叶片残留的水分用灭过菌的滤纸吸干；白瓷板上用消毒的解剖刀分割为1-1.5cm2的小块；接入相应的MS培养基上，每瓶接种4-5块。
接入（1）中培养。
（2）约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀；（3）15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%（4）30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点（5）60d后，不仅从愈伤组织上分化出越来越多幼芽，芽诱导频率(芽数/块愈伤组织)为25～35，而且还可观察到，该愈伤组织较早分化产生的幼芽叶片呈现不同程度白化（或缺绿）。
但此时若将此缺绿幼芽切下，转接至不加2,4-D的幼芽增殖培养基（2）上。
（6）3～5d后即可恢复正常，缺绿症状消失，并可不断增殖，发育成绿色健壮的小苗。
七、诱导生根及移栽与数据记录取约3～4cm长的无根小苗接种于生根培养基（3）中，约7～8d后，几乎所有外植体均从其基部产生白色幼根，根诱导频率为3～5，部分在培养基表面的根具大量白色根毛。
当试管苗长至5～6cm高时，打开瓶口，在散射光下放置2d后取出，洗去根部残留培养基，种植于经过消毒的珍珠岩、泥炭土和菜园土等量混合的基质中，成活率可达95%以上。
烟草叶片愈伤组织诱导情况烟草叶片愈伤组织再生植株情况烟草叶片诱导生根情况。