烟草组织培养实验方案
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验实验目的一学习和掌握植物组织培养技术，理解植物细胞的全能性。
实验原理二年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地世纪30植物组织培养是从20少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物、萘乙4-D4-二氯苯氧乙酸2，，质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2）细胞分裂素IBA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸NAA酸、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA））等。
分裂期是，KT-30CPPU糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（6-（苄氨基嘌呤6-BA、6-指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。
烟草组织培养
题目 ： 烟草组织培养
组员 ：刘耀敏（组长）黄净 任艳芳 钟小程 刘瑞莲 黄勺舒 周燕梅
• 研究目的：近年来随着先进的烟草工 厂化育苗的推广，传统的育种方法难 以克服自然退化的问题，而通过组织 培养可以克服这样一个问题。故烟草 组培在市场上将占有很大的优势。所 以我们组想对烟草进行组织培养研究， 这大部分也是我们个人的兴趣。 • 参考文献：烟草快速繁殖及培养的研 究（云南农业大学学报，第十三卷， 第四期）
研究内容：用试管快繁技术繁殖, 可节约繁 殖材料，只取原材料上的一小块组织或 器官就能在短期内生产出大量市场所需 的优质苗木, 每年可以繁殖出几万甚至数 百万的小植株，既不损伤原材料又可获 得较高的经济效益。 采用茎尖培养的方法或结合热处理除去绝 大数植物的病毒、真菌和细菌，使植株 生长势强、色泽鲜艳、抗逆能力提高
• 试管繁殖是一种微型的无性繁殖,它取材于 同一个体的体细胞而不是性细胞,因此其后 代遗传性非常一致,能保持原有品种的优良 性状。对保质、保纯有着特殊作用。可获 得大量的统一规格、高质量的苗木。
• 研究意义：1、繁殖速度快、繁殖 系数大; 2、繁殖方式多;有短枝扦 插、芽增殖、原球茎、器官分化和 胚状体发生 3、繁殖后代整齐一致, 能保持原有品种的优良性状 4、可 获得无毒苗 5、可进行周年工厂化、培养基的制备 在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种 适合的培养基，最好先由一种已被广泛彩的基本 培养基开始，烟草的培养采用的是MS基本培养 基。在实际培养过程中，分为三种培养基进行使 用： 1 1、诱导愈伤组织的培养基：MS+6MS+6BA2+NAA0.5 2、诱导芽的培养基：MS+6-BA2+NAA0.1 3、诱导根的培养基：MS+6-BA2+IBA0.5 各种培养基所用琼脂为9g/L，蔗糖均为30g/L， PH为5.5-6.0
烟草的组织培养技术
烟草的组织培养技术一、目的与要求1.验证“植物细胞全能性”理论。
2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。
二、实验原理植物组织培养是指在无菌条件下，分离、并在培养基中培养离体植物组织（器官或细胞）的技术。
植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适当条件下具有繁殖出完整植株的能力。
植物组织当中原本已经分化的细胞，组织、器官一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出细胞的全能性，从已经分化的细胞通过脱分化，成为重新具有分裂能力的胚性细胞，并能再分化重新生长发育成完整的植株。
愈伤组织：是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的细胞团。
脱分化：已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性细胞的过程。
再分化：经过脱分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细胞、组织、器官或完整植物体。
三、材料和用具1.材料：无菌烟草叶盘（已经诱导成芽），拟南芥。
2.用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术解剖刀、大、小镊子、30ml烧杯、500ml烧杯、药勺、玻璃棒、培养瓶、平皿、试纸（PH5.4-7），报纸等。
3.试剂：MS培养基、0.5mol/LNaOH、1mol/L HCl。
四、操作步骤（一）诱导培养基配制（见表1）1.加MS储液（储液配置见附表）大量元素和微量元素的母液都是高浓度的，为防止混合后发生沉淀，建议加完大量元素后先加水（约总体积3/4），再加各微量元素和有机成分。
铁盐也是微量元素，因为易发生沉淀，所以与其它微量元素分开配。
储液中的铁盐存于棕色瓶中。
配好的储液应当4℃保存。
表1是4瓶培养基（1组）的配置方案。
表1 诱导培养基配制表成分实际称取量蒸馏水120 mlMS母液15 mL蔗糖 4.5 g用蒸馏水粗略定容至100mlpH值 5.8琼脂 1.2 g2.加蔗糖（3%）（m/v）。
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术。
深刻理解植物细胞的全能性。
二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸IBA）细胞分裂素（6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（KT-30，CPPU））等。
分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。
普生实验报告烟草幼苗培养
普生实验报告
实验名称烟草幼苗的组织培养
实验目的：
1.掌握植物组织培养中无菌操作技术。
2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。
记录一：周次：14
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
记录二：周次：15
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
记录三：周次：16
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
作用：6-BA ：促进芽的形成,诱导愈伤组织发生。
NAA ：促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
差异：培养基中生长素、细胞分裂素浓度不同，可以诱导烟草幼片生根或生芽。
细胞的全能性：植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化的细胞发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。
烟草幼苗的组织培养
烟草幼苗的组织培养
一、目的与要求
掌握植物组织培养中无菌操作技术 学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法
二、 实验原理
植物组织培养 在无菌条件下，将植物体的一部分细胞、组织、器 官切割下来，接种到营养介质上，使其增殖成一群细胞、组织、器官， 甚至完整植物体的实验技术。
植物细胞全能性 植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适
当条件下具有繁殖出完整植株的能力。 脱分化 已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性 细胞的过程。 再分化 经过退分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细 胞、组织、器官或完整植物体。 改变生长素NAA和细胞分裂素6-BA浓度比例，可以决定烟草幼苗从 叶片直接分化生成根或芽。 2，4-D能够诱导生成愈伤组织。
1% 1% 1% 3%
3个实验组 5.8 0.8%
Step1: 配大瓶培养基(无激素)
500 ml
Step 2: 分瓶,加激素, 调PH=5.8
125ml
ctrl
NAA:6-BA=1:5
NAA:6-BA=5:1 2,4-D
Step 3:分装,加琼脂
30ml
四、操作步骤
1.灭菌：
(1)器具灭菌： 剪、镊、培养皿，诱导培养基， 120℃，高压灭菌15-20min；
五、无菌操作注意事项
1.
2.
无菌操作时不要讲话，以免污染；
用酒精对双手消毒时，务必待酒精彻底挥发后再靠近酒 精灯火焰，以免火焰伤手。
烟草实验实训目的和要求
烟草实验实训目的和要求
烟草是遗传转化的模式植物，已经建立了一套完善的转化再生体系。
本实验以烟草为实验材料，使同学们了解根癌农杆菌介导法的基本原理和一般步骤，掌握遗传转化的基本操作技术。
烟草叶片，LBA4404质粒载体，摇床，培养皿（带滤纸），移液枪，镊子，手术刀，无菌水。
根癌农杆菌介导转化的方法已经比较成熟，易于在植物细胞和组织培养实验室进行。
具体操作程序如下：
（1）根癌农杆菌质粒的保存：构建好的根癌农杆菌质粒接种在YEP固体培养基上，YEP固体培养基的成分为每100mL含NaCl 0.5g，酵母1 g，水解酪蛋白1g，琼脂1.5g，pH值7.0，在冰箱中冷藏，一个月换一次培养基，保证菌种正常生长。
（2）配制YEP液体培养基：成分同上，只是不添加琼脂，分装于试管中，每试管加入5mL左右的液体培养基，包好后高压灭菌，放置于冰箱中待用。
（3）摇菌：用灭菌后的牙签或者火柴棍等挑出一些菌液，一起放入上述YEP液体培养基中，然后置于振荡器上摇菌16—17h（180r ／min），直至溶液变浑浊，即有大量菌丝长出。
（4）用消毒后的0.5mm打孔器从叶片上切出叶盘，然后将叶盘投入农杆菌悬液中培养5min。
（5）用滤纸吸干多余的菌液，叶片放在MS+6—BA 1.0 mg/L 十IAA 0.1 mg/L培养基上共培养2d，随后转至附加卡那霉素
100mg/L，羧苄青霉素500 mg/L的培养基上筛选培养，（25±1）℃，16h光周期。
（6）2周后分化出卡那霉素抗性芽（应为绿色），从基部将芽切下，转至含100mg/L卡那霉素和500 mg/L羧苄青霉素的MS+0.1 mg/LIAA上生根培养，生根后的植株移入温室内栽培。
烟草叶片组织培养及植株再生
1、选取的叶片应尽可能健康， 无病虫害。
2、消毒过程中要避免过度浸泡， 以免对叶片造成损伤。
3、培养基的成分和浓度是诱导愈伤组织的关键因素，需要根据实验目的进 行调整。
4、培养过程中的温度和光照也是影响愈伤组织生长的重要环境因素，需要 保持恒定。
步骤2：红花烟草叶片愈伤组织诱导后的处理措施以及后续的筛选和优化 在红花烟草叶片愈伤组织诱导成功后，需要进行以下处理措施：
谢谢观看
通过对红花烟草叶片愈伤组织的诱导与植株再生研究，可以为提高烟草的产 量和品质以及植物生物技术的进一步发展提供有力的支持。
步骤1：红花烟草叶片愈伤组织 诱导的基本步骤和注意事项
红花烟草叶片愈伤组织的诱导主要分为以下几个步骤：
1、选取健康的红花烟草叶片， 将其用自来水冲洗干净。
2、将洗净的叶片置于消毒液中浸泡一定时间，以杀死叶片表面的微生物。 常用的消毒液有70%酒精和0.1%升汞等。
烟草叶片组织培养及植株再生
01 一、引言
目录Leabharlann 02二、烟草叶片组织培 养
03 三、烟草植株再生
04 四、分析比较叶片组 织培养和植株再生
05 五、总结
06 参考内容
一、引言
随着生物技术的迅速发展，植物组织培养技术已成为一种重要的研究手段， 广泛应用于农业、林业、医药等领域。在烟草行业，叶片组织培养和植株再生技 术的运用对于提高烟草产量、品质以及抗病抗逆性等方面具有重要意义。本次演 示将详细介绍烟草叶片组织培养和植株再生的基本原理、方法及应用，并对其优 缺点进行分析和比较。
（1）方法：烟草叶片组织培养的主要流程包括选取叶片、消毒、接种、培 养、增殖和移栽等步骤。
（2）设备：实验室进行烟草叶片组织培养需要的基本设备包括超净工作台、 酒精灯、解剖刀、镊子、培养皿、三角瓶、摇床等。
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烟草组织培养实验方案
摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养
前言
组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,
容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号
二实验材料：华烟6号种子
三实验方法与步骤
1．培养基的配制
本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）
3. 无菌苗的获得
把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化
在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
60d后，不仅从愈伤组织上分化出越来越多幼芽，芽诱导频率(芽数/块愈伤组织)为25～35，而且还可观察到，该愈伤组织较早分化产生的幼芽叶片呈现不同程度白化（或缺绿）。
但此时若将此缺绿幼芽切下，转接至不加2,4-D的幼芽增殖培养基（3）上，3～5d后即可恢复正常，缺绿症状消失，并可不断增殖，发育成绿色健壮的小苗。
光照时间8～12小时，温度通常在23～28℃之间。
5. 诱导生根及移栽
取约3～4cm长的无根小苗接种于生根培养基（4）中，约7～8d后，几乎所有外植体均从其基部产生白色幼根，根诱导频率为3～5，部分在培养基表面的根具大量白色根毛。
当试管苗长至5～6cm高时，打开瓶口，在散射光下放置2d后取出，洗去根部残留培养基，种植于经过消毒的珍珠岩、泥炭土和菜园土等量混合的基质中，成活率可达95%以上。
四数据记录：
编号 种子数目萌发时间萌发数目萌发时间染菌率
烟草叶片愈伤组织诱导情况
编号每瓶接种数愈伤组织诱导率愈伤组织状态染菌率
烟草叶片愈伤组织再生植株情况
编号分化率每个愈伤组织分化芽数分化情况染菌率
编号生根率生根情况 再生植株分化根数染菌率
参考文献
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学.2008,36(34):14871-14872
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物生理学报1986，12（1）：104~108
9、唐玉林，陈婉芬，周燮，烟草叶块分化根和芽过程中内源激素水平的变化，南
京农业大学学报，1996，19(2)：12~16。